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抗重组人白细胞介素18单克隆抗体的制备与特性研究 被引量:5
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作者 马颖 邹全明 +2 位作者 朱永红 罗萍 毛旭虎 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期412-414,417,共4页
目的 :获得有生物活性的小鼠抗重组人白细胞介素 18(rhIL 18)单克隆抗体。方法 :采用重组hIL 18免疫BALB C小鼠 ,应用杂交瘤技术 ,ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株并经多次克隆化。结果 :建立了 2株小鼠抗hIL 18单克隆抗体杂交瘤细胞 1C7和... 目的 :获得有生物活性的小鼠抗重组人白细胞介素 18(rhIL 18)单克隆抗体。方法 :采用重组hIL 18免疫BALB C小鼠 ,应用杂交瘤技术 ,ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株并经多次克隆化。结果 :建立了 2株小鼠抗hIL 18单克隆抗体杂交瘤细胞 1C7和 1F5 ,染色体数目分别为 92条和 90条 ,所分泌的抗体分别为IgG2a和IgG1,轻链均为κ型 ,腹水IgG抗体经亲和层析法纯化后纯度达 95 %以上 ,效价为 1× 10 - 4和 1× 10 - 5,Westernblot显示 2株单抗均能特异性识别 18 3kD处的rhIL 18蛋白。 1C7单抗的亲和常数Ka=1 7× 10 5,1F5的亲和常数Ka=1 3× 10 5。 2株单抗识别不同抗原表位。结论 :制备的 2株单抗为进一步研究IL 18的分子结构、生物学功能及其与免疫相关性疾病的关系提供了实验材料。 展开更多
关键词 抗重组人白细胞介素18 单克隆 制备 特性 杂交瘤
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重组鼠白细胞介素18在肝癌小鼠体内的抗肿瘤作用 被引量:1
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作者 方艳秋 米旭光 +3 位作者 李首庆 魏海峰 许淑芬 谭岩 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期550-554,共5页
目的:探讨不同剂量和输注方式的重组鼠白细胞介素18(rmIL-18)对肝癌小鼠生存时间和肿瘤生长的影响,阐明rmIL-18在体内抗肿瘤的合理应用方式。方法:60只Babl/C小鼠皮下接种小鼠肝癌H22细胞(1×10~6个),随机分为5μg rmIL-18腹腔内注... 目的:探讨不同剂量和输注方式的重组鼠白细胞介素18(rmIL-18)对肝癌小鼠生存时间和肿瘤生长的影响,阐明rmIL-18在体内抗肿瘤的合理应用方式。方法:60只Babl/C小鼠皮下接种小鼠肝癌H22细胞(1×10~6个),随机分为5μg rmIL-18腹腔内注射治疗组、0.5μg rmIL-18腹腔内注射治疗组、0.5μg rmIL-18肿瘤内注射治疗组、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)腹腔内注射治疗组、CTL肿瘤内注射治疗组和生理盐水腹腔注射对照组,每组10只。从接种肿瘤细胞的第10天起,各rmIL-18组小鼠每隔1d进行对应剂量和方式的注射治疗,CTL组小鼠分别腹腔和肿瘤内注射肿瘤特异性CTL(1×10~6/只),生理盐水腹腔注射对照组小鼠腹腔内注射注射等体积(100μL)生理盐水,共计10次。每周测量小鼠肿瘤直径,并记录生存时间。结果:与0.5μg、5μg rmIL-18腹腔内注射治疗组和生理盐水腹腔注射对照组比较,0.5μg rmIL-18肿瘤内注射治疗组小鼠肿瘤生长速度减慢(P<0.01),小鼠生存时间延长(P<0.01);与0.5μg rmIL-18腹腔内注射治疗组比较,CTL腹腔内注射治疗组小鼠肿瘤生长速度降低(P<0.01),小鼠存活率升高(P<0.01);与0.5μg rmIL-18肿瘤内注射治疗组比较,CTL肿瘤内注射治疗组小鼠肿瘤生长速度降低(P<0.01),小鼠存活率升高(P<0.01)。结论:rmIL-18抗肿瘤作用的最好途径为瘤内注射,并存在剂量依赖性。 展开更多
关键词 肝肿瘤 重组白细胞介素18 细胞毒性T淋巴细胞
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重组鸡干扰素/白细胞介素-2融合蛋白体内抗传染性法氏囊病病毒作用研究 被引量:8
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作者 程俊贞 闫若潜 +9 位作者 吴志明 赵明军 闫志玲 刘梅芬 赵雪丽 孔刚锐 陈慧娟 杨晓璐 张书阳 刘毅 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期140-145,共6页
为研究原核表达的鸡干扰素/白细胞介素-2融合蛋白(rChIFN--Linker-ChIL-2)在SPF鸡体内的抗病毒作用,本研究将传染性法氏囊病病毒(IBDV)强毒株与rChIFN--Linker-ChIL-2同时接种21日龄SPF鸡,并分别通过临床观察和攻毒后(dpc)不同时间IBDV... 为研究原核表达的鸡干扰素/白细胞介素-2融合蛋白(rChIFN--Linker-ChIL-2)在SPF鸡体内的抗病毒作用,本研究将传染性法氏囊病病毒(IBDV)强毒株与rChIFN--Linker-ChIL-2同时接种21日龄SPF鸡,并分别通过临床观察和攻毒后(dpc)不同时间IBDV排毒率、带毒时间、在不同组织器官的动态分布及其体液和细胞免疫指标的检测以评价该重组融合蛋白抗IBDV的效果。结果显示:与IBDV攻毒对照组相比,融合蛋白与IBDV同时接种组鸡的发病率、死亡率和典型症状维持时间及排毒率、外周血持续带毒时间和不同组织器官带毒时间均显著低于对照组。但试验组鸡的IBDV抗体水平于7 dpc^42 dpc则极显著低于对照组(p<0.01)。然而,其血清中ChIFN-α、ChIFN-γ、ChIL-2、ChIL-6和ChIL-4表达水平(3 dpc^21 dpc)以及外周血T淋巴细胞(PBLC)增殖活性(7 dpc^21 dpc)、脾淋巴细胞增殖活性(7 dpc^14 dpc)均显著高于对照组(p<0.01)。结果表明:融合蛋白可以通过上调机体细胞因子的表达水平、增强鸡体PBLC和脾淋巴细胞增殖活性等方式增强机体的细胞免疫能力,从而发挥抗病毒作用和免疫增强作用。 展开更多
关键词 重组鸡干扰素 白细胞介素 2融合蛋白 传染性法氏囊病病毒 病毒 免疫增强 作用
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白细胞介素18重组腺病毒对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响 被引量:6
4
作者 姚航平 张立煌 +1 位作者 冷建杭 曹雪涛 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2001年第6期248-251,共4页
目的 :研究白细胞介素 1 8重组腺病毒 ( Adms IL -1 8)对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响 ,并对其机理作一探讨。方法 :重组腺病毒腹腔注射 BAL B/ C小鼠 ,每周注射 1次 ,共 2次。 2周后制备腹腔巨噬细胞 ,经 L PS刺激 ,采用 EL ISA法... 目的 :研究白细胞介素 1 8重组腺病毒 ( Adms IL -1 8)对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响 ,并对其机理作一探讨。方法 :重组腺病毒腹腔注射 BAL B/ C小鼠 ,每周注射 1次 ,共 2次。 2周后制备腹腔巨噬细胞 ,经 L PS刺激 ,采用 EL ISA法检测培养上清 m IL-1 8、m IL-1 β、m TNFα的水平 ;酶还原法检测 NO的含量 ;L DH释放法检测巨噬细胞的杀伤活性。结果 :Adms IL -1 8注射后 ,小鼠腹腔巨噬细胞高效表达 m IL-1 8,同时巨噬细胞分泌 m IL-1 β、m TNFα、NO水平明显增加 ,并增强巨噬细胞的杀伤活性 ,与其它对照组比较均 P<0 .0 1。结论 :小鼠腹腔注射 Adms IL-1 8,能显著增加巨噬细胞表达 m IL -1 8、m IL -1β、m TNFα、NO,增强巨噬细胞的杀伤活性。 展开更多
关键词 白细胞介素18 巨噬细胞 重组腺病毒科 细胞毒作用 细胞因子 小鼠
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鸡α干扰素/白细胞介素18基因的融合表达及抗病毒活性研究 被引量:6
5
作者 何静 张盼盼 +6 位作者 孙敏华 康银峰 谢鹏 向斌 韩翡 谭阳通 任涛 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期18-22,共5页
【目的】构建原核表达载体p ET28a-r Ch IFN-α-Ch IL-18、大肠埃希菌Escherichia coli表达及产物纯化与活性检测,研究高效广谱鸡基因工程重组复合抗病毒制剂,以对鸡的病毒性疾病进行防治.【方法】采用融合PCR(Fusion PCR)方法,利用具... 【目的】构建原核表达载体p ET28a-r Ch IFN-α-Ch IL-18、大肠埃希菌Escherichia coli表达及产物纯化与活性检测,研究高效广谱鸡基因工程重组复合抗病毒制剂,以对鸡的病毒性疾病进行防治.【方法】采用融合PCR(Fusion PCR)方法,利用具有互补末端的引物,形成具有重叠链的PCR产物,通过PCR产物重叠链的延伸将鸡α干扰素(Chicken interferon alpha,Ch IFN-α)与鸡白细胞介素18(Chicken interleukin-18,Ch IL-18)基因构建Ch IFN-α-Ch IL-18融合基因并克隆入p ET-28a原核表达载体中进行原核表达.通过镍柱亲和层析法纯化可溶性蛋白,并进行SDSPAGE分析、Western-blot鉴定.采用细胞病变抑制法检测r Ch IFN-α-Ch IL-18蛋白在细胞上抑制水泡性口炎病毒(VSV)及新城疫病毒(NDV)增殖活性.【结果和结论】成功构建并克隆了p ET28a-r Ch IFN-α-Ch IL-18融合基因.融合基因在大肠埃希菌中表达的r Ch IFN-α-Ch IL-18蛋白相对分子质量约为38 000,蛋白经纯化后纯度在90%以上.r Ch IFN-α-Ch IL-18蛋白在鸡胚成纤维(CEF)细胞上具有明显抗病毒活性,其抗VSV和NDV的活性明显高于单一r Ch IFN-α、r Ch IL-18蛋白的抗病毒活性. 展开更多
关键词 鸡α干扰素 白细胞介素18 融合PCR 病毒活性
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白细胞介素-18在急性移植物抗宿主病发病机制中的作用 被引量:5
6
作者 居小萍 王健民 +3 位作者 侯军 冯曹波 童书鹏 章卫平 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2002年第5期452-454,共3页
为了研究异基因外周血造血干细胞 (allo PBSCT)移植期细胞因子白细胞介素 1 8(IL 1 8)与急性移植物抗宿主病 (aGVHD)的关系 ,以探讨IL 1 8在aGVHD发病中的作用 ,对 2 6例恶性血液病患者进行了allo PBSCT ,并采用双夹心酶联免疫吸附法 (E... 为了研究异基因外周血造血干细胞 (allo PBSCT)移植期细胞因子白细胞介素 1 8(IL 1 8)与急性移植物抗宿主病 (aGVHD)的关系 ,以探讨IL 1 8在aGVHD发病中的作用 ,对 2 6例恶性血液病患者进行了allo PBSCT ,并采用双夹心酶联免疫吸附法 (ELISA)检测移植前及移植后aGVHD发生时患者外周血单个核细胞分泌的IL 1 8浓度。结果表明 :移植患者中 1 0例发生Ⅰ度GVHD和 5例发生Ⅲ -Ⅳ度GVHD ,发生aGVHD患者分泌的IL 1 8浓度显著高于未发生aGVHD患者 ,并且IL 1 8浓度与aGVHD的严重程度成正相关 ,与感染的发生无关。结论 :IL 1 展开更多
关键词 异基因外周血干细胞移植 急性移植物宿主病 白细胞介素18 白血病 发病机制
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含有重组人白细胞介素18基因的工程菌的产物表达和鉴定 被引量:1
7
作者 董宇清 李荣贵 +2 位作者 董春霞 赵进东 吴光耀 《北京大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期271-274,共4页
The cDNA of human Interleukin\|18 was obtained by RT\|PCR from the mRNA of human peripheral blood cells.The DNA sequencing was performed and the DNA was cloned into expression vector pBV220.The overexpression was perf... The cDNA of human Interleukin\|18 was obtained by RT\|PCR from the mRNA of human peripheral blood cells.The DNA sequencing was performed and the DNA was cloned into expression vector pBV220.The overexpression was performed in E.coli HB101.The expressive product was purified through Sephadex G100 and identified by N\|terminal amino acid sequencing and Western blot. 展开更多
关键词 人白细胞介素18 工程菌 表达产物鉴定 基因重组
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白细胞介素18及其抗肿瘤作用研究现状 被引量:1
8
作者 解丽华 迟宝荣 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期696-699,共4页
白细胞介素 1 8( IL- 1 8)是近年发现的重要的免疫调节因子 ,具有诱生 IFN- γ、增强 NK和CTL细胞活性、促进 T细胞增殖活化、增强 Fas介导的细胞毒作用等多种生物学功能 ,是一种应用前景较好的抗肿瘤细胞因子。本文作者主要对其分子特... 白细胞介素 1 8( IL- 1 8)是近年发现的重要的免疫调节因子 ,具有诱生 IFN- γ、增强 NK和CTL细胞活性、促进 T细胞增殖活化、增强 Fas介导的细胞毒作用等多种生物学功能 ,是一种应用前景较好的抗肿瘤细胞因子。本文作者主要对其分子特征、信号传导。 展开更多
关键词 白细胞介素18 治疗应用 肿瘤 药物疗法 肿瘤药 综述文献
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重组白细胞介素—2的抗病毒机制及在兽医中的应用 被引量:5
9
作者 宋晓华 金红 +1 位作者 李媛 于康震 《预防兽医学进展》 2001年第3期1-5,共5页
白细胞介素-2(IL-2)是一种T细胞生长因子,具有许多生物活性,例如诱导细胞毒性T细胞,激活自然杀伤细胞,诱生LAK(淋巴因子激活的杀伤细胞),提高IFN-γ产量[1],激活B细胞而参与机体的体液免疫.IL-2是由辅助型T细胞(helper T cell)Th1细胞... 白细胞介素-2(IL-2)是一种T细胞生长因子,具有许多生物活性,例如诱导细胞毒性T细胞,激活自然杀伤细胞,诱生LAK(淋巴因子激活的杀伤细胞),提高IFN-γ产量[1],激活B细胞而参与机体的体液免疫.IL-2是由辅助型T细胞(helper T cell)Th1细胞分泌的,通过激活包括T细胞,NK细胞和LAK细胞的受体而介导细胞毒性反应,从而提高细胞毒性防御[2]. 展开更多
关键词 重组白细胞介素-2 病毒机制 兽医 免疫增强剂 应用 免疫治疗剂 基因工程疫苗
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重组人白细胞介素4(rhIL-4)抗肿瘤活性研究
10
作者 付东 王玉芝 +2 位作者 刘秀英 王勇波 马清钧 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1998年第2期132-133,共2页
IL-4是由Th2淋巴细胞和肥大细胞分泌的一种糖蛋白,最初被证明具有激活B细胞的功能,进一步发现IL-4还可以调节T、B淋巴细胞、肥大细胞、内皮细胞增殖和分化。近年来有文献报道IL-4可以抑制小鼠的恶性肿瘤的生长,IL-4对人的肿瘤细胞系也... IL-4是由Th2淋巴细胞和肥大细胞分泌的一种糖蛋白,最初被证明具有激活B细胞的功能,进一步发现IL-4还可以调节T、B淋巴细胞、肥大细胞、内皮细胞增殖和分化。近年来有文献报道IL-4可以抑制小鼠的恶性肿瘤的生长,IL-4对人的肿瘤细胞系也具有增殖抑制作用。本实验采用了六种人的肿瘤细胞系,观察重组人IL-4对其生长抑制作用,及裸鼠的整体抗肿瘤研究,探讨rhIL-4的抗肿瘤的应用前景。 1 材料与方法 1.1 rhIL-4来源 rhIL-4的工程菌由北京医科大学构建。中试纯化的rhIL-4由军事医学科学院生物工程研究所制备。 1.2 肿瘤细胞系及培养条件 人肺巨细胞肺癌(PLA801C)、人非小细胞肺癌(GLC-82)、人B细胞淋巴瘤(Daudi)、人单核细胞淋巴瘤(U937)、人T细胞淋巴瘤(Hut78)、人T细胞白血病(CEM)。 展开更多
关键词 白细胞介素 肿瘤活性 重组
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非融合型重组人白细胞介素-18的纯化及鉴定
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作者 朱永红 邹全明 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第16期1424-1427,共4页
目的 获得高纯度的重组人白细胞介素 18(rhIL 18)。方法 采用溶菌酶加超声破菌的方法抽提包涵体 ,以8mol/L尿素溶解包涵体 ,变性条件下以阴离子柱层析进行首步纯化 ,复性后再进行凝胶过滤层析。对纯化的样品进行了SDS PAGE、HPLC、N... 目的 获得高纯度的重组人白细胞介素 18(rhIL 18)。方法 采用溶菌酶加超声破菌的方法抽提包涵体 ,以8mol/L尿素溶解包涵体 ,变性条件下以阴离子柱层析进行首步纯化 ,复性后再进行凝胶过滤层析。对纯化的样品进行了SDS PAGE、HPLC、N端氨基酸序列、免疫印迹及生物学活性分析。结果 rhIL 18在大肠杆菌中以不溶性包涵体形式存在 ,所提取的包涵体中重组蛋白纯度可达到 80 %以上 ,包涵体经二步柱层析纯化后 ,HPLC分析纯度达 98%以上 ,SDS PAGE测定其分子质量约 19× 10 3 ,N端 15个氨基酸序列与预期一致 ,生物学活性分析证实纯化的rhIL 18具有诱导人外周血单个核细胞 (PBMC)产生IFN γ的能力。结论 所建立的纯化rhIL 18的方法简便有效 ,为开展rhIL 18的结构活性关系研究及其大规模纯化打下了良好的基础。 展开更多
关键词 非融合型重组人白细胞介素-18 纯化 鉴定 溶菌酶 超声破菌 包涵体
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人工分子伴侣辅助鸡白细胞介素18重组蛋白的复性 被引量:1
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作者 王新华 胡敬东 +2 位作者 孔娜 李宏梅 赵宏坤 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期344-347,共4页
目的:研究表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)和β-环糊精(β-CD)组成的人工分子伴侣系统辅助鸡IL-18重组蛋白的复性,以提高鸡IL-18重组蛋白复性率,获得更多具有良好活性的蛋白。方法:将重组原核表达质粒pGEX-mChIL-18转化宿主细胞... 目的:研究表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)和β-环糊精(β-CD)组成的人工分子伴侣系统辅助鸡IL-18重组蛋白的复性,以提高鸡IL-18重组蛋白复性率,获得更多具有良好活性的蛋白。方法:将重组原核表达质粒pGEX-mChIL-18转化宿主细胞大肠杆菌BL21(DE3),并用IPTG于37℃诱导培养获得表达。表达产物主要以包涵体的形式存在。包涵体经超声波破碎、洗涤后以6mol/L的盐酸胍溶解,使蛋白彻底变性,然后利用人工分子伴侣系统辅助蛋白复性。复性产物经透析纯化后,利用淋巴细胞增殖试验来检测其活性。结果:经SDS-PAGE分析表明,表达产物是与ChIL-18重组蛋白相符的Mr约44000的蛋白条带。利用人工分子伴侣系统辅助复性,鸡IL-18重组蛋白获得了42·54%复性率。鸡淋巴细胞增殖试验表明,表达产物对鸡淋巴细胞具有明显诱导增殖作用。结论:人工分子伴侣系统能够较好地辅助鸡IL-18重组蛋白复性,获得较高的复性率。其产物具有良好的生物学活性,为下一步鸡IL-18重组蛋白的应用研究奠定了试验基础。 展开更多
关键词 人工分子伴侣系统 白细胞介素18重组蛋白 Β-环糊精 复性 表面活性剂
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猪白细胞介素-2和融合抗菌肽重组酵母菌构建及其对小鼠免疫和生长的协同效应
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作者 胡冰 吴雪颖 +7 位作者 马常俊 万小平 肖永乐 陈建林 李江淩 吕学斌 王泽洲 高荣 《四川动物》 北大核心 2018年第6期609-619,共11页
为了开发经济实用的新型免疫调节剂,以2A自剪切技术构建重组毕赤酵母Pichiapastoris共同表达猪白细胞介素-2(IL-2)和融合抗菌肽基因,然后以重组基因工程酵母菌饲喂ICR小鼠,以实时荧光定量PCR、ELISA和流式细胞计数评估其对小鼠免疫力和... 为了开发经济实用的新型免疫调节剂,以2A自剪切技术构建重组毕赤酵母Pichiapastoris共同表达猪白细胞介素-2(IL-2)和融合抗菌肽基因,然后以重组基因工程酵母菌饲喂ICR小鼠,以实时荧光定量PCR、ELISA和流式细胞计数评估其对小鼠免疫力和生长的影响。实验结果显示,处理组(融合抗菌肽重组酵母菌、IL-2和融合抗菌肽重组酵母菌)小鼠的生长明显优于对照组(空质粒酵母菌)(P <0. 05),且血清Ig G、Ig G1和Ig G2a含量显著升高(P <0. 05); TLR1、TLR4、TLR6、TLR9、IL-7、IL-15、IL-23、CD62L、IL-2、IL-4、IL-6、IL-12、CRP4和CAMP基因的表达水平显著增加(P <0. 05)。同时,处理组小鼠血液白细胞Th和Tc细胞明显增多(P <0. 05),免疫力和存活率均明显高于对照组(P <0. 05)。重组酵母菌能有效增强小鼠的先天和获得性免疫力,促进生长,可进一步开发成安全有效的免疫调节生物制剂,改善动物的生长和免疫力。 展开更多
关键词 白细胞介素-2 融合菌肽 重组毕赤酵母 小鼠 免疫
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人白细胞介素18(hIL-18)的纯化及生物学活性的鉴定 被引量:3
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作者 杨广民 方艳秋 +1 位作者 谭岩 刘力华 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期850-854,共5页
目的 :在大肠杆菌中高效表达重组人IL 18(rhIL 18)蛋白 ,制备具有高纯度、高活性的rhIL 18。方法 :用IPTG诱导重组蛋白表达载体pKK2 2 3 3 hIL 18进行蛋白表达 ;菌体经超声破碎分离包含体 ,并对包含体进行洗涤、变性和复性处理 ,用DEAE ... 目的 :在大肠杆菌中高效表达重组人IL 18(rhIL 18)蛋白 ,制备具有高纯度、高活性的rhIL 18。方法 :用IPTG诱导重组蛋白表达载体pKK2 2 3 3 hIL 18进行蛋白表达 ;菌体经超声破碎分离包含体 ,并对包含体进行洗涤、变性和复性处理 ,用DEAE SepharoseCL 6B阴离子交换柱纯化复性的rhIL 18;以人外周血单核淋巴细胞 ,通过T细胞增殖实验、1 2 5I UdR标记的细胞毒实验、ELISA方法检测细胞因子的产生量等方法 ,测定rhIL 18的生物学活性。结果 :在大肠杆菌中成功地诱导、表达了rhIL 18,SDS PAGE凝胶电泳分离显示在分子量大约 18 3kD处有一诱导蛋白带 ,Westernblot证明表达产物与抗IL 18单克隆抗体有特异性免疫反应 ;表达产物经纯化后纯度达 94 % ;表达的rhIL 18蛋白具有促进T细胞增殖、增强NK细胞细胞毒作用及诱导外周血单核淋巴细胞合成IFN γ的能力 ,基本上具有天然IL 18相同的生物学活性。结论 :为rhIL 18的获得及为进一步研究其生物学功能提供了一定的条件 ,并为将rhIL 18用于肿瘤的免疫生物治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 重组人白细胞介素18 凝胶过滤 T细胞 NK细胞 细胞因子
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白细胞介素-18基因修饰的胎肝细胞经脾移植对小鼠免疫功能的影响 被引量:2
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作者 姚航平 张立煌 +1 位作者 孙文佶 冷建杭 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2002年第2期115-120,共6页
目的 :观察表达 m IL- 18的重组腺病毒基因修饰的胎肝细胞 (Adm IL- 18/ BNL.CL2 )经脾移植对正常小鼠免疫功能的影响。方法 :实验组小鼠经脾移植 Adm IL- 18/ BNL.CL2 ,同时设 Lac Z病毒对照组 (Ad- Lac Z/ BNL.CL2 ) ,BNL.CL2 细胞对... 目的 :观察表达 m IL- 18的重组腺病毒基因修饰的胎肝细胞 (Adm IL- 18/ BNL.CL2 )经脾移植对正常小鼠免疫功能的影响。方法 :实验组小鼠经脾移植 Adm IL- 18/ BNL.CL2 ,同时设 Lac Z病毒对照组 (Ad- Lac Z/ BNL.CL2 ) ,BNL.CL2 细胞对照组及空白对照组。2周后处死 ,留取血清 ,制备腹腔巨噬细胞、脾淋巴细胞、肝组织匀浆液 ,提取肝组织总 RNA。采用 ELISA法检测各组小鼠血清、腹腔 Mφ和脾细胞培养上清、肝匀浆中细胞因子的含量 ;采用半定量 RT- PCR法 ,检测肝组织细胞因子 m RNA相对表达量 ;以 LDH释放法测定腹腔 Mφ杀伤活性和脾 NK细胞活性 ,用 MTT还原比色法测定脾淋巴细胞的增殖活性。结果 :实验组小鼠血清、细胞培养上清及肝匀浆中 ,IL- 18、IL - 2、IFN-γ、TNF-α含量均高于其它对照组 ,而 IL - 4、IL - 10水平则低于对照组 ;半定量 RT- PCR结果与EL ISA检测结果一致 ;同时 ,实验组腹腔 Mφ的杀伤活性和脾 NK细胞活性 ,及脾淋巴细胞增殖活性也明显高于对照组。结论 :Adm IL - 18能有效转染至胎肝细胞并稳定表达 m IL- 18;Adm IL - 18基因修饰的胎肝细胞经脾移植后 ,可显著提高肝脏、脾脏免疫细胞活性 ,活化腹腔 Mφ,促进 Th1类细胞因子表达 ,抑制 Th2类细胞因子的分泌。 展开更多
关键词 白细胞介素-18 基因转移 重组腺病毒载体 胎肝细胞 脾内移植 免疫功能 动物实验
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人白细胞介素-18在大肠杆菌中的高效表达 被引量:2
16
作者 朱永红 邹全明 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期184-186,共3页
目的 在大肠杆菌中实现人IL 18成熟蛋白 (mhIL 18)的高效表达。方法 采用RT PCR由人肝脏Kupffer细胞中扩增mhIL 18基因 ,构建非融合型原核表达质粒petTT mhIL 18,转化至大肠杆菌DH5α ,用IPTG诱导重组蛋白表达 ,超声裂解细胞提取包涵... 目的 在大肠杆菌中实现人IL 18成熟蛋白 (mhIL 18)的高效表达。方法 采用RT PCR由人肝脏Kupffer细胞中扩增mhIL 18基因 ,构建非融合型原核表达质粒petTT mhIL 18,转化至大肠杆菌DH5α ,用IPTG诱导重组蛋白表达 ,超声裂解细胞提取包涵体 ,采用SDS PAGE及Westernblot分析重组蛋白的表达 ,包涵体蛋白经 8mol L尿素溶解 ,透析复性 ,ELISA检测重组蛋白诱导人外周血单个核细胞 (PBMC)产生IFN γ的能力。结果 所扩增的mhIL 18基因与GenBank公布的序列一到。经IPTG诱导 ,mhIL 18在大肠杆菌中的表达量占菌体蛋白的 40 %以上 ,在细胞中以包涵体形式存在 ,复性的重组蛋白具有诱生IFN γ的能力。结论 mhIL 展开更多
关键词 白细胞介素-18 重组表达 包涵体
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人白细胞介素18和新城疫病毒HN基因嵌合表达载体的构建与表达
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作者 解丽华 金宁一 +4 位作者 邵国喜 米志强 连海 薛丽娟 李萍 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期352-354,共3页
目的:构建人白细胞介素18(IL - 18)与新城疫病毒(NDV) HN基因嵌合表达质粒。方法:选用适当的限制性核酸内切酶将NDV的HN基因连接至真核表达质粒p VAX1IL - 18中IL - 18基因的尾部,同时替换掉IL - 18基因的终止子,构建表达IL - 18HN嵌合... 目的:构建人白细胞介素18(IL - 18)与新城疫病毒(NDV) HN基因嵌合表达质粒。方法:选用适当的限制性核酸内切酶将NDV的HN基因连接至真核表达质粒p VAX1IL - 18中IL - 18基因的尾部,同时替换掉IL - 18基因的终止子,构建表达IL - 18HN嵌合基因的p VAX1IL - 18HN质粒,经酶切鉴定正确后,通过脂质体介导转染He L a细胞,应用Western blotting及血凝试验检测其表达情况。结果:酶切鉴定证实正确地构建了p VAX1IL - 18HN嵌合表达质粒,Western blotting和血凝试验检测结果表明,嵌合后的IL - 18和HN基因均能够表达,且表达的HN蛋白具有较高的血凝活性。结论:IL - 18和HN基因嵌合后不影响二者的表达,而且表达的HN蛋白具有血凝活性。 展开更多
关键词 新城疫病毒 重组 遗传 白细胞介素18 嵌合表达质粒 基因表达
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转染IL-18基因慢性粒细胞白血病树突状细胞的抗白血病作用
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作者 李杰 丁艳华 +2 位作者 邵明柏 王冠军 金宁一 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期1061-1065,共5页
目的:探讨转染IL-18基因慢性粒细胞白血病(CML)树突状细胞(DCs)的抗白血病免疫作用。方法:以脂质体介导法将pVAX1-IL-18真核表达质粒转染CML DCs,检测转染IL-18 DCs的IL-18表达,通过流式细胞仪检测转染IL-18 DCs的CD80+、CD86+细胞百分... 目的:探讨转染IL-18基因慢性粒细胞白血病(CML)树突状细胞(DCs)的抗白血病免疫作用。方法:以脂质体介导法将pVAX1-IL-18真核表达质粒转染CML DCs,检测转染IL-18 DCs的IL-18表达,通过流式细胞仪检测转染IL-18 DCs的CD80+、CD86+细胞百分率,并检测IL-18基因修饰DCs刺激T细胞增殖能力、特异性CTL杀伤作用及诱导的NK细胞的杀伤活性。结果:转染IL-18 DCs上清中IL-18的含量为(596±34.1)pg/2×106cells/48 h,而在转染空质粒DCs和DCs上清中未检测到IL-18,且转染IL-18 DCs的CD80+、CD86+细胞百分率高于转染空质粒的DCs(P<0.05)。转染IL-18的DCs刺激T细胞增殖能力、特异性CTL杀伤作用及诱导的NK细胞的杀伤活性明显高于转染空质粒的DCs(P<0.05),且随着S/R或R/T增加,其多种免疫反应逐渐增强。结论:IL-18与DCs抗肿瘤作用具有协同性。 展开更多
关键词 白血病 髓样 慢性 树突细胞 白细胞介素18 白血病作用
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共表达H5、H7亚型AIV HA基因与鸡IL-18基因的重组鸡痘病毒构建 被引量:2
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作者 王振国 金宁一 +4 位作者 马鸣潇 费东亮 贾雷立 金扩世 尹革芬 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期408-413,共6页
以鸡痘病毒(FPV)疫苗株为载体,将H5和H7亚型禽流感病毒血凝素(AIV HA)基因串联后(拥有同一个阅读框)和鸡白细胞介素-18(IL-18)基因分别插入到鸡痘病毒表达载体pUTA-16-LacZ复合启动子(ATI-P7.5×20)和单一启动子1(P7.5... 以鸡痘病毒(FPV)疫苗株为载体,将H5和H7亚型禽流感病毒血凝素(AIV HA)基因串联后(拥有同一个阅读框)和鸡白细胞介素-18(IL-18)基因分别插入到鸡痘病毒表达载体pUTA-16-LacZ复合启动子(ATI-P7.5×20)和单一启动子1(P7.5)下游,构建了携带AIV HA基因和鸡白细胞介素-18基因的重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL-H5-H7-IL18;用相同的方法构建重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL-H5-IL18;将H5亚型AIV HA基因插入到鸡痘病毒表达载体pUTA2复合启动子(ATI-P7.5×20)下游,构建了携带H5亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTA2-H5.应用脂质体转染法,将重组鸡痘病毒转移载体质粒与282E4株鸡痘病毒共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),经BrdU进行三次加压蚀斑筛选后,以不同代次的细胞mRNA为模板,利用H5亚型AIV HA基因、H7亚型AIV HA基因和鸡IL-18基因特异引物进行RT-PCR和蛋白印迹检测,筛选出H5HA-H7HA融合蛋白基因和鸡IL-18基因共表达的重组鸡痘病毒rFPV-H5HA-H7HA-IL18,H5亚型AIV HA基因和鸡IL-18基因共表达的重组鸡痘病毒rFPV-H5HA-IL18以及单独表达H5亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒rFPV-H5HA.这些重组鸡痘病毒的构建为AIV活载体疫苗的研制奠定了基础. 展开更多
关键词 禽流感病毒 血凝素基因 重组禽痘病毒 白细胞介素-18
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鸡IL-18和IFN-γ协同抗病毒机制分析 被引量:2
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作者 李晓婷 宋佰芬 +5 位作者 王歆桐 王梦瑶 余崴 马金柱 于立权 崔玉东 《安徽农学通报》 2017年第11期40-46,共7页
禽病毒性疾病如禽传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease,IBD)一直困扰着养禽业的健康、快速发展。在其他抗病毒感染的药物效果不理想时,有必要应用细胞因子制剂来改善机体免疫并提高抗病毒能力。已证明,鸡白细胞介素18(Chicken int... 禽病毒性疾病如禽传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease,IBD)一直困扰着养禽业的健康、快速发展。在其他抗病毒感染的药物效果不理想时,有必要应用细胞因子制剂来改善机体免疫并提高抗病毒能力。已证明,鸡白细胞介素18(Chicken interleukin-18,Ch IL-18)和鸡干扰素γ(Chicken interferon,Ch IFN-γ)对多种病毒感染具有抑制作用。为了研究新型细胞因子制剂,该实验分析了鸡白细胞介素18(Chicken interleu-kin-18,Ch IL-18)和鸡干扰素γ(Chicken interferon,Ch IFN-γ)以及二者混合后的抗病毒机制。Ch IL-18和Ch IFN-γ蛋白注射雏鸡后7d内,应用试剂盒检测雏鸡体内血清中细胞因子的变化情况。利用鸡外周血单核细胞分析Ch IL-18和Ch IFN-γ对细胞内NO、几种Toll样受体(Toll-like receptors,TLR)及下游信号通路的影响。实验结果表明,混合组蛋白可刺激雏鸡血清中产生高水平IL-6,IL-12,及IL-17。混合组蛋白可以诱导巨噬细胞中NO的分泌水平显著升高,TLR 2、TLR 3、TLR 4和MHC-II的表达量升高,MAPK和NFκB信号通路被激活。综上结果表明,Ch IL-18和Ch IFN-γ以及二者协同可诱导机体对病毒感染产生有效的防御作用,为新型细胞因子制剂的研究提供参考。 展开更多
关键词 白细胞介素18 鸡干扰素γ 病毒 免疫调节
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