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基于高通量测序和纯培养技术解析海南东寨港红树植物老鼠簕根际放线菌多样性及其潜在的功能 被引量:1
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作者 刘顺卿 何小稳 +4 位作者 吴金燕 易国辉 陈芊芊 谢欣宜 隋金蕾 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2024年第7期1498-1510,共13页
根际是土壤-植物根系-微生物进行物质交换的活跃地带。根际放线菌是根系放线菌的重要组成部分,是生物活性物质的主要来源之一。本研究从海南东寨港红树林自然保护区采集了5份红树植物老鼠簕根际土壤样品,采用高通量测序和传统纯培养相... 根际是土壤-植物根系-微生物进行物质交换的活跃地带。根际放线菌是根系放线菌的重要组成部分,是生物活性物质的主要来源之一。本研究从海南东寨港红树林自然保护区采集了5份红树植物老鼠簕根际土壤样品,采用高通量测序和传统纯培养相结合的策略探究样品中根际放线菌的多样性和产生生物活性物质的潜力。利用Illumina Novaseq6000测序平台对老鼠簕根际样品细菌的16SrRNA基因的V3~V4区域进行测序与分析,结果显示:(1)老鼠簕根际细菌共注释到32个门(包括25个有效鉴定的门),其中优势门是变形菌门;α多样性分析表明老鼠簕根际细菌群落多样性非常丰富;(2)对放线菌门的微生物群落进行分析,注释到33个有效鉴定的属、4个暂定的属和28个未培养的新放线菌属,KEGG功能预测分析显示老鼠簕根际放线菌主要参与次级代谢产物的生物合成。同时,利用传统纯培养方法分离放线菌,经形态特征分群和排重,通过PCR扩增、测序并比对16SrRNA基因序列后进行放线菌多样性分析,利用琼脂扩散法筛选抑菌活性,通过基于PCR的基因筛选技术检测代表菌株可能存在的PKS-Ⅰ、PKS-Ⅱ和NRPS抗生素生物合成基因,结果显示:(1)共得到4个属的33株放线菌代表菌株,其中链霉菌属为优势菌属,有2个属未被高通量测序分析结果注释到;(2)代表菌株的NRPS和PKS-Ⅱ基因阳性率很高(90%以上),24.24%根际放线菌具有抗1种及以上指示菌的活性。本研究利用高通量测序和纯培养方法得出东寨港红树植物老鼠簕的根际放线菌多样性非常丰富,并具有较好的合成次生代谢产物的潜力,因此,该研究结果可为具有生物活性化合物的筛选提供丰富的菌种资源,同时也为后续新药的开发提供重要参考依据。 展开更多
关键词 老鼠簕 根际 放线菌多样性 高通量测序 纯培养
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河西走廊石羊河下游地区盐碱土中放线菌多样性——以民勤县为例 被引量:10
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作者 李海云 牛世全 +6 位作者 孔维宝 朱学泰 张爱梅 达文燕 韩彩虹 阎薇如 耿晖 《中国环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1805-1813,共9页
为了解甘肃省河西走廊石羊河流域地区盐碱土中放线菌种群结构及多样性,采用非培养法对河西走廊石羊河下游流域的3种不同类型土样(原生盐碱土、次生盐碱土和农田土)的总DNA进行提取,用放线菌特异性引物对16S r RNA基因进行扩增,构建放线... 为了解甘肃省河西走廊石羊河流域地区盐碱土中放线菌种群结构及多样性,采用非培养法对河西走廊石羊河下游流域的3种不同类型土样(原生盐碱土、次生盐碱土和农田土)的总DNA进行提取,用放线菌特异性引物对16S r RNA基因进行扩增,构建放线菌16S r RNA克隆文库.用HaeⅢ和HhaⅠ两种限制性内切酶对阳性克隆子进行16S r DNA扩增片段限制性内切酶分析(Amplifed Ribosomal DNA Restriction Analysis,ARDRA),提取酶切带型不同的菌液进行测序,构建其系统发育树并进行多样性指数分析.结果显示:原生盐碱土克隆文库中90个阳性克隆分归于20个OTUs,分属于微球菌科(Micrococcaceae)、中村氏菌科(Nakamurellaceae)、类诺卡氏菌科(Nocardioidaceae)、链霉菌科(Streptomycetaceae)、棒状杆菌科(Corynebacteriaceae)、诺卡氏菌科(Nocardiaceae)和未知类群;次生盐碱土克隆文库中98个阳性克隆分归于32个OTUs,分属于纤维素单胞菌科(Cellulomonadaceae)、微球菌科(Micrococcaceae)、地嗜皮菌科(Geodermatophilaceae)、类诺卡氏菌科(Nocardioidaceae)、小单孢菌科(Micromonosporaceae)、伪诺卡氏菌科(Pseudonocardiaceae)、链霉菌科(Streptomycetaceae)、链孢囊菌科(Streptosporangiaceae)、高温单孢菌科(Thermomonosporaceae)、动孢囊菌科(Kineosporiaceae)、糖霉菌科(Glycomycetaceae)和未知类群;农田土克隆文库中98个阳性克隆分归于10个OTUs,分属于微球菌科(Micrococcaceae)、博戈里亚湖菌科(Bogoriellaceae)、地嗜皮菌科(Geodermatophilaceae)、中村氏菌科(Nakamurellaceae)、类诺卡氏菌科(Nocardioidaceae)和未知类群.其中,微球菌亚目(Micrococcineae)是3种不同类型土壤中的优势类群.多样性指数和稀释性曲线分析结果显示,3种不同类型土壤中放线菌多样性为次生盐碱土>原生盐碱土>农田土. 展开更多
关键词 河西走廊 盐碱土 克隆文库 放线菌多样性
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艾比湖湿地根际放线菌多样性及其环境响应 被引量:9
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作者 张晓红 胡文革 +3 位作者 莫超 王翠华 武菲 郭飏 《环境科学与技术》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期22-30,134,共10页
分别在春、夏、秋3个季节采集新疆艾比湖自然保护区盐节木、芦苇以及盐角草3种不同植被的根际土壤,利用PCR-DGGE技术研究土壤放线菌群落结构及多样性,同时测定7个理化因子,并对放线菌多样性与土壤理化因子的相关性进行分析。结果表明,... 分别在春、夏、秋3个季节采集新疆艾比湖自然保护区盐节木、芦苇以及盐角草3种不同植被的根际土壤,利用PCR-DGGE技术研究土壤放线菌群落结构及多样性,同时测定7个理化因子,并对放线菌多样性与土壤理化因子的相关性进行分析。结果表明,艾比湖湿地不同植物根际、不同季节的放线菌多样性存在明显差异,其中盐角草群落放线菌的多样性最高,芦苇群落次之,盐节木群落最低;在盐节木和芦苇根际土壤中放线菌的多样性为夏季>秋季>春季,而盐角草根际土壤放线菌的多样性随春夏秋季节的变化依次增大。DGGE图谱中共测序22个条带,主要为放线菌亚目、微球菌亚目、弗兰克氏菌亚目、酸微菌亚目、棒杆菌亚目、动孢菌亚目和细菌域的未知类群。Shannon指数与土壤有机质含量、含水量呈显著正相关;与电导率、pH值、速效钾、有效磷和碱解氮等呈负相关。 展开更多
关键词 艾比湖湿地 放线菌多样性 理化因子 变性梯度凝胶电泳 相关性
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拜城盐山免培养放线菌多样性研究 被引量:2
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作者 周慧杰 夏占峰 +3 位作者 张娇 张瑶 张利莉 章建新 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期1272-1278,共7页
[目的]研究新疆拜城盐山高盐环境中的放线菌多样性,为今后的开发和利用奠定基础。[方法]应用基于16S rRNA基因序列的免培养技术和系统发育分析方法对拜城盐山样品中的放线菌多样性进行研究。采用SDS-CTAB方法提取样品中的总DNA,利用特... [目的]研究新疆拜城盐山高盐环境中的放线菌多样性,为今后的开发和利用奠定基础。[方法]应用基于16S rRNA基因序列的免培养技术和系统发育分析方法对拜城盐山样品中的放线菌多样性进行研究。采用SDS-CTAB方法提取样品中的总DNA,利用特异性引物扩增样品DNA中的放线菌16S rRNA基因,并构建放线菌16S rRNA基因克隆文库;通过比较酶切图谱,挑选克隆文库中的代表克隆,进行序列测定和BLAST比对分析。[结果]构建的放线菌克隆文库共包含216个放线菌克隆。克隆序列经过BLAST比对分析,放线菌亚纲中的克隆有171个,占总克隆数的79.2%。酸微菌亚纲45个克隆,占总克隆数的20.8%,与GenBank中已知的微球菌16S rRNA基因序列最大相似度小于92%,是酸微菌亚纲中新的类群。优势放线菌为放线菌亚纲棒杆菌亚目诺卡氏菌科(Nocardiaceae)的红球菌属(Rhodococcus),占克隆总数的51.9%。有24.5%的序列与已有效发表菌株的序列相似性小于97%,部分序列形成了几个独立的进化分支,可能代表着放线菌新的类群。[结论]拜城盐山存在着较为丰富的放线菌种类,并且潜藏着新类型的放线菌资源。 展开更多
关键词 拜城盐山 放线菌多样性 免培养方法
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塔里木盆地北缘土壤放线菌分布多样性分析
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作者 高艳红 耿为渊 张利莉 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期1082-1086,共5页
选用4种培养基进行涂布平板分离塔里木盆地北缘土壤放线菌样,所分离菌株初步鉴定为6个属,链霉菌是优势菌(占51.2%~100%)。在几种不同利用类型的土壤中,耕作土壤中放线菌分布最丰富。典型相关分析得出,放线菌分布多样性主要受土壤总盐... 选用4种培养基进行涂布平板分离塔里木盆地北缘土壤放线菌样,所分离菌株初步鉴定为6个属,链霉菌是优势菌(占51.2%~100%)。在几种不同利用类型的土壤中,耕作土壤中放线菌分布最丰富。典型相关分析得出,放线菌分布多样性主要受土壤总盐含量的影响,随总盐含量的升高而降低,总盐含量与放线菌数量和种类之间呈负相关,结合回归分析得出,在土壤总盐中,Mg^(2+)和Cl^-含量是影响放线菌分布的主要因素;其次,对塔里木盆地北缘土壤放线菌而言,土壤有机质、速效磷及速效氮含量对其分布多样性影响不显著。 展开更多
关键词 塔里木盆地 放线菌多样性 典型相关分析 回归分析
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