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兔源支气管败血波氏杆菌荧光定量PCR检测方法的建立
1
作者 苏进博 王锦祥 殷光文 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2025年第1期110-116,共7页
【目的】建立兔源支气管败血波氏杆菌(Bb)的快速检测方法,用于兔波氏杆菌病的诊断。【方法】以Bb的fimX基因为靶基因,设计特异性引物并构建质粒标准品。在此基础上建立检测兔源Bb的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,对该方法的特异性、敏感... 【目的】建立兔源支气管败血波氏杆菌(Bb)的快速检测方法,用于兔波氏杆菌病的诊断。【方法】以Bb的fimX基因为靶基因,设计特异性引物并构建质粒标准品。在此基础上建立检测兔源Bb的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,对该方法的特异性、敏感性和重复性进行评价,并将该方法初步应用于临床样品的检测。【结果】荧光定量PCR方法仅对兔源Bb的检测结果呈阳性,对其他常见兔源病原菌的检测结果均呈阴性;对质粒标准品的最低检测限为13.8拷贝·μL^(-1),敏感性是普通PCR方法的10倍;批内重复性试验的变异系数小于2%,批间重复性试验的变异系数小于3%;对68份临床样品进行检测,阳性检出率为39.71%,比普通PCR方法的高2.95%。【结论】建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法特异性强、敏感性高、重复性好,且对临床样品的阳性检出率比普通PCR方法高,为兔源Bb的快速检测和防控提供了技术支持。 展开更多
关键词 兔 兔波氏杆菌病 支气管败血波氏杆菌 荧光定量PCR方法 检出率
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家兔支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及耐药基因检测
2
作者 曹洪志 李成贤 +2 位作者 彭茜翎 其美拉姆 史纪强 《饲料工业》 CAS 北大核心 2024年第5期70-76,共7页
为深入了解兔支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb),试验将病兔体内分离得到的菌株进行菌株鉴定、生长曲线测定、致病性研究、药敏试验及耐药基因检测,期望了解该菌的生长规律,为临床用药及防控奠定基础。通过Gram染色镜... 为深入了解兔支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb),试验将病兔体内分离得到的菌株进行菌株鉴定、生长曲线测定、致病性研究、药敏试验及耐药基因检测,期望了解该菌的生长规律,为临床用药及防控奠定基础。通过Gram染色镜检、分离培养、16S rDNA序列分析对分离菌株进行鉴定,测定了该分离株的生长曲线、半数致死量、耐药性并对分离菌株进行β-内酰胺酶耐药基因的检测。结果表明:分离得到1株革兰氏阴性杆菌,命名为P201215,该分离株的16S rDNA基因序列与GenBank中支气管败血波氏杆菌(登录号为NR113628.1)的同源性为99%。分离株的对数生长期为2~9 h,9 h后进入平台期;对KM小鼠的半数致死量为1.19×107 CFU。药敏试验结果显示,分离株对部分头孢菌素类药物耐药,对大部分β-内酰胺类、喹诺酮类、四环素类及氨基糖苷类药物敏感,PCR检测未检出超广谱β-内酰胺酶耐药基因。 展开更多
关键词 支气管败血波氏杆菌 分离鉴定 生长曲线 半数致死量 超广谱Β-内酰胺酶
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犬源支气管败血波氏杆菌的分离鉴定和全基因组测序分析
3
作者 李雅卓 颜亚松 +2 位作者 王昊 孔令聪 马红霞 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第11期24-31,共8页
为明确致犬严重呼吸道症状的病原菌及其病原特征,本试验采集患有严重呼吸道症状病死犬肺脏脓包样本,通过病原菌的分离纯化和形态学观察、生化试验、16S rRNA基因测序鉴定、生长曲线绘制对分离菌株进行种属鉴定;通过微量肉汤稀释法检测... 为明确致犬严重呼吸道症状的病原菌及其病原特征,本试验采集患有严重呼吸道症状病死犬肺脏脓包样本,通过病原菌的分离纯化和形态学观察、生化试验、16S rRNA基因测序鉴定、生长曲线绘制对分离菌株进行种属鉴定;通过微量肉汤稀释法检测分离菌株的药物敏感性;通过溶血试验和小鼠感染试验检测分离菌株的致病性;通过全基因组测序分析分离菌株基因环境。结果显示,本试验分离菌株为支气管败血波氏杆菌,命名为Z2。药敏试验结果显示,分离菌株Z2对头孢曲松、头孢喹肟、链霉素和替米考星耐药,对恩诺沙星、多西环素和氟苯尼考等11种药物敏感。该分离菌株具有一定的溶血活性,对小鼠的半数致死量(LD50)为5.01×10^(5)CFU/mL。该分离菌株全基因组大小为5257583 bp,含有4887个基因;仅携带3个耐药基因,介导其对磺胺类和氨基糖苷类药物耐药,但未检测到β-内酰胺类耐药基因;共有1169个致病性相关基因,其中粘附性毒力基因最多,包括细胞间粘附蛋白、百日咳粘附素、菌毛、鞭毛和被膜等毒力基因。结果表明,分离菌株Z2具有较高的耐药性和致病性。本试验结果为支气管败血波氏杆菌的致病性研究提供了一定的参考价值。 展开更多
关键词 支气管败血波氏杆菌 分离鉴定 耐药性分析 全基因组测序
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犬支气管败血波氏杆菌的分离鉴定和灭活疫苗初步应用
4
作者 王潘龙 赵悦 +10 位作者 孙强 周昊 尹月 曲雪婷 原昆鹏 栾庆东 陈淑贞 卢艳敬 臧立玉 韩海峰 尹燕博 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第7期41-48,共8页
某实验比格犬养殖场部分犬出现咳喘和口鼻流血等症状,严重者死亡。为了调查发病原因并采取针对性措施,本试验采集临床发病犬的鼻腔拭子、死亡犬的肺脏和气管分泌物等,进行细菌分离培养;通过形态观察、革兰染色、16S rRNA和ptxA基因测序... 某实验比格犬养殖场部分犬出现咳喘和口鼻流血等症状,严重者死亡。为了调查发病原因并采取针对性措施,本试验采集临床发病犬的鼻腔拭子、死亡犬的肺脏和气管分泌物等,进行细菌分离培养;通过形态观察、革兰染色、16S rRNA和ptxA基因测序,对分离细菌进行鉴定,并对部分菌株进行药敏试验。选取1株致病性强的分离菌株制备支气管败血波氏杆菌蜂胶佐剂灭活疫苗,进行免疫保护试验,分别采用1.0和0.5 mL剂量免疫小鼠,免疫后21 d攻毒;对养殖场临床发病犬和同群健康犬进行紧急免疫接种,剂量为4月龄以上犬每只1.0 mL、2~4月龄犬每只0.5 mL。对临床病死犬和攻毒死亡小鼠进行组织病理学观察。结果显示,从临床发病犬的鼻腔拭子、肺脏、气管和鼻腔黏液状分泌物共分离鉴定获得30株支气管败血波氏杆菌。药敏试验结果显示,临床分离菌株对环丙沙星和米诺环素高度敏感,但临床治疗效果不明显。免疫保护试验中,1.0 mL和0.5 mL蜂胶佐剂灭活疫苗对小鼠的保护率均可达100%;紧急免疫接种后,临床发病犬逐渐恢复,同群健康犬无新发病个体,疫苗免疫效果良好。组织病理学观察发现,临床病死犬和攻毒死亡小鼠均表现典型的支气管肺炎和肺气肿病变,肝细胞呈水泡样变。结果表明,支气管败血波氏杆菌是导致该场部分犬出现呼吸道疾病的病原体,蜂胶灭活疫苗可有效防控实验用比格犬支气管败血波氏杆菌感染。 展开更多
关键词 比格犬 支气管败血波氏杆菌 16S rRNA 组织病理学观察 蜂胶佐剂灭活疫苗
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兔支气管败血波氏杆菌病及其防治措施
5
作者 孟凡勇 《中国畜牧业》 2024年第6期85-86,共2页
兔支气管败血波氏杆菌病是家兔养殖业中常见的呼吸道性传染病,临床表现为严重的鼻炎、咳嗽、流涕、支气管肺炎和败血症,影响仔兔的成活率和生长速度。养殖者可通过加强日常饲养管理、降低刺激因素、强化生物安全防控、接种支气管败血波... 兔支气管败血波氏杆菌病是家兔养殖业中常见的呼吸道性传染病,临床表现为严重的鼻炎、咳嗽、流涕、支气管肺炎和败血症,影响仔兔的成活率和生长速度。养殖者可通过加强日常饲养管理、降低刺激因素、强化生物安全防控、接种支气管败血波氏杆菌灭活苗或兔波氏杆菌与巴氏杆菌二联苗等进行预防。对于发病兔需隔离并进行及时治疗,以降低发病率,推动兔养殖业健康发展。 展开更多
关键词 支气管败血波氏杆菌 日常饲养管理 支气管肺炎 二联苗 巴氏杆菌 及时治疗 仔兔 生物安全防控
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藏猪多杀性巴氏杆菌、肺炎支原体、支气管败血波氏杆菌和传染性胸膜肺炎放线杆菌四重PCR方法的建立与初步应用
6
作者 肖晨冬 潘瑶 +4 位作者 陈亭宇 王艳琼 赵红燕 陈和强 赵晓刚 《甘肃畜牧兽医》 2024年第6期83-88,共6页
为了迅速、高效检测引起藏猪呼吸道疾病的4种主要病原菌,本研究选择猪多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)的kmt 1基因、猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mh)的P36ldh基因、猪支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptic... 为了迅速、高效检测引起藏猪呼吸道疾病的4种主要病原菌,本研究选择猪多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)的kmt 1基因、猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mh)的P36ldh基因、猪支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)的DNT基因和猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,App)的apxIV基因为靶标,设计4组特异性引物,建立灵敏、特异、可同时检测Pm、Mh、Bb和App的四重PCR检测方法,并初步用于调查甘孜州乡城县这4种细菌的流行情况。结果显示:该方法特异性强,不与猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒及猪伪狂犬病毒等9种病原的DNA/RNA反应;敏感性高,Pm、Mh、Bb和App的最低检测量分别为3.13×10^(3)、1.95×10^(3)、4.32×10^(4)和2.45×10^(4);重复性好,批内的试验、批间的试验结果都一致;临床检测显示,Pm、Mh、Bb和App阳性率分别为25.86%(45/174)、29.89%(52/174)、19.54%(34/174)、25.29%(44/174),与已报道的检测方法一致,符合率达100%。因此,本研究建立的四重PCR方法具有迅速、高效、敏感性高、特异性强的优点,对临床防控藏猪细菌性呼吸道疾病及进行流行病学调查具有重要意义。 展开更多
关键词 猪多杀性巴氏杆菌 猪肺炎支原体 猪支气管败血波氏杆菌 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌 四重PCR
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兔源支气管败血波氏杆菌和肺炎克雷伯菌的分离鉴定及其对抗菌药物的敏感性分析 被引量：17
7
作者 张自强 王佳佳 +3 位作者 任玉莹 朱慧杰 张倩文 刘玉梅 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期2254-2264,共11页
兔感染支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica)和肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)后,常引起兔多发性呼吸道疾病,严重危害家兔养殖业。作者剖检河南省某兔场疑似病死兔,并采集组织分离鉴定病原菌,然后进行药敏试验,以期确... 兔感染支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica)和肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)后,常引起兔多发性呼吸道疾病,严重危害家兔养殖业。作者剖检河南省某兔场疑似病死兔,并采集组织分离鉴定病原菌,然后进行药敏试验,以期确定引起兔呼吸困难、腹泻的病原。结果显示,经细菌分离培养得到1株革兰阴性、两端钝圆的小杆状可疑致病菌及1株革兰阴性、卵圆形的可疑致病菌;其16S rRNA基因序列扩增片段大小分别为1492和1494 bp,与B.bronchiseptica AU 12671和K.pneumoniae菌株F5feb.57相似性分别为99.85%和100.00%,即该兔场患病兔为B.bronchiseptica和K.pneumoniae混合感染。药敏试验结果显示所分离的B.bronchiseptica和K.pneumoniae同时对庆大霉素、头孢曲松、头孢唑啉3种药物敏感,对其他药物有不同程度的耐药性。综上表明,此次分离的细菌为B.bronchiseptica和K.pneumoniae,本试验为家兔B.bronchiseptica和K.pneumoniae混合感染的分离鉴定及科学用药提供参考。 展开更多
关键词 兔 支气管败血波氏杆菌 肺炎克雷伯菌 腹泻 呼吸道疾病 耐药性
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猪萎缩性鼻炎支气管败血波氏杆菌PCR检测方法的建立 被引量：8
8
作者 袁翠霞 罗阿东 +5 位作者 徐景峨 唐源 李建华 文明 李永明 周碧君 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期896-899,共4页
对表现猪萎缩性鼻炎临床症状的猪群中分离得到的34株支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb),采用针对Bb flagellum gene的一对引物进行PCR扩增,结果所有分离物均能扩增出237bp特异性DNA条带,与传统生化鉴定结果相一致,且其... 对表现猪萎缩性鼻炎临床症状的猪群中分离得到的34株支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb),采用针对Bb flagellum gene的一对引物进行PCR扩增,结果所有分离物均能扩增出237bp特异性DNA条带,与传统生化鉴定结果相一致,且其最小检出量为0.64pg;而猪鼻腔和肺组织中常见的多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌、铜绿假单胞菌、变形杆菌及大肠埃希氏菌均未能出现任何DNA条带。这表明,本试验建立的PCR方法具有特异性强、灵敏度高、可靠性好等特点,可用于猪萎缩性鼻炎的临床诊断。 展开更多
关键词 猪萎缩性鼻炎 支气管败血波氏杆菌 PCR方法 检测
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兔多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌复合PCR方法的建立及临床应用 被引量：11
9
作者 范志宇 魏后军 +5 位作者 胡波 宋艳华 王芳 薛家宾 徐为中 苏国清 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第2期376-381,共6页
根据Gen Bank中多杀性巴氏杆菌ATP合成酶基因(atp B)的保守序列设计特异性引物,建立巴氏杆菌PCR检测方法,并与已建立的支气管败血波氏杆菌PCR检测方法进行合并,经反应条件的优化,成功建立多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌复合PCR诊... 根据Gen Bank中多杀性巴氏杆菌ATP合成酶基因(atp B)的保守序列设计特异性引物,建立巴氏杆菌PCR检测方法,并与已建立的支气管败血波氏杆菌PCR检测方法进行合并,经反应条件的优化,成功建立多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌复合PCR诊断方法。该方法检出的最小多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌菌数分别为40 CFU和4 CFU;对兔源产气荚膜梭菌、大肠杆菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、猪鼻支原体、链球菌的检测结果均为阴性,说明该方法具有良好的特异性。用该方法对中国4个省份采集的临床鼻拭子样本共712份进行检测,结果显示,多杀性巴氏杆菌阳性率为25.56%,支气管败血波氏杆菌阳性率为34.55%,双阳性率为13.20%。该复合PCR方法能快速、敏感地从家兔鼻拭子样品中检出多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌,为临床疾病检测和流行病学调查提供了技术保障。 展开更多
关键词 兔支气管败血波氏杆菌 多杀性巴氏杆菌 复合PCR
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兔支气管败血波氏杆菌的分离与鉴定 被引量：8
10
作者 李长安 方艳琴 +1 位作者 陈晓霖 张耀相 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期16-19,共4页
对陕西商洛某养殖场病死兔解剖、无菌采取病料,从病料中分离到1株革兰阴性小杆菌,经生物学特性试验和生理生化试验鉴定,为兔支气管败血波氏杆菌。药敏试验结果表明,该分离菌株对环丙沙星、氟哌酸、氧氟沙星等抗生素高度敏感;对氯霉素、... 对陕西商洛某养殖场病死兔解剖、无菌采取病料,从病料中分离到1株革兰阴性小杆菌,经生物学特性试验和生理生化试验鉴定,为兔支气管败血波氏杆菌。药敏试验结果表明,该分离菌株对环丙沙星、氟哌酸、氧氟沙星等抗生素高度敏感;对氯霉素、红霉素、四环素等抗生素耐药。外毒素试验和动物致病性试验对小白鼠均有致病作用。 展开更多
关键词 兔 支气管败血波氏杆菌 分离 鉴定 药敏试验 致病性
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兔金黄色葡萄球菌和支气管败血波氏杆菌双重PCR检测方法的建立 被引量：7
11
作者 王锦祥 桑雷 +3 位作者 孙世坤 陈冬金 陈岩峰 谢喜平 《福建农业学报》 CAS 北大核心 2018年第8期777-780,共4页
为建立同时检测兔金黄色葡萄球菌和支气管败血波氏杆菌的双重PCR检测方法,本研究根据金黄色葡萄球菌的nuc基因和支气管败血波氏杆菌的fimN基因的保守序列设计2对特异性引物,通过优化反应条件,成功建立兔金黄色葡萄球菌和支气管败血波氏... 为建立同时检测兔金黄色葡萄球菌和支气管败血波氏杆菌的双重PCR检测方法,本研究根据金黄色葡萄球菌的nuc基因和支气管败血波氏杆菌的fimN基因的保守序列设计2对特异性引物,通过优化反应条件,成功建立兔金黄色葡萄球菌和支气管败血波氏杆菌双重PCR检测方法。该方法对兔多杀性巴氏杆菌、大肠杆菌和魏氏梭菌的检测结果为阴性;能够检出5pg的金黄色葡萄球菌和支气管败血波氏杆菌的基因组DNA;与单重PCR检测方法的符合率为100%。说明本试验建立的双重PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性和准确性,为兔金黄色葡萄球菌和支气管败血波氏杆菌的鉴别诊断提供了有效的技术手段。 展开更多
关键词 兔 金黄色葡萄球菌 支气管败血波氏杆菌 双重PCR
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兔支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及耐药基因检测 被引量：10
12
作者 王晓芳 刘燕 +5 位作者 肖琛闻 鲍国连 崔言顺 李建亮 季权安 韦强 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第3期544-548,共5页
本试验旨在了解近年来浙江省兔支气管败血波氏杆菌的感染情况及耐药状况,指导合理用药,检测细菌的耐药基因,探究其耐药机理。根据细菌形态、培养特性、生化试验,结合PCR法对分离菌株进行鉴定;K-B纸片扩散法检测细菌对18种常用抗生素的... 本试验旨在了解近年来浙江省兔支气管败血波氏杆菌的感染情况及耐药状况,指导合理用药,检测细菌的耐药基因,探究其耐药机理。根据细菌形态、培养特性、生化试验,结合PCR法对分离菌株进行鉴定;K-B纸片扩散法检测细菌对18种常用抗生素的耐药率;设计耐药基因特异性引物,PCR法扩增耐药基因,并进行测序分析。结果显示,分离鉴定出2012—2014年22株兔支气管败血波氏杆菌;药敏结果显示,分离菌对青霉素G、头孢拉定、链霉素、林可霉素、克林霉素、甲氧嘧啶耐药严重,对多黏菌素B、左氟沙星、强力霉素、四环素等药物敏感,耐β-内酰胺类药物的细菌中检测到耐药基因blaTEM。结果表明,兔支气管败血波氏杆菌是引起兔呼吸道疾病的主要病原菌,分离菌多重耐药,耐药率较高,检测到的耐药基因与耐药表型相符。 展开更多
关键词 支气管败血波氏杆菌 分离与鉴定 PCR 药敏试验 耐药基因
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呼吸道综合征的猪肺中支气管败血波氏杆菌的分离、鉴定及特性分析 被引量：8
13
作者 张彦兵 黎倩倩 +7 位作者 石元元 魏建超 李蓓蓓 刘珂 邵东华 马志永 孙延鸣 邱亚峰 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2017年第2期61-65,共5页
临床上猪呼吸道综合征(porcine respiratory disease complex,PRDC)大多为多种病原微生物共感染所致,支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)为PRDC的常见病原,但其在PRDC发生中的作用还不十分清楚。为了研究Bb在PRDC中的作... 临床上猪呼吸道综合征(porcine respiratory disease complex,PRDC)大多为多种病原微生物共感染所致,支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)为PRDC的常见病原,但其在PRDC发生中的作用还不十分清楚。为了研究Bb在PRDC中的作用,本研究聚焦于PRDC的猪肺中Bb的分离、鉴定及特性分析。首先,利用16S rRNA基因序列对分离的细菌进行鉴定,结果从15头已鉴定为PRDC的猪肺中共获得5株Bb分离菌株。随后,对Bb相关毒力因子包括皮肤坏死毒素(dermonecrotic toxin,DNT)、百日咳杆菌粘附素(bordetellaad hesin,PRN)以及鞭毛蛋白(flagellin,fla B)进行PCR鉴定,结果发现所有分离株上述毒力因子都为阳性。最后,对Bb分离株进行18种抗生素的药敏实验,发现所有分离株对阿莫西林、头孢噻呋、链霉素、氨苄西林等8种药物高度耐药,而对卡那霉素、美罗培南以及庆大霉素高度敏感;此外,部分菌株对红霉素、氟苯尼考、强力霉素以及阿米卡星耐药。总之,本研究从PRDC的猪肺中分离到5株支气管败血波氏杆菌,这些分离株显示出不同的耐药特性,同时,分离株含有的与毒力相关的毒力因子,暗示了其致病特性。 展开更多
关键词 猪呼吸道综合征 支气管败血波氏杆菌 16S rRAN 毒力因子 耐药性
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兔支气管败血波氏杆菌PRN基因缺失突变株的构建及特性研究 被引量：5
14
作者 李洪广 王芳 +2 位作者 姜平 范志宇 胡波 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期299-305,共7页
利用自杀性质粒构建兔支气管败血波氏杆菌百日咳黏附素(PRN)缺失突变株以研究PRN在支气管败血波氏杆菌(Bb)致病机理中的作用,同时为支气管败血波氏杆菌病减毒活疫苗的研究提供理论依据。PCR扩增出PRN1(PRN上游基因)和PRN2(PRN下游基因)... 利用自杀性质粒构建兔支气管败血波氏杆菌百日咳黏附素(PRN)缺失突变株以研究PRN在支气管败血波氏杆菌(Bb)致病机理中的作用,同时为支气管败血波氏杆菌病减毒活疫苗的研究提供理论依据。PCR扩增出PRN1(PRN上游基因)和PRN2(PRN下游基因)2个目的基因片段,运用基因重组技术将庆大霉素抗性基因(GM)连接到PRN1和PRN2之间,将连接好的基因片段克隆到pMEG-375自杀性载体中,构建自杀性载体pMEG375-PRN1-GM-PRN2,将其转化到宿主菌SM-10中,通过宿主菌SM-10与受体菌Bb固相滤膜交配,自杀性载体转移到受体菌,根据同源重组原理,抗性筛选得到基因缺失突变株,命名为Bb(△PRN)。对突变株Bb(△PRN)与野生株WT进行了遗传稳定性、生长特性、溶血特性、细胞黏附特性、毒力、免疫保护性等比较研究。结果表明:Bb(△PRN)具有遗传稳定性;与野生株相比,突变株生长速度较慢,毒力有所下降,溶血活性及对Hep-2细胞的黏附能力没有明显变化;小鼠免疫原性试验结果显示,突变株免疫小鼠后可以产生强有力的免疫力,能够抵抗野生株的攻击。Bb(△PRN)突变株构建成功并具有良好的免疫原性,为支气管败血波氏杆菌病减毒活疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 兔 支气管败血波氏杆菌 百日咳杆菌黏附素 基因缺失 生物学特性 免疫原性
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支气管败血波氏杆菌PCR检测方法的建立和应用 被引量：4
15
作者 肖海君 崔金生 +6 位作者 翁立雪 王小娥 杨春晓 曲朝杰 朱彩霞 刘冠华 朱瑞良 《山东农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2009年第1期70-74,共5页
根据支气管败血波氏杆菌ptxA基因设计1对引物,扩增特异的872bp核酸片段,建立了应用PCR检测支气管败血波氏杆菌的方法。特异性试验结果表明,3株支气管败血波氏杆菌参考菌株均能扩增出872bp特异性的核酸片段,兔源性的大肠杆菌、巴氏杆菌... 根据支气管败血波氏杆菌ptxA基因设计1对引物,扩增特异的872bp核酸片段,建立了应用PCR检测支气管败血波氏杆菌的方法。特异性试验结果表明,3株支气管败血波氏杆菌参考菌株均能扩增出872bp特异性的核酸片段,兔源性的大肠杆菌、巴氏杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄菌的扩增结果均为阴性。敏感性试验结果表明,PCR的最低检出限量为210个支气管败血波氏杆菌。利用建立的PCR检测方法对22株从山东省泰安地区某兔场采集的疑似兔支气管败血波氏杆菌病病兔鼻黏液棉拭子进行检测,结果19株为阳性。并同时进行普通血清学方法和细菌学方法,对检测结果进行了比较,结果显示,PCR方法阳性检出率高于其他检测方法。 展开更多
关键词 兔 支气管败血波氏杆菌 PCR 检测 建立 应用
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兔支气管败血波氏杆菌双夹心ELISA检测方法的建立 被引量：4
16
作者 熊富强 王芳 +4 位作者 恽时锋 林焱 范志宇 胡波 赵宁 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第1期120-125,共6页
为建立特异性好、敏感性高、稳定可靠的兔支气管败血波氏杆菌(Bb)双夹心ELISA检测方法,制备了兔抗Bb免疫血清和小鼠抗Bb腹水单抗(Bb McAb),并将它们提纯。用方阵法筛选最佳反应浓度,用特异性试验、敏感性试验和重复性试验对该方法进行鉴... 为建立特异性好、敏感性高、稳定可靠的兔支气管败血波氏杆菌(Bb)双夹心ELISA检测方法,制备了兔抗Bb免疫血清和小鼠抗Bb腹水单抗(Bb McAb),并将它们提纯。用方阵法筛选最佳反应浓度,用特异性试验、敏感性试验和重复性试验对该方法进行鉴定,并与PCR检测方法比较。结果表明,兔抗Bb IgG的最佳稀释度为1∶6 400,浓度为2.5 mg/L;单抗的最佳稀释度为1∶800,浓度为5.0 mg/L。特异性试验和重复性试验结果表明,该方法特异性强、重复性好,与兔常见病菌大肠埃希氏菌、多杀性巴氏杆菌和产气荚膜梭菌均不发生反应,同时与PCR检测方法的符合率为100%。 展开更多
关键词 支气管败血波氏杆菌 免疫血清 单克隆抗体 双夹心ELISA
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新西兰白兔支气管败血波氏杆菌的分离与鉴定 被引量：12
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作者 范志宇 恽时锋 +2 位作者 薛家宾 徐为中 王芳 《中国比较医学杂志》 CAS 2007年第5期278-282,共5页
目的了解支气管败血波氏杆菌在实验兔群中的感染情况,并对该菌的生物学特性进行研究。方法从江苏南京地区四家实验兔场采集有鼻炎症状的患兔鼻腔分泌物63份进行细菌的分离鉴定,并对分离菌对小鼠的毒性,对断奶幼兔的致病性,对抗生素敏感... 目的了解支气管败血波氏杆菌在实验兔群中的感染情况,并对该菌的生物学特性进行研究。方法从江苏南京地区四家实验兔场采集有鼻炎症状的患兔鼻腔分泌物63份进行细菌的分离鉴定,并对分离菌对小鼠的毒性,对断奶幼兔的致病性,对抗生素敏感性和生长培养特性等进行了研究。结果共分离出支气管败血波氏杆菌19株,分离率为30.16%,分离菌中有15株为强毒,1株为弱毒,3株无毒;对其中5株强毒株的抗生素敏感性试验表明,所有毒株对新霉素、氯霉素、红霉素、妥布霉素高度敏感,而对痢特灵、链霉素、洁霉素均不敏感,对其他抗生素的敏感性则各不相同。结论支气管败血波氏杆菌是引起实验兔鼻炎的重要病原菌,分离率较高,并与季节具有一定的相关性,分离菌对小鼠毒性较高,对幼兔具有一定的致病性,具有特定的生长特性、形态特性和对抗生素的敏感特性。 展开更多
关键词 新西兰白兔 支气管败血波氏杆菌 分离 鉴定 抗生素敏感性 致病性
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猪支气管败血波氏杆菌菌毛fimD基因的克隆表达及间接ELISA检测方法的建立 被引量：2
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作者 何华 裴洁 +5 位作者 吴斌 赵战勤 张建民 罗勇 向敏 卢顺 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期98-102,共5页
参照GenBank上支气管败血波氏杆菌的菌毛fimD基因序列(X75811),设计1对引物,从本实验室分离鉴定的猪源支气管败血波氏杆菌中扩增出fimD编码区1 098 bp的片段,将其克隆至原核表达载体pET-28a,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行融合表达。SDS... 参照GenBank上支气管败血波氏杆菌的菌毛fimD基因序列(X75811),设计1对引物,从本实验室分离鉴定的猪源支气管败血波氏杆菌中扩增出fimD编码区1 098 bp的片段,将其克隆至原核表达载体pET-28a,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行融合表达。SDS-PAGE和Western blot检测证实该表达产物以包涵体形式存在,大小约42 ku,与用支气管败血波氏杆菌菌体制备的阳性血清能发生特异性反应。将包涵体变性和复性后包被酶标板建立间接ELISA(fimD-ELISA),特异性良好。用fimD-ELISA检测临床送检的668份血清,阳性率为30.7%。用该法与微量凝集试验平行检测102份血清,fimD-ELISA的敏感性高于微量凝集试验。 展开更多
关键词 支气管败血波氏杆菌 fimD 克隆 表达 ELISA
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支气管败血波氏杆菌dnt基因的克隆、表达及活性鉴定 被引量：3
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作者 赵战勤 薛云 +3 位作者 裴洁 王臣 丁轲 程相朝 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2010年第11期112-115,共4页
通过PCR扩增获得支气管败血波氏杆菌的全长4 395 bpdnt基因,并利用pET-28a/BL21系统对其进行了融合表达。Western-blot检测结果表明,表达产物具有良好的免疫学活性。使用His-band purification kit纯化后,得到纯度为93.2%的融合蛋白HIS6... 通过PCR扩增获得支气管败血波氏杆菌的全长4 395 bpdnt基因,并利用pET-28a/BL21系统对其进行了融合表达。Western-blot检测结果表明,表达产物具有良好的免疫学活性。使用His-band purification kit纯化后,得到纯度为93.2%的融合蛋白HIS6-DNT。在乳鼠皮肤坏死试验中,表达产物HIS6-DNT和天然DNT均能导致乳鼠皮肤产生坏死性病变。在乳鼠皮肤坏死阻断试验中,兔抗HIS6-DNT血清能中和天然DNT,使其失去对乳鼠皮肤的坏死毒性。试验结果表明,重组蛋白具有天然DNT的生物学毒性和免疫原性,所产生的抗体具有中和活性,为DNT的结构和功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 支气管败血波氏杆菌 皮肤坏死毒素 dnt基因 表达
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兔支气管败血波氏杆菌OMP-ELISA抗体检测方法的建立 被引量：3
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作者 范志宇 王欣 +5 位作者 王芳 熊富强 胡波 徐鹏 魏后军 徐为中 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第3期566-570,共5页
为简便快速检测支气管败血波氏杆菌(Bb),建立了一种特异、敏感的间接ELISA方法。通过应用超声波裂解和超速离心法提取了支气管败血波氏杆菌Ⅰ相菌外膜蛋白(OMPs),并用该蛋白包被酶标板,经特异性、敏感性和重复性试验优化后建立间接ELIS... 为简便快速检测支气管败血波氏杆菌(Bb),建立了一种特异、敏感的间接ELISA方法。通过应用超声波裂解和超速离心法提取了支气管败血波氏杆菌Ⅰ相菌外膜蛋白(OMPs),并用该蛋白包被酶标板,经特异性、敏感性和重复性试验优化后建立间接ELISA方法。结果表明,试验确定抗原的包被浓度为14.44μg/ml,可检测血清最高稀释度达1∶400;该方法有很高的特异性和敏感性,与微量凝集试验相比,敏感性提高约33倍;该方法重复性良好。 展开更多
关键词 支气管败血波氏杆菌 外膜蛋白(OMPs) 抗体 间接ELISA
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