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高亲和力抗Met人源基因工程抗体scFv的筛选与特性分析
被引量：
6
1
作者
朱进
王辛
+3 位作者
焦永军
冯振卿
曹伯良
管晓虹
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
2006年第6期417-422,共6页
目的应用噬菌体展示技术制备抗HGF受体Met特异性、高亲和力的全人抗体scFv片段。方法以从天然抗体库中筛选出的Fab基因可变区VH和VL为模板,分别在CDR区引入有限突变和随机突变,扩增出scFv基因库,克隆于pComb3XSS中,构建scFv次级突变抗体...
目的应用噬菌体展示技术制备抗HGF受体Met特异性、高亲和力的全人抗体scFv片段。方法以从天然抗体库中筛选出的Fab基因可变区VH和VL为模板,分别在CDR区引入有限突变和随机突变,扩增出scFv基因库,克隆于pComb3XSS中,构建scFv次级突变抗体库,筛选高亲和力克隆。结果经5轮细胞筛选和2轮抗原固相筛选,选取60个克隆进行ELISA检测,选择较高亲和力的噬菌体抗体,克隆于原核表达载体pBAD-gIII/A中,经诱导表达、SDS-PAGE和Westernblotting分析,在相对分子质量30000处出现预期大小的蛋白条带。单链抗体经表达、变性与复性和IMAC亲和纯化后,用于流式细胞术、免疫沉淀分析,结果表明,scFv能够与S114细胞表达Met的胞外区特异性结合,其亲和常数Kd值为4.76×10-8mol/L,与突变前抗体的亲和力(Kd值为5.24×10-6mol/L)相比,抗体的亲和力提高约100倍。竞争ELISA结果显示,亲和力成熟后抗体的抗原结合表位未变。结论经过CDR突变和抗体库筛选,有效提高了抗体的亲和力,该抗体有望成为临床肿瘤诊断或治疗的候选分子。
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关键词
噬菌体
抗体
库
抗met单链抗体
亲和力成熟
抗
肿瘤
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职称材料
题名
高亲和力抗Met人源基因工程抗体scFv的筛选与特性分析
被引量：
6
1
作者
朱进
王辛
焦永军
冯振卿
曹伯良
管晓虹
机构
南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室
南京军区军事医学研究所
出处
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
2006年第6期417-422,共6页
基金
江苏省卫生厅重大科技项目(No.wkj2004-2-12)
文摘
目的应用噬菌体展示技术制备抗HGF受体Met特异性、高亲和力的全人抗体scFv片段。方法以从天然抗体库中筛选出的Fab基因可变区VH和VL为模板,分别在CDR区引入有限突变和随机突变,扩增出scFv基因库,克隆于pComb3XSS中,构建scFv次级突变抗体库,筛选高亲和力克隆。结果经5轮细胞筛选和2轮抗原固相筛选,选取60个克隆进行ELISA检测,选择较高亲和力的噬菌体抗体,克隆于原核表达载体pBAD-gIII/A中,经诱导表达、SDS-PAGE和Westernblotting分析,在相对分子质量30000处出现预期大小的蛋白条带。单链抗体经表达、变性与复性和IMAC亲和纯化后,用于流式细胞术、免疫沉淀分析,结果表明,scFv能够与S114细胞表达Met的胞外区特异性结合,其亲和常数Kd值为4.76×10-8mol/L,与突变前抗体的亲和力(Kd值为5.24×10-6mol/L)相比,抗体的亲和力提高约100倍。竞争ELISA结果显示,亲和力成熟后抗体的抗原结合表位未变。结论经过CDR突变和抗体库筛选,有效提高了抗体的亲和力,该抗体有望成为临床肿瘤诊断或治疗的候选分子。
关键词
噬菌体
抗体
库
抗met单链抗体
亲和力成熟
抗
肿瘤
Keywords
phage-displayed antibody library
anti-
met
scFv fragment
affinity maturation
anti-tumor
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
高亲和力抗Met人源基因工程抗体scFv的筛选与特性分析
朱进
王辛
焦永军
冯振卿
曹伯良
管晓虹
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
2006
6
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