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MMP-9反义RNA真核表达载体的构建及鉴定
被引量:
1
1
作者
唐琳
陈奎生
+2 位作者
张岚
张云汉
高冬玲
《山东医药》
CAS
北大核心
2005年第16期13-14,共2页
目的构建MMP-9反义RNA真核表达载体。方法提取胃癌组织总RNA,按照GenBank中检索的MMP-9基因cDNA序列,设计并合成反义MMP-9基因片段引物,进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),先将扩增产物克隆至pGEM-T载体,再将其反向亚克隆到真核表达质粒pc...
目的构建MMP-9反义RNA真核表达载体。方法提取胃癌组织总RNA,按照GenBank中检索的MMP-9基因cDNA序列,设计并合成反义MMP-9基因片段引物,进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),先将扩增产物克隆至pGEM-T载体,再将其反向亚克隆到真核表达质粒pcDNA3.1中,然后对阳性克隆进行酶切鉴定和测序分析。结果PCR扩增出的反义片段与预期长度相符。构建的MMP-9反义RNA表达质粒pcDNA3.1-MMP-9分别作PCR及双酶切(BamH和Hind)鉴定,证实其中有目的片段完整插入,插入片段测序结果与反义MMP-9序列设计完全一致。结论成功构建了MMP-9反义RNA真核表达载体pcDNA3.1-MMP-9,为进一步研究MMP-9蛋白分子的生物学功能和以MMP-9为靶点的恶性肿瘤的基因治疗研究奠定了基础。
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关键词
真核表达载体
逆转录聚合酶链反应
反义RNA表达质粒
PCDNA3.1
MMP-9基因
CDNA序列
真核表达质粒
PCR扩增
BamHⅠ
生物学功能
总RNA
胃癌组织
扩增产物
基因
片段
测序分析
酶切鉴定
阳性克隆
序列设计
插入片段
基因治疗
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职称材料
人呼吸道合胞病毒转录调节基因转染肺腺癌细胞系的研究
2
作者
张利群
陈杭薇
+3 位作者
王四海
辛庆红
杜玉国
尤兰华
《山东医药》
CAS
北大核心
2005年第12期15-16,共2页
目的 获得稳定表达人呼吸道合胞病毒(h RSV) M2 - 1基因的人肺腺癌细胞系。方法 通过基因重组法构建h RSV M2 - 1基因真核表达载体,用脂质体将其转染人肺腺癌PAa和A5 4 9细胞,经G4 18筛选获得阳性表达细胞株,并用逆转录-聚合酶链反应(...
目的 获得稳定表达人呼吸道合胞病毒(h RSV) M2 - 1基因的人肺腺癌细胞系。方法 通过基因重组法构建h RSV M2 - 1基因真核表达载体,用脂质体将其转染人肺腺癌PAa和A5 4 9细胞,经G4 18筛选获得阳性表达细胞株,并用逆转录-聚合酶链反应(RT- PCR)和Western Blot进行验证。结果 得到了约6 5 0 bp的基因插入片段,DNA测序表明该基因高度保守。筛选出了稳定高量表达M2 - 1基因的PAa和A5 4 9细胞,并被证实有M2 - 1蛋白表达。结论 获得了稳定表达h RSV M2 - 1蛋白的PAa和A5 4
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关键词
人呼吸道合胞病毒
逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)
基因转染
转录调节
基因真核表达载体
M2-1基因
人肺腺癌细胞系
Western
A549细胞株
HRSV
稳定表达
DNA测序
PAa
基因重组
阳性表达
插入片段
Blot
蛋白表达
脂质体
筛选
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职称材料
基于重测序的大豆新品种齐黄34的全基因组变异挖掘
被引量:
18
3
作者
张彦威
李伟
+3 位作者
张礼凤
王彩洁
戴海英
徐冉
《中国油料作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第2期150-158,共9页
为全面揭示大豆优良品种和重要亲本的全基因组突变类型,采用高通量重测序技术,对大豆品种齐黄34进行全基因组重测序,测序深度13×,共检测到1 519 494个单核苷酸多态位点,357 549个小片段插入缺失位点,4 506个结构变异;这些变异共导...
为全面揭示大豆优良品种和重要亲本的全基因组突变类型,采用高通量重测序技术,对大豆品种齐黄34进行全基因组重测序,测序深度13×,共检测到1 519 494个单核苷酸多态位点,357 549个小片段插入缺失位点,4 506个结构变异;这些变异共导致了17 748基因变异;大量光周期相关的重要基因发生突变,其中包括CRYPTOCHROME 2、GIGANTEA、Timing of CAB expression 1、E1、PHYTOCHROME A、Flowering Locus T、CONSTANS、Terminal Flower like等,齐黄34为E1基因型。本研究为分子标记辅助选择提供了重要的标记资源。
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关键词
全基因组重测序
单核苷酸多态
小
片段
插入
缺失
结构变异
基因变异
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职称材料
云南黑山羊全基因组重测序
被引量:
7
4
作者
兰蓉
朱兰
+1 位作者
邵庆勇
洪琼花
《草食家畜》
2016年第5期11-17,共7页
采用Illumina Hiseq2000测序技术对由云南黑山羊具有代表性的个体构建的DNA池进行20X全基因组重测序,以期对云南黑山羊分子特征做出评价,并为云南黑山羊功能基因定位提供分子基础数据。结果表明:云南黑山羊可以检测到7 615 774个SNP、87...
采用Illumina Hiseq2000测序技术对由云南黑山羊具有代表性的个体构建的DNA池进行20X全基因组重测序,以期对云南黑山羊分子特征做出评价,并为云南黑山羊功能基因定位提供分子基础数据。结果表明:云南黑山羊可以检测到7 615 774个SNP、877 232个INDEL和40 005个SV。通过比对山羊参考基因组,并进行生物信息学分析,结果显示云南黑山羊位于外显子区域的SNP有35 902个,其中异义突变17 160个,同义突变18 920个;外显子区域的小INDEL有1 330个;位于内含子区域的SNP 1 695 420个,小INDEL 208 999,位于UTR3区域的SNP 16 106个,小INDEL 580个。研究结果基本阐明了云南黑山羊的分子特征,为后续功能基因的研究提供了强大的数据支撑,并为功能基因的定位提供新的思路和线索。
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关键词
云南黑山羊
全基因组重测序
单核苷酸多态性
小
片段
插入
缺失变异
结构变异
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职称材料
题名
MMP-9反义RNA真核表达载体的构建及鉴定
被引量:
1
1
作者
唐琳
陈奎生
张岚
张云汉
高冬玲
机构
河南省肿瘤病理重点实验室
郑州大学第一附属医院
出处
《山东医药》
CAS
北大核心
2005年第16期13-14,共2页
基金
国家"十五""211"工程重点学科建设项目[教重办(2002)第2号]
河南省医学科技创新人才工程资助项目(No.2003112007)
文摘
目的构建MMP-9反义RNA真核表达载体。方法提取胃癌组织总RNA,按照GenBank中检索的MMP-9基因cDNA序列,设计并合成反义MMP-9基因片段引物,进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),先将扩增产物克隆至pGEM-T载体,再将其反向亚克隆到真核表达质粒pcDNA3.1中,然后对阳性克隆进行酶切鉴定和测序分析。结果PCR扩增出的反义片段与预期长度相符。构建的MMP-9反义RNA表达质粒pcDNA3.1-MMP-9分别作PCR及双酶切(BamH和Hind)鉴定,证实其中有目的片段完整插入,插入片段测序结果与反义MMP-9序列设计完全一致。结论成功构建了MMP-9反义RNA真核表达载体pcDNA3.1-MMP-9,为进一步研究MMP-9蛋白分子的生物学功能和以MMP-9为靶点的恶性肿瘤的基因治疗研究奠定了基础。
关键词
真核表达载体
逆转录聚合酶链反应
反义RNA表达质粒
PCDNA3.1
MMP-9基因
CDNA序列
真核表达质粒
PCR扩增
BamHⅠ
生物学功能
总RNA
胃癌组织
扩增产物
基因
片段
测序分析
酶切鉴定
阳性克隆
序列设计
插入片段
基因治疗
Keywords
MMP-9 Expression vector Antisense Gene clone
分类号
R512.62 [医药卫生—内科学]
R735.7 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
人呼吸道合胞病毒转录调节基因转染肺腺癌细胞系的研究
2
作者
张利群
陈杭薇
王四海
辛庆红
杜玉国
尤兰华
机构
北京军区总医院
出处
《山东医药》
CAS
北大核心
2005年第12期15-16,共2页
基金
全军医药卫生科研基金课题 (No.0 1MA0 14 )
文摘
目的 获得稳定表达人呼吸道合胞病毒(h RSV) M2 - 1基因的人肺腺癌细胞系。方法 通过基因重组法构建h RSV M2 - 1基因真核表达载体,用脂质体将其转染人肺腺癌PAa和A5 4 9细胞,经G4 18筛选获得阳性表达细胞株,并用逆转录-聚合酶链反应(RT- PCR)和Western Blot进行验证。结果 得到了约6 5 0 bp的基因插入片段,DNA测序表明该基因高度保守。筛选出了稳定高量表达M2 - 1基因的PAa和A5 4 9细胞,并被证实有M2 - 1蛋白表达。结论 获得了稳定表达h RSV M2 - 1蛋白的PAa和A5 4
关键词
人呼吸道合胞病毒
逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)
基因转染
转录调节
基因真核表达载体
M2-1基因
人肺腺癌细胞系
Western
A549细胞株
HRSV
稳定表达
DNA测序
PAa
基因重组
阳性表达
插入片段
Blot
蛋白表达
脂质体
筛选
Keywords
Human respiratory syncytial virus Lung adenocarcinoma cell M2-1 gene Reverse Transc- ription-polymerase chain reaction
分类号
R392.7 [医药卫生—免疫学]
R737.9 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
基于重测序的大豆新品种齐黄34的全基因组变异挖掘
被引量:
18
3
作者
张彦威
李伟
张礼凤
王彩洁
戴海英
徐冉
机构
山东省农业科学院作物研究所
出处
《中国油料作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第2期150-158,共9页
基金
国家自然科学基金(31501329)
山东省自然科学基金(ZR2015YL070)
国家大豆产业技术体系(CARS-04-CES18)
文摘
为全面揭示大豆优良品种和重要亲本的全基因组突变类型,采用高通量重测序技术,对大豆品种齐黄34进行全基因组重测序,测序深度13×,共检测到1 519 494个单核苷酸多态位点,357 549个小片段插入缺失位点,4 506个结构变异;这些变异共导致了17 748基因变异;大量光周期相关的重要基因发生突变,其中包括CRYPTOCHROME 2、GIGANTEA、Timing of CAB expression 1、E1、PHYTOCHROME A、Flowering Locus T、CONSTANS、Terminal Flower like等,齐黄34为E1基因型。本研究为分子标记辅助选择提供了重要的标记资源。
关键词
全基因组重测序
单核苷酸多态
小
片段
插入
缺失
结构变异
基因变异
Keywords
Whole genome re- sequencing
Single nucleotide polymorphism
Small Indel
Structure varia-tion
DNA variation
分类号
S565.103 [农业科学—作物学]
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职称材料
题名
云南黑山羊全基因组重测序
被引量:
7
4
作者
兰蓉
朱兰
邵庆勇
洪琼花
机构
云南省畜牧兽医科学院
出处
《草食家畜》
2016年第5期11-17,共7页
基金
云南省科技计划项目(2014BB014)
国家现代农业产业技术体系建设(CARS-39)
文摘
采用Illumina Hiseq2000测序技术对由云南黑山羊具有代表性的个体构建的DNA池进行20X全基因组重测序,以期对云南黑山羊分子特征做出评价,并为云南黑山羊功能基因定位提供分子基础数据。结果表明:云南黑山羊可以检测到7 615 774个SNP、877 232个INDEL和40 005个SV。通过比对山羊参考基因组,并进行生物信息学分析,结果显示云南黑山羊位于外显子区域的SNP有35 902个,其中异义突变17 160个,同义突变18 920个;外显子区域的小INDEL有1 330个;位于内含子区域的SNP 1 695 420个,小INDEL 208 999,位于UTR3区域的SNP 16 106个,小INDEL 580个。研究结果基本阐明了云南黑山羊的分子特征,为后续功能基因的研究提供了强大的数据支撑,并为功能基因的定位提供新的思路和线索。
关键词
云南黑山羊
全基因组重测序
单核苷酸多态性
小
片段
插入
缺失变异
结构变异
Keywords
yunnan black goat
whole-genome sequencing
SNP
InDel
SV
分类号
S813.8 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
MMP-9反义RNA真核表达载体的构建及鉴定
唐琳
陈奎生
张岚
张云汉
高冬玲
《山东医药》
CAS
北大核心
2005
1
在线阅读
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职称材料
2
人呼吸道合胞病毒转录调节基因转染肺腺癌细胞系的研究
张利群
陈杭薇
王四海
辛庆红
杜玉国
尤兰华
《山东医药》
CAS
北大核心
2005
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
基于重测序的大豆新品种齐黄34的全基因组变异挖掘
张彦威
李伟
张礼凤
王彩洁
戴海英
徐冉
《中国油料作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
18
在线阅读
下载PDF
职称材料
4
云南黑山羊全基因组重测序
兰蓉
朱兰
邵庆勇
洪琼花
《草食家畜》
2016
7
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职称材料
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