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MMP-9反义RNA真核表达载体的构建及鉴定 被引量:1
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作者 唐琳 陈奎生 +2 位作者 张岚 张云汉 高冬玲 《山东医药》 CAS 北大核心 2005年第16期13-14,共2页
目的构建MMP-9反义RNA真核表达载体。方法提取胃癌组织总RNA,按照GenBank中检索的MMP-9基因cDNA序列,设计并合成反义MMP-9基因片段引物,进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),先将扩增产物克隆至pGEM-T载体,再将其反向亚克隆到真核表达质粒pc... 目的构建MMP-9反义RNA真核表达载体。方法提取胃癌组织总RNA,按照GenBank中检索的MMP-9基因cDNA序列,设计并合成反义MMP-9基因片段引物,进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),先将扩增产物克隆至pGEM-T载体,再将其反向亚克隆到真核表达质粒pcDNA3.1中,然后对阳性克隆进行酶切鉴定和测序分析。结果PCR扩增出的反义片段与预期长度相符。构建的MMP-9反义RNA表达质粒pcDNA3.1-MMP-9分别作PCR及双酶切(BamH和Hind)鉴定,证实其中有目的片段完整插入,插入片段测序结果与反义MMP-9序列设计完全一致。结论成功构建了MMP-9反义RNA真核表达载体pcDNA3.1-MMP-9,为进一步研究MMP-9蛋白分子的生物学功能和以MMP-9为靶点的恶性肿瘤的基因治疗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 真核表达载体 逆转录聚合酶链反应 反义RNA表达质粒 PCDNA3.1 MMP-9基因 CDNA序列 真核表达质粒 PCR扩增 BamHⅠ 生物学功能 总RNA 胃癌组织 扩增产物 基因片段 测序分析 酶切鉴定 阳性克隆 序列设计 插入片段 基因治疗
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人呼吸道合胞病毒转录调节基因转染肺腺癌细胞系的研究
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作者 张利群 陈杭薇 +3 位作者 王四海 辛庆红 杜玉国 尤兰华 《山东医药》 CAS 北大核心 2005年第12期15-16,共2页
目的 获得稳定表达人呼吸道合胞病毒(h RSV) M2 - 1基因的人肺腺癌细胞系。方法 通过基因重组法构建h RSV M2 - 1基因真核表达载体,用脂质体将其转染人肺腺癌PAa和A5 4 9细胞,经G4 18筛选获得阳性表达细胞株,并用逆转录-聚合酶链反应(... 目的 获得稳定表达人呼吸道合胞病毒(h RSV) M2 - 1基因的人肺腺癌细胞系。方法 通过基因重组法构建h RSV M2 - 1基因真核表达载体,用脂质体将其转染人肺腺癌PAa和A5 4 9细胞,经G4 18筛选获得阳性表达细胞株,并用逆转录-聚合酶链反应(RT- PCR)和Western Blot进行验证。结果 得到了约6 5 0 bp的基因插入片段,DNA测序表明该基因高度保守。筛选出了稳定高量表达M2 - 1基因的PAa和A5 4 9细胞,并被证实有M2 - 1蛋白表达。结论 获得了稳定表达h RSV M2 - 1蛋白的PAa和A5 4 展开更多
关键词 人呼吸道合胞病毒 逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) 基因转染 转录调节 基因真核表达载体 M2-1基因 人肺腺癌细胞系 Western A549细胞株 HRSV 稳定表达 DNA测序 PAa 基因重组 阳性表达 插入片段 Blot 蛋白表达 脂质体 筛选
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基于重测序的大豆新品种齐黄34的全基因组变异挖掘 被引量:18
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作者 张彦威 李伟 +3 位作者 张礼凤 王彩洁 戴海英 徐冉 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期150-158,共9页
为全面揭示大豆优良品种和重要亲本的全基因组突变类型,采用高通量重测序技术,对大豆品种齐黄34进行全基因组重测序,测序深度13×,共检测到1 519 494个单核苷酸多态位点,357 549个小片段插入缺失位点,4 506个结构变异;这些变异共导... 为全面揭示大豆优良品种和重要亲本的全基因组突变类型,采用高通量重测序技术,对大豆品种齐黄34进行全基因组重测序,测序深度13×,共检测到1 519 494个单核苷酸多态位点,357 549个小片段插入缺失位点,4 506个结构变异;这些变异共导致了17 748基因变异;大量光周期相关的重要基因发生突变,其中包括CRYPTOCHROME 2、GIGANTEA、Timing of CAB expression 1、E1、PHYTOCHROME A、Flowering Locus T、CONSTANS、Terminal Flower like等,齐黄34为E1基因型。本研究为分子标记辅助选择提供了重要的标记资源。 展开更多
关键词 全基因组重测序 单核苷酸多态 片段插入缺失 结构变异 基因变异
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云南黑山羊全基因组重测序 被引量:7
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作者 兰蓉 朱兰 +1 位作者 邵庆勇 洪琼花 《草食家畜》 2016年第5期11-17,共7页
采用Illumina Hiseq2000测序技术对由云南黑山羊具有代表性的个体构建的DNA池进行20X全基因组重测序,以期对云南黑山羊分子特征做出评价,并为云南黑山羊功能基因定位提供分子基础数据。结果表明:云南黑山羊可以检测到7 615 774个SNP、87... 采用Illumina Hiseq2000测序技术对由云南黑山羊具有代表性的个体构建的DNA池进行20X全基因组重测序,以期对云南黑山羊分子特征做出评价,并为云南黑山羊功能基因定位提供分子基础数据。结果表明:云南黑山羊可以检测到7 615 774个SNP、877 232个INDEL和40 005个SV。通过比对山羊参考基因组,并进行生物信息学分析,结果显示云南黑山羊位于外显子区域的SNP有35 902个,其中异义突变17 160个,同义突变18 920个;外显子区域的小INDEL有1 330个;位于内含子区域的SNP 1 695 420个,小INDEL 208 999,位于UTR3区域的SNP 16 106个,小INDEL 580个。研究结果基本阐明了云南黑山羊的分子特征,为后续功能基因的研究提供了强大的数据支撑,并为功能基因的定位提供新的思路和线索。 展开更多
关键词 云南黑山羊 全基因组重测序 单核苷酸多态性 片段插入缺失变异 结构变异
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