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不同提取缓冲液对红树林土壤DNA提取品质的影响 被引量:5
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作者 蒋云霞 郑天凌 《热带海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期87-93,共7页
针对1种典型的酸性、高有机质含量类型土壤——红树林土壤,从DNA产量、DNA纯度、土壤腐殖酸类物质的提取量以及DNA提取物PCR(polymerase chain reaction)扩增反应的敏感度等方面比较了不同提取缓冲液对土壤DNA品质的影响。结果表明,酸性... 针对1种典型的酸性、高有机质含量类型土壤——红树林土壤,从DNA产量、DNA纯度、土壤腐殖酸类物质的提取量以及DNA提取物PCR(polymerase chain reaction)扩增反应的敏感度等方面比较了不同提取缓冲液对土壤DNA品质的影响。结果表明,酸性SDS(sodium dodecyl sulfate)提取缓冲液所获得的土壤DNA产量及纯度均较低;PVP(polyvinylpyrrolidone)提取缓冲液所获得的土壤DNA产量较高,但土壤腐殖酸类物质的提取量亦远高于其他提取缓冲液;酸性SDS提取缓冲液及PVP提取缓冲液所获得的土壤DNA提取物即使稀释到10?3量级亦不能获得目的基因PCR扩增条带。PVPP(polyvinylpolypyrrolidone)提取缓冲液及CTAB(cetyltrimethylammonium bromide)+PVPP提取缓冲液所获得的土壤DNA产量较PVP提取缓冲液低,但其纯度较高,并且其纯度随提取缓冲液中PVPP浓度的升高而提高;当2%PVPP提取缓冲液及CTAB+PVPP提取缓冲液所获得的土壤DNA提取物分别稀释到10?2及10?1量级时,均能获得PCR扩增条带。综上所述,酸性提取缓冲液及PVP提取缓冲液不适用于酸性、高有机质含量类型土壤DNA的提取,而2%PVPP提取缓冲液及CTAB+PVPP提取缓冲液均能提高此类土壤DNA的提取品质。 展开更多
关键词 红树林土壤 DNA提取 DNA产量 腐殖酸 提取缓冲液
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转hTNF-α基因在鱼腥藻中表达产物的提取及其初步纯化 被引量:1
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作者 牛黎莉 张芃芃 +7 位作者 韩睿 冉亮 赵兴贵 宋东辉 邓元告 张越男 郭玉蓉 施定基 《生物技术通报》 CAS CSCD 2006年第2期88-92,共5页
研究了转hTNF-α基因鱼腥藻7120(Anabaenasp.PCC 7120)中表达产物的最佳提取条件,并研究目标蛋白hTNF-α对温度耐受度和硫酸铵盐析的条件,对总蛋白和目标蛋白进行了检测。结果表明,hTNF-α的最佳溶出条件为:0.05 mol/L、pH7.5Tris-HCl... 研究了转hTNF-α基因鱼腥藻7120(Anabaenasp.PCC 7120)中表达产物的最佳提取条件,并研究目标蛋白hTNF-α对温度耐受度和硫酸铵盐析的条件,对总蛋白和目标蛋白进行了检测。结果表明,hTNF-α的最佳溶出条件为:0.05 mol/L、pH7.5Tris-HCl缓冲液,NaCl的浓度为0.2 mol/L;当温度为55℃时,处理30min,其hTNF-α提取量下降不明显,回收率达到92.08%,可除去约40%的杂蛋白;先用饱和度为30%的硫酸铵沉淀杂蛋白,再用60%的硫酸铵沉淀目标蛋白,又可除去部分杂蛋白。 展开更多
关键词 人肿瘤坏死因子Α 鱼腥藻7120 提取缓冲液 温度处理 硫酸铵沉淀处理
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影响胡萝卜种子蛋白质提取的几种因素探讨
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作者 王慧英 林石明 +2 位作者 廖富荣 陈青 刘斌 《福建农业学报》 CAS 2009年第4期338-340,共3页
探讨了提取液比例、pH值、提取缓冲液、浸提时间、PVP用量、提取介质、SDS等因素对胡萝卜种子蛋白质提取的影响。结果表明:蛋白质的提取受料液比、pH值、浸提时间、缓冲液种类、提取介质的影响较大。初步确定,在4℃条件下,胡萝卜种子蛋... 探讨了提取液比例、pH值、提取缓冲液、浸提时间、PVP用量、提取介质、SDS等因素对胡萝卜种子蛋白质提取的影响。结果表明:蛋白质的提取受料液比、pH值、浸提时间、缓冲液种类、提取介质的影响较大。初步确定,在4℃条件下,胡萝卜种子蛋白提取的较佳条件为:料液比(W∶V)1∶10,pH值8.0的50mmol.L-1Tris-HCL缓冲液,浸提时间1 h。 展开更多
关键词 胡萝卜 种子蛋白 料液比 提取缓冲液 浸提时间 提取介质
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流式细胞术分析苜蓿相对DNA含量的样品处理方法 被引量:7
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作者 刘倩 魏臻武 《草业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1718-1723,共6页
为制备用于流式细胞仪分析的高纯度苜蓿(Medicago sativa)细胞核悬液,筛选最适合流式细胞仪分析的苜蓿细胞核提取方法,选用江苏地方品种淮阴苜蓿为供试材料,分别采用酶解法和机械解离法提取苜蓿细胞核悬液;用5种细胞核分离缓冲液及两种... 为制备用于流式细胞仪分析的高纯度苜蓿(Medicago sativa)细胞核悬液,筛选最适合流式细胞仪分析的苜蓿细胞核提取方法,选用江苏地方品种淮阴苜蓿为供试材料,分别采用酶解法和机械解离法提取苜蓿细胞核悬液;用5种细胞核分离缓冲液及两种混合酶解液制备样品,根据各自优缺点筛选最适宜的苜蓿细胞核提取法。在机械法所用的5种细胞核提取缓冲液中,LB01缓冲液提取效果最好,提取的细胞核形态及内部结构完整,获得的细胞核量多。利用两种混合酶液制备苜蓿细胞核悬液,均出现倍性明显的峰,混合酶液Ⅰ制备的单细胞核悬液优于混合酶液Ⅱ,且酶解法制备细胞核悬液,可获得数量更多更完整的原生质体。但利用酶解法制备细胞核原生质体,其悬浮液中杂质多,需时较长。结果表明,LB01缓冲液为最适合制备苜蓿细胞核悬液的提取缓冲液。 展开更多
关键词 苜蓿 流式细胞术 酶解法 细胞核提取缓冲液
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超高效液相色谱-串联质谱法同时测定猪肌肉中13种喹诺酮药物残留 被引量:24
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作者 王金秋 马建民 +2 位作者 夏曦 李晓薇 丁双阳 《质谱学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第2期185-192,共8页
建立了超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)同时测定猪肌肉中13种喹诺酮类药物残留的方法.样品用Na2 EDTA-Mcllvaine缓冲溶液及磷酸盐缓冲液超声提取,HLB柱固相萃取,在电喷雾正离子模式下,以多反应监测(MRM)方式采集数据进行定性... 建立了超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)同时测定猪肌肉中13种喹诺酮类药物残留的方法.样品用Na2 EDTA-Mcllvaine缓冲溶液及磷酸盐缓冲液超声提取,HLB柱固相萃取,在电喷雾正离子模式下,以多反应监测(MRM)方式采集数据进行定性与定量分析.在5~200 μg/kg浓度范围内线性良好,相关系数均大于0.990;所检测的13种药物在5.0、50.0、100.0 μg/kg 3个浓度水平添加,回收率在64.55%~117.62%之间,日内变异系数小于14.28%,日间变异系数小于12.81%,检测限均为1.0 μg/kg,定量限均为5.0 μg/kg.本方法简便快速、灵敏可靠,适用于猪肌肉中喹诺酮类药物多残留的同时快速定性与定量测定. 展开更多
关键词 超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS MS) 喹诺酮 缓冲液提取 猪肌肉
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