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肾移植受者血清抗血管内皮细胞特异性抗体的提取和纯化 被引量：2
1
作者 刘丹 胡娟 +5 位作者 刘萍 罗伟光 李婷婷 郭靖 明英姿 邹义洲 《器官移植》 CAS CSCD 2015年第3期146-151,共6页
目的探讨肾移植术后出现排斥反应的受者血清中抗血管内皮细胞特异性抗体的提取和纯化方法。方法首先分离培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)。收集肾移植术后肾功能不良受者的血清样本,应用流式细胞术进行抗血管内皮细胞特异性抗体的筛选;... 目的探讨肾移植术后出现排斥反应的受者血清中抗血管内皮细胞特异性抗体的提取和纯化方法。方法首先分离培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)。收集肾移植术后肾功能不良受者的血清样本,应用流式细胞术进行抗血管内皮细胞特异性抗体的筛选;用Luminex抗体检测平台检测血清中抗人类白细胞抗原(HLA)和主要组织相容性复合体Ⅰ类相关链A(MICA)的抗体。在确定血清标本中存在有抗血管内皮细胞特异性抗体后,用HUVEC将其吸附。洗涤细胞后再将吸附的抗体从细胞膜上洗脱下来,再用Protein-A/G磁珠再次纯化和浓缩洗脱液中的抗体Ig G。采用流式细胞术检测洗脱液中抗体活性,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)凝胶和免疫印迹法鉴定纯化的抗血管内皮细胞特异性抗体(Ig G)。结果在386例肾移植受者的血清中,选取血清肌酐(Scr)>400μmo I/L、抗HLA抗体阴性、抗MICA抗体阴性和荧光反应强度(MFI)>16的5例受者的血清样本,纯化后的抗血管内皮细胞特异性抗体Ig G在SDS-PAGE凝胶显示免疫球蛋白重链(纯度>95%)。流式细胞术结果显示纯化的抗体具有重新结合血管内皮细胞表面抗原的特性。结论采用人脐静脉血管内皮细胞吸附肾移植受者血清中抗血管内皮细胞特异性抗体的提纯方法可取得较好效果。 展开更多
关键词 肾移植 免疫排斥反应 抗血管内皮细胞特异性抗体 抗体吸附 人血管内皮细胞
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血管内皮细胞特异性Traf2基因敲除小鼠的制备及鉴定
2
作者 陈卓 蒯佳婕 +2 位作者 王凤玲 何菊 魏伟 《中国药理学通报》 北大核心 2025年第8期1592-1598,共7页
目的构建血管内皮细胞(endothelial cell,EC)特异性肿瘤坏死因子受体相关因子2(tumor necrosis factor receptor-associated factor 2,Traf2)基因敲除小鼠,为研究通过TRAF2调控血管EC活性致血管功能障碍相关疾病提供实验动物模型。方法C... 目的构建血管内皮细胞(endothelial cell,EC)特异性肿瘤坏死因子受体相关因子2(tumor necrosis factor receptor-associated factor 2,Traf2)基因敲除小鼠,为研究通过TRAF2调控血管EC活性致血管功能障碍相关疾病提供实验动物模型。方法Cre-loxP系统构建血管EC特异性Traf2基因敲除(Traf2^(flox/flox)Tek-iCre^(+))小鼠;PCR和凝胶电泳鉴定小鼠基因型;流式分离小鼠血管原代EC;Western blot和免疫荧光验证小鼠血管EC中Traf2敲除效果;HE染色检测小鼠血管及主要器官病理形态改变;基质胶成管检测小鼠血管原代EC成管能力。结果敲除小鼠基因型符合要求;流式结果表明,成功分选出血管原代EC,敲除小鼠血管EC中TRAF2表达降低(P<0.01);组织学结果显示,敲除小鼠血管TRAF2表达降低,血管及主要器官形态无明显改变。基质胶成管表明模型小鼠血管原代EC成管能力下降。结论成功构建血管EC特异性Traf2基因敲除小鼠,可为研究血管功能障碍相关疾病中TRAF2对血管EC的调控机制提供可靠的动物模型。 展开更多
关键词 血管内皮细胞 TRAF2 特异性基因敲除 胸主动脉血管 CRE-LOXP 血管功能障碍
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网状内皮组织增生病病毒特异性杂交瘤细胞培养液中单克隆抗体的效价动态 被引量：1
3
作者 吴永平 崔治中 《中国兽药杂志》 2002年第10期13-15,共3页
为获取网状内皮组织增生病病毒(REV)单克隆抗体的最高抗体滴度,在含10%胎牛血清的DMEM培养液中培养对REV特异性的杂交瘤细胞株11B154。每1 mL培养液中平均含0.65×106 个活细胞,于37 ℃在含7% CO2的培养箱中继续培养。在24、48、72... 为获取网状内皮组织增生病病毒(REV)单克隆抗体的最高抗体滴度,在含10%胎牛血清的DMEM培养液中培养对REV特异性的杂交瘤细胞株11B154。每1 mL培养液中平均含0.65×106 个活细胞,于37 ℃在含7% CO2的培养箱中继续培养。在24、48、72和96 h后,每1 mL培养液中的平均总细胞数和活细胞数分别是:1.13×106和1.03×106 (活细胞占94.5%)、3.42×106和2.48×106(活细胞占72.5%)、2.6×106和0.98×106 (活细胞占37.7%)、2.47×106和0.53×106(活细胞占21.5%)。同时用细胞培养上清液对REV感染的鸡胚成纤维细胞作间接荧光抗体试验,在培养24、48、72和96 h后上清液中平均抗体效价分别是1:67、1:133、1:67及1:33。结果表明,培养48 h后,当细胞总数及活细胞总数最高但活细胞百分比开始下降时的培养液中抗体效价最高。该研究结果可作为用细胞培养方法大批量生产抗REV单抗的技术参数。 展开更多
关键词 网状内皮组织增生病 病毒特异性 杂交瘤 细胞培养液 单克隆抗体 效价动态 鸡
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SLE抗中性粒细胞胞质抗体及抗血管内皮细胞抗体检测 被引量：2
4
作者 刘玉琴 蒋建华 +3 位作者 周炳华 普雄明 岳华 藤玉芬 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第10期627-628,共2页
通过对41例SLE患者抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)、抗血管内皮细胞抗体(AECA)的检测结果显示,活动期SLE患者中ANCA的阳性率为53.7%,AECA阳性率为9.76%;各系统损害及实验室检查结果相比均无明显差异;AECA阳性者其血清ANCA阴性。表明SLE患... 通过对41例SLE患者抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)、抗血管内皮细胞抗体(AECA)的检测结果显示,活动期SLE患者中ANCA的阳性率为53.7%,AECA阳性率为9.76%;各系统损害及实验室检查结果相比均无明显差异;AECA阳性者其血清ANCA阴性。表明SLE患者免疫机制复杂,有待深入研究。 展开更多
关键词 SLE 抗中性粒细胞胞质抗体 系统性红斑狼疮 抗血管内皮细胞抗体 ANCA AECA
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变应性皮肤血管炎患者血清抗中性粒细胞胞质抗体及抗血管内皮细胞抗体检测 被引量：3
5
作者 蒋建华 普雄明 刘玉琴 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期613-613,共1页
为探讨抗中性粒细胞胞质抗体（ANCA）及抗血管内皮细胞抗体（AECA）在变应性皮肤血管炎患者中的意义，笔者应用间接免疫荧光技术（IIF）对20例变应性皮肤血管炎患者进行了血清ANCA及AECA的检测，现将结果报告如下。
关键词 血管炎 皮肤 变应性 抗体 抗中性粒细胞胞质 抗体 抗血管内皮细胞
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抗内皮细胞抗体与丙硫氧嘧啶引起的抗中性粒细胞胞浆抗体阳性小血管炎病变活动相关 被引量：1
6
作者 于峰 赵明辉 +1 位作者 张颖 章友康 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期374-377,共4页
目的:在丙硫氧嘧啶(propylthiouracil,PTU)引起的抗中性粒细胞胞浆抗体(antineutrophilcytoplasmicanti-body,ANCA)相关小血管炎患者血清中检测抗内皮细胞抗体(anti-endothelialcellantibody,AECA),探讨其在该类疾病发病中的作用。方法... 目的:在丙硫氧嘧啶(propylthiouracil,PTU)引起的抗中性粒细胞胞浆抗体(antineutrophilcytoplasmicanti-body,ANCA)相关小血管炎患者血清中检测抗内皮细胞抗体(anti-endothelialcellantibody,AECA),探讨其在该类疾病发病中的作用。方法:选取11例PTU引起的ANCA相关小血管炎患者及10例临床上使用PTU治疗甲亢,无系统性血管炎症状而ANCA阳性的患者,应用体外原代培养的脐静脉血管内皮细胞制备可溶性抗原,采用蛋白免疫印迹法检测其血清中的AECA。结果:PTU相关ANCA阳性小血管炎组患者疾病活动期共有10(91%,10/11)例病人血清可检出AECA,有6种不同的蛋白可以被识别。对以上10例AECA阳性患者同时测定了其缓解期血清的AECA,发现其中7例AECA转为阴性,3例出现的条带与活动期比较无差别。使用PTU治疗甲亢,无系统性血管炎症状而ANCA阳性患者组中未检出AECA。结论:PTU相关的ANCA阳性小血管炎中存在着不同分子质量大小的AECA,AECA在该类疾病的发病中可能具有比ANCA更为重要的意义。 展开更多
关键词 抗体 抗内皮细胞 丙硫氧嘧啶 抗体 抗中性白细胞胞质 血管炎
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抗人白细胞单克隆抗体的特异性及其特性鉴定 被引量：1
7
作者 杨斌 何杨 +3 位作者 赵益明 沈文红 李佩霞 阮长耿 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期158-160,共3页
目的制备抗人白细胞单克隆抗体（ｍＡｂ），并对其识别抗原及组织的特异性进行鉴定。方法采用分离的人全白细胞悬液免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，取脾细胞与Ｓｐ２／０细胞常规融合，用间接ＥＬＩＳＡ筛选ｍＡｂ，流式细胞仪及免疫组化染色Ｓ... 目的制备抗人白细胞单克隆抗体（ｍＡｂ），并对其识别抗原及组织的特异性进行鉴定。方法采用分离的人全白细胞悬液免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，取脾细胞与Ｓｐ２／０细胞常规融合，用间接ＥＬＩＳＡ筛选ｍＡｂ，流式细胞仪及免疫组化染色ＳＰ法鉴定其组织特异性。　结果成功地制备１株抗人白细胞　ｍＡｂ，命名为ＳＺ－１０５。ＥＬＩＳＡ法测定其腹水效价为１×１０－５。琼脂糖双扩散鉴定为ＩｇＧ１类。流式细胞仪间接免疫荧光技术及免疫组化ＳＰ法测定表明，ｍＡｂ　ＳＺ－１０５可选择性地与外周血液的粒细胞、单核细胞和淋巴细胞呈强阳性反应，而与红细胞及血小板不出现反应。该ｍＡｂ还可与正常人骨髓的白细胞前体起反应。另外，在肝、肺、脾、胸腺及淋巴结正常组织中的巨噬细胞表面，也有ＳＺ－１０５抗原表达。ＳＺ－１０５抗原经亲和层析纯化，再经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ　和Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ证实，ｍＡｂ　ＳＺ－１０５识别的抗原是相对分子质量（Ｍｒ）为７５　０００左右的单链蛋白多肽。结论　获得１株具有高度免疫学活性和组织特异性的抗人白细胞ｍＡｂ　ＳＺ－１０５，其对研究白细胞的分化、免疫功能，以及隐匿性急、慢性炎症疾病的放免显像诊断都具有一定的临床意义。 展开更多
关键词 抗人白细胞单克隆抗体 特异性 特性鉴定 免疫组织化学
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系统性红斑狼疮患者血清抗血管内皮细胞抗体及抗心磷脂抗体的检测
8
作者 蒋建华 普雄明 +2 位作者 周炳华 吴卫东 刘玉琴 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期164-165,共2页
关键词 红斑狼疮 系统性 抗体 抗血管内皮细胞 抗体 抗心磷脂
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内皮细胞特异性RTK受体与血管生成
9
作者 明佳 刘旭盛 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期361-363,共3页
关键词 内皮细胞 血管生成 周细胞 毛细血管 受体 增殖 特异性 过程 分子 步骤
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分泌抗急性非淋巴细胞白血病M_2型单克隆抗体细胞株的建立及其特异性
10
作者 张权一 潘荆华 +5 位作者 李秀芝 王丽叶 艾元洪 郝秀智 张贻林 易永林 《单克隆抗体通讯》 CSCD 1989年第1期49-54,共6页
应用细胞杂交瘤技术建立了分泌抗急性非淋巴细胞白血病M_2型单克隆抗体1D_1、1C_2和1D_6细胞株,连续传代11个月,稳定地分泌单克隆抗体。用间接免疫荧光方法检测,这三株细胞分泌的单克隆抗体与急性非淋巴细胞白血病M_2型病人的白血病细... 应用细胞杂交瘤技术建立了分泌抗急性非淋巴细胞白血病M_2型单克隆抗体1D_1、1C_2和1D_6细胞株,连续传代11个月,稳定地分泌单克隆抗体。用间接免疫荧光方法检测,这三株细胞分泌的单克隆抗体与急性非淋巴细胞白血病M_2型病人的白血病细胞呈阳性反应;与急性非淋巴细胞白血病M_1、M_3、M_4、M_5型病人白血病细胞呈阴性反应;与慢性粒细胞白血病、慢粒急变,急性淋巴细胞白血病病人白血病细胞呈阴性反应;与正常人白细胞也呈阴性反应,说明建立的细胞株分泌的单克隆抗体具有型的特异性。 展开更多
关键词 抗急性非淋巴细胞白血病单克隆抗体 M2型单克隆抗体细胞株 特异性 免疫分型诊断 免疫治疗
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抗血管内皮细胞单克隆抗体的制备及免疫组化鉴定
11
作者 任峰 刘彦仿 隋延仿 《单克隆抗体通讯》 CSCD 1989年第2期30-32,共3页
本文报道用临床手术切除的肝癌标本制备细胞悬液直接免疫BALB/c小鼠与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,在筛选过程中获得一株抗血管内皮细胞的单克隆抗体。该细胞株稳定地在体外连续培养四个月。抗体能直接用于常规福尔马林固定的石蜡包埋的切片染... 本文报道用临床手术切除的肝癌标本制备细胞悬液直接免疫BALB/c小鼠与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,在筛选过程中获得一株抗血管内皮细胞的单克隆抗体。该细胞株稳定地在体外连续培养四个月。抗体能直接用于常规福尔马林固定的石蜡包埋的切片染色,不需胰酶消化。经A.B.C法免疫组化染色证明,对全身各脏器血管内皮细胞定位以及30例各种类型血管瘤的内皮细胞染色均呈阳性反应。对起源于内皮细胞的5例血管内皮细胞肉瘤定位4例阳性,1例为阴性。而对血管外皮细胞肉瘤却大部份呈阴性反应。与内皮细胞以外的组织无交叉反应。提示此抗体能识别的抗原可能是Ⅷ因子相关抗原,它对起源于血管的软组织肿瘤的鉴别诊断及免疫组化定位有一定的应用价值。 展开更多
关键词 抗血管内皮细胞 单克隆抗体 BALB/c小鼠 血管内皮细胞肉瘤 血管外皮细胞肉瘤 Ⅷ因子相关抗原 鉴定 体外连续培养 福尔马林固定 免疫组化定位 Sp2/0 软组织肿瘤 细胞融合 细胞悬液 标本制备 手术切除 石蜡包埋 胰酶消化
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抗磷脂抗体引起血管内皮细胞功能紊乱的机制及其病理生理意义 被引量：12
12
作者 邵钫钰 冯娟 王宪 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期172-176,共5页
抗磷脂综合征是由抗磷脂抗体引起的一种自身免疫性疾病,临床上以反复动静脉血栓、习惯性流产以及系统性红斑狼疮为主要表现。流行病学调查表明抗磷脂综合征显著增加患者动脉粥样硬化等心血管疾病发病风险。而抗磷脂抗体所介导的血管内... 抗磷脂综合征是由抗磷脂抗体引起的一种自身免疫性疾病,临床上以反复动静脉血栓、习惯性流产以及系统性红斑狼疮为主要表现。流行病学调查表明抗磷脂综合征显著增加患者动脉粥样硬化等心血管疾病发病风险。而抗磷脂抗体所介导的血管内皮细胞功能紊乱以及补体系统的激活被认为是抗磷脂综合征患者诱发心血管疾病的主要原因。本文对抗磷脂抗体引起血管内皮细胞损伤在动脉粥样硬化等心血管疾病发病中的作用机制及其病理生理意义进行综述。 展开更多
关键词 抗磷脂抗体 心血管疾病 血栓 动脉粥样硬化 血管内皮细胞
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血清内皮细胞特异分子-1、脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂水平对微血管性心绞痛诊断的临床价值 被引量：20
13
作者 刘秋梅 张爱文 +3 位作者 金凤表 李博 张英 侯瑞田 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2019年第4期351-356,共6页
目的 :探讨内皮细胞特异分子-1(endothelial cell specific molecule-1,Endocan)、脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(visceral adipose tissue-derived serine protease inhibitor,Vaspin)水平对微血管性心绞痛诊断的临床价值。方法 :该研... 目的 :探讨内皮细胞特异分子-1(endothelial cell specific molecule-1,Endocan)、脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(visceral adipose tissue-derived serine protease inhibitor,Vaspin)水平对微血管性心绞痛诊断的临床价值。方法 :该研究共纳入微血管性心绞痛患者40例(MVA组),不稳定性心绞痛患者103例(UA组),同期于我院体检的正常人35例(正常对照组)。应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组血清Endocan、Vaspin水平。结果 :(1)与正常对照组相比,UA组和MVA组血清Endocan水平升高,血清Vaspin水平降低(P均<0.01);与UA组相比,MVA组血清Endocan水平低,Vaspin水平高(P均<0.01)。(2)Spearman相关性分析显示,UA组血清Endocan水平与Gensini评分呈正相关(r=0.516,P<0.001),Vaspin水平与Gensini评分呈负相关(r=-0.563,P<0.001)。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,Endocan、Vaspin诊断MVA的曲线下面积分别是0.816、0.796。结论 :血清Endocan、Vaspin水平可能与血管内皮功能障碍密切相关,有可能成为MVA诊断的新型标志物。 展开更多
关键词 内皮细胞特异分子-1 脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂 微血管性心绞痛 炎症
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抗内皮细胞抗体与系统性血管炎关系的研究进展 被引量：5
14
作者 陈柏谕 任少敏 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期891-893,共3页
抗内皮细胞抗体(AECA)是一组与内皮细胞多种蛋白相结合的异质性自身免疫性抗体,于1971年由Lindquist和Osterland首次报道。此后越来越多的研究表明,其广泛出现在由免疫、炎症介导的血管壁损伤相关的多种自身免疫性疾病中,尤其在系统性... 抗内皮细胞抗体(AECA)是一组与内皮细胞多种蛋白相结合的异质性自身免疫性抗体,于1971年由Lindquist和Osterland首次报道。此后越来越多的研究表明,其广泛出现在由免疫、炎症介导的血管壁损伤相关的多种自身免疫性疾病中,尤其在系统性血管炎中,具有潜在的致病作用,并且对相关自身免疫性疾病的诊断及其预后判断有一定的作用。文章就近年来对AECA及其与系统性血管炎密切相关性的研究进展作一综述。 展开更多
关键词 内皮细胞 抗内皮细胞抗体 系统性血管炎 自身免疫性疾病
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ESM1通过激活DLL4/Notch1通路促进口腔鳞癌细胞的凋亡和血管生成
15
作者 李钊 赵霞 蔡晓清 《实用口腔医学杂志》 北大核心 2025年第5期617-622,共6页
目的:研究内皮细胞特异性分子1(ESM1)对口腔鳞癌(OSCC)细胞凋亡和血管生成的影响及相关机制。方法:用GEO数据库分析ESM1在OSCC组织中的表达,qRT-PCR和Western blot检测ESM1在OSCC细胞系Cal27、SCC9、Tca8113中的表达。对Tca8113细胞进... 目的:研究内皮细胞特异性分子1(ESM1)对口腔鳞癌(OSCC)细胞凋亡和血管生成的影响及相关机制。方法:用GEO数据库分析ESM1在OSCC组织中的表达,qRT-PCR和Western blot检测ESM1在OSCC细胞系Cal27、SCC9、Tca8113中的表达。对Tca8113细胞进行分组转染实验,流式细胞术检测细胞凋亡,小管形成实验检测细胞血管生成,Western blot检测Delta样配体4(DLL4)、Notch通路下游分子Notch胞内结构域(NICD)、发状分裂相关增强子1(Hes1)及c-Myc蛋白表达的影响,免疫共沉淀(Co-IP)验证ESM1与DLL4的相互作用。结果:GSE31056和GSE30784数据集显示ESM1在OSCC组织中表达升高,且ESM1在OSCC细胞系Cal27、SCC9和Tcal8113中也显著上调。与Tca8113细胞转染阴性对照小干扰RNA相比,转染靶向ESM1的小干扰RNA后细胞凋亡率显著升高(11.9%±0.20%vs 1.56%±0.20%),血管生成数目显著减少。敲低ESM1可显著抑制DLL4、NICD、Hes1、c-Myc的表达。Co-IP实验表明ESM1与DLL4存在相互作用关系。敲低ESM1且过表达DLL4可以逆转只敲低ESM1对细胞凋亡和血管生成的影响,具体表现为DLL4、NICD的表达量显著上升,细胞凋亡率显著下降,血管生成数目显著增加。结论:ESM1可通过激活DLL4/Notch1通路促进OSCC细胞的凋亡,抑制血管生成。 展开更多
关键词 内皮细胞特异性分子1 口腔鳞癌 凋亡 血管生成 Delta样配体4/notch
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内皮细胞特异性分子1与内皮细胞功能异常疾病 被引量：10
16
作者 刘雅 张蓓 +1 位作者 刘洁琳 温绍君 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 2015年第6期655-657,共3页
内皮细胞特异性分子（endothelial cell specific molecule-1,ESM）-1又称为Endocan,是一种硫酸皮肤素黏蛋白,1996年由法国科学家Lassalle从人脐静脉内皮细胞中分离出来的一种ESM,主要在人肺和肾脏以及血管网中表达。初步的研究结果显示... 内皮细胞特异性分子（endothelial cell specific molecule-1,ESM）-1又称为Endocan,是一种硫酸皮肤素黏蛋白,1996年由法国科学家Lassalle从人脐静脉内皮细胞中分离出来的一种ESM,主要在人肺和肾脏以及血管网中表达。初步的研究结果显示,其具有非常广泛的生物学活性,与炎症过程以及肿瘤的发生发展有关,被认为是内皮细胞激活的新标记物。 展开更多
关键词 内皮细胞 心血管疾病 肿瘤 炎症 内皮细胞特异性分子1
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重组可溶性KDR及其抗体对内皮细胞的增殖抑制作用 被引量：4
17
作者 刘丽 肖畅 +1 位作者 王烨 曹颖 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2002年第1期23-26,共4页
目的 :分析可溶性KDR(sKDR)及其抗体对内皮细胞增殖的抑制作用。方法 :通过ELISA分析大肠杆菌表达的sKDR纯化产物与VEGF16 5结合的能力 ;sKDR免疫家兔制备KDR2 6 2抗血清 ,Wensternblot分析该抗血清与KDR2 6 2蛋白结合的特异性 ;用3 H ... 目的 :分析可溶性KDR(sKDR)及其抗体对内皮细胞增殖的抑制作用。方法 :通过ELISA分析大肠杆菌表达的sKDR纯化产物与VEGF16 5结合的能力 ;sKDR免疫家兔制备KDR2 6 2抗血清 ,Wensternblot分析该抗血清与KDR2 6 2蛋白结合的特异性 ;用3 H TdR掺入法 ,MTT法和细胞计数 3种方法分析重组sKDR及其抗体对内皮细胞的增殖抑制作用。结果 :sKDR蛋白可与VEGF16 5特异性结合 ,肝素可增强其结合能力。KDR2 6 2抗血清具有特异性识别KDR蛋白的能力 ,其滴度为 1∶2 0 0 0。用3 H TdR掺入法和MTT 2种方法分析sKDR蛋白及其抗体对内皮细胞的增殖抑制作用结果一致 ,sKDR蛋白浓度在 10 μg/ml,2μg/ml,0 .4μg/ml时对内皮细胞增殖抑制率平均为 5 6 %,44 %和 32 %;抗KDR2 6 2抗体在稀释度为 5 0 ,2 0 0和 80 0倍时对内皮细胞增殖的抑制率平均为 70 %,5 6 %和 43%。细胞计数法测定结果 ,sKDR及抗KDR2 6 2抗体组与VEGF16 5单独刺激组 ,GST和PBS对照组相比 ,内皮细胞增殖被明显抑制 ,随浓度增加抑制活性明显增强 ,但抗体的抑制活性比sKDR蛋白高。结论 :大肠杆菌表达的sKDR及其抗体对内皮细胞均具有明显的增殖抑制作用。 展开更多
关键词 重组可溶性KDR 抗体 内皮细胞 抑制作用 血管内皮细胞生长因子 抗血管形成 细胞增殖
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生长停滞特异性蛋白6在牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导内皮细胞黏附因子及趋化因子表达中的作用 被引量：5
18
作者 刘颖君 欧阳翔英 +2 位作者 王宇光 吕培军 安娜 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期20-25,共6页
目的:探讨维生素K依赖的生长停滞特异性蛋白6(growth-arrest-specific protein 6,Gas6,一种维生素K依赖性蛋白,参与细胞增殖、存活、黏附和迁移,也在炎症反应中起重要作用)在牙龈卟琳单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis lipopolysac... 目的:探讨维生素K依赖的生长停滞特异性蛋白6(growth-arrest-specific protein 6,Gas6,一种维生素K依赖性蛋白,参与细胞增殖、存活、黏附和迁移,也在炎症反应中起重要作用)在牙龈卟琳单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,P.g-LPS)诱导血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)表达黏附因子和趋化因子过程中的作用。方法:在血管内皮细胞中过表达和敲低Gas6基因后,用1 mg/L P.g-LPS刺激血管内皮细胞3 h和24 h,利用实时定量荧光聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)检测细胞间黏附分子1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)和E选择素(E-selectin),以及趋化因子白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)和单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemoattractant protein 1,MCP-1)的表达。过表达或敲低Gas6基因后,细胞划痕实验检验内皮细胞迁移的生物学功能表型的变化。结果:P.g-LPS刺激3 h后,敲低Gas6组的黏附因子及趋化因子的表达情况与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05),过表达Gas6组的黏附因子及趋化因子与对照组相比显著降低(E-selectin、ICAM-1、IL-8和MCP-1分别下降81%±0%、47%±3%、76%±3%和26%±6%,P<0.01);P.g-LPS刺激24 h后,敲低组的黏附因子及趋化因子表达情况与对照组相比显著升高(E-selectin、ICAM-1、IL-8和MCP-1上调的倍数分别是2.06±0.07、1.99±0.11、3.14±0.15和1.84±0.03),过表达组的黏附因子及趋化因子与对照组相比显著降低(E-selectin、ICAM-1、IL-8和MCP-1分别下降29%±1%、62%±3%、69%±1%和41%±2%),实验组与对照组黏附分子及趋化分子表达差异具有统计学意义(P<0.01)。细胞划痕实验结果显示,敲低Gas6组细胞迁移能力与对照组相比增强,过表达组细胞迁移能力较对照组弱,与realtime PCR检测结果趋势一致。结论:下调Gas6基因后,P.g-LPS促进ICAM-1、E-selectin、IL-8和MCP-1表达作用增强,上调Gas6基因后,P.g-LPS促进ICAM-1、E-selectin、IL-8和MCP-1表达作用减弱,各细胞因子表达量与Gas6表达趋势相反,提示Gas6在内皮细胞炎症状态下的黏附过程中可能发挥抑制作用。 展开更多
关键词 人脐静脉血管内皮细胞 生长停滞特异性蛋白6 牙龈卟琳单胞菌脂多糖 细胞因子
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肾癌组织中内皮细胞特异性分子-1 mRNA水平及其蛋白表达的关系 被引量：4
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作者 熊江霞 吴强 +3 位作者 周青 吴正升 桂淑玉 汪渊 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 2004年第2期187-190,共4页
目的　探讨内皮细胞特异性分子 1(ESM 1)mRNA及其蛋白在肾癌组织中的表达及其意义。方法　采用地高辛标记cDNA探针原位杂交方法、免疫组织化学S P法对 4 0例肾癌、2 9例癌旁正常肾组织中ESM 1mRNA及其蛋白进行检测。结果　ESM 1mRNA及... 目的　探讨内皮细胞特异性分子 1(ESM 1)mRNA及其蛋白在肾癌组织中的表达及其意义。方法　采用地高辛标记cDNA探针原位杂交方法、免疫组织化学S P法对 4 0例肾癌、2 9例癌旁正常肾组织中ESM 1mRNA及其蛋白进行检测。结果　ESM 1mRNA及其蛋白在正常肾组织和肾癌中均有表达 ,肾癌间质血管内皮中表达明显。肾癌组织中 ,肿瘤血管内皮的ESM 1mRNA和蛋白的高表达率显著高于正常肾组织血管内皮 ;而在肾小管上皮细胞与肾癌细胞中差异无显著性 ,ESM 1mRNA和蛋白表达具有较好的一致性。结论　ESM 1分子可能参与了肾癌的发生。 展开更多
关键词 肾癌 内皮细胞特异性分子-1 MRNA表达 检测 肿瘤转移 血管生成
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癌细胞和人血管内皮粘附与器官特异转移相关 被引量：2
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作者 周转 遇珑 +4 位作者 冉宇靓 胡海 孙立新 娄晋宁 杨治华 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2006年第21期1201-1204,共4页
目的:检测5种不同类型的人肿瘤细胞系与4种不同来源的人微血管内皮的粘附,并探讨粘附作用与肿瘤器官特异性转移的相关性。方法:人微血管内皮培养形成完全汇合的静止内皮单层后,与CalceinAM标记人肿瘤细胞系进行粘附测定。结果:8种食管... 目的:检测5种不同类型的人肿瘤细胞系与4种不同来源的人微血管内皮的粘附,并探讨粘附作用与肿瘤器官特异性转移的相关性。方法:人微血管内皮培养形成完全汇合的静止内皮单层后,与CalceinAM标记人肿瘤细胞系进行粘附测定。结果:8种食管癌细胞系中,有6种与人肺内皮的粘附显著强于与肝窦内皮的粘附;7种食管癌细胞系与人正常食管及食管癌内皮的粘附均强于与人正常肺内皮和肝窦内皮的粘附,这与食管癌临床上肺转移多于肝转移,但相对于远处转移,更倾向于食管内侵袭播散性转移的特征一致。4种结肠癌细胞系与人肝窦内皮粘附均显著强于与人肺内皮和食管正常内皮,与临床上结肠癌主要发生肝转移的特征一致。肝癌、胃癌、肺癌细胞系与内皮的粘附也与临床上转移特征一致。结论:不同组织类型肿瘤细胞与器官来源不同的人内皮细胞的粘附能力具有明显的组织特异性和选择性,且这种粘附特性与临床上肿瘤的组织特异性转移密切相关。阻断这种粘附作用有可能治疗肿瘤转移。 展开更多
关键词 人肿瘤细胞 人微血管内皮 粘附 组织特异性转移
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