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转pK2.10-拟蜘蛛拖丝蛋白基因绵羊成纤维细胞株的筛选被引量：11: 1; 作者王春生刘欣 +1 位作者原璐安铁洙《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1262-1265,共4页; 为了筛选转pK2.10-拟蜘蛛拖丝蛋白基因绵羊成纤维细胞株,本研究参照GenBank上蜘蛛拖丝蛋白基因序列(AY555585和AH015065)设计并人工合成拟蜘蛛基因四聚体(4S),与pcDNA3.1载体(K2.10启动子)相连构建真核表达载体(pcDNA3.1-K2.10-4S),采... 展开更多; 关键词拟蜘蛛拖丝蛋白基因载体构建转染绵羊成纤维细胞; 在线阅读下载PDF 职称材料

拟蜘蛛拖丝蛋白基因人工合成及其原核表达被引量：5: 2; 作者王春生原璐 +2 位作者罗芳梁洋安铁洙《四川动物》 CSCD 北大核心 2010年第2期184-188,共5页; 根据GenBank上蜘蛛拖丝蛋白基因序列(AY555585和AH015065)、拖丝蛋白基因的结构特点和密码子的简并性,设计378bp的拖丝蛋白基因单体,并对其人工聚合成二聚体。Primer5.0分析结果表明,决定拖丝弹性和抗拉力的氨基酸(Gla和Ala)含量(41.43... 展开更多; 关键词拖丝蛋白基因人工合成二聚体原核表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

UHS-拟蜘蛛拖丝蛋白基因转染小鼠成纤维细胞及其鉴定被引量：1: 3; 作者王春生李晶 +4 位作者宁方勇张秋婷梁洋朴善花安铁洙《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期1202-1205,1235,共5页; 为了获得转拟蜘蛛拖丝蛋白基因2S的阳性小鼠成纤维细胞,本研究将前期工作中人工合成的拟蜘蛛拖丝蛋白基因2S和克隆获得的小鼠超高硫角蛋白启动子(UHS),与带有IRES序列和GFP报告基因的表达载体连接,构建真核表达载体UHS-2S-pIRES2-EGFP;... 展开更多; 关键词蜘蛛拖丝蛋白基因二聚体超高硫角蛋白启动子真核表达载体小鼠成纤维细胞转基因; 在线阅读下载PDF 职称材料

大腹圆蛛拖丝蛋白基因3′端克隆和序列分析: 4; 作者陈瑶孟清《东华大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期177-180,共4页; 用PCR(Polymerase Chain Reaction)技术从大腹圆蛛主壶腹腺组织的基因组DNA和RNA中分别扩增获得编码拖丝蛋白基因的3′端基因序列,克隆PCR产物到pDrive载体,经PCR、限制性酶切筛选和序列分析后证明获得了蜘蛛拖丝蛋白基因两个克隆AvDS1... 展开更多; 关键词蜘蛛拖丝蛋白基因基因克隆; 在线阅读下载PDF 职称材料

蜘蛛拖牵丝蛋白基因转家蚕表达质粒的构建被引量：6: 5; 作者刘辉芬李维 +2 位作者王宇蒋平郭聪《湖南大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第5期105-109,共5页; 利用DNA重组技术对络新妇蛛(Nephila clavipes)拖牵丝蛋白基因MaSp1高度重复序列进行多次重组,人工构建成1.6 kb的蜘蛛拖牵丝蛋白人工基因Sil-E,DNA序列分析证明了人工基因序列的正确性.将家蚕L链基因启动子片段、L链cDNA、L链基因终止... 展开更多; 关键词蜘蛛拖牵丝蛋白基因转座子表达质粒转基因家蚕; 在线阅读下载PDF 职称材料

转蜘蛛拖牵丝蛋白基因家蚕蚕丝氨基酸组成及其机械性能被引量：5: 6; 作者王昌河蒋平 +2 位作者刘辉芬吴灵芝郭聪《四川动物》 CSCD 北大核心 2006年第3期451-454,440,共5页; 将以绿色荧光蛋白基因为报告基因、含有人工合成的1.6 kb的蜘蛛拖牵丝蛋白基因及转座子pig-gyBac的转基因载体成功导入减秋无滞育家蚕受精卵,得到转蜘蛛拖牵丝蛋白基因家蚕及绿色荧光茧。对转基因家蚕与对照家蚕丝素蛋白进行了氨基酸组... 展开更多; 关键词转基因家蚕蜘蛛拖牵丝蛋白基因蚕丝氨基酸组成机械性能; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名转pK2.10-拟蜘蛛拖丝蛋白基因绵羊成纤维细胞株的筛选被引量：11: 1; 作者王春生刘欣原璐安铁洙; 机构东北林业大学生命科学学院; 出处《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1262-1265,共4页; 基金国家自然科学基金资助项目(30771538) 东北林业大学引进人才资助项目; 文摘为了筛选转pK2.10-拟蜘蛛拖丝蛋白基因绵羊成纤维细胞株,本研究参照GenBank上蜘蛛拖丝蛋白基因序列(AY555585和AH015065)设计并人工合成拟蜘蛛基因四聚体(4S),与pcDNA3.1载体(K2.10启动子)相连构建真核表达载体(pcDNA3.1-K2.10-4S),采用脂质体介导法转染绵羊成纤维细胞,通过药物筛选、阳性细胞鉴定及体外培养等方法,获得了转蜘蛛拖丝蛋白基因的绵羊成纤维细胞株。结果,用pcDNA3.1-K2.10-4S表达载体转染冷冻复苏的绵羊成纤维细胞后,利用G418筛选法获得neo基因的抗性细胞,即阳性细胞;采用PCR方法对阳性细胞鉴定显示,所构建的载体整合到了细胞基因组中;对阳性细胞的染色体核型分析显示,阳性细胞核型稳定,与正常细胞的核型无差异;阳性细胞经冷冻复苏后仍能保持原有的特性。该细胞株的建立为进一步开展转拟蜘蛛拖丝蛋白基因的克隆羊研究奠定了基础。; 关键词拟蜘蛛拖丝蛋白基因载体构建转染绵羊成纤维细胞; Keywords spider dragline silk gene construction of vector tansfection sheep fibroblasts; 分类号 S813.3 [农业科学—畜牧学] S852.23 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名拟蜘蛛拖丝蛋白基因人工合成及其原核表达被引量：5: 2; 作者王春生原璐罗芳梁洋安铁洙; 机构东北林业大学生命科学学院; 出处《四川动物》 CSCD 北大核心 2010年第2期184-188,共5页; 基金国家自然科学基金(30751325 30771538)资助东北林业大学引进人才科研启动基金资助; 文摘根据GenBank上蜘蛛拖丝蛋白基因序列(AY555585和AH015065)、拖丝蛋白基因的结构特点和密码子的简并性,设计378bp的拖丝蛋白基因单体,并对其人工聚合成二聚体。Primer5.0分析结果表明,决定拖丝弹性和抗拉力的氨基酸(Gla和Ala)含量(41.43和18.22)接近天然丝蛋白氨基酸含量(42.81和26.32);利用Antheprot软件对二聚体编码氨基酸的二级结构预测结果显示,与丝蛋白的氨基酸链相近,由2个相同的部分排列而成,即β-片层(占48%)、6个α-螺旋间隔(占15%)、散在的转角(占12%)和若干不规则卷曲(占25%)。将二聚体与pET-28a(+)连接构建原核表达载体,IPTG诱导重组菌体裂解物经SDS-PAGE电泳可检测到相对分子质量为26.6×103kD的重组蛋白。上述结果为进一步开展有关转蜘蛛拖丝蛋白基因在绵羊被毛中表达的研究奠定了基础。; 关键词拖丝蛋白基因人工合成二聚体原核表达; Keywords dragline silk protein gene artificially synthesize duple-polymerized prokaryotic expression; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名UHS-拟蜘蛛拖丝蛋白基因转染小鼠成纤维细胞及其鉴定被引量：1: 3; 作者王春生李晶宁方勇张秋婷梁洋朴善花安铁洙; 机构东北林业大学生命科学学院东北农业大学动物科技学院; 出处《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期1202-1205,1235,共5页; 基金国家自然科学基金资助项目(30771538 31000990) 国家转基因生物新品种培育科技重大专项(2009ZX08008-004B); 文摘为了获得转拟蜘蛛拖丝蛋白基因2S的阳性小鼠成纤维细胞,本研究将前期工作中人工合成的拟蜘蛛拖丝蛋白基因2S和克隆获得的小鼠超高硫角蛋白启动子(UHS),与带有IRES序列和GFP报告基因的表达载体连接,构建真核表达载体UHS-2S-pIRES2-EGFP;将UHS-2S-pIRES2-EGFP线性化后,采用脂质体法转染小鼠皮肤成纤维细胞,通过G418筛选获得neo基因抗性阳性细胞。结果表明:(1)成功构建UHS-2S-pIRES2-EGFP;(2)转基因细胞的最佳G418筛选浓度为400μg/mL;(3)筛选获得呈梭形的转基因细胞,对其进行传代培养时,细胞增殖缓慢,细胞未呈现正常细胞的"S"型的生长曲线;(4)PCR检测结果显示,UHS-2S-pIRES2-EGFP载体已经整合到G418抗性细胞的基因组中。; 关键词蜘蛛拖丝蛋白基因二聚体超高硫角蛋白启动子真核表达载体小鼠成纤维细胞转基因; Keywords polymerized spider dragline silk protein gene（2S） ultra-high sulfur keratin（UHS）promoter mouse fibroblast eukaryotic expression vector transgene; 分类号 Q781 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名大腹圆蛛拖丝蛋白基因3′端克隆和序列分析: 4; 作者陈瑶孟清; 机构东华大学化学化工与生物工程学院; 出处《东华大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期177-180,共4页; 基金国家"863"项目资助(2006AA03Z451); 文摘用PCR(Polymerase Chain Reaction)技术从大腹圆蛛主壶腹腺组织的基因组DNA和RNA中分别扩增获得编码拖丝蛋白基因的3′端基因序列,克隆PCR产物到pDrive载体,经PCR、限制性酶切筛选和序列分析后证明获得了蜘蛛拖丝蛋白基因两个克隆AvDS1和AvRS2.基因序列和氨基酸序列分析表明AvDS1和AvRS2具有拖丝蛋白基因序列和蛋白质氨基酸序列特有的结构特征,氨基酸序列中存在4个motifs—(A)n,(GA)n,(GPGX)n以及(GGX)n.AvDS1与基因库中已报道的蜘蛛拖丝蛋白基因序列同源性较低,而AvRS2与已经报道的Nephila clavipes拖丝蛋白基因组分-1的同源性可达91%,推测AvRS2是编码大腹圆蛛拖丝蛋白基因组分-1基因片段.比较这两个克隆的核苷酸序列和氨基酸序列,发现它们之间没有同源性.推测它们是同一基因的不同片段,或是编码大腹圆蛛拖丝蛋白的两个基因组分.; 关键词蜘蛛拖丝蛋白基因基因克隆; Keywords spider dragline silk gene gene cloning; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名蜘蛛拖牵丝蛋白基因转家蚕表达质粒的构建被引量：6: 5; 作者刘辉芬李维王宇蒋平郭聪; 机构四川大学生命科学学院四川师范大学生命科学学院; 出处《湖南大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第5期105-109,共5页; 基金国家科技型中小企业创新基金项目(01C26215120592) 四川省科技厅应用基础研究项目(2004kj-2); 文摘利用DNA重组技术对络新妇蛛(Nephila clavipes)拖牵丝蛋白基因MaSp1高度重复序列进行多次重组,人工构建成1.6 kb的蜘蛛拖牵丝蛋白人工基因Sil-E,DNA序列分析证明了人工基因序列的正确性.将家蚕L链基因启动子片段、L链cDNA、L链基因终止子融合在一起,构建成丝腺特异性表达单元.再与Sil-E融合构建成蜘蛛拖牵丝蛋白基因家蚕丝腺特异表达单元.将该表达单元克隆到转座子piggyBac的转基因载体中,获得了蜘蛛拖牵丝蛋白转基因表达载体.采用显微注射法将其与辅助质粒共导入到家蚕蚕卵中.筛选转基因阳性个体,经PCR和Southern杂交鉴定,结果表明目的基因整合到家蚕基因组中,为进一步研究家蚕作为生物反应器表达蜘蛛拖牵丝蛋白基因奠定了基础.; 关键词蜘蛛拖牵丝蛋白基因转座子表达质粒转基因家蚕; Keywords synthesized gene piggyBac gene expression vector, transgenic silkworm; 分类号 Q782 [生物学—分子生物学] S881.2 [农业科学—特种经济动物饲养]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名转蜘蛛拖牵丝蛋白基因家蚕蚕丝氨基酸组成及其机械性能被引量：5: 6; 作者王昌河蒋平刘辉芬吴灵芝郭聪; 机构生物资源与生态环境教育部重点实验室四川大学生命科学学院; 出处《四川动物》 CSCD 北大核心 2006年第3期451-454,440,共5页; 基金国家科技型中小企业创新基金资助(01C26215120592); 文摘将以绿色荧光蛋白基因为报告基因、含有人工合成的1.6 kb的蜘蛛拖牵丝蛋白基因及转座子pig-gyBac的转基因载体成功导入减秋无滞育家蚕受精卵,得到转蜘蛛拖牵丝蛋白基因家蚕及绿色荧光茧。对转基因家蚕与对照家蚕丝素蛋白进行了氨基酸组成分析,结果表明转基因蚕茧丝素蛋白甘氨酸和丙氨酸的百分含量分别增加了1.65%和1.80%(平均值);对其生丝的机械性能进行了测试研究,结果表明转基因蚕茧生丝的伸长率降低,断裂强度和初始模量增加,且差异均显著,与理论预期结果吻合。结果表明转基因家蚕蚕丝的机械性能一定程度上得到了提高。; 关键词转基因家蚕蜘蛛拖牵丝蛋白基因蚕丝氨基酸组成机械性能; Keywords transgenic silkworm synthetic MaSp1 gene silkworm silk amino acid composition tensile property; 分类号 Q789 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	转pK2.10-拟蜘蛛拖丝蛋白基因绵羊成纤维细胞株的筛选	王春生刘欣原璐安铁洙	《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2009	11	在线阅读下载PDF 职称材料
2	拟蜘蛛拖丝蛋白基因人工合成及其原核表达	王春生原璐罗芳梁洋安铁洙	《四川动物》 CSCD 北大核心	2010	5	在线阅读下载PDF 职称材料
3	UHS-拟蜘蛛拖丝蛋白基因转染小鼠成纤维细胞及其鉴定	王春生李晶宁方勇张秋婷梁洋朴善花安铁洙	《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2011	1	在线阅读下载PDF 职称材料
4	大腹圆蛛拖丝蛋白基因3′端克隆和序列分析	陈瑶孟清	《东华大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心	2008	0	在线阅读下载PDF 职称材料
5	蜘蛛拖牵丝蛋白基因转家蚕表达质粒的构建	刘辉芬李维王宇蒋平郭聪	《湖南大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心	2006	6	在线阅读下载PDF 职称材料
6	转蜘蛛拖牵丝蛋白基因家蚕蚕丝氨基酸组成及其机械性能	王昌河蒋平刘辉芬吴灵芝郭聪	《四川动物》 CSCD 北大核心	2006	5	在线阅读下载PDF 职称材料