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烟草突变体筛选与鉴定方法篇:6.烟草T-DNA激活标签突变体侧翼序列筛选与鉴定 被引量：1
1
作者 崔萌萌 《中国烟草科学》 CSCD 2012年第6期109-111,共3页
通过激活标签技术（activation tagging）得到突变群体是构建突变体库的一种重要方法，应用此种方法研究基因功能，不管是用正向或反向遗传学方法，都必须先获得插入位点的侧翼序列（flanking sequence）。随着拟南芥、水稻及烟草等作... 通过激活标签技术（activation tagging）得到突变群体是构建突变体库的一种重要方法，应用此种方法研究基因功能，不管是用正向或反向遗传学方法，都必须先获得插入位点的侧翼序列（flanking sequence）。随着拟南芥、水稻及烟草等作物的侧翼序列数据库的不断完善及烟草全基因组测序的完成，越来越体现出激活标签技术对于推动烟草功能基因组学研究具有巨大的潜力。 展开更多
关键词 突变体筛选 激活标签 侧翼序列 鉴定方法 烟草 DNA 全基因组测序 功能基因组学
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烟草激活标签突变体库的创制和突变表型的初步鉴定 被引量：1
2
作者 刘峰 刘贯山 +5 位作者 张芊 王卫锋 丁昌敏 吕婧 路铁刚 王元英 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期180-185,共6页
突变体库在烟草功能基因组研究中具有重要的作用,本研究建立了快速、高效农杆菌介导的烟草遗传转化体系,目前已经创制了3万份激活标签(pSK1015)突变体。利用PCR扩增对突变体库进行阳性检测,扩增结果表明其阳性率接近90%。大田T1代可视... 突变体库在烟草功能基因组研究中具有重要的作用,本研究建立了快速、高效农杆菌介导的烟草遗传转化体系,目前已经创制了3万份激活标签(pSK1015)突变体。利用PCR扩增对突变体库进行阳性检测,扩增结果表明其阳性率接近90%。大田T1代可视突变表型调查结果表明,在团棵期具有可视突变表型的概率为5.4%,在现蕾期具有可视突变表型的概率为3.6%。 展开更多
关键词 烟草 突变体库 激活标签 表型
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影响拟南芥转化效率和激活标签丢失的因素分析 被引量：8
3
作者 王爱荣 吴智芳 +5 位作者 张丽丽 张春华 张冬梅 鲁国东 周洁 王宗华 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2006年第3期298-302,共5页
用激活标签载体pSK I015和农杆菌介导的浸花转化法创建拟南芥激活标签突变体,优化了浸花法转化方案,采取原地转化的措施,减少了工作量,又保证了植株在转化期间的正常生长,转化效率高达1.434%.突变体分析表明,57.5%含单拷贝T-DNA插入,100... 用激活标签载体pSK I015和农杆菌介导的浸花转化法创建拟南芥激活标签突变体,优化了浸花法转化方案,采取原地转化的措施,减少了工作量,又保证了植株在转化期间的正常生长,转化效率高达1.434%.突变体分析表明,57.5%含单拷贝T-DNA插入,100%整合了Bar基因,87%含有CaMV 35S增强子,进一步分析发现CaMV 35S增强子丢失机率与农杆菌继代次数呈正相关. 展开更多
关键词 拟南芥 农杆菌 激活标签 转化
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激活标签法及其在植物基因工程上的应用 被引量：4
4
作者 郑继刚 李成梅 +1 位作者 肖英华 李雅轩 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期471-474,共4页
激活标签法是新近发展起来的一种用于基因分离和鉴定的方法。它通过诱变使特定内源基因发生过量表达,而产生显性功能获得型突变,从而对基因进行鉴定和分析。因为具有独特的性质已使其成为发现新基因和进行基因功能分析的有效工具。本文... 激活标签法是新近发展起来的一种用于基因分离和鉴定的方法。它通过诱变使特定内源基因发生过量表达,而产生显性功能获得型突变,从而对基因进行鉴定和分析。因为具有独特的性质已使其成为发现新基因和进行基因功能分析的有效工具。本文综述了激活标签法的原理、研究现状和在植物基因工程上的应用。 展开更多
关键词 植物 拟南芥 T—DNA 激活标签 激活标签法 基因工程
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激活标签转化结球甘蓝的研究 被引量：2
5
作者 王凤华 陈双臣 +1 位作者 李光远 王丽敏 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期905-909,共5页
以夏光甘蓝下胚轴为材料,采用含激活标签pSKI015的农杆菌GV3101进行遗传转化研究,对预培养时间、侵染时间和共培养时间等转化条件进行优化.结果表明,预培养2d,侵染6min,共培养1d是遗传转化的较优组合.采用GV3101转化下胚轴结合glufosin... 以夏光甘蓝下胚轴为材料,采用含激活标签pSKI015的农杆菌GV3101进行遗传转化研究,对预培养时间、侵染时间和共培养时间等转化条件进行优化.结果表明,预培养2d,侵染6min,共培养1d是遗传转化的较优组合.采用GV3101转化下胚轴结合glufosinate筛选,获得了2株表型变异植株:一株叶片中心绿色,边缘黄化;另一株叶片卷曲.PCR检测显示这2株植株均含有pSKI015增强子序列,Southern blot结果显示这2株植株具有明显的杂交信号,说明这2株植株为激活标签突变体. 展开更多
关键词 甘蓝 遗传转化 激活标签 突变体
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甜瓜T-DNA插入突变体的构建
6
作者 许荣华 姜陆 +1 位作者 宁雪飞 李冠 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1048-1053,共6页
【目的】构建激活标签载体并将其转入甜瓜中,获得甜瓜T-DNA插入突变体,为甜瓜功能基因组学的研究奠定基础。【方法】用PCR法扩增目的 DNA片段,经EcoRI和Sac I顺序酶切,将目的片段连接到p CAMBIA2301载体上,构建含4×35s Enhancer DN... 【目的】构建激活标签载体并将其转入甜瓜中,获得甜瓜T-DNA插入突变体,为甜瓜功能基因组学的研究奠定基础。【方法】用PCR法扩增目的 DNA片段,经EcoRI和Sac I顺序酶切,将目的片段连接到p CAMBIA2301载体上,构建含4×35s Enhancer DNA片段的激活标签载体。以甜瓜品种‘伽师’为材料,利用农杆菌介导的转化体系转化甜瓜愈伤组织,获得甜瓜T-DNA插入突变体。【结果】获得4株T0代甜瓜转化幼苗,通过Kan筛选和PCR鉴定甜瓜转化幼苗的DNA中是否含有目的基因,证明其中3株甜瓜转化幼苗为转基因植株。【结论】获得了突变植株,为甜瓜重要性状基因发掘奠定基础。 展开更多
关键词 甜瓜 激活标签 T-DNA插入突变体
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拟南芥抗根结线虫和蚜虫的功能基因鉴定 被引量：1
7
作者 陈曦 冯辉 +3 位作者 张金凤 卢小雪 陈怀谷 魏利辉 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第6期1250-1256,共7页
为了鉴定出增强植物对根结线虫和蚜虫抗性的功能基因,从9个抗蚜虫的拟南芥激活标签突变体中筛选增强根结线虫抗性的突变体。利用反向PCR技术定位激活标签在基因组上的插入位点,并通过荧光定量PCR技术分析插入位点上、下游基因表达水平,... 为了鉴定出增强植物对根结线虫和蚜虫抗性的功能基因,从9个抗蚜虫的拟南芥激活标签突变体中筛选增强根结线虫抗性的突变体。利用反向PCR技术定位激活标签在基因组上的插入位点,并通过荧光定量PCR技术分析插入位点上、下游基因表达水平,结合根结线虫和蚜虫在过量表达转基因植株上的表现验证基因功能。结果显示接种根结线虫后7 d,侵入3个拟南芥突变体根系的根结线虫数量明显少于野生型。其中2个突变体中的激活标签插入位点只相差2个碱基,SKS13基因表达水平提高;另一个株系中激活标签导致PERK2基因的表达水平提高。与野生型植株相比,分别过量表达SKS13和PERK2的转基因植株能明显减少侵入根系的根结线虫数量,同时蚜虫的繁殖数量也较低。 展开更多
关键词 根结线虫 蚜虫 拟南芥激活标签突变体 抗性鉴定
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T-DNA插入突变及其研究进展 被引量：10
8
作者 王凤华 李光远 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2007年第6期12-14,共3页
T-DNA插入突变在反向遗传学和功能基因组学研究中发挥着重要作用。文中综述了T-DNA插入突变的原理以及在拟南芥和水稻等模式植物中的研究现状,同时指出了该技术的优缺点及发展方向。
关键词 T-DNA插入 突变体 激活标签
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拟南芥18srRNA参与隐花色素介导的信号传导途径的研究 被引量：1
9
作者 汪启明 屠小菊 +2 位作者 唐冬英 赵小英 刘选明 《湖南大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第12期66-71,共6页
通过筛选以拟南芥蓝光受体隐花色素双突变体cry1cry2为遗传背景的激活标签突变体库,得到一株SCC98-D株系,该突变体具有早开花,下胚轴变短,并具有花瓣数目增加等表型,彻底恢复了cry1cry2的晚开花和长下胚轴表型.通过Tail-PCR的方法克隆得... 通过筛选以拟南芥蓝光受体隐花色素双突变体cry1cry2为遗传背景的激活标签突变体库,得到一株SCC98-D株系,该突变体具有早开花,下胚轴变短,并具有花瓣数目增加等表型,彻底恢复了cry1cry2的晚开花和长下胚轴表型.通过Tail-PCR的方法克隆得到SCC98-D突变体中激活标签插入位点的侧翼序列,通过对该侧翼序列测序发现插入位点在18srRNA的1751bp处,运用RT-PCR方法分析插入位点周围基因的表达,发现只有18srRNA的表达被激活,由此证实了18srRNA参与隐花色素介导的信号传导途径. 展开更多
关键词 拟南芥 隐花色素 激活标签突变体 18s核糖体RNA
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2013年35卷第9期《遗传》封面说明
10
作者 张海瑞 徐冉 +3 位作者 高玉梅 金维环 郜刚 李云海 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1116-1116,共1页
器官形状和大小的控制是一个基本的发育生物学过程,受细胞分裂和细胞扩展的影响。到目前为止,对器官形状和大小调控机制的了解还很少。本研究通过激活标签的方法筛选到一个叶子形状发生改变的半显性突变体（yuan1-1D）。
关键词 《遗传》 封面 细胞分裂 生物学过程 调控机制 激活标签 形状 突变体
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