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指数富集的配体系统进化技术研究进展及在食品检测中的应用 被引量:4
1
作者 谭建锡 陈盼 +2 位作者 莫瑾 彭梓 朱金国 《食品安全质量检测学报》 CAS 2016年第1期80-84,共5页
核酸适配体是指能以极高的亲和力和特异性与靶分子结合的寡核苷酸序列,可识别的靶分子范围非常广,并均可通过指数富集的配体系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)技术筛选得到。近年来,在传统SE... 核酸适配体是指能以极高的亲和力和特异性与靶分子结合的寡核苷酸序列,可识别的靶分子范围非常广,并均可通过指数富集的配体系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)技术筛选得到。近年来,在传统SELEX技术的基础上,新的SELEX技术不断出现。这些新技术的出现,在不断完善SELEX技术的同时,也极大地推动了适配体技术在各学科领域中的发展及应用。本文对核酸适配体的筛选方法进行了总结,并介绍了其在食品检测领域的应用现状和发展方向,为核酸适配体的筛选与应用提供了参考。 展开更多
关键词 核酸适配体 筛选方法 指数富集配体系统进化技术 食品检测
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配体指数级系统进化技术与医学检测
2
作者 任延平 吕卓人 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期55-57,共3页
关键词 配体指数系统进化 医学检测 流式细胞术 生物传感器 分子信标
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复合靶指数富集的配基系统进化技术研究进展 被引量:2
3
作者 武振宁 薛书江 杨咏洁 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期947-951,共5页
核酸适配体是一类具有高度特异性和亲和力的单链寡核苷酸,被誉为"人工单抗",具有广阔的应用前景。它一般是通过指数富集的配基系统进化(SELEX)技术筛选获得。目前SELEX技术多局限于单一、纯化的可溶性蛋白质靶标。然而,蛋白... 核酸适配体是一类具有高度特异性和亲和力的单链寡核苷酸,被誉为"人工单抗",具有广阔的应用前景。它一般是通过指数富集的配基系统进化(SELEX)技术筛选获得。目前SELEX技术多局限于单一、纯化的可溶性蛋白质靶标。然而,蛋白质的纯化过程繁琐,耗时费力,而且很多靶标(如血清中的低丰度蛋白质或细胞的膜蛋白)很难纯化获得单一纯品。复合靶SELEX技术则可以避免靶标的纯化过程,能够保持靶标的天然构象,并且可以在未明确靶标的组成及结构特性的前提下,通过高通量的盲筛获得一系列特异性核酸适配体。该文主要介绍以未纯化的各种生物样本为复合靶的SELEX技术,以期为核酸适配体的筛选提供新思路。 展开更多
关键词 复合靶 核酸适配体 指数富集的配基系统进化 筛选 综述
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小分子靶标的非固定化核酸适配体筛选技术研究进展
4
作者 胡洋洋 杨歌 屈锋 《色谱》 北大核心 2025年第4期297-308,共12页
核酸适配体是通过指数富集配体系统进化(SELEX)技术获得的一段核糖核酸(RNA)或单链脱氧核糖核酸(ssDNA),可用于靶标的特异性识别。核酸适配体具有易于化学合成和修饰、高热稳定性、低毒性与低免疫原性等优势。小分子靶标的核酸适配体在... 核酸适配体是通过指数富集配体系统进化(SELEX)技术获得的一段核糖核酸(RNA)或单链脱氧核糖核酸(ssDNA),可用于靶标的特异性识别。核酸适配体具有易于化学合成和修饰、高热稳定性、低毒性与低免疫原性等优势。小分子靶标的核酸适配体在新药研发、肿瘤治疗、疾病诊断、超快速灵敏检测、环境污染监测和毒品检测等领域具有广泛的应用前景。然而,小分子因结构简单、分子质量小且可供核酸结合的基团有限,导致靶向小分子的适配体结合不稳定,为适配体的筛选与传感器的开发带来了巨大挑战。高效的筛选技术是获取高性能适配体的关键,目前适用于小分子靶标的核酸适配体筛选技术主要分为3类:基于靶标固定的筛选技术、基于核酸库固定的筛选技术以及靶标非固定化的筛选技术。与其他两种筛选技术相比,靶标非固定化的筛选技术所需的筛选轮数更少且获得的适配体亲和力更高(通常在nmol/L水平)。本文总结了小分子靶标的非固定化核酸适配体筛选技术(包括氧化石墨烯(GO)-SELEX、毛细管电泳(CE)-SELEX和纳米金辅助(GNP)-SELEX)的原理、优缺点及应用进展。此外,本文总结了在适配体特异性评价中对照靶标的选择策略。 展开更多
关键词 指数富集配体系统进化技术 小分子靶标 非固定化核酸适配体筛选技术 综述
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呋虫胺残留检测核酸适配体的筛选与鉴定
5
作者 张栋园 崔新仪 +3 位作者 张志鹏 李金丽 李宁 程伟霞 《农药学学报》 北大核心 2025年第2期248-256,共9页
呋虫胺的广泛使用对农产品安全及生态环境具有潜在风险,快速、准确检测呋虫胺残留具有重要意义。本研究通过氧化石墨烯-指数富集配体系统进化技术(GO-SELEX),从ssDNA(单链DNA)文库中筛选并获得了呋虫胺的核酸适配体Seq1、Seq12和Seq14... 呋虫胺的广泛使用对农产品安全及生态环境具有潜在风险,快速、准确检测呋虫胺残留具有重要意义。本研究通过氧化石墨烯-指数富集配体系统进化技术(GO-SELEX),从ssDNA(单链DNA)文库中筛选并获得了呋虫胺的核酸适配体Seq1、Seq12和Seq14。对适配体二级结构进行预测并检测了适配体的亲和力,结果表明:适配体Seq1、Seq12和Seq14的解离常数分别为164.23±25.41、201.68±17.42及237.10±29.17 nmol/L。采用适配体Seq1与纳米金粒子(AuNPs)建立了纳米金比色检测方法,对呋虫胺进行定量检测,检出限为0.002 mg/kg。相对于传统的检测方法,本研究基于GO-SELEX建立的纳米金比色法可以实现更加快速、方便的现场检测,在注重时效性和新鲜度的农业生产实践中具有很好的应用潜力。 展开更多
关键词 呋虫胺 核酸适配体 氧化石墨烯 指数富集配体系统进化 纳米金颗粒 比色法
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铜绿假单胞菌特异性核酸适配体的筛选及其在菌体检测方面的应用
6
作者 李旭 成洋洋 +2 位作者 杨凯 刘本康 李成 《食品科学》 北大核心 2025年第9期322-328,共7页
为实现对致病菌铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)的快速微量检测,本研究首先利用全细胞指数富集的配体系统进化技术,筛选靶向铜绿假单胞菌的特异性单链DNA(single-stranded DNA,ssDNA)适配体。经15轮富集后共获得30个ssDNA序列,比... 为实现对致病菌铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)的快速微量检测,本研究首先利用全细胞指数富集的配体系统进化技术,筛选靶向铜绿假单胞菌的特异性单链DNA(single-stranded DNA,ssDNA)适配体。经15轮富集后共获得30个ssDNA序列,比较吉布斯自由能ΔG和解离常数Kd后,确定适配体Apt_(13)的特异性和亲和力最佳,可用于铜绿假单胞菌的检测。异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记菌体形成的FITC-P.aeruginosa复合物具有荧光,适配体Apt_(13)的加入可猝灭其荧光,而反筛菌大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和溶壁微球菌不影响Apt_(13)对FITC-P.aeruginosa荧光的猝灭作用。基于此现象构建了用于铜绿假单胞菌检测的荧光系统。通过适配体Apt_(13)对待测样本中荧光的猝灭情况判断是否存在铜绿假单胞菌。在确定Apt_(13)最佳使用浓度及其与P.aeruginosa孵育的最优时间基础上,Apt_(13)猝灭的荧光强度与铜绿假单胞菌在10^(1)~10^(8)CFU/mL范围内呈线性关系,检出限为2 CFU/mL,检测可在2.0 h内完成,并可对水样中铜绿假单胞菌实现有效检测。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 全细胞指数富集配体系统进化技术 配体 荧光传感器
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外泌体的核酸适配体筛选技术研究进展
7
作者 郑李婷 杨歌 屈锋 《色谱》 北大核心 2025年第5期424-433,共10页
外泌体密切参与细胞间通讯,调控细胞生理过程,是目前癌症和其他疾病早期诊断的潜在生物标志物之一。因此,具有特定功能的外泌体的检测与分离具有重要临床意义。与此同时,开发低成本、高灵敏度的外泌体特异性识别元件,将在疾病早期诊断... 外泌体密切参与细胞间通讯,调控细胞生理过程,是目前癌症和其他疾病早期诊断的潜在生物标志物之一。因此,具有特定功能的外泌体的检测与分离具有重要临床意义。与此同时,开发低成本、高灵敏度的外泌体特异性识别元件,将在疾病早期诊断和治疗过程中发挥关键作用。核酸适配体是通过指数富集配体系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)筛选获得的、可与靶标特异性结合的单链脱氧核糖核酸或核糖核酸,具备稳定性高、可化学合成、高亲和力和特异性以及靶标范围广等独特优势。目前,靶向外泌体的适配体已应用于细胞成像、药物递送、疾病诊疗等众多研究领域。然而,外泌体的异质性以及复杂结构,为精准识别特定外泌体的适配体筛选带来巨大挑战,高效的筛选技术是获得优良性能适配体的关键。本文总结了外泌体适配体筛选过程中关键靶点的功能及其选择策略,概述了目前应用于外泌体适配体筛选的主要方法与应用,包括磁珠-SELEX、微流控-SELEX、硝酸纤维素膜-SELEX、细胞-SELEX和毛细管电泳-SELEX等5种筛选技术,并对其分离原理、优势与限制以及最新应用进行阐述与分析。最后,对外泌体适配体筛选所面临的问题与挑战进行了总结与展望。 展开更多
关键词 配体 指数富集系统进化技术 外泌体
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采用Cell-SELEX技术的核酸适配体在肿瘤靶向治疗的研究进展
8
作者 成志云 陈佳怡 +3 位作者 白如玉 杨会勇 MOHSAN Ullah 刁勇 《华侨大学学报(自然科学版)》 CAS 2024年第4期439-444,共6页
阐述细胞-配体指数富集系统进化(Cell-SELEX)技术特点,以及通过该技术筛选得到的核酸适配体在肿瘤靶向治疗中的应用进展和挑战,通过查阅近年的相关文献,综述核酸适配体作为药物及药物载体在肿瘤靶向治疗中的应用研究进展。结果表明:基于... 阐述细胞-配体指数富集系统进化(Cell-SELEX)技术特点,以及通过该技术筛选得到的核酸适配体在肿瘤靶向治疗中的应用进展和挑战,通过查阅近年的相关文献,综述核酸适配体作为药物及药物载体在肿瘤靶向治疗中的应用研究进展。结果表明:基于Cell-SELEX技术筛选得到的核酸适配体在肿瘤靶向治疗中的疗效显著,可开发成为肿瘤靶向治疗的潜力药物及良好的药物载体。 展开更多
关键词 核酸适配体 细胞-配体指数富集系统进化(Cell-SELEX)技术 肿瘤 靶向治疗
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细菌的核酸适配体筛选的研究进展 被引量:10
9
作者 陈尔凝 赵新颖 屈锋 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期389-396,共8页
核酸适配体(aptamer)是通过指数富集配体系统进化技术(SELEX)筛选的能够以高亲和力和高特异性识别靶标分子或细胞的核糖核酸(RNA)和单链脱氧核糖核酸(ssDNA)。作为化学抗体,核酸适配体的制备和合成比抗体的成本更低。核酸适配... 核酸适配体(aptamer)是通过指数富集配体系统进化技术(SELEX)筛选的能够以高亲和力和高特异性识别靶标分子或细胞的核糖核酸(RNA)和单链脱氧核糖核酸(ssDNA)。作为化学抗体,核酸适配体的制备和合成比抗体的成本更低。核酸适配体的靶标范围极其广泛,包括小分子、生物大分子、细菌和细胞等。针对细菌靶标筛选的适配体,目前主要应用于食品、医药和环境中的细菌检测。细菌的核酸适配体筛选可以通过离心法将菌体-适配体复合物与游离的适配体分离,并通过荧光成像、荧光光谱分析、流式细胞仪分选、DNA捕获元件、酶联适配体分析等方法表征适配体与靶标的相互作用。筛选出的适配体可结合生物、化学检测方法用于细菌检测。本文介绍了细菌适配体的筛选和表征方法以及基于适配体的检测方法的最新进展,分析了不同检测方法的利弊,并列出了2011~2015年筛选的细菌的核酸适配体。 展开更多
关键词 核酸适配体 细菌 筛选 指数富集配体系统进化技术 综述
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鲤春病毒血症病毒核酸适配体的筛选及分析 被引量:3
10
作者 于力 王津津 +6 位作者 卢奕良 郑晓聪 贾鹏 何俊强 史秀杰 刘莹 刘荭 《中国动物检疫》 CAS 2017年第2期101-105,共5页
核酸适配体(Aptamer)是一类单链短DNA或RNA片段,具有一定的空间结构,对特定靶分子具有亲和力。本研究采用指数富集配体系统进化技术(SELEX),首次筛选出针对鲤春病毒血症病毒(SVCV)的核酸适配体A2和A15,经过荧光PCR、凝胶阻滞和病毒中和... 核酸适配体(Aptamer)是一类单链短DNA或RNA片段,具有一定的空间结构,对特定靶分子具有亲和力。本研究采用指数富集配体系统进化技术(SELEX),首次筛选出针对鲤春病毒血症病毒(SVCV)的核酸适配体A2和A15,经过荧光PCR、凝胶阻滞和病毒中和实验,证明了其对SVCV具有结合力和抑制作用,在该病的检测和防治方面具有良好的前景。 展开更多
关键词 核酸适配体 指数富集配体系统进化技术 鲤春病毒血症病毒 病毒抑制
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核酸适配体在病原微生物检测中的应用研究进展 被引量:4
11
作者 王佳齐 吴倩倩 +1 位作者 郑晓雪 李倩 《山东医药》 CAS 2021年第9期106-109,共4页
核酸适配体是一段单链寡核苷酸分子,主要通过指数富集配体系统进化技术获得。核酸适配体可以通过其独特的三维结构高选择性地与目标靶点结合,具有与抗原-抗体反应相类似的高亲和性、高特异性。核酸适配体由于具有分子量小、无免疫原性... 核酸适配体是一段单链寡核苷酸分子,主要通过指数富集配体系统进化技术获得。核酸适配体可以通过其独特的三维结构高选择性地与目标靶点结合,具有与抗原-抗体反应相类似的高亲和性、高特异性。核酸适配体由于具有分子量小、无免疫原性、合成成本低、可通过化学修饰获得高稳定性等区别于蛋白质抗体的优点,成为病原微生物检测的研究开发热点。核酸适配体可用于疟原虫、隐孢子虫、溶组织阿米巴寄生虫等寄生虫的诊断和靶向控制,核酸适配体用于大肠杆菌、肠沙门氏菌、霍乱弧菌等细菌的检测具有高特异性,核酸适配体应用于HIV、丙型肝炎病毒、H1N1病毒等病毒检测具有更好的病毒变异适应性,核酸适配体还具备应用于白假丝酵母菌、黄曲霉菌等真菌临床检测和治疗的潜力。 展开更多
关键词 核酸适配体 病原微生物 寄生虫检测 细菌检测 病毒检测 真菌检测 指数富集配体系统进化技术
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核酸适配体技术在食品重金属检测中的应用研究进展 被引量:26
12
作者 于寒松 隋佳辰 +6 位作者 代佳宇 宋战昀 郑言 杨倩 王向辉 张健 李敏思 《食品科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第15期228-233,共6页
近年来食品中重金属超标对人们健康构成了威胁,所以对食品中重金属检测技术的开发成为了重要研究内容。虽然传统的检测技术对重金属进行了高选择性和高灵敏度的检测,但是仍需要一种简单、快速、有效、成本低廉的方法用于食品安全领域的... 近年来食品中重金属超标对人们健康构成了威胁,所以对食品中重金属检测技术的开发成为了重要研究内容。虽然传统的检测技术对重金属进行了高选择性和高灵敏度的检测,但是仍需要一种简单、快速、有效、成本低廉的方法用于食品安全领域的快速检测。核酸适配体为一段单链DNA或者RNA序列,是经体外筛选技术筛选出的能特异结合蛋白质或其他小分子物质的寡聚核苷酸片段。核酸适配体具有靶分子广、灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点,因而被广泛用于食品安全检测领域。本文综述近年来核酸适配体技术对食品中Hg2+、As3+、Pb2+的检测,并对核酸适体技术在食品重金属检测领域的应用前景进行了展望。 展开更多
关键词 重金属 核酸适配体 配体指数富集系统进化技术 检测
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黄曲霉毒素B1核酸适配体筛选和检测方法的建立 被引量:6
13
作者 张敏 张先舟 +6 位作者 李聪 高浩 刘健慧 田益玲 马雯 李英军 檀建新 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第24期295-303,共9页
建立一种高灵敏的快速检测黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)的方法。基于氧化石墨烯(graphene oxide,GO)通过π-π共轭吸附单链寡核苷酸(single-strand DNA,ssDNA),对已结合靶标的ssDNA吸附能力较弱的特性,设计针对AFB1核酸适配体的筛... 建立一种高灵敏的快速检测黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)的方法。基于氧化石墨烯(graphene oxide,GO)通过π-π共轭吸附单链寡核苷酸(single-strand DNA,ssDNA),对已结合靶标的ssDNA吸附能力较弱的特性,设计针对AFB1核酸适配体的筛选方案。经过10轮筛选,共获得45条ssDNA序列。挑选具有代表性的6条序列进行亲和力分析实验,其解离常数Kd分别为16.29、27.88、18.54、23.11、47.94、22.31 nmol/L。选用亲和力较高的AFB-5、AFB-8进行特异性实验,结果显示所筛选的适配体能特异性吸附AFB1。最后利用适配体AFB-8作为识别元件建立了基于纳米金比色检测AFB1的方法。在优化的检测条件下,AFB1质量浓度与A520 nm值有良好的线性关系,其回归方程为y=-0.00709x+0.46142(R^2=0.9979),线性范围为0.025~10 ng/mL,检出限为0.025 ng/mL。通过特异性实验和对大米样品加标回收实验,加标回收率为83.36%~105.74%,证明本方法的可行性。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素B1 核酸适配体 指数富集配体系统进化技术 比色检测 纳米金
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小分子靶标核酸适配体研究进展 被引量:13
14
作者 王红旗 张玲 +4 位作者 刘冬梅 王敏 葛艳静 周玲 刘继红 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期790-798,共9页
核酸适配体是能够与靶分子高亲和力、高特异性结合的单链寡核苷酸。目前,在生物传感、疾病诊断和治疗等方面,以核酸适配体作为分子识别元件已经开发了许多具有应用可行性的各种检测方法。尽管核酸适配体具有这些方面的应用可能性,但是... 核酸适配体是能够与靶分子高亲和力、高特异性结合的单链寡核苷酸。目前,在生物传感、疾病诊断和治疗等方面,以核酸适配体作为分子识别元件已经开发了许多具有应用可行性的各种检测方法。尽管核酸适配体具有这些方面的应用可能性,但是目前能够结合小分子的核酸适配体非常少。小分子具有多种多样的生物功能以及临床、商业价值,因此针对小分子靶标展开研究,开发新型、实用的分子识别探针用于检测这些小分子具有重要的研究意义。作者主要介绍了针对小分子靶标核酸适配体开发所面临的技术挑战,以及在生物传感和食品安全应用方面所存在的机遇。 展开更多
关键词 核酸适配体 小分子 食品安全 生物传感 指数富集配基系统进化技术
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Cell-SELEX技术筛选急性早幼粒细胞白血病NB4细胞适配体 被引量:6
15
作者 陈鑫 李卫滨 +1 位作者 王开宇 兰小鹏 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期518-521,共4页
目的用以细胞为靶标的指数富集配体的系统进化(Cell-SELEX)技术获得与急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株NB4高亲和力、高特异性的适配体。方法以NB4细胞为靶标,用Cell-SELEX技术从随机单链DNA(ssDNA)文库中筛选出一组适配体,将筛选得到... 目的用以细胞为靶标的指数富集配体的系统进化(Cell-SELEX)技术获得与急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株NB4高亲和力、高特异性的适配体。方法以NB4细胞为靶标,用Cell-SELEX技术从随机单链DNA(ssDNA)文库中筛选出一组适配体,将筛选得到的适配体群进行克隆、测序及结合力测定,用流式细胞仪和荧光显微镜对结合率最高的适配体进行亲和力和特异性分析。结果第1,4,7,10,13,16,19轮筛选获得的次级文库与NB4细胞的结合率分别为(1.6%,3.8%,6.3%,11.4%,15.4%,19.9%,16.7%);第16轮筛选的21个阳性克隆菌测序结果表明,存在有3种高度富集的适配体,分别为CX1序列2个,CX5序列3个,CX9序列16个;流式细胞仪检测3种序列的结合率分别为9.7%,12.6%,17.2%;CX9的解离常数(Kd)为16.2 nmol/L;荧光显微镜下发现,CX9与NB4细胞结合的荧光强度高于K562细胞。结论用Cell-SELEX技术成功筛选到针对NB4细胞的适配体CX9,为荧光标记适配体快速鉴定APL提供实验依据。 展开更多
关键词 以细胞为靶标的指数富集配体系统进化技术 配体 急性早幼粒细胞白血病 NB4细胞
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蛋白质的核酸适配体筛选的研究进展 被引量:7
16
作者 杨歌 魏强 +1 位作者 赵新颖 屈锋 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期370-381,共12页
核酸适配体是通过指数富集系统配体进化(SELEX)筛选获得的,与靶标具有高亲和力和特异性结合的单链DNA或RNA。蛋白质是生命进程中的关键功能分子。近年来,以蛋白质为靶标的适配体筛选在蛋白质相关的基础及应用研究领域受到广泛关注。核... 核酸适配体是通过指数富集系统配体进化(SELEX)筛选获得的,与靶标具有高亲和力和特异性结合的单链DNA或RNA。蛋白质是生命进程中的关键功能分子。近年来,以蛋白质为靶标的适配体筛选在蛋白质相关的基础及应用研究领域受到广泛关注。核酸适配体应用性能的优劣取决于其亲和力、特异性与稳定性。目前,适配体筛选方法的优化主要是提高筛选效率、提升适配体性能及降低筛选成本。适配体主要筛选步骤包括复合物分离、核酸库优化、次级库的富集、适配体序列分析以及亲和力表征等。迄今为止,以蛋白质-核酸复合物的分离为核心步骤的适配体筛选方法有20余种。本文归纳总结了2005年以来以蛋白质为靶标的适配体筛选技术,讨论了各方法的缺陷与局限。介绍了核酸库的设计优化方法、适配体的序列特征,以及常用的亲和力表征方法。 展开更多
关键词 核酸适配体 蛋白质 筛选 指数富集系统配体进化 综述
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用SELEX技术筛选葡萄球菌肠毒素B特异性适配体 被引量:8
17
作者 江丽 兰小鹏 +1 位作者 曾燕丽 甘龙杰 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期420-421,共2页
目的通过指数级富集配体的系统进化技术(SELEX)筛选能与葡萄球菌肠毒素B(SEB)特异、高亲和力结合的单链DNA(ssDNA)适配体(aptamer)。方法体外构建一个长度为96个碱基的随机ssDNA文库,与靶物质SEB混合,以磁珠作为固相介质,利用热洗脱方... 目的通过指数级富集配体的系统进化技术(SELEX)筛选能与葡萄球菌肠毒素B(SEB)特异、高亲和力结合的单链DNA(ssDNA)适配体(aptamer)。方法体外构建一个长度为96个碱基的随机ssDNA文库,与靶物质SEB混合,以磁珠作为固相介质,利用热洗脱方法分离与靶标结合的核苷酸片段,通过PCR反复扩增、富集数个循环。利用荧光素标记适配体,测定筛选过程中各轮结合率;通过地高辛标记适配体,与碱性磷酸酶标记的抗地高辛抗体进行酶促显色反应,检测适配体的特异性。结果经过13轮筛选,ssDNA文库与SEB的结合百分率从1.1%提高到39.8%。制备的适配体针对SEB的特异性强,与葡萄球菌A蛋白(SPA)及牛血清清蛋白(BSA)无非特异性结合。结论成功利用SELEX技术筛选获得了特异结合SEB的高亲和力的ssDNA适配体,为金黄色葡萄球菌感染的诊断与治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 指数富集配体进化技术 SEB 适体 磁珠
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赭曲霉毒素A核酸适配体筛选 被引量:6
18
作者 刘继红 胡颖 +2 位作者 洪慧杰 张玲 王红旗 《食品安全质量检测学报》 CAS 2015年第9期3543-3550,共8页
目的筛选小麦和其他相关食品中常见的赭曲霉毒素A真菌毒素核酸适配体。方法采用固态靶标筛选策略和磁分离的筛选方法筛选赭曲霉毒素A的核酸适配体。结果获得的赭曲霉毒素A核酸适配体亲和力较高,解离常数为纳摩尔级;特异性好,与赭曲霉毒... 目的筛选小麦和其他相关食品中常见的赭曲霉毒素A真菌毒素核酸适配体。方法采用固态靶标筛选策略和磁分离的筛选方法筛选赭曲霉毒素A的核酸适配体。结果获得的赭曲霉毒素A核酸适配体亲和力较高,解离常数为纳摩尔级;特异性好,与赭曲霉毒素A结构相似性化合物如赭曲霉毒素B、N-乙酰苯丙氨酸或华法令不结合或结合力非常弱。结论本文采用固态靶标筛选策略和磁分离的SELEX筛选方法获得了赭曲霉毒素A的高特异性、高亲和力核酸适配体,有望在农产品质量安全领域替代传统抗体开发真菌毒素快速检测传感器或制备固相亲和柱。 展开更多
关键词 真菌毒素 赭曲霉毒素 核酸适配体 指数富集的配基系统进化技术 固相亲和柱
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核酸适配体—靶标复合物解离常数测定方法研究进展 被引量:2
19
作者 刘继红 李淑芳 +3 位作者 尹海燕 洪慧杰 张玲 王红旗 《食品安全质量检测学报》 CAS 2016年第3期1210-1219,共10页
核酸适配体是通过体外指数富集配基系统进化技术筛选到的一小段单链DNA或RNA寡核苷酸片段,能够与靶标高亲和力、高选择性地结合。为了在实际检测中应用核酸适配体,必须深入了解核酸适配体—靶标的结合过程,如测定复合物的解离常数。本... 核酸适配体是通过体外指数富集配基系统进化技术筛选到的一小段单链DNA或RNA寡核苷酸片段,能够与靶标高亲和力、高选择性地结合。为了在实际检测中应用核酸适配体,必须深入了解核酸适配体—靶标的结合过程,如测定复合物的解离常数。本文综述了近年来有关核酸适配体—靶标复合物解离常数测定的方法。这些方法大致上分为两大类:一类是基于分离策略的测定方法,如透析法、超滤法、凝胶电泳法、毛细管电泳法和高效液相色谱法;另一类是基于均相策略的测定方法,如荧光强度法、荧光各向异性法、紫外可见分光光度法、圆二色谱法以及表面等离子体共振法等。本文对每种方法的原理、应用范围和特性进行了概括和比较,并对未来的发展趋势进行了展望。 展开更多
关键词 核酸适配体 解离常数 结合常数 指数富集配基系统进化技术
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适配体技术及其在医学检验研究中的作用 被引量:4
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作者 兰小鹏 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期765-768,共4页
适配体是利用指数富集配体的系统进化技术从含有大量序列的随机文库中筛选出来,能通过特定三维结构与靶标紧密结合的单链DNA或RNA。适配体不仅能与各种有机物或无机物靶标分子高特异性、高亲和力结合,还具有分子量小,免疫原性低,稳定性... 适配体是利用指数富集配体的系统进化技术从含有大量序列的随机文库中筛选出来,能通过特定三维结构与靶标紧密结合的单链DNA或RNA。适配体不仅能与各种有机物或无机物靶标分子高特异性、高亲和力结合,还具有分子量小,免疫原性低,稳定性好,制备和标记方便等优点。适配体将有可能替代抗体,在疾病的诊断和治疗中发挥重要的作用。本文就适配体作用和筛选的原理及策略、适配体技术在医学检验研究中的作用以及面临的挑战作简要的述评。 展开更多
关键词 配体 指数富集配体系统进化技术 信号识别 疾病标志物
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