东方拟无枝酸菌糖基转移酶基因gtfE的克隆(英文) 被引量：2

1

作者 金飞燕 李国亮 +2 位作者 王旻 戈梅 陈代杰 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期134-137,共4页

糖基转移酶基因 gtf E位于万古霉素产生菌东方拟无枝酸菌 (Amycolatopsisorientalis)染色体上。通过 PCR的方法并对PCR反应条件进行了优化 ,扩增得到了较高产量的 PCR产物。PCR产物经酶切回收后克隆到 p Bluscript KS+质粒载体 ,转化E.... 糖基转移酶基因 gtf E位于万古霉素产生菌东方拟无枝酸菌 (Amycolatopsisorientalis)染色体上。通过 PCR的方法并对PCR反应条件进行了优化 ,扩增得到了较高产量的 PCR产物。PCR产物经酶切回收后克隆到 p Bluscript KS+质粒载体 ,转化E.coli DH5 α感受态细胞 ,筛选得到一阳性克隆。测序后与文献报道的基因序列做同源比较 ,结果仅有两个碱基的差异。 展开更多

关键词 万古霉素 东方拟无枝酸菌 糖基转移酶 基因克隆

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地中海拟无枝酸菌原生质体电融合及其在提高利福霉素SV发酵效价中的应用 被引量：3

2

作者 郑璞 王蕾 史朝辉 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期267-269,279,共4页

对产利福霉素SV的地中海拟无枝酸菌 (Amycolatopsismediterranei)原生质体进行热灭活和紫外灭活标记 ,其热灭活条件为 5 2℃ ,1.5h ,紫外灭活条件为紫外线照射 ( 15W ,2 5cm ,2 70nm) 6 0min。将双灭活标记的原生质体用CRY 3型细胞融合... 对产利福霉素SV的地中海拟无枝酸菌 (Amycolatopsismediterranei)原生质体进行热灭活和紫外灭活标记 ,其热灭活条件为 5 2℃ ,1.5h ,紫外灭活条件为紫外线照射 ( 15W ,2 5cm ,2 70nm) 6 0min。将双灭活标记的原生质体用CRY 3型细胞融合仪进行电融合 ,得出 :成串电流频率 1.5MHz ,电压 5 8V ,成串时间 2 0s ,融合脉冲幅宽 80 μS ,融合电压 5 0 0V ,融合槽间距 0 .5mm时 ,融合率最高为 9.3× 10 -4 。对筛选的融合子产量试验表明 ,5 0 %以上的融合子产量高于出发菌株 ,有明显的正变作用 ,将融合子在利福霉素代谢类似物平板上分离纯化 ,获得了化学效价提高 30 %以上的产量稳定菌株。 展开更多

关键词 热灭活 紫外灭活 原生质体电融合 利福霉素SV 地中海拟无枝酸菌

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东方拟无枝酸菌基因工程菌产新糖肽类化合物的发酵条件优化 被引量：4

3

作者 魏维 黄鹤 +3 位作者 阮林高 杨晟 戈梅 陈代杰 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期755-759,共5页

目的对产新糖肽类化合物的基因工程菌东方拟无枝酸菌HCCB10167的发酵条件进行优化。方法考察了该工程菌的遗传稳定性,对发酵的主要影响因子接种量、初始pH值、温度、摇瓶装量、转速等进行了单因素试验,确定了最佳培养条件,并用均匀设计... 目的对产新糖肽类化合物的基因工程菌东方拟无枝酸菌HCCB10167的发酵条件进行优化。方法考察了该工程菌的遗传稳定性,对发酵的主要影响因子接种量、初始pH值、温度、摇瓶装量、转速等进行了单因素试验,确定了最佳培养条件,并用均匀设计试验对其发酵培养基进行了优化。结果该工程菌遗传稳定,优化后的产量较起始条件提高1.8倍。结论工程菌保持了万古霉素类抗生素的生产能力,具有规模化生产的潜能。 展开更多

关键词 东方拟无枝酸菌 基因工程菌 发酵优化

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在东方拟无枝酸菌中建立I-SceI内切酶介导的无标记敲除系统

4

作者 朱丽 饶敏 罗敏玉 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期330-333,共4页

目的在东方拟无枝酸菌中建立由I-Sce I介导的无标记高效重组系统。方法首先构建可用于东方拟无枝酸菌的I-Sce I操作盒,通过敲除多烯类化合物ECO-0501合成相关基因hem A2,比较操作盒使用前后获得hem A2基因双交换突变株的效率。结果在没... 目的在东方拟无枝酸菌中建立由I-Sce I介导的无标记高效重组系统。方法首先构建可用于东方拟无枝酸菌的I-Sce I操作盒,通过敲除多烯类化合物ECO-0501合成相关基因hem A2,比较操作盒使用前后获得hem A2基因双交换突变株的效率。结果在没有引入I-Sce I的情况下,随机重组的发生几率仅约2%,而导入后,由于I-Sce I酶对引入DNA位点的双链切割,导致双交换重组的发生率提高至90%以上。结论 I-Sce I系统是一种可用于东方拟无枝酸菌无标记遗传操作的有效工具。 展开更多

关键词 I-SceI内切酶 东方拟无枝酸菌 ECO-0501 hemA2

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AMETH_3452基因在拟无枝酸菌中的系统发育分析

5

作者 唐标 吴静 +2 位作者 郑华军 赵维 杨华 《浙江农业科学》 2021年第4期763-767,共5页

AMETH_3452基因是拟无枝酸菌(Amycolatopsis)中发现的一个放线菌的保守基因,位于拟无枝酸菌属中的环形基因组中间位置。为进一步探究该基因的序列特征并挖掘该基因的应用潜力,本研究将该基因构建在pET28载体上,在大肠杆菌中进行表达,使... AMETH_3452基因是拟无枝酸菌(Amycolatopsis)中发现的一个放线菌的保守基因,位于拟无枝酸菌属中的环形基因组中间位置。为进一步探究该基因的序列特征并挖掘该基因的应用潜力,本研究将该基因构建在pET28载体上,在大肠杆菌中进行表达,使用蛋白预测网站进行了二级结构和保守区分析,对其直系同源基因在拟无枝酸菌属进行了系统发育分析。AMETH_3452蛋白在大肠杆菌的上清液中可溶性表达。该基因在拟无枝酸菌属的核酸同源性为79.23%~99.02%,在300~500 bp的序列一致性较高。该蛋白序列共269个氨基酸,作为分子标记在76个拟无枝酸菌中进行系统发育分析后发现,东方拟无枝酸菌分支和甲基拟无枝酸菌分支稳定性高,同时可将东方拟无枝酸菌分支分成AORIS和AMEDS 2个可稳定的分支。以上研究将为AMETH_3452基因作为检测环境、动物或临床上的放线菌或系统发育应用研究提供依据。 展开更多

关键词 AMETH_3452 拟无枝酸菌 系统发育

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拟无枝酸菌ST2710转化洛伐他汀为无锡他汀的发酵工艺的初步研究 被引量：3

6

作者 王方 诸葛斌 +3 位作者 方慧英 饶志明 沈微 诸葛健 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期7-10,共4页

无锡他汀是胆固醇合成途径中限速酶羟甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂,由洛伐他汀经拟无枝酸菌(Amycolatopsis sp.ST 2710)转化产生。文中在摇瓶水平考察了底物浓度、溶氧和剪切力等因素对洛伐他汀(底物)转化为无锡他汀(产物)的影... 无锡他汀是胆固醇合成途径中限速酶羟甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂,由洛伐他汀经拟无枝酸菌(Amycolatopsis sp.ST 2710)转化产生。文中在摇瓶水平考察了底物浓度、溶氧和剪切力等因素对洛伐他汀(底物)转化为无锡他汀(产物)的影响,并在5 L发酵罐上进行了分批发酵及材料分批发酵研究。摇瓶结果表明,菌株对溶氧要求较高,对剪切力很敏感,底物适宜添加浓度为1 g/L。在5 L发酵罐间歇发酵过程中。在控制溶氧不低于35%.搅拌转速为300r/min,产物产量达到最高,为0.77 g/L左右,发酵周期为80 h,较摇瓶发酵缩短16 h。采用补料发酵工艺后,有效减缓底物抑制,产物产量达到1.83 g/L。是分批发酵的2.4倍。 展开更多

关键词 洛伐他汀 无锡他汀 拟无枝酸菌 微生物转化

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产利福霉素地中海拟无枝酸菌的电转化条件优化 被引量：4

7

作者 樊菲 成文玉 金红星 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期575-578,共4页

目的 为了获得较高的地中海拟无枝酸菌的转化率，进行了电转化条件的优化。方法 以大肠埃希菌．拟无枝酸菌穿梭质粒pULVKl-Am为载体，地中海拟无枝酸菌为受体菌，考察了收集菌体时期、细胞壁弱化方式、电击缓冲液和电击参数等因素对... 目的 为了获得较高的地中海拟无枝酸菌的转化率，进行了电转化条件的优化。方法 以大肠埃希菌．拟无枝酸菌穿梭质粒pULVKl-Am为载体，地中海拟无枝酸菌为受体菌，考察了收集菌体时期、细胞壁弱化方式、电击缓冲液和电击参数等因素对转化率的影响。结果 以0．1gg／mL氨苄西林处理细胞，A600为0．7～0．8时收集菌体，用溶菌酶．LiAc-DTT溶液于37℃孵育30min，去离子水作电击缓冲液，7．5kV／cm、25gF、750W下进行电击，转化率最高可达到9．23×104CFU／μg质粒DNA。结论只有将不同机制的3种细胞壁弱化剂组合起来对拟无枝酸菌进行处理时，才能得到较高的转化率。 展开更多

关键词 地中海拟无枝酸菌 利福霉素 电转化 转化率

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东方拟无枝酸菌中ECO-0501生物合成基因簇的筛选及其相关调控基因的初步分析 被引量：2

8

作者 申洋 黄鹤 +3 位作者 朱丽 杨晟 戈梅 陈代杰 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期327-331,共5页

ECO-0501是从东方拟无枝酸菌代谢物中分离到的一种新型线性多烯类化合物,其不但具有良好的抗菌活性,且体内毒性较低,目前处于临床前的开发。本文通过对东方拟无枝酸菌的菌落原位杂交,筛选到4个粘粒克隆NL5B,NL9-3-1,NL3-1C,NL3-3A,可以... ECO-0501是从东方拟无枝酸菌代谢物中分离到的一种新型线性多烯类化合物,其不但具有良好的抗菌活性,且体内毒性较低,目前处于临床前的开发。本文通过对东方拟无枝酸菌的菌落原位杂交,筛选到4个粘粒克隆NL5B,NL9-3-1,NL3-1C,NL3-3A,可以覆盖整个ECO-0501生物合成簇,并对其中的基因ORF4进行了生物信息学分析,推测其为ECO-0501合成途径中的正调控基因。并通过该基因的过表达,成功地将ECO-0501的产量提高了6倍,为下一步ECO-0501的开发及其调控机制的研究打下基础。 展开更多

关键词 ECO-0501 东方拟无枝酸菌 菌落原位杂交 调控蛋白

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东方拟无枝酸菌HCCB10007内attB位点的人工构建 被引量：4

9

作者 盖忆青 朱丽 +1 位作者 陈代杰 张怡轩 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期193-197,共5页

目的在万古霉素产生菌东方拟无枝酸菌HCCB10007内构建attB整合位点,将噬菌体ΦC31重组酶介导的位点特异性整合系统引入该菌,从而提高该工业菌株的遗传操作效率。方法在不破坏结构基因的情况下经同源重组将来源于变铅青链霉菌的attB编码... 目的在万古霉素产生菌东方拟无枝酸菌HCCB10007内构建attB整合位点,将噬菌体ΦC31重组酶介导的位点特异性整合系统引入该菌,从而提高该工业菌株的遗传操作效率。方法在不破坏结构基因的情况下经同源重组将来源于变铅青链霉菌的attB编码序列插入到东方拟无枝酸菌HCCB10007基因组中,然后将带有绿色荧光蛋白基因(eGFP)的特异性位点重组质粒pLYGYQ2导入该工程菌中。用于验证整合系统的有效性。结果获得基因组中整合有attB位点的基因工程菌LYGYQA。eGFP基因顺利整合入所构建的attB位点,并且获得了表达。同时发现该系统的整合效率较同源重组效率提高了约3倍。结论本研究不但表明来源于链霉菌的位点特异性整合系统可以成功应用于东方拟无枝酸菌中,也证明绿色荧光蛋白基因可以作为报告基因用于该菌的研究。 展开更多

关键词 东方拟无枝酸菌 attB EGFP

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常压室温等离子体诱变选育高产香兰素拟无枝酸菌(Amycolatopsis sp.) 被引量：5

10

作者 刘琼 郑璞 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期40-44,共5页

采用新型常压室温等离子体射流诱变拟无枝酸菌CCTCC M2011265(Amycolatopsis sp.),在等离子体对菌株致死率为61.71%的条件下,以香兰素产量为指标的正突变率达到17.6%,其中复筛得到遗传稳定性的高产突变株LQ-6,香兰素产量达到6.78 g/L,... 采用新型常压室温等离子体射流诱变拟无枝酸菌CCTCC M2011265(Amycolatopsis sp.),在等离子体对菌株致死率为61.71%的条件下,以香兰素产量为指标的正突变率达到17.6%,其中复筛得到遗传稳定性的高产突变株LQ-6,香兰素产量达到6.78 g/L,对前体阿魏酸的摩尔产率为72.14%,比出发菌株提高了21.29%,同时其香兰素合成代谢途径中的关键酶脱乙酰酶活性提高了43.2%,香兰素氧化酶活性降低了38.7%。 展开更多

关键词 常压室温等离子体 拟无枝酸菌 高通量筛选 诱变 香兰素

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锌离子影响地中海拟无枝酸菌合成有机酸和利福霉素SV 被引量：1

11

作者 邓鹏飞 周峰 +3 位作者 李长军 陈雄 黄亚男 王志 《中国酿造》 CAS 2013年第8期84-87,共4页

在10L发酵罐培养地中海拟无枝酸菌过程中基料添加Zn2+(终浓度0.75mg/L)对利福霉素SV效价和有机酸合成产生了显著影响。72h^141h胞外丙酮酸、丙氨酸浓度分别比对照提高了19.7%~93.72%和降低了37.69%~59.55%;同时,胞外谷氨酸、赖氨酸和苯... 在10L发酵罐培养地中海拟无枝酸菌过程中基料添加Zn2+(终浓度0.75mg/L)对利福霉素SV效价和有机酸合成产生了显著影响。72h^141h胞外丙酮酸、丙氨酸浓度分别比对照提高了19.7%~93.72%和降低了37.69%~59.55%;同时,胞外谷氨酸、赖氨酸和苯丙氨酸的浓度分别比对照提高了7.62%~162.59%、1.99%~43.10%和25.84%~92.89%。胞外酪氨酸浓度(72h^120h)与对照差异不大,之后迅速提高,141h时酪氨酸浓度是对照组的2.56倍。利福霉素SV的效价在96h比对照提高了11.72%,120h时效价提高了9.1%;141h时效价仅比对照提高了3.5%。说明锌离子抑制了丙氨酸脱氢酶活性并引起丙酮酸积累,这使得丙酮酸流入三羧酸循环的碳通量增大,使由草酰乙酸衍生的赖氨酸和由α-酮戊二酸衍生的谷氨酸合成量增大,促进了利福霉素SV的合成。但是,丙酮酸的积累也促进了芳环氨基酸的合成(如酪氨酸、苯丙氨酸),其会协同抑制利福霉素的芳环前体3-氨基-5-羟基-苯甲酸的合成,这可能是效价中后期增长放缓的原因。 展开更多

关键词 地中海拟无枝酸菌 利福霉素SV 锌离子 氨基酸 生物合成

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中心组合设计优化东方拟无枝酸菌发酵生产万古霉素的微量金属离子 被引量：5

12

作者 彭哲 张嗣良 《化学与生物工程》 CAS 2011年第4期65-69,共5页

对万古霉素生产菌东方拟无枝酸菌(Amycolatopsis orientalis)V-0704摇瓶培养48 h时发酵培养基中添加的几种微量金属离子进行了优化。依次通过部分因子析因设计、最速上升实验、中心组合设计,并利用统计学软件Minitab对实验数据进行分析... 对万古霉素生产菌东方拟无枝酸菌(Amycolatopsis orientalis)V-0704摇瓶培养48 h时发酵培养基中添加的几种微量金属离子进行了优化。依次通过部分因子析因设计、最速上升实验、中心组合设计,并利用统计学软件Minitab对实验数据进行分析,得到一组较优的微量金属离子组合:Co2+浓度2.486×10-5g.mL-1、Mo6+浓度2.486×10-5g.mL-1,添加这些金属离子摇瓶培养72 h的万古霉素平均效价达到4946 U.mL-1,较未加金属离子提高了17%。 展开更多

关键词 万古霉素 微量金属离子 中心组合设计 东方拟无枝酸菌

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S-丙二酰转移酶基因失活对地中海拟无枝酸菌产利福霉素的影响 被引量：1

13

作者 何思雨 成文玉 金红星 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期174-179,共6页

为提高利福霉素的产量,构建了S-丙二酰转移酶基因失活的地中海拟无枝酸菌。利用融合PCR构建S-丙二酰转移酶基因的同源重组载体,通过电击转化导入到地中海拟无枝酸菌中,使之发生同源重组,以安普霉素为标记,筛选了S-丙二酰转移酶基因失活... 为提高利福霉素的产量,构建了S-丙二酰转移酶基因失活的地中海拟无枝酸菌。利用融合PCR构建S-丙二酰转移酶基因的同源重组载体,通过电击转化导入到地中海拟无枝酸菌中,使之发生同源重组,以安普霉素为标记,筛选了S-丙二酰转移酶基因失活菌株,并对比了突变菌株与原始菌株的利福霉素SV产量。成功构建了S-丙二酰转移酶基因的同源重组载体,获得了地中海拟无枝酸菌突变株A.mediterranei △fab D,失活菌株的利福霉素SV产量为168.08 mg/L,比原始菌提高了9.94%。S-丙二酰转移酶基因的失活,弱化了突变菌株脂肪酸的合成,强化了利福霉素的合成。 展开更多

关键词 地中海拟无枝酸菌 利福霉素 S-丙二酰转移酶 融合PCR 基因失活

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地中海拟无枝酸菌S699电转化方法的优化 被引量：2

14

作者 王明艳 何璟 《湖北农业科学》 北大核心 2014年第4期920-924,共5页

地中海拟无枝酸菌S699(Amycolatopsis mediterranei S699)能够产生具有重要经济价值的抗生素———利福霉素B。在该菌株中建立高效的遗传操作系统是研究利福霉素生物合成机制以及构建基因工程高产菌株的基础。研究利用单因素试验探索了... 地中海拟无枝酸菌S699(Amycolatopsis mediterranei S699)能够产生具有重要经济价值的抗生素———利福霉素B。在该菌株中建立高效的遗传操作系统是研究利福霉素生物合成机制以及构建基因工程高产菌株的基础。研究利用单因素试验探索了供体质粒的构型、甘氨酸溶度、MgCl2浓度及电转化参数对地中海拟无枝酸菌S699电转化效率的影响。结果表明,使用添加了0.05 g/L甘氨酸和2.5 mmol/L MgCl2的34%YEME培养基培养菌丝体,在9 kV/cm、25μF、550Ω的电转化条件下,以双链DNA为供体,转化效率最高可达到3.37×102个转化子/μg DNA。利用优化后的电转化方法,成功地获得了利福霉素生物合成基因簇中细胞色素P450氧化酶基因orf5的同源缺失突变菌株,证实了优化后的电转化方法可以很好地用于后期遗传学及利福霉素生物合成基因的研究。 展开更多

关键词 地中海拟无枝酸菌S699(Amycolatopsis MEDITERRANEI S699) 利福霉素B 电转化 同源缺失

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东方拟无枝酸菌产万古霉素发酵工艺优化 被引量：2

15

作者 王会会 姜明星 +4 位作者 戴梦 葛鹍鹏 鞠加学 任风芝 张雪霞 《化学与生物工程》 CAS 2021年第6期40-43,54,共5页

采用东方拟无枝酸菌V19-07发酵产万古霉素,通过单因素实验对发酵工艺进行了优化,确定最优发酵工艺为:发酵温度28℃、发酵液pH值7.2、通气量1.0 vvm、溶解氧浓度10%。该工艺经50 L发酵罐验证,平均发酵效价达14117 U·mL^(-1),产量较... 采用东方拟无枝酸菌V19-07发酵产万古霉素,通过单因素实验对发酵工艺进行了优化,确定最优发酵工艺为:发酵温度28℃、发酵液pH值7.2、通气量1.0 vvm、溶解氧浓度10%。该工艺经50 L发酵罐验证,平均发酵效价达14117 U·mL^(-1),产量较优化前提高18.8%,可用于规模化生产。 展开更多

关键词 万古霉素 东方拟无枝酸菌 发酵工艺 优化

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拟无枝酸菌属羽毛降解菌株BJA-103的诱变育种 被引量：1

16

作者 严冬 李姜函 +3 位作者 陈欢 赵康康 颜华 贾良辉 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2021年第6期139-145,共7页

【目的】对具有羽毛降解能力的BJA-103菌株进行硫酸二乙酯(DES)诱变,筛选羽毛降解速率更快、降解程度更高的突变株,并对突变株产生的角蛋白酶性质进行初步探究,为其进一步扩大发酵及生产应用提供理论依据。【方法】使用DES对BJA-103菌... 【目的】对具有羽毛降解能力的BJA-103菌株进行硫酸二乙酯(DES)诱变,筛选羽毛降解速率更快、降解程度更高的突变株,并对突变株产生的角蛋白酶性质进行初步探究,为其进一步扩大发酵及生产应用提供理论依据。【方法】使用DES对BJA-103菌株进行诱变,涂布解除氮代谢分解调节筛选培养基为第1次初筛,点植法接种牛奶平板为第2次初筛,羽毛摇瓶降解为复筛。得到理想突变株后,对该突变株进行羽毛降解试验,初步探究降解时间、温度、pH对角蛋白酶活性的影响。【结果】筛选获得解除氮代谢分解调节突变株库(1253株),牛奶平板筛选水解圈宽度为8.5~12 mm的突变株5株(RT、BM′、CV′、FX′、NK′),平均水解圈大小为野生型的2.5倍。羽毛降解复筛得到突变株NK′,降解试验中,其48 h内的羽毛降解率为65.29%,远大于野生型(12.82%);其最终降解率为90.74%(降解144 h),大于野生型的降解率79.24%。突变株NK′产生的角蛋白酶最适发酵时间为72 h,最适反应温度为70℃,最适反应pH为11。【结论】筛选出1株羽毛降解速率快、降解程度高的突变株NK′,其所生产的角蛋白酶可耐高温、高碱环境。 展开更多

关键词 诱变育种 拟无枝酸菌属 羽毛降解角蛋白酶

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东方拟无枝酸菌发酵液小组分的分离鉴定

17

作者 刘效稳 李秋爽 +3 位作者 阮林高 韩威 陈代杰 戈梅 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期654-658,683,共6页

本文首次从万古霉素产生菌东方拟无枝酸菌的发酵液中分离纯化出三个微量组分LYV09lx01、LYV09lx02、LYV09lx03。考察了摇瓶装量的影响,确定了适合LYV09lx01、LYV09lx02富集的摇瓶发酵条件。LYV09lx03则通过万古霉素水解来富集提取。经... 本文首次从万古霉素产生菌东方拟无枝酸菌的发酵液中分离纯化出三个微量组分LYV09lx01、LYV09lx02、LYV09lx03。考察了摇瓶装量的影响,确定了适合LYV09lx01、LYV09lx02富集的摇瓶发酵条件。LYV09lx03则通过万古霉素水解来富集提取。经筛选获得一种具有特异性吸附作用的弱极性大孔吸附树脂AB-8,结合中压液相色谱及高效液相色谱技术进一步纯化鉴定得到一新结构的异黄酮苷。 展开更多

关键词 东方拟无枝酸菌 发酵 水解液 异黄酮 分离

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内源性质粒pXL100的消除影响东方拟无枝酸菌HCCB10007中次级代谢产物的合成

18

作者 仲茜 徐莉 +2 位作者 朱丽 戈梅 钱秀萍 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期570-574,共5页

目的利用分子手段获得东方拟无枝酸菌HCCB10007内源环型质粒pXL100消除突变株,探究大质粒pXL100对于HCCB10007次级代谢产物的影响。方法利用同源重组的方法将pXL100上疑似编码与质粒复制相关的基因orf37(par A)阻断,同时引入安普霉素抗... 目的利用分子手段获得东方拟无枝酸菌HCCB10007内源环型质粒pXL100消除突变株,探究大质粒pXL100对于HCCB10007次级代谢产物的影响。方法利用同源重组的方法将pXL100上疑似编码与质粒复制相关的基因orf37(par A)阻断,同时引入安普霉素抗性基因作为后续的筛选标记。通过EB诱导,影印培养筛选pXL100消除突变株。比较突变株与原始菌株生长及主要次级代谢产物的变化。结果通过筛选获得质粒消除突变株HCCB10007-pXL(-),其万古霉素和ECO-0501的产量较原始菌明显下降,分别为原菌株的1/4和1/100。结论东方拟无枝酸菌HCCB10007的质粒pXL100具有调控万古霉素和ECO-0501合成的基因。 展开更多

关键词 东方拟无枝酸菌 质粒消除 pXL100 万古霉素 EC-0501

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拟无枝酸菌宿主构建及次级代谢基因簇异源表达

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作者 胡欣瑞 贺卫军 +2 位作者 吕金 王业民 陶美凤 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期164-172,共9页

为将生长快、发酵时间短、遗传操作便捷的稀有放线菌拟无枝酸菌TNS106开发成异源表达宿主,通过同源重组将内源的瑞斯托霉素生物合成关键基因rpsA替换为ΦC31和ΦBT1噬菌体细菌附着位点attB,清除代谢背景并引入整合位点,得到菌株HXR1;将... 为将生长快、发酵时间短、遗传操作便捷的稀有放线菌拟无枝酸菌TNS106开发成异源表达宿主,通过同源重组将内源的瑞斯托霉素生物合成关键基因rpsA替换为ΦC31和ΦBT1噬菌体细菌附着位点attB,清除代谢背景并引入整合位点,得到菌株HXR1;将含有来自天蓝色链霉菌的放线紫红素基因簇或来自刺糖多孢菌的多杀菌素基因簇的质粒转到HXR1进行异源表达,检测发酵产物。结果显示,HXR1成功表达放线紫红素和多杀菌素;与红色糖多孢菌宿主LJ161相比,放线紫红素的产生提前1 d,产量提高1.3倍。拟无枝酸菌异源表达宿主HXR1可为从链霉菌和稀有放线菌中发现新的次级代谢产物提供有用的平台。 展开更多

关键词 药物研发 稀有放线菌 拟无枝酸菌 异源表达 放线紫红素 多杀菌素 抗生素 次级代谢产物

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筛选地中海拟无枝酸菌无痕基因敲除菌株的简便方法

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作者 张巧巧 金哲男 金红星 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2018年第4期25-33,共9页

将抗生素抗性基因作为标记筛选无痕基因敲除菌株比较费时,因而建立筛选无痕基因敲除菌株的简便方法。通过敲除茄红素生物合成途径中第一个反应的酶编码基因dxs(1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶基因),获得白色地中海拟无枝酸菌突变菌株,以此... 将抗生素抗性基因作为标记筛选无痕基因敲除菌株比较费时,因而建立筛选无痕基因敲除菌株的简便方法。通过敲除茄红素生物合成途径中第一个反应的酶编码基因dxs(1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶基因),获得白色地中海拟无枝酸菌突变菌株,以此菌株为受体菌,对S-丙二酰转移酶基因(mtf)进行无痕敲除。针对菌落本身携带颜色的地中海拟无枝酸菌(橘红色),利用茄红素合成酶基因dxs无痕敲除获得了白色菌株,在此基础上进行mtf的无痕敲除。以茄红素生物合成途径中任意一个反应的酶编码基因作为标记,很容易筛选得到无痕基因敲除的突变菌株。 展开更多

关键词 地中海拟无枝酸菌 利福霉素 茄红素 无痕基因敲除 1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶

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