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趋化因子受体4拮抗剂对实验性角膜新生血管的抑制作用及其机制
被引量：
4
1
作者
蔡琴华
刘高勤
+1 位作者
夏春林
陆培荣
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第10期877-881,共5页
背景基质细胞源性细胞因子1α/趋化因子受体4（SDF-1αCXCR4）信号途径是机体内介导多种细胞趋化、黏附以及增生的关键分子，能通过促进血管内皮祖细胞向肿瘤组织的迁移而促进肿瘤新生血管的发生，同时也参与新生血管性眼病的病理过程...
背景基质细胞源性细胞因子1α/趋化因子受体4（SDF-1αCXCR4）信号途径是机体内介导多种细胞趋化、黏附以及增生的关键分子，能通过促进血管内皮祖细胞向肿瘤组织的迁移而促进肿瘤新生血管的发生，同时也参与新生血管性眼病的病理过程。目的探讨阻断CXCR4信号通路对实验性角膜新生血管（CNV）发生发展的抑制作用及机制。方法收集8周龄BALB／c小鼠80只，将浸有1mol／LNaOH的滤纸贴附在左眼角膜中央40S以诱导小鼠CNV，按随机数字表法将动物分为透明质酸钠组（质量分数0．2％透明质酸钠点眼）及CXCR4拮抗剂组（0．2％透明质酸钠配制的CXCR4拮抗剂点眼），自碱烧伤当日分别用相应的药物点眼共14d，于第14天裂隙灯下观察两组小鼠的CNV，然后制备角膜悬液，用流式细胞技术检测角膜悬液中CD31的表达值；制备角膜组织切片，以逆转录PCR（RT—PCR）和Western blot法检测CXCR4mRNA和蛋白在小鼠角膜组织中的表达，以免疫组织化学法检测角膜组织内CD31阳性标记的血管内皮细胞。以ELISA法检测角膜组织裂解液内血管内皮生长因子（VEGF）的表达。使用CXCR4拮抗剂干预小鼠腹腔来源的巨噬细胞，检测粒细胞巨噬细胞刺激因子（GM—CSF）刺激后培养上清液中VEGF的表达。结果小鼠角膜碱烧伤后2周，裂隙灯下可见CNV达高峰，与透明质酸钠组比较，CXCR4拮抗剂组CNV明显减少；角膜免疫组织化学检测显示，CXCR4拮抗剂组小鼠角膜中CD31阳性染色强度弱于透明质酸钠组，CD31阳性细胞数量明显减少；进一步流式细胞技术检测发现，CXCR4拮抗剂组CD31阳性表达率为（9．50±2．34）％，明显低于透明质酸钠组的（17．50±3．16）％，差异有统计学意义（t=-7．312，P〈0．05）；RT—PCR和Western blot法检测表明，碱烧伤后2、4、7d小鼠角膜组织中CXCR4mRNA和蛋白的表达均明显高于正常小鼠角膜组织，组间比较差异均有统计学意义（P〈0．01；P〈0．05）。ELISA检测结果显示，CXCR4拮抗剂点眼后4d、7d角膜组织内VEGF表达明显低于透明质酸钠组，差异均有统计学意义（t=10．927、5．151，P〈0．05）。体外实验发现，细胞培养后12、24和48h，GM—CSF＋CXCR4拮抗剂组上清液中VEGF的表达水平明显低于GM—CSF组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论CXCR4拮抗剂能通过下调VEGF的表达抑制实验性CNV的形成。
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关键词
趋化因子受体4
拮抗剂新生血管
碱烧伤
趋化因子
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题名
趋化因子受体4拮抗剂对实验性角膜新生血管的抑制作用及其机制
被引量：
4
1
作者
蔡琴华
刘高勤
夏春林
陆培荣
机构
苏州大学附属第一医院眼科
苏州大学医学部细胞神经生物学研究室暨解剖学系
出处
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第10期877-881,共5页
基金
国家自然科学基金项目（30972712,30771978）
江苏省医学重点人才项目（RC2011104）
文摘
背景基质细胞源性细胞因子1α/趋化因子受体4（SDF-1αCXCR4）信号途径是机体内介导多种细胞趋化、黏附以及增生的关键分子，能通过促进血管内皮祖细胞向肿瘤组织的迁移而促进肿瘤新生血管的发生，同时也参与新生血管性眼病的病理过程。目的探讨阻断CXCR4信号通路对实验性角膜新生血管（CNV）发生发展的抑制作用及机制。方法收集8周龄BALB／c小鼠80只，将浸有1mol／LNaOH的滤纸贴附在左眼角膜中央40S以诱导小鼠CNV，按随机数字表法将动物分为透明质酸钠组（质量分数0．2％透明质酸钠点眼）及CXCR4拮抗剂组（0．2％透明质酸钠配制的CXCR4拮抗剂点眼），自碱烧伤当日分别用相应的药物点眼共14d，于第14天裂隙灯下观察两组小鼠的CNV，然后制备角膜悬液，用流式细胞技术检测角膜悬液中CD31的表达值；制备角膜组织切片，以逆转录PCR（RT—PCR）和Western blot法检测CXCR4mRNA和蛋白在小鼠角膜组织中的表达，以免疫组织化学法检测角膜组织内CD31阳性标记的血管内皮细胞。以ELISA法检测角膜组织裂解液内血管内皮生长因子（VEGF）的表达。使用CXCR4拮抗剂干预小鼠腹腔来源的巨噬细胞，检测粒细胞巨噬细胞刺激因子（GM—CSF）刺激后培养上清液中VEGF的表达。结果小鼠角膜碱烧伤后2周，裂隙灯下可见CNV达高峰，与透明质酸钠组比较，CXCR4拮抗剂组CNV明显减少；角膜免疫组织化学检测显示，CXCR4拮抗剂组小鼠角膜中CD31阳性染色强度弱于透明质酸钠组，CD31阳性细胞数量明显减少；进一步流式细胞技术检测发现，CXCR4拮抗剂组CD31阳性表达率为（9．50±2．34）％，明显低于透明质酸钠组的（17．50±3．16）％，差异有统计学意义（t=-7．312，P〈0．05）；RT—PCR和Western blot法检测表明，碱烧伤后2、4、7d小鼠角膜组织中CXCR4mRNA和蛋白的表达均明显高于正常小鼠角膜组织，组间比较差异均有统计学意义（P〈0．01；P〈0．05）。ELISA检测结果显示，CXCR4拮抗剂点眼后4d、7d角膜组织内VEGF表达明显低于透明质酸钠组，差异均有统计学意义（t=10．927、5．151，P〈0．05）。体外实验发现，细胞培养后12、24和48h，GM—CSF＋CXCR4拮抗剂组上清液中VEGF的表达水平明显低于GM—CSF组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论CXCR4拮抗剂能通过下调VEGF的表达抑制实验性CNV的形成。
关键词
趋化因子受体4
拮抗剂新生血管
碱烧伤
趋化因子
Keywords
Chemokine receptor 4
Antagonist neovascularization
Alkali burn
Chemokine
分类号
R772.2 [医药卫生—眼科]
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1
趋化因子受体4拮抗剂对实验性角膜新生血管的抑制作用及其机制
蔡琴华
刘高勤
夏春林
陆培荣
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
4
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