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抗LPS mAb Fab片段cDNA的克隆及其在CHO细胞中的表达
被引量：
1
1
作者
马越云
马文煜
+3 位作者
于文彬
尹文
苏明权
丁振若
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第3期280-283,共4页
目的构建抗LPS单克隆抗体Fab段的真核表达载体,并在CHO细胞中表达。方法以逆转录PCR方法扩增抗LPSmAb重链Fd和轻链cDNA,分别克隆入载体pGEM-Teasy。经测序分析后,再分别亚克隆入载体pcDNA3,构建成重组载体pcDNA3-Fd和pcDNA3-LC,并以PCR...
目的构建抗LPS单克隆抗体Fab段的真核表达载体,并在CHO细胞中表达。方法以逆转录PCR方法扩增抗LPSmAb重链Fd和轻链cDNA,分别克隆入载体pGEM-Teasy。经测序分析后,再分别亚克隆入载体pcDNA3,构建成重组载体pcDNA3-Fd和pcDNA3-LC,并以PCR方法扩增pcD-NA3-LC中包括CMV启动子、轻链序列和BGHPoly(A)在内的轻链表达序列。经适当的限制性内切酶酶切后,插入到质粒pcDNA3-Fd中Fd表达序列的前部,构建成表达载体pcD-NA3-Fab,以脂质体包裹转染CHO细胞。经G418筛选,用ELISA、免疫荧光和Westernblot鉴定阳性克隆。结果用ELISA和免疫荧光法,筛选出4株高表达Fab的细胞株。Westernblot显示,表达产物的Mr为50000。同时,ELISA结果显示,该Fab具有良好的结合LPS的活性。结论成功地在CHO细胞中表达抗LPSmAb的Fab段,为进一步鉴定其抗LPS的作用,使之成为诊断和治疗革兰氏阴性细菌感染的工具奠定了基础。
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关键词
抗lps单克隆抗体
FAB段
CDNA
克隆
CHO细胞
表达
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职称材料
题名
抗LPS mAb Fab片段cDNA的克隆及其在CHO细胞中的表达
被引量：
1
1
作者
马越云
马文煜
于文彬
尹文
苏明权
丁振若
机构
第四军医大学西京医院临床分子生物学研究室
第四军医大学微生物学教研室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第3期280-283,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目
No.39800154
文摘
目的构建抗LPS单克隆抗体Fab段的真核表达载体,并在CHO细胞中表达。方法以逆转录PCR方法扩增抗LPSmAb重链Fd和轻链cDNA,分别克隆入载体pGEM-Teasy。经测序分析后,再分别亚克隆入载体pcDNA3,构建成重组载体pcDNA3-Fd和pcDNA3-LC,并以PCR方法扩增pcD-NA3-LC中包括CMV启动子、轻链序列和BGHPoly(A)在内的轻链表达序列。经适当的限制性内切酶酶切后,插入到质粒pcDNA3-Fd中Fd表达序列的前部,构建成表达载体pcD-NA3-Fab,以脂质体包裹转染CHO细胞。经G418筛选,用ELISA、免疫荧光和Westernblot鉴定阳性克隆。结果用ELISA和免疫荧光法,筛选出4株高表达Fab的细胞株。Westernblot显示,表达产物的Mr为50000。同时,ELISA结果显示,该Fab具有良好的结合LPS的活性。结论成功地在CHO细胞中表达抗LPSmAb的Fab段,为进一步鉴定其抗LPS的作用,使之成为诊断和治疗革兰氏阴性细菌感染的工具奠定了基础。
关键词
抗lps单克隆抗体
FAB段
CDNA
克隆
CHO细胞
表达
Keywords
Fab
lps
cloning
expression
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
抗LPS mAb Fab片段cDNA的克隆及其在CHO细胞中的表达
马越云
马文煜
于文彬
尹文
苏明权
丁振若
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2001
1
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