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凝血因子Ⅸ无义突变真核表达载体的构建及其在COS-7细胞的表达
被引量：
1
1
作者
聂欣
杨林花
+4 位作者
柴宝峰
申泉
张媛
张耀方
陈剑芳
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
2010年第3期749-752,共4页
本研究以含有fⅨ cDNA的pcDNA3.1质粒为模板构建4种包含不同类型无义突变的fⅨ真核表达载体并进行鉴定,实现其在COS-7细胞中的表达。采用以PCR为基础的定点突变法体外构建fⅨ基因无义突变体,并通过DNA序列分析进一步鉴定证实;应用脂质...
本研究以含有fⅨ cDNA的pcDNA3.1质粒为模板构建4种包含不同类型无义突变的fⅨ真核表达载体并进行鉴定,实现其在COS-7细胞中的表达。采用以PCR为基础的定点突变法体外构建fⅨ基因无义突变体,并通过DNA序列分析进一步鉴定证实;应用脂质体转化技术将野生型、突变型fⅨ表达载体分别瞬时转染COS-7细胞,采用实时定量PCR鉴定fⅨ mRNA在各组的相对表达水平。结果表明,4个突变型质粒除相应位点的无义突变外,未见其它突变,提示无义突变载体构建成功。实时定量PCR鉴定表明,各突变组真核表达载体已成功转染COS-7细胞株并能转录为mRNA。结论:采用以PCR为基础的定点突变法可在体外构建fⅨ真核表达载体,并可在COS-7细胞中表达,其转录过程中不引发mRNA降解,这为进一步研究无义突变引起FⅨ功能丧失及表达量降低的机制和治疗研究提供了物质基础。
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关键词
凝血因子IX
真核表达载体
血友病B
提前终止翻译密码子
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职称材料
题名
凝血因子Ⅸ无义突变真核表达载体的构建及其在COS-7细胞的表达
被引量：
1
1
作者
聂欣
杨林花
柴宝峰
申泉
张媛
张耀方
陈剑芳
机构
山西医科大学第二医院血液科
山西大学生物技术研究所
出处
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
2010年第3期749-752,共4页
基金
山西省归国留学人员科研基金(编号2009重点7)
山西省科技攻关项目(编号022073-1)
文摘
本研究以含有fⅨ cDNA的pcDNA3.1质粒为模板构建4种包含不同类型无义突变的fⅨ真核表达载体并进行鉴定,实现其在COS-7细胞中的表达。采用以PCR为基础的定点突变法体外构建fⅨ基因无义突变体,并通过DNA序列分析进一步鉴定证实;应用脂质体转化技术将野生型、突变型fⅨ表达载体分别瞬时转染COS-7细胞,采用实时定量PCR鉴定fⅨ mRNA在各组的相对表达水平。结果表明,4个突变型质粒除相应位点的无义突变外,未见其它突变,提示无义突变载体构建成功。实时定量PCR鉴定表明,各突变组真核表达载体已成功转染COS-7细胞株并能转录为mRNA。结论:采用以PCR为基础的定点突变法可在体外构建fⅨ真核表达载体,并可在COS-7细胞中表达,其转录过程中不引发mRNA降解,这为进一步研究无义突变引起FⅨ功能丧失及表达量降低的机制和治疗研究提供了物质基础。
关键词
凝血因子IX
真核表达载体
血友病B
提前终止翻译密码子
Keywords
Factor Ⅸ
eukaryotic expression vector
hemophilia B
premature termination codon
分类号
R544.1 [医药卫生—心血管疾病]
Q789 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
凝血因子Ⅸ无义突变真核表达载体的构建及其在COS-7细胞的表达
聂欣
杨林花
柴宝峰
申泉
张媛
张耀方
陈剑芳
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
2010
1
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