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一种获得大片段克隆的SMART全长cDNA文库构建方法
被引量：
6
1
作者
董志敏
李英慧
+3 位作者
张宝石
关荣霞
常汝镇
邱丽娟
《大豆科学》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第3期223-227,共5页
针对SMART方法中PCR扩增削减了大片段基因所占比例，使文库中很难获得大片段克隆的问题，进行了方法改进。在原始SMART方法的基础上，以大豆叶片为材料，通过琼脂糖凝胶分级分离技术，将PCR扩增后合成的dscDNA分成3个等级，分别与载体...
针对SMART方法中PCR扩增削减了大片段基因所占比例，使文库中很难获得大片段克隆的问题，进行了方法改进。在原始SMART方法的基础上，以大豆叶片为材料，通过琼脂糖凝胶分级分离技术，将PCR扩增后合成的dscDNA分成3个等级，分别与载体连接、转化，构建相应亚库，每个亚库容量在1．0×10^6左右，重组率接近99％。改进方法所建文库的平均全长率53．6％，与改进前的（52．2%）相当。插入片段范围为0．5～3．5kb，最大插入片断长度比改进前的提高1．5kb。该方法提高了SMART方法中大片段克隆的获得率，为大豆功能基因组学研究提供了保障。
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关键词
改进的smart法
扩增后cDNA分级分离
全长CDNA文库
大片段克隆
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职称材料
题名
一种获得大片段克隆的SMART全长cDNA文库构建方法
被引量：
6
1
作者
董志敏
李英慧
张宝石
关荣霞
常汝镇
邱丽娟
机构
沈阳农业大学农学院
中国农业科学院作物科学研究所国家农作物基因资源与遗传改良重大科学工程农业部作物种质资源与生物技术重点开放实验室
出处
《大豆科学》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第3期223-227,共5页
基金
国家自然科学基金重大项目(30490250)
国家"863"计划项目(2003AA207060)
文摘
针对SMART方法中PCR扩增削减了大片段基因所占比例，使文库中很难获得大片段克隆的问题，进行了方法改进。在原始SMART方法的基础上，以大豆叶片为材料，通过琼脂糖凝胶分级分离技术，将PCR扩增后合成的dscDNA分成3个等级，分别与载体连接、转化，构建相应亚库，每个亚库容量在1．0×10^6左右，重组率接近99％。改进方法所建文库的平均全长率53．6％，与改进前的（52．2%）相当。插入片段范围为0．5～3．5kb，最大插入片断长度比改进前的提高1．5kb。该方法提高了SMART方法中大片段克隆的获得率，为大豆功能基因组学研究提供了保障。
关键词
改进的smart法
扩增后cDNA分级分离
全长CDNA文库
大片段克隆
Keywords
Improved
smart
Amplified cDNA size fractionation
Full-length cDNA library
Largeclones
分类号
S565.1 [农业科学—作物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
一种获得大片段克隆的SMART全长cDNA文库构建方法
董志敏
李英慧
张宝石
关荣霞
常汝镇
邱丽娟
《大豆科学》
CAS
CSCD
北大核心
2006
6
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