人工合成柞蚕抗菌肽D基因转化沙田柚 被引量：18

1

作者 郑启发 陈大成 +1 位作者 黄自然 胡桂兵 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期103-107,共5页

采用根癌农杆菌介导法将柞蚕抗菌肽Ｄ基因导入沙田柚上胚轴等外植体，经卡那霉素筛选，获得了若干转基因植株对这些植株进行胭脂碱电泳检测、点印迹杂交、ＰＣＲ扩增和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析。

关键词 沙田柚 根癌农杆菌 抗菌肽d基因 基因转化

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农杆菌法将抗菌肽D基因导入蕉柑胚性细胞的研究 被引量：9

2

作者 王声斌 邹伟权 +2 位作者 余让才 房师松 黄自然 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期47-50,共4页

用农杆菌介导的方法成功地将抗菌肽D基因导入到蕉柑胚性悬浮细胞 .再生芽经PCR、Southern杂交证明抗菌肽D基因已整合到其基因组DNA中 .在农杆菌介导的蕉柑胚性悬浮细胞转化过程中 ,共培养介质中的乙酰丁香酮 (As)能显著提高其转化效率 ... 用农杆菌介导的方法成功地将抗菌肽D基因导入到蕉柑胚性悬浮细胞 .再生芽经PCR、Southern杂交证明抗菌肽D基因已整合到其基因组DNA中 .在农杆菌介导的蕉柑胚性悬浮细胞转化过程中 ,共培养介质中的乙酰丁香酮 (As)能显著提高其转化效率 ,与对照相比 ,每克悬浮细胞转化后形成的抗卡那霉素细胞团数从 0提高到 0 .75 .悬浮细胞与农杆菌共培养时间对转化效率也具有显著影响 ,共培养 1、2、3d后 ,每克悬浮细胞转化后形成的抗卡那霉素细胞团数分别为 0 .2 0、0 75、0 . 展开更多

关键词 抗菌肽d基因 胚性细胞 遗传转化 抗病育种 蕉柑 农杆菌法

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抗菌肽D基因导入番茄及转基因植株的鉴定 被引量：17

3

作者 田长恩 王正询 +3 位作者 陈韬 周玉萍 黄自然 黄亚东 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期86-89,共4页

用花粉管通道法将柞蚕抗菌肽D基因导入番茄 ,获得了转基因植株。应用PCR技术、DNA斑点杂交以及South ern印迹分析表明 ,抗菌肽D基因已整合到番茄基因组 ;而且 ,位于目的基因下游的胭脂碱合成酶基因有表达。青枯假单孢菌活体接种结合高... 用花粉管通道法将柞蚕抗菌肽D基因导入番茄 ,获得了转基因植株。应用PCR技术、DNA斑点杂交以及South ern印迹分析表明 ,抗菌肽D基因已整合到番茄基因组 ;而且 ,位于目的基因下游的胭脂碱合成酶基因有表达。青枯假单孢菌活体接种结合高发病大田种植试验结果显示 ,部分转基因植株的子一代具有较强的抗青枯病能力。 展开更多

关键词 抗菌肽d基因 花粉通道法 番茄 青枯病 抗病育种

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韧皮部特异启动子驱动密码子优化的抗菌肽D基因的植物表达载体构建 被引量：7

4

作者 胡桂兵 张上隆 +1 位作者 徐昌杰 林顺权 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期639-643,共5页

根据177个GenBank中登录的柑橘编码蛋白密码子用法的分析结果,优化并重新设计和合成了含柑橘偏爱密码子、对柑橘黄龙病有杀灭作用的柞蚕抗菌肽D基因(命名为CAPD),克隆入pUC19克隆载体并经测序验证后,获得了含新抗病基因的重组质粒pUC19-... 根据177个GenBank中登录的柑橘编码蛋白密码子用法的分析结果,优化并重新设计和合成了含柑橘偏爱密码子、对柑橘黄龙病有杀灭作用的柞蚕抗菌肽D基因(命名为CAPD),克隆入pUC19克隆载体并经测序验证后,获得了含新抗病基因的重组质粒pUC19-CAPD。用限制性内切酶BamHI和SacI双酶切pUC19-CAPD克隆载体和pBI121植物表达载体的质粒DNA,回收pUC19-CAPD克隆载体中的CAPD基因小片段和pBI121植物表达载体中去掉GUS报告基因的大片段,经连接、转化和鉴定后,构建了由CaMV35S组成型启动子(35SP)驱动CAPD目的基因的新植物表达载体(命名为pHZ05);用限制性内切酶BamHI和HindIII双酶切含笋瓜韧皮部特异启动子(PSP)的pUCm-PSP克隆载体和pHZ05植物表达载体的质粒DNA,分别回收pUCm-PSP克隆载体中的PSP小片段和pHZ05植物表达载体中去掉CAPD目的基因上游35SP的大片段,经连接、转化和鉴定后,构建了由PSP驱动CAPD目的基因的新植物表达载体(命名为pHZ06)。利用细胞感受态法直接将2个由不同启动子驱动的含CAPD目的基因的新重组植物表达载体分别导入根癌农杆菌LBA4404、GV3101、EHA105和发根农杆菌Ri15834等4个农杆菌菌株中,为利用农杆菌介导的遗传转化技术培育抵抗由韧皮部传导的毁灭性和检疫性病害柑橘黄龙病的新种质奠定了基础。 展开更多

关键词 柑橘 密码子优化 抗菌肽d基因 韧皮部特异启动子 植物表达载体

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转柞蚕抗菌肽D基因辣椒的目的基因及表达产物检测 被引量：5

5

作者 廖富蘋 钟杨生 +5 位作者 邓平建 黄自然 刘建军 房师松 赵锦 陈迎 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期155-160,共6页

应用现代生物技术,从核酸和蛋白质水平对转柞蚕抗菌肽D基因辣椒第4代的目的基因进行了检测。发现所分离的柞蚕抗菌肽D基因与原设计的序列一样;辣椒组织中也含有抑菌物质,经与天然抗菌肽D对比,表明抗菌肽D基因得到了表达。

关键词 转基因食品 柞蚕抗菌肽d基因 辣椒 表达产物

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柞蚕抗菌肽D基因在酵母中表达的研究 被引量：9

6

作者 叶玉坤 叶松广 +5 位作者 毛秋霞 黄自然 徐飞 庄楚雄 陈章良 温刘发 《蚕业科学》 CAS CSCD 1994年第2期95-99,共5页

柞蚕抗菌肽具有广谱杀菌功能，人工合成抗菌肽Ｄ基因（１２２ｂｐ）与含α－因子及前导肽序列的穿梭质粒ｐＣＬＷＡ２重组，克隆于酵母ＡＢ１０３。在缺亮氨酸的ＹＥ培养基中筛选Ｌｅｕ＋阳性的转化子。转化子菌株培养扩增后提取重组质... 柞蚕抗菌肽具有广谱杀菌功能，人工合成抗菌肽Ｄ基因（１２２ｂｐ）与含α－因子及前导肽序列的穿梭质粒ｐＣＬＷＡ２重组，克隆于酵母ＡＢ１０３。在缺亮氨酸的ＹＥ培养基中筛选Ｌｅｕ＋阳性的转化子。转化子菌株培养扩增后提取重组质粒与抗菌肽基因片段探针作点杂交为阳性，电泳后插入含抗菌肽Ｄ基因１２８ｂｐ的区带。在转基因酵母的发酵液中分离上清液，浓缩，对抗菌肽敏感的指示菌Ｅ．ｃｏｌｉＫ１２Ｄ３１有明显抑菌效应。证实人工合成柞蚕抗菌肽Ｄ基因在酵母中表达。 展开更多

关键词 柞蚕 抗菌肽d基因 酵母

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柞蚕抗菌肽D基因导入桑树获得抗青枯病桑树株系简报 被引量：1

7

作者 顾伟民 谭智达 《山东林业科技》 北大核心 1999年第5期9-9,共1页

关键词 桑树 抗青枯病 基因工程 柞蚕 抗菌肽d基因

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几丁质酶和抗菌肽D双价基因转化茄子的研究 被引量：10

8

作者 邹克琴 张银东 +2 位作者 王金宇 吴代飞 曾宪松 《热带作物学报》 CSCD 2001年第2期57-61,共5页

在建立茄子的组织培养及遗传转化体系的基础上，以根癌农杆菌为介导，采用叶盘法将几丁质酶和抗菌肽Ｄ双价基因转入茄子，分别获得６株ＫａｎＲ植株。对ＫａｎＲ植株进行点杂交、ＰＣＲ扩增等分子检测。结果表明，目的基因已整合进茄子... 在建立茄子的组织培养及遗传转化体系的基础上，以根癌农杆菌为介导，采用叶盘法将几丁质酶和抗菌肽Ｄ双价基因转入茄子，分别获得６株ＫａｎＲ植株。对ＫａｎＲ植株进行点杂交、ＰＣＲ扩增等分子检测。结果表明，目的基因已整合进茄子核基因组中。 展开更多

关键词 几丁质酶基因 抗菌肽d基因 遗传转化 茄子 双价基因

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柞蚕抗菌肽D转基因酵母的培养及表达产物的分析 被引量：2

9

作者 马礼金 庄楚雄 黄自然 《蚕业科学》 CAS CSCD 1995年第1期42-46,共5页

采用碱金属法（醋酸锂盐），以大肠杆菌－酵母穿梭质粒表达载体在酵母中表达人工合成的柞蚕抗菌肽Ｄ基因。用电泳及抗菌肽活性检测法对表达产物进行分析。同时还研究了转基因酵母的发酵条件，如温度、ｐＨ及营养等对酵母表达的影响。试... 采用碱金属法（醋酸锂盐），以大肠杆菌－酵母穿梭质粒表达载体在酵母中表达人工合成的柞蚕抗菌肽Ｄ基因。用电泳及抗菌肽活性检测法对表达产物进行分析。同时还研究了转基因酵母的发酵条件，如温度、ｐＨ及营养等对酵母表达的影响。试验结果表明转基因酵母表达产物为１．１４ｍｇ／Ｌ培养液，杀菌活力为０．２１６单位。 展开更多

关键词 柞蚕 抗菌肽d基因 酵母

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双价抗菌肽基因表达载体的构建 被引量：1

10

作者 张银东 金小平 +2 位作者 曾宪松 彭存智 郑学勤 《热带作物学报》 CSCD 1994年第S1期61-66,共6页

将人工合成的抗菌肽Ｄ基因和抗菌肽Ｂ基因克隆到同一植物表达载体ｐＢⅠ１２１，且各自具有其３５ｓ启动子和Ｎｏｓ终止子。先将抗菌肽Ｄ基因及其启动子和终止子克隆到ｐＢ１２１ＨｉｎｄⅢ位点获得ｐＥＣＶⅠ重组子。然后将抗菌肽Ｂ基... 将人工合成的抗菌肽Ｄ基因和抗菌肽Ｂ基因克隆到同一植物表达载体ｐＢⅠ１２１，且各自具有其３５ｓ启动子和Ｎｏｓ终止子。先将抗菌肽Ｄ基因及其启动子和终止子克隆到ｐＢ１２１ＨｉｎｄⅢ位点获得ｐＥＣＶⅠ重组子。然后将抗菌肽Ｂ基因克隆到ｐＥＣＶⅠ的ＢａｍＨⅠ位点，经Ａｇａｒｏｓｅｇｅｌ检测和酶切鉴定获得具有抗菌肽Ｄ，抗菌肽Ｂ基因的双价基因表达载体ｐＥＣＶⅡ。 展开更多

关键词 抗菌肽d基因 抗菌肽B基因 双价抗菌肽基因植物表达载体

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影响根癌农杆菌介导的丰香草莓遗传转化因素分析 被引量：8

11

作者 秦永华 张上隆 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期461-465,共5页

将构建的携带NPTⅡ和AP-D基因的植物表达载体pBI121导入根癌农杆菌EH105中后,用其对草莓主栽品种丰香叶盘进行遗传转化,探讨了卡那霉素（Kan）的浓度、菌液浓度、侵染时间、预培养时间、共培养时间和筛选方式等因素对转化率的影响。结... 将构建的携带NPTⅡ和AP-D基因的植物表达载体pBI121导入根癌农杆菌EH105中后,用其对草莓主栽品种丰香叶盘进行遗传转化,探讨了卡那霉素（Kan）的浓度、菌液浓度、侵染时间、预培养时间、共培养时间和筛选方式等因素对转化率的影响。结果表明：丰香草莓适宜的转化条件是Kan筛选浓度为20 mg/L,预培养时间为2-3 d,菌液浓度OD6000.3-0.5,侵染时间10-20 min;共培养2-3 d后将外植体接到含有5 mg/L Kan和500 mg/L Carb的诱导培养基上进行培养,以后每次继代逐步提高Kan选择压力至终浓度20 mg/L（每次增加5 mg/L）;或共培养2-3 d后将外植体接到含有500 mg/L Carb的诱导培养基上,培养2周后继代到含20 mg/L Kan和400 mg/L Carb的培养基上进行选择培养。根据PCR检测结果,抗性愈伤组织转化率高达18.5%。抗性愈伤组织经进一步诱导,最后获得了17株抗性植株。本文探讨了影响丰香草莓转化的多个因素,以期建立高效的遗传转化体系,为草莓属植物种质的遗传转化奠定基础。 展开更多

关键词 草莓 抗菌肽d基因 载体构建 遗传转化

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