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抗转铁蛋白受体单链抗体原核表达载体的构建和表达 被引量:3
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作者 朱慧芬 杨道锋 +1 位作者 沈关心 周春 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期402-404,408,共4页
目的 构建抗转铁蛋白受体 (TfR)单链抗体原核表达载体 ,为进一步研究其效应奠定基础。方法 从抗TfR单克隆抗体重链和轻链可变区基因的克隆载体 pGEM T VH和 pGEM T VL中扩增重链可变区 (VH)和轻链可变区 (VL)基因 ,用重叠延伸PCR的方... 目的 构建抗转铁蛋白受体 (TfR)单链抗体原核表达载体 ,为进一步研究其效应奠定基础。方法 从抗TfR单克隆抗体重链和轻链可变区基因的克隆载体 pGEM T VH和 pGEM T VL中扩增重链可变区 (VH)和轻链可变区 (VL)基因 ,用重叠延伸PCR的方法 ,在VH和VL基因间引入连接短肽 (Linker) ,构建VH Linker VL的单链抗体 (singlechainFv ,scFv)基因。经NcoⅠ和NotⅠ酶切后亚克隆到原核分泌型表达载体pUC19/119上 ,转化和筛选后 ,阳性细菌经IPTG诱导表达。间接免疫荧光法 (IFA)及抗体封闭试验鉴定其抗体活性。结果 凝胶电泳可见重叠延伸PCR扩增产物约 70 0bp条带 ,SDS PAGE鉴定表达产物的分子量为 2 7kD左右 ,与scFv的理论值一致 ,IFA及抗体封闭试验证明表达产物有抗人TfR的活性。结论 本研究成功地构建并表达了抗人TfRscFv ,为抗人TfRscFv的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 抗转铁蛋白受体 单链 原核表达 跨膜糖蛋白
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脑药物转运载体——抗转铁蛋白受体单链抗体的克隆表达及鉴定 被引量:4
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作者 颜冰 黄培堂 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期303-307,共5页
为构建特异性的脑药物转运载体 ,分段合成了抗大鼠转铁蛋白受体的单链抗体基因 (Ox2 6 scfv) .经重叠PCR拼接成完整片段 ,克隆入pUC19载体中 ,测序正确后克隆到大肠杆菌表达载体pET 15b E .tag上 .IPTG诱导 ,表达产物分子量为 2 9kD ,... 为构建特异性的脑药物转运载体 ,分段合成了抗大鼠转铁蛋白受体的单链抗体基因 (Ox2 6 scfv) .经重叠PCR拼接成完整片段 ,克隆入pUC19载体中 ,测序正确后克隆到大肠杆菌表达载体pET 15b E .tag上 .IPTG诱导 ,表达产物分子量为 2 9kD ,约占菌体总蛋白量的 4 0 % .包涵体经 6mol L盐酸胍变性后 ,过SephacrylS 30 0HR分子筛柱复性蛋白 .免疫酶染色实验表明 ,该单链抗体能与转铁蛋白受体特异性结合 。 展开更多
关键词 药物转运载体 抗转铁蛋白受体 克隆表达 鉴定 单链 血脑屏障
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抗转铁蛋白受体单抗可变区基因克隆和序列分析 被引量:6
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作者 王硕 沈关心 +4 位作者 蒋琳 王晓林 苏娜 熊伟 卢昌秀 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1998年第1期13-16,19,共5页
目的:制备基因工程抗体,减少或消除鼠源性单克隆抗体(mAb)在人体内的免疫原性,保留其对人体抗原配体的高度特异性,发展临床导向诊断和治疗。方法:从体外分泌抗转铁蛋白受体mAb杂交瘤细胞系7579中,对其mAb可变区基... 目的:制备基因工程抗体,减少或消除鼠源性单克隆抗体(mAb)在人体内的免疫原性,保留其对人体抗原配体的高度特异性,发展临床导向诊断和治疗。方法:从体外分泌抗转铁蛋白受体mAb杂交瘤细胞系7579中,对其mAb可变区基因进行克隆和序列分析。利用逆转录PCR技术扩增轻、重链可变区基因,再分别与pGEMT载体连接,并克隆于JM109受体菌之中。利用荧光染色链终止法测定其序列,采用DNASIS7分析软件和与NIH基因库比较分析。结果:轻、重链可变区分别由139和128氨基酸残基组成,包括信号肽、互补决定区和骨架氨基酸残基等功能序列。分别属于鼠免疫球蛋白重链Ⅱc和κ链Ⅵ家族。结论:来自mAb可变区的基因是完整的和具有潜在功能性的,为体外获得抗转铁蛋白受体基因工程抗体奠定了基础。 展开更多
关键词 抗转铁蛋白受体 可变区基因 序列分析
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转铁蛋白受体在肝癌细胞上的表达
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作者 封江南 史良如 《单克隆抗体通讯》 CSCD 1989年第4期42-43,共2页
作者用抗转铁蛋白受体单克隆抗体抗TfR McAb,(D71)检测17例原发性肝癌患者肿瘤组织。发现14例肝癌细胞呈现特异性结合,阳性率为82.4%。其余3例肝癌细胞未检测到转铁蛋白受体(TfR),可能与肝癌细胞的分化程度或分泌程度有关。同时用抗A-F... 作者用抗转铁蛋白受体单克隆抗体抗TfR McAb,(D71)检测17例原发性肝癌患者肿瘤组织。发现14例肝癌细胞呈现特异性结合,阳性率为82.4%。其余3例肝癌细胞未检测到转铁蛋白受体(TfR),可能与肝癌细胞的分化程度或分泌程度有关。同时用抗A-FP单克隆抗体与CD71进行比较,发现肝癌胞细TfR含量高于A-FP含量。该发现为肝癌的诊断及导向治疗提供了新的较好的载体。 展开更多
关键词 肝癌细胞 抗转铁蛋白受体 原发性肝癌患者 单克隆 McAb 肿瘤组织 分化程度 CD71 A-FP FFR 特异性 TFR 检测 含量
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武汉(Wu)系列抗入T细胞及其亚群单抗 被引量:1
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作者 史良如 陈善华 +8 位作者 王中德 谭向阳 欧阳斌 徐辉 吴晓波 封江南 王志友 孙可芳 赵亚杰 《单克隆抗体通讯》 CSCD 1989年第2期22-29,共8页
本文报告了Wu系列抗人T及其亚群单抗按国际第三次人白细胞分化抗原专题讨论会要求进行检定的结果。这是国内第一套较全的OKT样系列单抗,即WuT1(OKT1,CD5);WuT3(OKT3,CD3);WuT4(OKT4,CD4);WuT6(OKT6,CD1a):WuT8(OKT8,CD8);WuT9(OKT9,抗... 本文报告了Wu系列抗人T及其亚群单抗按国际第三次人白细胞分化抗原专题讨论会要求进行检定的结果。这是国内第一套较全的OKT样系列单抗,即WuT1(OKT1,CD5);WuT3(OKT3,CD3);WuT4(OKT4,CD4);WuT6(OKT6,CD1a):WuT8(OKT8,CD8);WuT9(OKT9,抗转铁蛋白受体,抗TfR);WuT10(OKT10,CD38);WuT11(OKT11,CD2)及Wu-Tac(Tac,CD25)。 展开更多
关键词 亚群 T细胞 人白细胞分化 抗转铁蛋白受体 武汉 专题讨论会 OKT8
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