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改良酶放大免疫法提高甲氨蝶呤检测灵敏度 被引量:1
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作者 邴海峰 李中 《儿科药学杂志》 CAS 2019年第6期52-55,共4页
目的:通过对现有检测方法进行改良,将西门子VIVA-E生化分析仪对甲氨喋呤的检测灵敏度从0. 30μmol/L提升至0. 05μmol/L。方法:设置参数,降低试剂用量从180μL降至110μL,同时更改定标点浓度为0、0. 05、0. 10、0. 25、0. 50和1. 00μmo... 目的:通过对现有检测方法进行改良,将西门子VIVA-E生化分析仪对甲氨喋呤的检测灵敏度从0. 30μmol/L提升至0. 05μmol/L。方法:设置参数,降低试剂用量从180μL降至110μL,同时更改定标点浓度为0、0. 05、0. 10、0. 25、0. 50和1. 00μmol/L,建立新方法。分别使用改良法、商业化方法及LC-MS/MS法测量相同的样本进行对照检验。结果:改良后新方法在0. 30~1. 00μmol/L范围内与商业化的方法有良好的相关性,在0. 05~1. 00μmol/L范围内改良法与LC-MS/MS法有良好的相关性。结论:改良法在提高灵敏度的前提下将单个试剂盒的测量次数从140次提升至210次,显著降低了检测成本,且检测结果准确可靠,可在临床推广应用。 展开更多
关键词 甲氨蝶呤 血药浓度 放大免疫法 灵敏度
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酶放大免疫分析法与二维液相色谱法监测癫痫患者血清中卡马西平浓度的比较 被引量:2
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作者 柳航 王敏 +1 位作者 金路 张晋萍 《中国医药导报》 CAS 2018年第21期106-109,共4页
目的比较酶放大免疫分析法(EMIT)与二维液相色谱法(2D-HPLC)测定卡马西平血药浓度的差异。方法采集67例癫痫患者卡马西平血清样本,分别采用EMIT法和2D-HPLC法测定,其中二维液相的色谱条件如下:第一维色谱柱为ASTON-FAQ C8柱(4.0 mm×... 目的比较酶放大免疫分析法(EMIT)与二维液相色谱法(2D-HPLC)测定卡马西平血药浓度的差异。方法采集67例癫痫患者卡马西平血清样本,分别采用EMIT法和2D-HPLC法测定,其中二维液相的色谱条件如下:第一维色谱柱为ASTON-FAQ C8柱(4.0 mm×100.0 mm,3μm,ANAX),流动相为乙腈-水(55∶45,v/v),流速为1 m L/min;中间柱为ASTON C18(4.6 mm×10.0 mm,3μm,ANAX);第二维色谱柱为Diamonsil-C18柱(4.6 mm×200.0 mm,5μm,Dikma),流动相为乙腈-20 mmol/L乙酸铵(20∶80,v/v,p H=7.0),流速为1.2 m L/min。柱温为40℃,检测波长为285 nm。结果两种方法差异无统计学意义,且相关性好,回归方程为y(2D-HPLC)=0.9876×x(EMIT)-0.0313,Bland-Altman分析显示两种方法一致性良好。结论 EMIT法与2D-HPLC法测定的结果具有良好的一致性和相关性,应综合考虑实验室条件和人员配置等方面,采用合适的测定方法。 展开更多
关键词 卡马西平 血药浓度 放大免疫分析 二维液相色谱
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生物素-亲和素放大酶联免疫吸附法测定呋喃西林代谢物 被引量:9
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作者 黄登宇 冯敏 +3 位作者 李亚楠 高丽霞 高文静 杨秀松 《食品安全质量检测学报》 CAS 2017年第2期394-401,共8页
目的建立竞争生物素-亲和素放大酶联免疫吸附测定法(biotin-avidin enzyme linked immumosobent assay,BA-ELISA)检测呋喃西林代谢物。方法采用棋盘法确定单克隆抗体和包被原的最佳稀释倍数,通过单因素试验优化辣根过氧化物酶标记的链... 目的建立竞争生物素-亲和素放大酶联免疫吸附测定法(biotin-avidin enzyme linked immumosobent assay,BA-ELISA)检测呋喃西林代谢物。方法采用棋盘法确定单克隆抗体和包被原的最佳稀释倍数,通过单因素试验优化辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(streptavidin-horseradish peroxidase,SA-HRP)稀释倍数、封闭液浓度、竞争反应时间、生物素标记羊抗鼠二抗(biotinylated goat anti-mouse Immunoglobulin G,Biotin-IgG)孵育时间、SA-HRP孵育时间和显色时间,建立标准曲线,并对方法的灵敏度、特异性、准确度和精密度进行方法学评价。结果最佳实验条件为:包被原稀释倍数为1:800,单克隆抗体稀释倍数为1:12800,SA-HRP稀释倍数为1:8000,封闭液为1%的脱脂乳,竞争反应时间为30 min,Biotin-IgG孵育时间为30 min,SA-HRP孵育时间为60 min,显色时间为15 min;在优化条件下,线性方程为Y=-0.3299X+0.4272(r^2=0.990),IC_(50)为0.601ng/m L,线性范围为0.074~4.883 ng/m L;加标回收率为88.8%~98.5%,批内变异系数(coefficient of variation,CV)和批间CV分别为1.2%~3.6%和2.5%~5.1%,建立的方法与其他结构类似物及衍生化试剂的交叉反应率(cross reactivity,CR)均小于0.1%。BA-ELISA与高效液相色谱-串联质谱法的回收率均在85%~115%范围内。结论 BA-ELISA法灵敏度高、特异性好、重现性好,可适用于动物组织中呋喃西林代谢物的快速筛查。 展开更多
关键词 兽药 呋喃西林 氨基脲 生物素-亲和素放大酶联免疫吸附
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基于Fe_3O_4@Au复合纳米粒子标记抗体的电化学免疫方法用于水体中大肠杆菌的检测 被引量:10
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作者 刘慧杰 滕瑛巧 +3 位作者 张新爱 符莹 张文 金利通 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2010年第6期1131-1136,共6页
合成了Fe3O4@Au复合纳米粒子作为辣根过氧化酶标记抗体的载体,并将该复合纳米粒子标记物应用于电化学放大免疫分析.将电子媒介体硫堇聚合在玻碳电极表面,以纳米金作为固定大肠杆菌抗体的基底,通过辣根过氧化酶催化溶液中H2O2产生的电流... 合成了Fe3O4@Au复合纳米粒子作为辣根过氧化酶标记抗体的载体,并将该复合纳米粒子标记物应用于电化学放大免疫分析.将电子媒介体硫堇聚合在玻碳电极表面,以纳米金作为固定大肠杆菌抗体的基底,通过辣根过氧化酶催化溶液中H2O2产生的电流信号来测定大肠杆菌.实验结果表明,该方法对水体中大肠杆菌检测的线性范围为50~1×105cfu/mL,检出限为20 cfu/mL.对过富集后的实际水样进行测定,该法结果表明,对水体中大肠杆菌的检测灵敏度达到2 cfu/mL. 展开更多
关键词 大肠杆菌 Fe3O4@Au复合纳米粒子 放大免疫法 电化学免疫分析
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三种方法测定万古霉素血药浓度比较分析 被引量:7
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作者 莫晓乡 周家福 《儿科药学杂志》 CAS 2017年第7期42-44,共3页
目的:比较高效液相色谱法(HPLC)、酶放大免疫法和微生物法测定血清万古霉素谷浓度的差异,确定三种测定方法间的线性关系。方法:分别采用HPLC、酶放大免疫法和微生物法对我院患儿血清中万古霉素谷浓度进行检测,比较分析测定结果,建立线... 目的:比较高效液相色谱法(HPLC)、酶放大免疫法和微生物法测定血清万古霉素谷浓度的差异,确定三种测定方法间的线性关系。方法:分别采用HPLC、酶放大免疫法和微生物法对我院患儿血清中万古霉素谷浓度进行检测,比较分析测定结果,建立线性关系。结果:三种方法均能有效测定患儿万古霉素血药浓度,三种方法测得结果具有良好的相关性,相关性分析结果分别为:Y=1.006 9X+0.030 2(X-HPLC,Y-酶放大免疫法,r=0.999 9);Y=0.993 1X-0.043 8(X-酶放大免疫法,Y-微生物法,r=0.999 9);Y=1.000 1X-0.014 7(X-HPLC,Y-微生物法,r=0.999 9)。结论:HPLC、酶放大免疫法和微生物法均为可靠的万古霉素血药浓度检测方法,HPLC对于较低浓度的样本有更好的敏感性,各医疗机构可以根据条件选用。 展开更多
关键词 高效液相色谱 放大免疫法 微生物 万古霉素 血药浓度
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一种基于常规生化仪的低成本治疗药物监测新技术 被引量:1
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作者 齐谢敏 虞留明 +2 位作者 李冬 朱婷婷 储小曼 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2014年第11期1197-1201,共5页
目的:国内尚无市售自主研发的治疗药物监测( therapeutic drug monitoring, TDM)酶放大免疫检测原理( enzyme multiplied immunoassay technique, EMIT)试剂盒。比较基于EMIT的自主研发试剂盒与Viva-E试剂盒和基于FPIA的AXSYM检... 目的:国内尚无市售自主研发的治疗药物监测( therapeutic drug monitoring, TDM)酶放大免疫检测原理( enzyme multiplied immunoassay technique, EMIT)试剂盒。比较基于EMIT的自主研发试剂盒与Viva-E试剂盒和基于FPIA的AXSYM检测试剂盒用于TDM相关性能,评价其用于TDM的可行性。方法通过进行卡马西平、丙戊酸和苯巴比妥方法学比较,评价Viva-E、AXSYM分析仪配套检测试剂盒和自主研发试剂盒的灵敏度、准确度及精密度。并对83例卡马西平、80例丙戊酸和72例苯巴比妥临床样本进行检测,比较自主研发试剂盒和AXSYM分析仪配套检测试剂盒测定结果相关性。结果3种试剂盒分别测定卡马西平、丙戊酸和苯巴比妥的回收率均高于90%。其中自主研发试剂盒3种药物的回收率在98.7%~103.9%,定量下限依次为2、10、5μg/mL,精密度均<10%,标曲单点校正后结果偏差<3%。其血清样本检测结果与AXSYM试剂盒检测结果相关性较好(R2>0.985),差异无统计学意义(P>0.05)。 Bland-Altman分析的95% LOA依次为(-1.32,1.26)、(-15.24,15.17)和(-3.69,3.00),仅有5%的点落于95%置信区间外。结论自主研发试剂盒性能与现进口试剂盒基本一致,方法学结果符合生物样本检测要求,可用于临床生物样本检测。 展开更多
关键词 放大免疫检测 自主研发试剂盒 卡马西平 丙戊酸 苯巴比妥
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