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免疫亲和层析法纯化抗Pgp/抗CD3双功能抗体
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作者 王金宏 刘娟妮 +3 位作者 高瀛岱 邵晓枫 熊冬生 杨纯正 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期356-359,共4页
目的:制备可以纯化抗Pgp/抗CD3双功能抗体的免疫亲和层析柱。方法:纯化的抗抗CD3ScFv单克隆抗体与预活化的Sepharose4B偶联制成免疫亲和层析柱,采用自制的免疫亲和层析柱纯化由摇瓶发酵获得的抗Pgp/抗CD3双功能抗体,采用间接免疫荧光法... 目的:制备可以纯化抗Pgp/抗CD3双功能抗体的免疫亲和层析柱。方法:纯化的抗抗CD3ScFv单克隆抗体与预活化的Sepharose4B偶联制成免疫亲和层析柱,采用自制的免疫亲和层析柱纯化由摇瓶发酵获得的抗Pgp/抗CD3双功能抗体,采用间接免疫荧光法测定抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体能与Jurkat细胞及K562/A02细胞特异性结合活性。结果:成功地制备了可以纯化抗Pgp/抗CD3双功能抗体的免疫亲和层析柱,采用此柱纯化的抗体与Jurkat细胞及K562/A02细胞特异性结合的活性与带有E-tag纯化标志的抗体基本一致。结论:此介质可以替代价格高昂的E-tag亲和层析介质在纯化Pgp/抗CD3双特异双功能抗体中的应用,同时还可以避免由于E-tag纯化标志而带来的免疫原性问题,此项研究工作为抗Pgp/抗CD3双功能抗体将来在临床应用奠定了基础。 展开更多
关键词 cd3ScFv单克隆抗体 抗pgp/抗cd3双功能抗体 亲和层析
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抗Pgp/抗CD3微型双功能抗体裸鼠体内分布研究 被引量:3
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作者 杨铭 高瀛岱 +5 位作者 熊冬生 刘汉芝 邵晓枫 许元富 彭晖 杨纯正 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2004年第20期1182-1184,共3页
关键词 功能抗体 免疫效应细胞 C 临床实验 肿瘤细胞 cd3 裸鼠 杀伤 数量 微型
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抗CD3/抗B细胞肿瘤的双功能小抗体的抗肿瘤活性研究
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作者 许元富 熊冬生 +7 位作者 杨纯正 邵晓枫 彭晖 范冬梅 刘汉芝 赖增祖 高赢岱 朱祯平 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2003年第8期33-38,共6页
为评价已研制的抗CD3/抗B细胞肿瘤 (CD2 0 + )双功能小抗体的生物学活性 ,采用多种实验方法在体内外对其进行研究。结果表明 :该型双功能小抗体能同时与Ju rkat和Daudi细胞结合 ,并交联两种细胞形成玫瑰花环。它与Jurkat(CD3+ )和Daudi... 为评价已研制的抗CD3/抗B细胞肿瘤 (CD2 0 + )双功能小抗体的生物学活性 ,采用多种实验方法在体内外对其进行研究。结果表明 :该型双功能小抗体能同时与Ju rkat和Daudi细胞结合 ,并交联两种细胞形成玫瑰花环。它与Jurkat(CD3+ )和Daudi细胞 (CD2 0 + )的结合的亲和常数Ka分别为 3.2× 10 8M- 1和 8.9× 10 8M- 1。在体外该抗体能激活并介导T细胞杀伤Daudi细胞。裸鼠体内分布实验结果表明 :该型抗体可在移植瘤部位富集 ;在人B淋巴瘤裸鼠移植瘤腹腔模型中 ,联合人的PBMC和IL 2 ,该抗体可以杀灭人B淋巴瘤细胞 ,明显延长荷瘤裸鼠的生存时间。 展开更多
关键词 cd3/抗B细胞肿瘤 功能抗体 肿瘤活性 玫瑰花环 亲和常数 JURKAT细胞 DAUDI细胞 B淋巴瘤
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抗人喉癌/抗CD_3双功能抗体的制备及对Hep-2细胞株的杀伤作用
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作者 冯青杰 闫世军 +1 位作者 孙立群 吴东辉 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期359-360,共2页
目的 :研究制备抗人喉癌 抗CD3 双功能抗体 ,探讨喉癌主动免疫治疗。方法 :以化学方法将人喉癌及抗CD3单克隆抗体交联为双功能抗体 ,进行介导对肿瘤细胞的杀伤作用。结果 :该双功能抗体介导效应细胞对靶细胞的杀伤率高于抗CD3 的介导作... 目的 :研究制备抗人喉癌 抗CD3 双功能抗体 ,探讨喉癌主动免疫治疗。方法 :以化学方法将人喉癌及抗CD3单克隆抗体交联为双功能抗体 ,进行介导对肿瘤细胞的杀伤作用。结果 :该双功能抗体介导效应细胞对靶细胞的杀伤率高于抗CD3 的介导作用 ,并随着效靶比的提高而升高。结论 :采用化学交联法制备的抗人喉癌 CD3 双功能抗体具有潜在的临床应用价值。 展开更多
关键词 喉癌 cd3 功能抗体 制备 HEP-2细胞株 杀伤作用
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肝癌细胞凋亡-抗HBx/抗CD3双功能抗体介导细胞毒性T细胞对靶细胞的杀伤
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作者 廖勇 汤钊猷 +4 位作者 刘康达 叶胜龙 陈洁 薛群 孙瑞霞 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1995年第4期261-262,共2页
研究发现,针对效应细胞毒性T淋巴细胞[CTL]表面受体[TCB/CD3复合物]与肿瘤相关抗原的双功能抗体能有效地介导CTL对靶肿瘤细胞的杀伤。为此,我们通过细胞融合法经流式细胞仪[FACS]无菌分选建立了抗HBx/抗CD3二次杂交瘤,应用该二次... 研究发现,针对效应细胞毒性T淋巴细胞[CTL]表面受体[TCB/CD3复合物]与肿瘤相关抗原的双功能抗体能有效地介导CTL对靶肿瘤细胞的杀伤。为此,我们通过细胞融合法经流式细胞仪[FACS]无菌分选建立了抗HBx/抗CD3二次杂交瘤,应用该二次杂交瘤所分泌的双特性单克隆抗体[BsAb]介导CTL在LTNM4裸鼠人肝癌模型进行了实验性治疗研究。 展开更多
关键词 cd3 功能抗体 C 介导 HB 肝癌细胞凋亡 细胞毒性T细胞 细胞融合 表面受体 靶细胞
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抗人卵巢癌COC183B2/抗CD3单链双特异抗体的构建和表达 被引量:2
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作者 赖娟 李小平 +3 位作者 冯捷 程洪艳 姚煜 叶雪 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期358-361,共4页
目的 :构建和表达一种可与卵巢癌细胞和淋巴细胞结合的双特异抗体。方法 :利用PCR分别扩增抗人CD3单链抗体 (singlechainvariablefragment,ScFv)重链可变区 (variableregionoftheheavychain ,VH)和轻链可变区 (variableregionofthelight... 目的 :构建和表达一种可与卵巢癌细胞和淋巴细胞结合的双特异抗体。方法 :利用PCR分别扩增抗人CD3单链抗体 (singlechainvariablefragment,ScFv)重链可变区 (variableregionoftheheavychain ,VH)和轻链可变区 (variableregionofthelightchain ,VL) ,重组抗人CD3ScFv ,经测序后将其克隆入有链间连接肽基因序列的载体pALM中 ,再将抗人卵巢癌COC183B2ScFv克隆至紧邻链间连接肽前形成COC183B2 /抗CD3单链双特异抗体(single-chainbispecificantibody ,scBsAb)的重组。最后将COC183B2 /抗CD3scBsAb克隆入表达载体 pTMFC中进行表达 ,同时分别表达抗人卵巢癌单抗COC183B2和抗人CD3单抗的ScFv作为对照组。用ELISA、流式细胞学方法和玫瑰花环实验对scBsAb进行免疫学活性测定。结果 :成功构建抗人卵巢癌COC183B2 /抗CD3scBsAb ;其表达的蛋白链相对分子质量约 6 0 ;ELISA结果显示scBsAb可与抗原OC183B2结合 ,流式细胞学结果显示scBsAb可与抗原CD3结合 ,花环实验显示scBsAb在体外可引导效应细胞聚集在靶细胞周围。结论 :构建和表达抗人卵巢癌COC183B2 /抗CD3scBsAb成功 ,且具有与抗原OC183B2。 展开更多
关键词 卵巢癌 COC183B2 特异抗体 淋巴细胞 cd3单链抗体 PCR
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抗抗CD3 ScFv单克隆抗体的制备和活性检测
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作者 邵晓枫 高灜岱 +5 位作者 刘娟妮 王金宏 许元富 范冬梅 杨纯正 熊冬生 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期354-359,共6页
目的制备抗抗CD3ScFv单克隆抗体,用以抗CD3抗体的亲和层析纯化及血清中该类抗体浓度的检测。方法采用常规免疫学方法制备抗抗CD3ScFv单克隆体并制备抗抗CD3ScFv单克隆抗体免疫亲和层析柱,用于抗CD3ScFv蛋白和去除E-tag的Diabody[CD3... 目的制备抗抗CD3ScFv单克隆抗体,用以抗CD3抗体的亲和层析纯化及血清中该类抗体浓度的检测。方法采用常规免疫学方法制备抗抗CD3ScFv单克隆体并制备抗抗CD3ScFv单克隆抗体免疫亲和层析柱,用于抗CD3ScFv蛋白和去除E-tag的Diabody[CD3×Pgp]的分离纯化。采用FACS法测定分别经抗抗CD3ScFV抗体免疫亲和层析柱及抗E-tag亲和层析柱纯化的抗CD3ScFv蛋白和Diabody[CD3×Pgp]对K562/A02和Jurkat细胞特异结合活性。采用间接ELISA法进行抗抗CD3ScFv抗体特异性结合活性的检测。结果抗抗CD3ScFV单克隆抗体能特异性地与抗CD3ScFv蛋白结合而不与血清发生反应。经抗抗CD3ScFV抗体免疫亲和层析柱和经抗E-tag亲和层析柱纯化后的抗CD3ScFv蛋白均能与Jurkat细胞特异结合。经抗抗CD3ScFV抗体免疫亲和层析柱纯化的去除E-tag的Diabody[CD3×Pgp]与K562/A02和Jurkat细胞结合的阳性率分别为89.87%和83.95%;与其亲代抗体竞争结合K562/A02和Jurkat细胞后,结合率分别下降为56.30%和43.78%。结论制备了抗抗CD3单克隆抗体和亲和层析柱,可用于抗CD3抗体的亲和层析纯化及血清中该类抗体浓度的检测。 展开更多
关键词 cd3ScFv蛋白 单克隆抗体 免疫亲和层析 Diabody[cd3×pgp]
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抗抗CD3 ScFv单克隆抗体的制备及鉴定 被引量:7
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作者 邵晓枫 熊冬生 +5 位作者 高灜岱 许元富 郭红星 刘芳 郭桂庆 杨纯正 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期142-145,共4页
目的:制备抗抗CD3 ScFv单克隆抗体并研究其生物活性。方法:分离纯化后的抗CD3 ScFv蛋白免疫BALB/c小鼠,采用传统杂交瘤技术制备抗抗CD3 ScFv单克隆抗体;采用ELISA和Western blot鉴定其亚类和抗原结合特异性;采用FACS测定抗抗CD3 ScFv单... 目的:制备抗抗CD3 ScFv单克隆抗体并研究其生物活性。方法:分离纯化后的抗CD3 ScFv蛋白免疫BALB/c小鼠,采用传统杂交瘤技术制备抗抗CD3 ScFv单克隆抗体;采用ELISA和Western blot鉴定其亚类和抗原结合特异性;采用FACS测定抗抗CD3 ScFv单克隆抗体对Jurkat细胞特异活性。结果:成功筛选出一株能稳定分泌抗抗CD3 ScFv单克隆抗体的杂交瘤细胞株(10B7),其分泌的抗体亚类为IgG1。该抗抗CD3 ScFv单克隆抗体直标后可特异性结合抗CD3 ScFv蛋白和抗CD3抗体。结论:文中所研制的抗抗CD3 ScFv单克隆抗体具有与抗CD3抗体、抗CD3 ScFv蛋白特异结合的活性,在肿瘤导向治疗中抗CD3/抗肿瘤双特异抗体的亲和层析纯化、药代动力学监测等方面具有广泛的应用前景。 展开更多
关键词 cd3 ScFv蛋白 单克隆抗体 杂交瘤 特异抗体
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1例OKT_3逆转肾移植术后急性排异反应的护理
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作者 李贵琴 《护理研究(上旬版)》 2006年第9期2348-2348,共1页
关键词 急性排异反应 肾移植术后 预防护理 OKT3 逆转 cd3单克隆抗体 功能丧失 长期生存率 移植肾功能 诊断治疗
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