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集胞藻ORFs侧翼序列的PCR扩增和定向基因插入失活策略
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作者 徐旭东 孔任秋 +2 位作者 刘珂 王江新 宁德刚 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期544-550,共7页
针对集胞藻PCC6803的1927个待定编码基因进行了两侧序列的PCR扩增。4个亚株基因组在。sll0267-sll0268-sll0269区域的 PCR扩增产物与 Kazusa DNA数据存在差异。以叶绿素合成基因c... 针对集胞藻PCC6803的1927个待定编码基因进行了两侧序列的PCR扩增。4个亚株基因组在。sll0267-sll0268-sll0269区域的 PCR扩增产物与 Kazusa DNA数据存在差异。以叶绿素合成基因chlH和chlL为例,显示三片段连接PCR产物可有效用于集胞藻6803基因组定向插入失活。 展开更多
关键词 集胞藻6803 PCR 定向基因插入失活 扩增
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多变鱼腥藻ATCC 29413基因的一步插入失活
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作者 雷棋琴 戢水玲 +3 位作者 黄任衡 高宏 徐旭东 孔任秋 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期48-53,共6页
多变鱼腥藻ATCC 29413有潜力发展为异养生长产异形胞蓝藻的研究模式种,但由于细胞内的限制-修饰系统等原因,其基因转移效率极低。研究克隆了该藻株的两个甲基化酶(M.AvaⅠ和M.AvrⅡ)基因ava_3181和ava_4359,构建了辅助质粒pHB6088,对运... 多变鱼腥藻ATCC 29413有潜力发展为异养生长产异形胞蓝藻的研究模式种,但由于细胞内的限制-修饰系统等原因,其基因转移效率极低。研究克隆了该藻株的两个甲基化酶(M.AvaⅠ和M.AvrⅡ)基因ava_3181和ava_4359,构建了辅助质粒pHB6088,对运载质粒进行甲基化保护以避免被细胞中的限制酶切割。以ava_1237和ava_4412基因为例,研究证明利用该辅助质粒和接合转移系统可通过双交换对多变鱼腥藻ATCC 29413的基因实现一步插入失活。 展开更多
关键词 多变鱼腥藻ATCC 29413 接合转移 辅助质粒 甲基化酶基因 基因插入失活
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普杜大学利用转座子插入失活法鉴定抗病害基因
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作者 孙国凤 《生物技术通报》 CAS CSCD 1989年第6期30-30,共1页
美国普杜大学(印第安纳州西拉法耶特)生物科学部J.L.Bennetzen等的小组使用转座子,进行探索玉米病害基因的研究。目前病害抗性是关系到多数基因均复杂现象。因此,在分子水平上测定有关病害抗性的基因是要花费很多劳力和时间的工作。插... 美国普杜大学(印第安纳州西拉法耶特)生物科学部J.L.Bennetzen等的小组使用转座子,进行探索玉米病害基因的研究。目前病害抗性是关系到多数基因均复杂现象。因此,在分子水平上测定有关病害抗性的基因是要花费很多劳力和时间的工作。插入转座子,查找失活的基因方法有可能使病害抗性基因的探索效率飞跃性提高。Bennetzen从8月20日在京都召开的第五次国际植物病理学会上报告了目前的成果。 展开更多
关键词 转座子 插入失活 拉法耶特 飞跃性 碱基序列 玉米柄锈菌 印第安纳州 特异性 米基 玉米品种
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1种用于检测抑制基因功能的酵母株系的建立(英文)
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作者 李慧娥 郭其强 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2011年第3期57-60,共4页
酵母被广泛用于分子生物学中基因功能的检测。为扩大酵母株系UCC419在抑制基因活性检测方面的应用,本研究通过向UCC419株系中导入用特殊引物扩增出的包含标记基因TRP1的PCR片段,利用同源重组将UCC419中的筛选标记基因LEU2敲除,并同时插... 酵母被广泛用于分子生物学中基因功能的检测。为扩大酵母株系UCC419在抑制基因活性检测方面的应用,本研究通过向UCC419株系中导入用特殊引物扩增出的包含标记基因TRP1的PCR片段,利用同源重组将UCC419中的筛选标记基因LEU2敲除,并同时插入TRP1,新建立的株系命名为UCC419m(m:modi-fied)。UCC419m为TRP1筛选、leu2突变型菌株,其它基因型均同UCC419。给UCC419m中转入携带LEU2的质粒pDEST32检测是否能恢复其表现型,同时转入不携带LEU2的质粒pDEST22作为阴性对照,将转化子在不含LEU2与URA3的培养基中培养,结果显示,携带LEU2质粒pDEST32的转化子能够在LEU2与URA3缺陷型培养基上正常生长,而不携带LEU2质粒pDEST22的转化子不能生长。本研究结果表明,成功建立了一种适用于基于Invitrogen载体的抑制基因活性检测或从文库中筛选抑制基因的酵母菌株。 展开更多
关键词 酵母 双交换插入失活 转化
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HCO_3^-高亲和转运蛋白操纵子基因在聚球藻7942CO_2浓缩机制中功能的研究
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作者 陈金灶 张平 +3 位作者 邬小兵 徐惠娟 纪小苹 龙敏南 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第B05期27-31,共5页
蓝藻Synechococcussp.PCC7942 HCO3-高亲和转运蛋白操纵子基因cmpABCD是其CO2浓缩机制中的调控基因之一.本研究用携带潮霉素B磷酸转移酶基因(hygromyc in B pho transferase,hpt)筛选标记的同源双臂整合载体pUC-HATH转化蓝藻Synechococc... 蓝藻Synechococcussp.PCC7942 HCO3-高亲和转运蛋白操纵子基因cmpABCD是其CO2浓缩机制中的调控基因之一.本研究用携带潮霉素B磷酸转移酶基因(hygromyc in B pho transferase,hpt)筛选标记的同源双臂整合载体pUC-HATH转化蓝藻Synechococcussp.PCC7942,以潮霉素B作为筛选试剂筛选出具潮霉素B抗性的转化藻,运用引物PCR方法证实潮霉素B磷酸转移酶基因表达盒通过质粒pUC-HATH的介导已定点插入蓝藻Synechococcussp.PCC7942基因组中,成功地构建了具有潮霉素B抗性的cmpBCD基因插入失活突变藻株.并最终通过比较野生藻Synechococcussp.PCC7942和突变藻Synechococcussp.PCC7942在不同Na2CO3浓度的改良BG-11培养基中生长特性,探讨了HCO3-高亲和转运蛋白操纵子cmpABCD基因失活对藻体生长的影响. 展开更多
关键词 SYNECHOCOCCUS SP.PCC7942 CO2浓缩机制 插入失活
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