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156例SARS患者血清抗SARS冠状病毒抗体的观测 被引量：6
1
作者 王海宝 刘景汉 +8 位作者 欧阳锡林 于洋 马曙轩 李锡金 吕留彩 田亚平 刘红鹰 许红民 姚伟 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2003年第5期441-443,共3页
本研究的目的是观察严重急性呼吸综合征 (severeacuterespiratorysyndrome ,SARS)患者抗SARS 冠状病毒 (SARS CoV)抗体IgG和IgM的产生及抗体效价变化特征 ,探索采集SARS痊愈患者抗血清的时机。应用ELISA方法对随机抽取的 156名SARS患者... 本研究的目的是观察严重急性呼吸综合征 (severeacuterespiratorysyndrome ,SARS)患者抗SARS 冠状病毒 (SARS CoV)抗体IgG和IgM的产生及抗体效价变化特征 ,探索采集SARS痊愈患者抗血清的时机。应用ELISA方法对随机抽取的 156名SARS患者血清标本进行抗SARS CoV抗体IgG和IgM抗体效价测定。结果表明 ,156名SARS患者于病后 3至 9周期间 ,IgG抗体阳性率为 75.6% ,IgM抗体阳性率为 41.7% ,IgG和IgM抗体均阳性为 41% ,IgG和IgM抗体均阴性为 2 3 .7% ;IgG抗体阳性患者中抗体效价为 18.2 3± 2 4.72 ,IgM抗体阴性患者抗体效价为 2 .18± 1.13 ;IgG和IgM抗体效价与SARS患者的性别、年龄、病程、体温正常天数无显著相关性。结论 :并非所有SARS患者都能产生抗SARS CoV抗体 ,即使产生抗体 ,其效价的个体差异也较大 ,并不能通过性别、年龄、病程及体温正常天数等因素较准确地评估抗体的效价。因此 ,在SARS抗血清采集前 ,应重新进行抗体效价测定 ,遴选具有高效价抗SARS CoV抗体的SARS痊愈患者进行抗血清的采集 ,才能提高所采集的抗血清在临床的治疗效果 。 展开更多
关键词 严重急性呼吸综合征 抗sars冠状病毒抗体 酶联免疫吸附测定
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猪德尔塔冠状病毒N蛋白原核表达及多克隆抗体制备
2
作者 叶晨倩 李智丽 +11 位作者 叶曼青 秦文珍 杨心雨 翟雪滢 郑浩 童武 李国新 于海 童光志 单同领 娄华 孔宁 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第1期164-170,共7页
猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)是一种新发的病原体,引起仔猪腹泻、脱水和呕吐等症状。本研究以PDCoV的RNA为模板,扩增PDCoV N基因,将其插入原核表达载体pColdⅠ中,构建PDCoV N-pColdⅠ质粒;通过BL21(DE3)原核表达和纯化获得高纯度的PDCoV N蛋... 猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)是一种新发的病原体,引起仔猪腹泻、脱水和呕吐等症状。本研究以PDCoV的RNA为模板,扩增PDCoV N基因,将其插入原核表达载体pColdⅠ中,构建PDCoV N-pColdⅠ质粒;通过BL21(DE3)原核表达和纯化获得高纯度的PDCoV N蛋白;免疫BALB/c小鼠,制备PDCoV N蛋白多克隆抗体。结果显示:原核表达的PDCoV N蛋白为可溶性蛋白,分子量约为40 kDa;通过ELISA、Western blot和IFA鉴定可知,本研究制备的PDCoV N多克隆抗体均具有良好的效价,可为深入开展PDCoV相关的基础和应用研究提供工具。 展开更多
关键词 猪德尔塔冠状病毒 N蛋白 原核表达 多克隆抗体
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猪德尔塔冠状病毒N蛋白单克隆抗体制备及双抗体夹心ELISA方法建立
3
作者 王田田 于瑞明 +5 位作者 张莉萍 白英杰 张中旺 潘丽 张全伟 刘新生 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第11期5326-5337,共12页
【目的】制备猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)N蛋白的单克隆抗体并建立一种检测PDCoV抗原的双抗体夹心ELISA方法,为猪群PDCoV感染情况的临床快速、准确检测提供技术支持。【方法】通过原核表达系统表达PDCoV N蛋白并... 【目的】制备猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)N蛋白的单克隆抗体并建立一种检测PDCoV抗原的双抗体夹心ELISA方法,为猪群PDCoV感染情况的临床快速、准确检测提供技术支持。【方法】通过原核表达系统表达PDCoV N蛋白并验证,用其免疫BALB/c雌鼠,利用杂交瘤细胞融合技术筛选制备抗PDCoV N蛋白的特异性单克隆抗体,并通过Western blotting、间接免疫荧光试验(IFA)验证单克隆抗体的反应性和特异性。将筛选到的单克隆抗体进行辣根过氧化物酶(HRP)标记,并分别与未标记的单克隆抗体两两组合配对,选择最优抗体用于双抗体夹心ELISA检测方法的建立,通过棋盘法优化捕获抗体包被浓度和酶标抗体稀释度等条件,条件优化后通过梯度稀释法确定该方法的PDCoV N蛋白和PDCoV的检出限,并验证其重复性和特异性,最终检测临床样品验证该方法与反转录实时荧光定量PCR的一致性。【结果】成功表达出纯度较高的PDCoV N蛋白,用其免疫小鼠4次后其血清抗体效价达到1∶256000,通过杂交瘤融合技术成功筛选到6株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株(5D2-1、5D2-2、6G7-1、6G7-2、3C5和6F10)。Western blotting、IFA结果显示,筛选到的6株单克隆抗体可与PDCoV N蛋白特异性反应。配对试验结果表明,最佳捕获抗体为5D2-1,最佳检测抗体为6G7-1-HRP。本研究建立的双抗体夹心ELISA方法对PDCoV N蛋白的检出限为2 ng/mL,全病毒的检出限为7.89×103 TCID 50/mL,具有良好的灵敏性。批间和批内重复试验变异系数均<10%,且未见与其他常见猪肠道病毒发生反应,具有良好的重复性和特异性。临床样本检测结果显示,建立的双抗体夹心ELISA方法与反转录实时荧光定量PCR方法符合率为88.19%,Kappa值为0.761,表明该方法可用于PDCoV临床样品的检测。【结论】本研究成功筛选制备了6株针对PDCoV N蛋白的特异性单克隆抗体,建立了一种特异性好、灵敏度高的PDCoV双抗体夹心ELISA检测方法,为PDCoV临床诊断提供了新方法。 展开更多
关键词 猪德尔塔冠状病毒(PDCoV) N蛋白 单克隆抗体 双抗体夹心ELISA
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SARS冠状病毒N蛋白单克隆抗体在SARS尸检组织中的表达 被引量：13
4
作者 贺莉 丁彦青 +14 位作者 车小燕 张庆玲 黄仲曦 王慧君 申洪 李祖国 蔡俊杰 张进华 耿舰 李欣 张文丽 韩慧霞 康伟 杨磊 陆药丹 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第11期1128-1130,共3页
目的观察SARS死者的尸检组织中SARS冠状病毒(SARS-CoV)的存在与分布情况。方法应用免疫组化技术检测4例尸检标本肺、脾脏、淋巴结、脑、垂体、心、肝、肾、胰腺、气管、食道、胃肠道和骨髓等组织的SARS-CoV N蛋白。结果肺泡上皮、肺、... 目的观察SARS死者的尸检组织中SARS冠状病毒(SARS-CoV)的存在与分布情况。方法应用免疫组化技术检测4例尸检标本肺、脾脏、淋巴结、脑、垂体、心、肝、肾、胰腺、气管、食道、胃肠道和骨髓等组织的SARS-CoV N蛋白。结果肺泡上皮、肺、脾、淋巴结内浸润的单核细胞/巨噬细胞、脑神经元、肝细胞、肾远曲小管上皮细胞、胰腺腺泡细胞、垂体嗜酸细胞、甲状旁腺嗜酸性细胞、肾上腺皮质细胞、气管及支气管浆液腺上皮细胞、食道粘膜鳞状上皮、胃肠道柱状上皮细胞及胃壁细胞、骨髓早幼粒细胞及小静脉内皮细胞等细胞质内SARS-CoV N蛋白单克隆抗体均为阳性。结论SARS-CoV可侵犯全身多种器官和组织。SARS-CoV N蛋白单克隆抗体在胃肠道、肾远曲小管及汗腺细胞内的阳性表达,对研究SARS-CoV传播途径具有重要意义。 展开更多
关键词 sars冠状病毒 N蛋白单克隆抗体 尸检组织 sars-COV 急性重症呼吸综合征
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抗SARS冠状病毒M蛋白片段单克隆抗体的制备与初步鉴定 被引量：6
5
作者 钱超 姜平 +1 位作者 卢春 姚堃 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期213-215,共3页
目的： 制备抗SARS冠状病毒（SARS-CoV） M 蛋白N端1～43氨基酸（aa）单克隆抗体（mAb）, 并对其特性进行初步鉴定.方法： 用纯化的SARS-M/GST融合蛋白抗原免疫BALB/c小鼠, 采用杂交瘤技术制备抗M蛋白片段的mAb.用间接ELISA法筛选能分泌... 目的： 制备抗SARS冠状病毒（SARS-CoV） M 蛋白N端1～43氨基酸（aa）单克隆抗体（mAb）, 并对其特性进行初步鉴定.方法： 用纯化的SARS-M/GST融合蛋白抗原免疫BALB/c小鼠, 采用杂交瘤技术制备抗M蛋白片段的mAb.用间接ELISA法筛选能分泌抗M蛋白片段mAb的杂交瘤细胞株. Western blot和间接ELISA鉴定所获mAb的特异性, 并用小鼠mAb亚类测定试剂盒检测所获的mAb Ig亚类.为分析mAb识别位点, 进一步将M蛋白片段截短为部分重叠的2段表达, 以Western blot初步定位mAb识别位点.结果： 获得1株可分泌特异性抗SARS-CoV M蛋白片段的mAb杂交瘤细胞株（3H9）, Ig亚类鉴定为IgG2a, 轻链为κ型.Western blot显示其mAb可特异识别SARS-CoV M蛋白N端1～43aa, 间接ELISA证实mAb可与包被于聚苯乙烯微孔板上的SARS病毒全蛋白抗原发生特异性反应, 其识别位点位于M蛋白N端16～28aa.结论： 成功获得1株抗SARS-CoV M蛋白N端1～43aa mAb杂交瘤细胞, 并初步定位其识别位点. 展开更多
关键词 sars冠状病毒 单克隆抗体 M蛋白
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SARS冠状病毒核衣壳蛋白的重组表达及其单克隆抗体的制备 被引量：3
6
作者 王平 黄庆生 +5 位作者 薛小平 雷迎峰 王海涛 任君萍 丁天兵 徐志凯 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期50-52,共3页
　目的: 表达SARS冠状病毒核衣壳蛋白(N蛋白),并以表达产物为免疫原制备特异性单克隆抗体 (mAb)。方法: 采用RT- PCR方法, 从灭活的病毒抗原标本中扩增编码N蛋白的基因。测序确认后, 再亚克隆至原核表达载体中。从SDS -PAGE凝胶中回收... 　目的: 表达SARS冠状病毒核衣壳蛋白(N蛋白),并以表达产物为免疫原制备特异性单克隆抗体 (mAb)。方法: 采用RT- PCR方法, 从灭活的病毒抗原标本中扩增编码N蛋白的基因。测序确认后, 再亚克隆至原核表达载体中。从SDS -PAGE凝胶中回收原核表达产物后免疫BALB/c小鼠, 经融合、筛选制备特异性mAb。结果: 从标本中扩增出 1 269bp的DNA, 测序结果证实为N蛋白基因。将该基因克隆至原核表达载体中后, 在大肠杆菌中获得了较好的表达。表达产物经SDS- PAGE后, 在Mr约为 43 000处可见 1条明显的诱导表达带。Westernblot的结果表明, 该电泳带与SARS患者的恢复期血清呈特异的免疫反应。从SDS- PAGE凝胶中回收表达产物并免疫BALB/c小鼠, 制备出 3株抗N蛋白的mAb。这些mAb与SDS- PAGE凝胶上Mr约为 43 000的蛋白带也呈现很强的免疫反应。结论: 所获的重组N蛋白及特异性mAb, 将为进一步建立SARS病毒感染早期诊断的方法奠定了基础。 展开更多
关键词 sars冠状病毒 核衣壳蛋白 原核表达 单克隆抗体
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抗SARS冠状病毒表面抗原抗体的制备及其初步应用 被引量：1
7
作者 许文革 刘一兵 +2 位作者 韩世泉 胡轶丁 罗志福 《原子能科学技术》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第2期101-105,共5页
研究探讨了制备和鉴定SARS 冠状病毒表面抗原的快速免疫检测方法。采用基因工程表达SARS冠状病毒表面抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术,获得了4 株稳定分泌高特异性抗SARS冠状病毒表面抗原的杂交瘤细胞系,制取了含高效价单克隆抗体的... 研究探讨了制备和鉴定SARS 冠状病毒表面抗原的快速免疫检测方法。采用基因工程表达SARS冠状病毒表面抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术,获得了4 株稳定分泌高特异性抗SARS冠状病毒表面抗原的杂交瘤细胞系,制取了含高效价单克隆抗体的腹水;采用SARS冠状病毒表面抗原免疫家兔、绵羊、山羊,制取了抗SARS冠状病毒表面抗原的多克隆抗体。研究结果表明:CS4 C11单抗作为示踪抗体、绵羊抗SARS冠状病毒表面抗原抗体作为固相抗体为最佳配对;CS4 C11 单抗作为示踪抗体、CS6B12单抗作为固相抗体次之。获得的抗SARS冠状病毒表面抗原的抗体为SARS的早期诊断研究奠定了基础。 展开更多
关键词 表面抗原 抗SA sars冠状病毒 抗体 单抗 免疫 腹水 绵羊 山羊 家兔
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猪德尔塔冠状病毒感染与抗感染研究进展 被引量：1
8
作者 毛福超 翟崇凯 +4 位作者 田文静 王聪慧 宋敏杰 王迎鲜 张贺伟 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第3期1281-1291,共11页
猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)是一种新型肠道冠状病毒,主要感染哺乳仔猪,临床表现为腹泻、呕吐、脱水等症状,发病率可达100%。PDCoV严重危害新生仔猪健康,现已成为引起猪群腹泻的主要病原体之一。PDCoV通过膜融合... 猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)是一种新型肠道冠状病毒,主要感染哺乳仔猪,临床表现为腹泻、呕吐、脱水等症状,发病率可达100%。PDCoV严重危害新生仔猪健康,现已成为引起猪群腹泻的主要病原体之一。PDCoV通过膜融合及受体介导的内吞作用侵入宿主细胞,S蛋白是病毒侵入细胞的主要结构,表面氨基肽酶N、小窝蛋白是病毒侵入细胞的关键位点。此外,表面氨基肽酶N目前被认为是PDCoV跨物种传播的重要位点。细胞通过干扰素(IFN)基因表达、胆固醇代谢及N蛋白泛素化等途径引发抗感染。PDCoV通过自身结构蛋白、辅助蛋白及非结构蛋白等通过干扰IFN的表达及诱导侵染细胞凋亡等途径产生免疫逃避,进而持续侵染宿主细胞。目前用于预防和控制PDCoV感染的商业疫苗或抗病毒药物多在试验研发阶段或初上市阶段,其对PDCoV的预防和控制的临床效果亟需市场验证。尤其是针对病毒复制、免疫逃逸、抗PDCoV宿主因子等靶点开发的抗病毒药物或疫苗,为未来开发新型疫苗或抗病毒药物研发提供了新的研究方向和坚实的基础。笔者通过阐述PDCoV与宿主之间的感染和抗感染机制,探究多种抗病毒药物抑制PDCoV感染的潜在作用机制,为研究PDCoV致病机制、抗PDCoV感染治疗以及新药物的开发提供参考。 展开更多
关键词 猪德尔塔冠状病毒(PDCoV) 致病性 免疫逃逸 抗病毒机制
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猪德尔塔冠状病毒N蛋白单克隆抗体2D7的制备与生物学特性鉴定 被引量：1
9
作者 张宁 赵平 +12 位作者 刘思雨 赵硕 陈忠伟 何颖 欧阳康 卢冰霞 蒋家霞 郭旋 林昌华 赵武 黄伟坚 秦毅斌 赵凌 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第5期115-125,共11页
为获得猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)N蛋白的特异性单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb),并鉴定其生物学特性,本研究利用RT-PCR方法扩增PDCoV-N基因,构建表达质粒,转化BL21感受态细胞获得重组大肠杆菌,诱导表达后... 为获得猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)N蛋白的特异性单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb),并鉴定其生物学特性,本研究利用RT-PCR方法扩增PDCoV-N基因,构建表达质粒,转化BL21感受态细胞获得重组大肠杆菌,诱导表达后获得PDCoV-N重组蛋白,将其进行纯化后再免疫小鼠,制备针对PDCoV-N蛋白的mAb,并进行了抗体的效价测定、免疫荧光(IFA)、Western blot、亚类的鉴定、mAb特异性的鉴定。结果,成功构建pColdⅡ-PDCoV-N重组原核表达质粒,SDS-PAGE显示重组N蛋白成功表达,分子质量约为38 kDa;经小鼠免疫、细胞融合、亚克隆筛选获得1株分泌PDCoV-N蛋白抗体的阳性杂交瘤细胞株;制备的腹水经间接ELISA方法测定抗体的效价为2.048×10^(6)。IFA、Western blot试验表明该mAb可以与PDCoV-N蛋白及全病毒特异性结合,亚类鉴定其亚型为IgG1,轻链为κ链。该mAb只与PDCoV反应,而与其他猪肠道病毒无交叉反应,表明本研究制备的mAb具有良好的特异性。本研究成功制备了PDCoV-N蛋白的mAb,为进一步研究PDCoV的生物学特性和诊断试剂的开发提供技术支持。 展开更多
关键词 猪德尔塔冠状病毒 N蛋白 单克隆抗体
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杆状病毒表达SARS冠状病毒纤突蛋白及其抗原性分析 被引量：3
10
作者 王喜军 胡森 +5 位作者 王清华 邓国华 王笑梅 吴东来 申之义 步志高 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期549-552,共4页
本研究构建了SARS冠状病毒纤突蛋白(S)重组杆状病毒(rBac-SS)。SDS-PAGE及Western-Blot分析表明约190 Ku左右的重组SARS纤突蛋白(rSS)在rBac-SS感染sf9昆虫细胞获得表达,并具有特异免疫反应原性。以rBac-SS感染的昆虫细胞裂解物稀释后... 本研究构建了SARS冠状病毒纤突蛋白(S)重组杆状病毒(rBac-SS)。SDS-PAGE及Western-Blot分析表明约190 Ku左右的重组SARS纤突蛋白(rSS)在rBac-SS感染sf9昆虫细胞获得表达,并具有特异免疫反应原性。以rBac-SS感染的昆虫细胞裂解物稀释后直接包被ELISA板,与Vero细胞培养的全病毒裂解物比较,检测SARS-CoV康复病人血清特异抗体,表现出同样的敏感性和特异性;rBac-SS感染的昆虫细胞用于间接免疫荧光,快速检测血清特异抗体反应,具有良好的敏感性和特异性。结果显示,杆状病毒表达的rSS有望替代SARS-CoV全病毒,作为安全、敏感和特异的重组诊断抗原,并为探索重组亚单位疫苗的可行性奠定基础。 展开更多
关键词 sars冠状病毒 纤突蛋白 重组杆状病毒 ELISA IFA
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猪德尔塔冠状病毒N蛋白原核表达及其多克隆抗体制备 被引量：1
11
作者 赵梓桥 张昆丽 +4 位作者 张春红 翟少伦 康欣桐 黄淑坚 张建峰 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1798-1806,共9页
【目的】构建猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)核衣壳(N)蛋白原核表达系统并制备多克隆抗体,为新型疫苗、诊断试剂研发及PDCoV致病机制的深入研究提供基础。【方法】提取PDCoV HeN17株RNA,经RT-PCR扩增,将N基因克隆至p... 【目的】构建猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)核衣壳(N)蛋白原核表达系统并制备多克隆抗体,为新型疫苗、诊断试剂研发及PDCoV致病机制的深入研究提供基础。【方法】提取PDCoV HeN17株RNA,经RT-PCR扩增,将N基因克隆至pGEX-6P-1载体构建重组原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞并进行IPTG诱导表达。利用Glutathione Sepharose 4B亲和层析纯化重组蛋白,采用3C蛋白酶去除标签。以纯化后的N蛋白为免疫原免疫3月龄新西兰大白兔制备多克隆抗体,采用间接酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定抗体效价,并通过Western blotting、间接免疫荧光试验(IFA)和免疫沉淀(IP)试验对其进行鉴定。【结果】成功构建原核表达载体pGEX-6p-1-PDCoV-N,获得的PDCoV-N-GST重组蛋白主要以可溶性形式表达,大小约69 kD,经去除GST标签可获得单一目的蛋白条带,经测定蛋白浓度为12.6 mg/mL,获得的PDCoV-N蛋白能与PDCoV阳性血清反应产生单一特异性条带。制备的兔源抗PDCoV-N多克隆抗体效价达1∶4096000,可特异性识别pCAGGS-Flag-N转染HEK-293T细胞中表达的Flag-N蛋白和PDCoV感染LLC-PK1细胞中表达的PDCoV-N蛋白,且能检测到PDCoV-N真核表达载体pCAGGS-Flag-N转染HEK-293T细胞中表达的PDCoV-N蛋白。【结论】成功构建高效PDCoV-N原核表达系统,获得纯度好、浓度高且免疫原性佳的PDCoV-N蛋白,制备的兔源抗PDCoV-N多克隆抗体效价高,具有较强亲和力和特异性,可用于Western blotting、IFA和IP检测。 展开更多
关键词 猪德尔塔冠状病毒(PDCoV) N蛋白 原核表达 多克隆抗体
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杆状病毒表达SARS冠状病毒核蛋白抗原性的研究 被引量：2
12
作者 胡森 王喜军 +4 位作者 王清华 吴东来 邓国华 王笑梅 步志高 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第4期301-303,319,共4页
目的　对杆状病毒表达SARS冠状病毒NP抗原性进行分析与比较。方法　利用SDS PAGE、Western Blot和ELISA证明重组核蛋白(rSN)在昆虫细胞获得高效表达,具有特异免疫反应原性。结果　表达rSN的昆虫细胞裂解、稀释后直接包被ELISA板,来检测S... 目的　对杆状病毒表达SARS冠状病毒NP抗原性进行分析与比较。方法　利用SDS PAGE、Western Blot和ELISA证明重组核蛋白(rSN)在昆虫细胞获得高效表达,具有特异免疫反应原性。结果　表达rSN的昆虫细胞裂解、稀释后直接包被ELISA板,来检测SARS CoV康复病人血清特异抗体,敏感性稍高于Vero细胞培养的全病毒(OD分别为2 .8和0 .6 ) ,与健康人血清不发生特异反应(OD值为0 .0 1) ;表达rSN昆虫细胞用于间接免疫荧光,快速检测血清特异抗体反应,同样表现了良好的敏感性和特异性。结论　昆虫细胞表达rSN有望替代SARS CoV全病毒,作为安全、敏感和特异的诊断抗原,应用于ELISA和IFA血清学检测。 展开更多
关键词 sars冠状病毒 核蛋白 重组杆状病毒 ELISA IFA
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SARS冠状病毒N蛋白在酵母中的表达纯化及抗原性分析
13
作者 郭旭 张竞 +2 位作者 李玉珍 张麒 李东云 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期59-62,共4页
目的研究人SARS冠状病毒核壳N蛋白在Pichia pastoris酵母中的表达,获得具有生物学活性的重组N蛋白,并鉴定表达蛋白的抗原性,为下一步的研究奠定基础。方法合成引物扩增SARS冠状病毒N基因,插入含AOX1启动子的Pichia pastoris酵母表达载体... 目的研究人SARS冠状病毒核壳N蛋白在Pichia pastoris酵母中的表达,获得具有生物学活性的重组N蛋白,并鉴定表达蛋白的抗原性,为下一步的研究奠定基础。方法合成引物扩增SARS冠状病毒N基因,插入含AOX1启动子的Pichia pastoris酵母表达载体中,转化酵母宿主菌KM71H、X-33、GS115,筛选阳性转化子,摇瓶培养,用甲醇诱导表达。表达产物经镍离子柱亲和层析纯化后,以抗SARS冠状病毒N蛋白的小鼠单抗、兔多抗及SRAS病人阳性血清鉴定其抗原性。结果SDS-PAGE和免疫学分析显示,酵母转化子仅在KM71H、X-33中有M r约70 000的诱导蛋白,表达产物具有良好的抗原性和特异性。结论在酵母表达系统中,初步实现了SARS冠状病毒核壳N蛋白的有效表达。 展开更多
关键词 sars冠状病毒 N蛋白 基因表达 毕赤巴斯德酵母
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预测的SARS冠状病毒刺突蛋白S2亚基B细胞表位肽在大肠杆菌中的表达及其抗原性的鉴定
14
作者 冯宇 万敏 +3 位作者 王宣军 张培因 于永利 王丽颖 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期113-116,共4页
目的研究预测的SARS冠状病毒刺突蛋白S2亚基B细胞表位肽在大肠杆菌中的表达及其模拟S2蛋白的抗原性。方法用DNAStar软件对S2亚基序列进行分析,预测B细胞表位所在肽段。通过4轮PCR反应人工搭建预测表位cDNA序列并克隆到含有伴侣10基因的p... 目的研究预测的SARS冠状病毒刺突蛋白S2亚基B细胞表位肽在大肠杆菌中的表达及其模拟S2蛋白的抗原性。方法用DNAStar软件对S2亚基序列进行分析,预测B细胞表位所在肽段。通过4轮PCR反应人工搭建预测表位cDNA序列并克隆到含有伴侣10基因的pET28a(+)载体中,构成重组载体pET28-chap10-S2epi。重组蛋白Chap10-S2epi在E.coliBL21(DE3)中表达并以SDS-PAGE和Westernblot进行鉴定。用纯化的chap10-S2epi免疫家兔制备抗血清,并通过ELISA判断Chap10-S2epi的抗原性。结果成功构建并在大肠杆菌中表达了Chap10-S2pei融合蛋白。Chap10-S2epi免疫的抗血清能识别真核细胞表达的SARS冠状病毒全长S2刺突蛋白。结论预测的SARS冠状病毒S2刺突蛋白B细胞表位肽能够诱导家兔产生针对S2蛋白的抗体,为研制抗SARS病毒基因工程疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 sars冠状病毒剌突蛋白 B细胞表位预测 伴侣10分子 S2亚基
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SARS冠状病毒对血液系统的影响及可能的机制(英文) 被引量：39
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作者 杨默 韩锦伦 +2 位作者 李桂霞 霍泰辉 李志光 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2003年第3期217-221,共5页
20 0 2年 11月在广东发现首例严重急性呼吸综合征 (俗称“非典型性肺炎”)病例。 2 0 0 3年 2月世界卫生组织 (WHO)在越南河内正式确认此疾病为新的人类传染病 ,并命名为严重急性呼吸综合征 (severeacuterespiratorysyndrome ,SARS)。 2... 20 0 2年 11月在广东发现首例严重急性呼吸综合征 (俗称“非典型性肺炎”)病例。 2 0 0 3年 2月世界卫生组织 (WHO)在越南河内正式确认此疾病为新的人类传染病 ,并命名为严重急性呼吸综合征 (severeacuterespiratorysyndrome ,SARS)。 2 0 0 3年 3月在香港发现其病原体为新的冠状病毒 (coronavirus) ,称之为SARS冠状病毒 (SARS CoV)。SARS患者常常出现异常的血液学改变 ,包括淋巴细胞减少 (在成人为 6 8% - 90 % ;在儿童为 10 0 % ,n =10 ) ,血小板减少 (成人 2 0 % - 4 5 % ,儿童 5 0 % ) ,和白细胞减少 (成人 2 0 % - 34% ,儿童 70 % )。同时在部份患者D 二聚体水平可见升高。初步的研究表明SARS冠状病毒可侵犯造血细胞 ,但作用机制尚不清楚。我们推测其病理生理过程可能包括 :(1)通过CD13或CD6 6a受体 ,SARS病毒直接侵入造血细胞或感染骨髓基质细胞等 ,加重细胞凋亡 ,引致造血抑制 ;(2 )通过生成自身抗体或免疫复合物等免疫介导造成细胞损害。肺部损害也可部分解释血小板减少。肺部可能是成熟巨核细胞释出血小板的器官之一。SARS病人有广泛肺泡损害 ,包括充血、水肿、透明膜形成和肺纤维化 ,使肺部有效毛细血管床减少 ,从而血小板生成减少。同时 ,炎症损伤使肺部血小板聚集、血栓形成 ,也引致血小板? 展开更多
关键词 sars sars冠状病毒 淋巴细胞减少症 血小板减少症 白细胞减少症
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SARS冠状病毒编码蛋白质及其基因分析的研究进展 被引量：11
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作者 梅林 李京 +2 位作者 闫婕 刘婷婷 李学军 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期126-128,共3页
关键词 严重急性呼吸综合征 sars冠状病毒 sars-COV
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SARS冠状病毒对心脏及其传导系统影响的病理学研究 被引量：11
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作者 周光德 赵景民 +6 位作者 王松山 孙艳玲 潘登 杨建法 李文淑 于海丽 张泰和 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期52-54,共3页
目的　探讨严重急性呼吸综合征(SARS)对心脏、尤其是心脏传导系统的影响。方法　应用HE、组织化学及核酸原位杂交等方法 ,对 6例SARS死亡患者的心脏组织及其中 1例死者的心脏传导系统进行病理研究。结果　SARS患者的心脏损伤表现为心肌... 目的　探讨严重急性呼吸综合征(SARS)对心脏、尤其是心脏传导系统的影响。方法　应用HE、组织化学及核酸原位杂交等方法 ,对 6例SARS死亡患者的心脏组织及其中 1例死者的心脏传导系统进行病理研究。结果　SARS患者的心脏损伤表现为心肌细胞空泡变性、萎缩和少数心肌细胞肌浆溶解 ,心肌间质轻度水肿、少量炎细胞浸润及轻度小血管炎 ;Macchiavello染色示心肌细胞胞质内偶见病毒包涵体 ;核酸原位杂交示少部分心肌细胞及心脏传导系统特化心肌细胞内呈现明确的冠状病毒 (SARS CoV)阳性杂交信号。结论　SARS CoV不仅能够感染心肌细胞 ,而且可感染心脏传导系统中的特化心肌细胞 ,可引起心脏轻度病毒性心肌炎性改变。该研究结果为解释临床上SARS患者心律失常和心肌酶谱异常提供了重要的病理学依据。 展开更多
关键词 严重急性呼吸综合征 sars冠状病毒 心脏传导系统 病理学
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SARS冠状病毒PLpro蛋白酶的结构与功能 被引量：18
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作者 杨宇东 孙莉 陈忠斌 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期15-21,共7页
SARS冠状病毒基因组编码2种病毒蛋白酶,即木瓜样蛋白酶(PLpro)和3C样蛋白酶(3CLpro).其中,PLpro蛋白酶结构与功能研究是近年来冠状病毒分子生物学研究的热点之一.PLpro蛋白酶参与SARS冠状病毒1a(1ab)复制酶多聚蛋白N端部分的切割加工,是... SARS冠状病毒基因组编码2种病毒蛋白酶,即木瓜样蛋白酶(PLpro)和3C样蛋白酶(3CLpro).其中,PLpro蛋白酶结构与功能研究是近年来冠状病毒分子生物学研究的热点之一.PLpro蛋白酶参与SARS冠状病毒1a(1ab)复制酶多聚蛋白N端部分的切割加工,是SARS冠状病毒复制酶复合体(RC)形成的重要调节蛋白分子;最新研究表明,SARS冠状病毒PLpro蛋白酶是一种病毒编码的去泛素化酶(DUB),对细胞蛋白具有明显去泛素化作用;而且对泛素(Ub)和泛素样分子ISG15均具有活性.PLpro蛋白酶对宿主抗病毒天然免疫反应具有负调节作用,是SARS冠状病毒的一种重要干扰素拮抗分子.PLpro蛋白酶是一种多功能病毒蛋白酶.本文结合作者课题组研究工作,对SARS冠状病毒PLpro蛋白酶结构和功能研究最新进展进行综述. 展开更多
关键词 sars冠状病毒 PLpro蛋白酶 去泛素化酶 抗病毒天然免疫 干扰素拮抗剂
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反转录巢式PCR方法检测SARS冠状病毒 被引量：19
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作者 王艳 马文丽 +6 位作者 宋艳斌 肖维威 张宝 黄海 王洪敏 马晓冬 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第5期421-423,共3页
目的探索SARS冠状病毒早期诊断的有效手段。方法对临床病例样品采用反转录巢式PCR方法鉴定SARS冠状病毒。提取样品RNA,用巢式PCR外侧下游引物进行反转录,以反转录产物为模板,进行巢式第一次、第二次PCR。PCR产物克隆到pMD18-T载体后进... 目的探索SARS冠状病毒早期诊断的有效手段。方法对临床病例样品采用反转录巢式PCR方法鉴定SARS冠状病毒。提取样品RNA,用巢式PCR外侧下游引物进行反转录,以反转录产物为模板,进行巢式第一次、第二次PCR。PCR产物克隆到pMD18-T载体后进行测序鉴定。结果被检样品扩增出特异片段,经测序验证确实来自SARS相关冠状病毒。Blast比较结果与SARS冠状病毒多伦多株相应片段只有一个碱基的差异。结论反转录巢式PCR方法验证在非典型肺炎患者标本中存在SARS相关冠状病毒的序列,证实该法不失为一种检测SARS冠状病毒的快速、简便、易行的方法。 展开更多
关键词 sars冠状病毒 巢式反转录PCR 早期诊断
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2019新型冠状病毒的抗原抗体检测 被引量：15
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作者 高原 陈川 王晶 《计量学报》 CSCD 北大核心 2020年第5期513-517,共5页
2019新型冠状病毒(SARS-CoV-2)入侵人体引起急性呼吸道传染病,命名为2019冠状病毒病(COVID-19)。新冠病毒在全球范围传播对全球公共卫生安全构成了巨大的威胁,新冠病毒的检测对疫病诊断尤为重要。免疫分析技术作为核酸检测的辅助手段,... 2019新型冠状病毒(SARS-CoV-2)入侵人体引起急性呼吸道传染病,命名为2019冠状病毒病(COVID-19)。新冠病毒在全球范围传播对全球公共卫生安全构成了巨大的威胁,新冠病毒的检测对疫病诊断尤为重要。免疫分析技术作为核酸检测的辅助手段,主要用于对疑似病例和与感染者密切接触人员的筛查。免疫诊断技术包括抗体和抗原检测,通过检测感染部位或者血液样本中是否含有病毒本身的蛋白或是由病毒引起免疫反应而产生的抗体来判断是否携带病毒。对目前用于新冠病毒抗原和抗体检测的免疫分析方法着重进行了分析。 展开更多
关键词 计量学 新型冠状病毒 2019冠状病毒病 抗原 抗体 免疫分析 检测
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