疫苗生产过程中预防支原体污染的方法

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作者 刘召明 杨香芳 +3 位作者 刘兆霞 申茂欣 王琳 吴太航 《中国畜牧业》 2024年第2期43-44,共2页

兽用疫苗的生产过程通常会涉及细胞培养,而在细胞培养过程中非常容易被支原体污染,影响细胞的正常形态和遗传,进而对疫苗制品的质量与安全造成严重的负面影响,破坏疫苗的正常免疫效力,甚至会给动物造成严重的危害。笔者简单阐述了在疫... 兽用疫苗的生产过程通常会涉及细胞培养,而在细胞培养过程中非常容易被支原体污染,影响细胞的正常形态和遗传,进而对疫苗制品的质量与安全造成严重的负面影响,破坏疫苗的正常免疫效力,甚至会给动物造成严重的危害。笔者简单阐述了在疫苗生产过程中的重点检测目标、疫苗生产中常见的污染物、支原体常用的检测方法,同时还对有效预防支原体污染提出了几点建议,以供相关人员参考。 展开更多

关键词 兽用疫苗 免疫效力 支原体污染 细胞培养 疫苗生产 质量与安全 检测方法 检测目标

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生物制品中支原体污染的快速检测 被引量：11

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作者 应蓓蓓 陆诗华 +2 位作者 吴维寿 赵寿元 李昌本 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1999年第5期53-56,共4页

用两步ＰＣＲ法（ＮｅｓｔｅｄＰＣＲ）及ＤＮＡ荧光染色技术（ＨｏｅｃｈｓｔＳｔａｉｎｉｎｇ），检测了８１份不同来源和批号的疫苗及一些实验用细胞株中的支原体，并对检测结果做了比较。ＰＣＲ阳性检出率为３８．３％，Ｈｏｅｃｈ... 用两步ＰＣＲ法（ＮｅｓｔｅｄＰＣＲ）及ＤＮＡ荧光染色技术（ＨｏｅｃｈｓｔＳｔａｉｎｉｎｇ），检测了８１份不同来源和批号的疫苗及一些实验用细胞株中的支原体，并对检测结果做了比较。ＰＣＲ阳性检出率为３８．３％，Ｈｏｅｃｈｓｔ阳性检出率为１９％。这些结果表明ＰＣＲ法较Ｈｏｅｃｈｓｔ染色法更敏感。 展开更多

关键词 支原体污染 NestedPCR DNA荧光染色法 生物制品

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支原体污染的检测及鉴定方法研究进展 被引量：5

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作者 英聪 刘灿 +2 位作者 王海光 宁宜宝 毕丁仁 《中国家禽》 北大核心 2012年第23期46-49,共4页

自1956年国外学者第一次检测到细胞培养物中存在支原体污染以来,这个世界性问题持续了半个多世纪。对于生物制品中支原体污染的检测方法多种多样,但尚无统一的内控标准,而建立一种快速、准确的方法用于支原体污染的检测,可以有效地减少... 自1956年国外学者第一次检测到细胞培养物中存在支原体污染以来,这个世界性问题持续了半个多世纪。对于生物制品中支原体污染的检测方法多种多样,但尚无统一的内控标准,而建立一种快速、准确的方法用于支原体污染的检测,可以有效地减少和预防支原体污染,从而提高生物制品的纯净性。本文对支原体污染的几种常见检测及鉴定方法进行综述,包括DNA荧光染色法、PCR、IFA与ELISA等,以期为支原体污染的检测及鉴定研究提供参考。 展开更多

关键词 支原体污染 检测 鉴定

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PCR和分离培养检测细胞培养支原体污染的比较 被引量：5

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作者 赖小敏 方国源 +1 位作者 李彩霞 王传恩 《中山医科大学学报》 CSCD 1999年第2期151-154,共4页

目的：检测细胞培养中支原体的污染，建立支原体通用的ＰＣＲ方法。方法：根据已出版的序列设计并合成一对支原体（柔膜体纲）１６ＳｒＲＮＡ基因组特异引物。对实验室所存的１２种支原体、大肠杆菌、变形杆菌及无支原体污染的组织培养... 目的：检测细胞培养中支原体的污染，建立支原体通用的ＰＣＲ方法。方法：根据已出版的序列设计并合成一对支原体（柔膜体纲）１６ＳｒＲＮＡ基因组特异引物。对实验室所存的１２种支原体、大肠杆菌、变形杆菌及无支原体污染的组织培养细胞进行了ＰＣＲ扩增。以ＰＣＲ与分离培养比较检测了３３份细胞培养标本。结果：１２种支原体均出现了约６２０ｂｐ左右的特异性扩增带，敏感性为１００～１０００个支原体细胞，且常见的６种细胞培养污染支原体的扩增片段均能被ＨｉｎｄⅢ切成２８０与３４０ｂｐ左右的２条带。理论上推测这对引物可扩增所有支原体１６ＳｒＤＮＡ。但对大肠杆菌、变形杆菌及无支原体污染的组织培养细胞等未见有扩增带出现。在对３３份细胞培养标本的检测中，除ＰＣＲ和分离培养同时检出２份阳性外，前方法还另检出阳性３份。５份ＰＣＲ扩增物均被ＨｉｎｄⅢ切出２条带。结论：ＰＣＲ较分离培养敏感性高，可提高细胞培养污染支原体的检出率，防止出现假阴性结果；如做好质量控制，对于一般实验室检测细胞培养支原体污染。 展开更多

关键词 细胞培养 支原体污染 聚合酶链反应

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应用聚合酶链式反应检测细胞培养物和细胞培养用小牛血清支原体污染 被引量：2

5

作者 郭玉广 南文龙 +6 位作者 张春艳 宫晓 李金积 张文学 李明义 范根成 杜元钊 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2005年第7期30-32,共3页

支原体污染是细胞培养中普遍存在的突出问题,直接影响细胞培养的成败以及以细胞培养为基础的科学实验结果的准确性。本试验用聚合酶链式反应(套式PCR)对实验室中生长不良的3种细胞系、11种细胞培养用小牛血清进行了检测。结果显示,3种... 支原体污染是细胞培养中普遍存在的突出问题,直接影响细胞培养的成败以及以细胞培养为基础的科学实验结果的准确性。本试验用聚合酶链式反应(套式PCR)对实验室中生长不良的3种细胞系、11种细胞培养用小牛血清进行了检测。结果显示,3种细胞系的第一次PCR扩增结果为全部为阳性,检出率为100%;11种细胞培养用小牛血清第一次PCR扩增后8种样品为阳性,对第一次PCR扩增为阴性的血清样品进行第二次PCR扩增结果全部为阳性,检出率100%。传统的支原体检测繁琐、费时、周期长而受到限制,本试验使用的套式PCR法为细胞培养工作中检测支原体污染提供了一种敏感、快速、特异的方法。 展开更多

关键词 聚合酶链式反应 支原体污染 牛血清 细胞培养物 检测 PCR扩增 应用 科学实验 直接影响 生长不良 血清样品 培养工作 PCR法 细胞系 检出率 准确性 实验室 阳性 试验

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兽用生物制品的支原体污染检验及注意事项 被引量：5

6

作者 张瑞婷 张立春 +1 位作者 夏业才 刘惠文 《中国兽药杂志》 2001年第2期28-30,共3页

制备支原体污染检验培养基所使用原材料水、血清、无机盐类、乳蛋白水解物、琼脂的质量要求 ,制备培养基方法 ,检验操作及检验中注意事项。

关键词 检验培养基 检验方法 兽用生物制品 支原体污染

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清除杂交瘤细胞支原体污染几种方法的比较 被引量：1

7

作者 佘鸣 孙同哲 沈德诚 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1999年第1期F003-F003,共1页

关键词 杂交瘤细胞 支原体污染 细胞培养

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应用电镜技术快速检测培养细胞中的支原体污染 被引量：1

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作者 李六金 姜焕宏 +3 位作者 李成 刘建荣 马伟辉 李宏 《中国兽药杂志》 2002年第6期31-33,共3页

应用电镜技术可快速准确地检测培养细胞中的支原体污染。通过高速离心浓缩样品,负染色后电镜观察,可在30min内做出判定,方法快速、简便、准确。

关键词 电镜技术 快速检测 培养细胞 支原体污染

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生物制品中的支原体污染 被引量：2

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作者 朱庆虎 刘兰刚 康二勇 《畜牧兽医科技信息》 2010年第6期9-11,共3页

支原体（Myeoplasma）是一种大小介于细菌和病毒之间（最小直径0．2um）并独立生活的微生物，是生物制品细胞培养中较常见的污染物。目前，细胞培养（特别是传代细胞）被支原体污染已成为一个世界性问题。据报道，目前世界上有30％．50... 支原体（Myeoplasma）是一种大小介于细菌和病毒之间（最小直径0．2um）并独立生活的微生物，是生物制品细胞培养中较常见的污染物。目前，细胞培养（特别是传代细胞）被支原体污染已成为一个世界性问题。据报道，目前世界上有30％．50％的细胞系（株）已受支原体污染。 展开更多

关键词 支原体污染 生物制品 细胞培养 最小直径 传代细胞 世界性 微生物 污染物

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生物制品生产过程中支原体污染的预防和清除 被引量：1

10

作者 朱庆虎 刘兰刚 康二勇 《畜牧兽医科技信息》 2010年第7期6-7,共2页

在生物制品中,组织活疫苗和细胞苗都可能由于种种原因受到支原体的污染,尤其是细胞苗更容易受到污染。支原体是介于细菌与病毒之间能独立生活的最小微生物,最小直径0.2μm,一般过滤除菌无法去除它,光镜下难以看清它的形态结构。开始不... 在生物制品中,组织活疫苗和细胞苗都可能由于种种原因受到支原体的污染,尤其是细胞苗更容易受到污染。支原体是介于细菌与病毒之间能独立生活的最小微生物,最小直径0.2μm,一般过滤除菌无法去除它,光镜下难以看清它的形态结构。开始不易发现,能在偏碱条件下生存,对青霉素有抗药性。多吸附于细胞表面或散在于细胞之间。支原体是细胞培养中最常见、不易被察觉和干扰正常生产的污染物，约有30％～50％的细胞培养物中有支原体污染。培养细胞受支原体污染后，部分敏感细胞可见细胞生长增殖变慢， 展开更多

关键词 支原体污染 生产过程 生物制品 细胞培养物 清除 预防 细胞苗 最小直径

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用清洗纯化法清除传代细胞系中支原体污染的方法探索 被引量：2

11

作者 丁建民 《中国兽药杂志》 2004年第10期41-42,共2页

　为了解决引进细胞系的支原体污染和细胞传代生长不稳定问题,尝试对细胞培养条件和细胞群进行优选,并建立了清洗离心结合敏感抗生素法,达到了清除支原体和稳定细胞活力的目的。

关键词 清洗纯化法 传代细胞 支原体污染 细胞活力

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生物制品生产中支原体污染的检测和预防 被引量：1

12

作者 李小静 练炳洲 +2 位作者 邓月嫦 王凤国 梁榕丽 《山东畜牧兽医》 2012年第1期55-56,共2页

支原体是生物制品中常见的一种污染微生物,工作环境、操作者本身、培养基、污染支原体的细胞、试验器材和用来制备细胞的原始组织或器官都可能给生产带来支原体的污染。生物制品一旦污染支原体,会引起质量下降,免疫效果得不到保证,严重... 支原体是生物制品中常见的一种污染微生物,工作环境、操作者本身、培养基、污染支原体的细胞、试验器材和用来制备细胞的原始组织或器官都可能给生产带来支原体的污染。生物制品一旦污染支原体,会引起质量下降,免疫效果得不到保证,严重时可造成人力、物力、财力上的巨大损失,因此在生物制品生产中,需严格保持无菌操作,建立快速有效的检测方法,有效防止支原体的污染。 展开更多

关键词 生物制品生产 支原体污染 检测 预防 污染微生物 原始组织 免疫效果 无菌操作

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46株分泌单抗杂交瘤细胞株支原体污染的检测

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作者 李秀华 郭玮 +5 位作者 高光 范学祥 吕秀华 袁曾麟 尹红章 李德富 《单克隆抗体通讯》 CSCD 1994年第2期61-61,81,共2页

４６株分泌单抗杂交瘤细胞株支原体污染的检测李秀华，郭玮，高光，范学祥，吕秀华，袁曾麟，尹红章，李德富（中国药品生物制品检定所，北京１０００５０）细胞培养物感染支原体是一个十分严重的问题，尤其是对有重要应用价值的杂交瘤... ４６株分泌单抗杂交瘤细胞株支原体污染的检测李秀华，郭玮，高光，范学祥，吕秀华，袁曾麟，尹红章，李德富（中国药品生物制品检定所，北京１０００５０）细胞培养物感染支原体是一个十分严重的问题，尤其是对有重要应用价值的杂交瘤细胞，往往造成细胞生长缓慢、胞浆颗... 展开更多

关键词 单克隆抗体 杂交瘤 支原体污染

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制苗用鸡蛋中支原体污染的检测

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作者 张映 李彦明 霍朝辉 《山西农业大学学报（自然科学版）》 CAS 2002年第4期342-343,共2页

本研究应用KM_2液体培养基培养法和姬姆萨氏染色法对来源于山西生物制品厂的两批可疑感染支原体的制苗用鸡蛋进行了检测。结果表明:第一批样品阳性检出率为71.4％;第二批样品阳性检出率为85.7％。由此说明,该试验方法作为支原体污染检... 本研究应用KM_2液体培养基培养法和姬姆萨氏染色法对来源于山西生物制品厂的两批可疑感染支原体的制苗用鸡蛋进行了检测。结果表明:第一批样品阳性检出率为71.4％;第二批样品阳性检出率为85.7％。由此说明,该试验方法作为支原体污染检测的常规方法使用于生产中具有重要的实践意义。 展开更多

关键词 制苗用鸡蛋 支原体污染 KM2液体培养基 姬姆萨氏染色法

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3种PCR引物对猪瘟活疫苗中支原体污染的检测 被引量：5

15

作者 任杰 张绍芬 张映 《中国畜牧兽医》 CAS 2008年第10期39-42,共4页

本研究以GenBank中登录的几种常见支原体的16S rRNA基因序列为标准,依据其属、种特征设计了3对引物,对猪肺炎支原体DNA进行PCR扩增,建立PCR扩增体系和条件。然后以此体系和条件对从市场上随机购买的猪瘟活疫苗样品进行检测。结果显示:3... 本研究以GenBank中登录的几种常见支原体的16S rRNA基因序列为标准,依据其属、种特征设计了3对引物,对猪肺炎支原体DNA进行PCR扩增,建立PCR扩增体系和条件。然后以此体系和条件对从市场上随机购买的猪瘟活疫苗样品进行检测。结果显示:3对PCR引物都可以从疫苗样品中检测到支原体的污染,3对引物的检出率分别为20%、17.1%和14.3%,说明猪瘟活疫苗中的支原体污染为多种支原体的混合污染,污染源较为复杂。 展开更多

关键词 支原体污染 猪瘟活疫苗 PCR

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吕梁黑山羊成纤维细胞培养过程中支原体污染的快速发现及去除

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作者 吴苏君 李希 王曦 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2021年第5期42-46,I0013,共6页

为了快速发现细胞培养过程中的支原体污染,并在污染发生早期有效去除,从而挽救细胞。以吕梁黑山羊耳缘成纤维细胞为研究对象,通过显微镜直接观察法、DNA荧光染色法结合检测细胞,可在1 h内快速发现细胞是否存在支原体污染。对疑似支原体... 为了快速发现细胞培养过程中的支原体污染,并在污染发生早期有效去除,从而挽救细胞。以吕梁黑山羊耳缘成纤维细胞为研究对象,通过显微镜直接观察法、DNA荧光染色法结合检测细胞,可在1 h内快速发现细胞是否存在支原体污染。对疑似支原体污染的试验组细胞使用25μg/mL支原体抗生素(Plasmocin)连续处理14 d,再通过上述2种方法和PCR法结合检测细胞中是否仍存在支原体污染,绘制药物处理后试验组细胞的生长曲线。结果表明,支原体污染早期,用25μg/mL Plasmocin连续处理试验组细胞14 d后,高倍显微镜下细胞形态恢复,荧光试剂Hoechst 33342染色观察试验组细胞和对照组细胞均只见胞核,核外未见散在荧光,PCR未检测到支原体,药物处理后试验组细胞生长曲线正常。说明细胞已恢复正常生长,支原体抗生素Plasmocin可有效去除细胞培养中早期支原体污染。 展开更多

关键词 吕梁黑山羊 细胞培养 支原体污染 支原体去除 plasmocin

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生物制品中支原体污染及清除方法的研究进展 被引量：2

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作者 杜金玲 王丹娜 +6 位作者 石磊 吕超超 王吉玮 孟姗姗 刘长辉 卢会英 赵亚荣 《中国兽药杂志》 2012年第2期57-60,共4页

支原体是生物制品污染中较常见的一种微生物,它可以污染细胞、病毒批、血清等制品,给科研及生物制品产业带来危害。文章简要介绍了支原体污染生物制品后带来的危害,并对清除支原体方法的研究进展进行了综述。

关键词 支原体污染 危害 清除

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兽医生物制品生产中消除支原体污染方法探讨 被引量：1

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作者 苏国华 《福建畜牧兽医》 2002年第4期8-8,共1页

关键词 兽医生物制品 生产 消除 支原体污染

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兽用疫苗生产中支原体污染检测及预防

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作者 康一岚 徐慧琳 +5 位作者 杨代蓉 魏嘉 刘玉静 申茂欣 赵同渊 夏娜 《中国畜牧业》 2023年第15期89-90,共2页

在兽用疫苗生产的过程中,特别是对细胞培养过程中,极易被支原体污染,严重地影响了疫苗的质量及安全,对于普通疫苗和细胞生产活毒疫苗的污染,会给疫苗生产商或使用不合格疫苗的养殖户带来极大的经济损失,同时也不利于畜禽疾病防控工作的... 在兽用疫苗生产的过程中,特别是对细胞培养过程中,极易被支原体污染,严重地影响了疫苗的质量及安全,对于普通疫苗和细胞生产活毒疫苗的污染,会给疫苗生产商或使用不合格疫苗的养殖户带来极大的经济损失,同时也不利于畜禽疾病防控工作的顺利开展。其中支原体是疫苗生产过程中比较常见的微生物,而造成支原体污染的原因也较多. 展开更多

关键词 兽用疫苗 畜禽疾病 防控工作 支原体污染 细胞培养 活毒疫苗 微生物 养殖户

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支原体对细胞培养污染的研究概况 被引量：19

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作者 武昱孜 张旭 +2 位作者 华利忠 刘茂军 邵国青 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第9期112-117,共6页

支原体是自然界中存在的最小、最简单的原核生物,大小介于细菌和病毒之间,可通过滤菌器,对许多抗生素有抗性,是细胞培养污染中一种常见的微生物。被支原体污染后的细胞培养物,引起细胞形态学和功能的改变,导致用细胞基质制备的生物制品... 支原体是自然界中存在的最小、最简单的原核生物,大小介于细菌和病毒之间,可通过滤菌器,对许多抗生素有抗性,是细胞培养污染中一种常见的微生物。被支原体污染后的细胞培养物,引起细胞形态学和功能的改变,导致用细胞基质制备的生物制品报废,且很难清除。一旦发生污染,就意味着试验的失败,造成巨大的人力、物力、财力的浪费。从支原体对细胞培养物污染后造成的危害及对支原体污染的预防、检测、清除等的研究进展进行论述,为细胞支原体污染的防控提供依据和手段。 展开更多

关键词 细胞培养 支原体污染 检测技术 清除

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