将重组载体pet32a-19肽转化到表达宿主菌大肠杆菌中,对其进行摇瓶发酵实验来优化重组蛋白在大肠杆菌中的诱导表达条件。通过Ni Sepharose 6 Fast Flow对重组蛋白进行纯化,用梯度透析的方法进行复性。结果表明:筛选出了pET32a-19肽-BL21(...将重组载体pet32a-19肽转化到表达宿主菌大肠杆菌中,对其进行摇瓶发酵实验来优化重组蛋白在大肠杆菌中的诱导表达条件。通过Ni Sepharose 6 Fast Flow对重组蛋白进行纯化,用梯度透析的方法进行复性。结果表明:筛选出了pET32a-19肽-BL21(DE3)高效表达菌株,在发酵条件为培养基的pH7.0、接种量3%、IPTG浓度0.1mmol/L、IPTG添加时间OD600为0.7、诱导温度41℃和诱导时间5h时蛋白表达量最高,为54.57mg/L,得到纯度为95%以上的融合抗肿瘤19肽,并成功复性出融合蛋白。展开更多
抗肿瘤蛋白Mere15是从海洋生物文蛤中获得的抗肿瘤多肽。前期研究表明,Mere15具有显著的体内外抗肿瘤活性,但其在文蛤体液中含量极低。利用简并引物技术克隆了Mere15的全基因序列,并在大肠杆菌中获得高效表达。利用亲和层析技术纯化目...抗肿瘤蛋白Mere15是从海洋生物文蛤中获得的抗肿瘤多肽。前期研究表明,Mere15具有显著的体内外抗肿瘤活性,但其在文蛤体液中含量极低。利用简并引物技术克隆了Mere15的全基因序列,并在大肠杆菌中获得高效表达。利用亲和层析技术纯化目的蛋白,经透析除去盐和超滤浓缩,获得Mere融合蛋白,SDS-PAGE分析表明,目的蛋白分子量为33 k Da。MTT结果表明,目的蛋白对多种肿瘤细胞具有显著的抑制作用,为海洋抗肿瘤蛋白研究提供了新的思路,对抗肿瘤新药Mere15的开发应用也有一定的价值。展开更多
基金supported by the Natural Science Foundation of Zhejiang Province (No.Y3100129)the Scientific Research Foundation of Zhejiang Province (No.Y200907990)the College Students Sci-ence and Technology Innovation Program of Zhejiang Province
文摘将重组载体pet32a-19肽转化到表达宿主菌大肠杆菌中,对其进行摇瓶发酵实验来优化重组蛋白在大肠杆菌中的诱导表达条件。通过Ni Sepharose 6 Fast Flow对重组蛋白进行纯化,用梯度透析的方法进行复性。结果表明:筛选出了pET32a-19肽-BL21(DE3)高效表达菌株,在发酵条件为培养基的pH7.0、接种量3%、IPTG浓度0.1mmol/L、IPTG添加时间OD600为0.7、诱导温度41℃和诱导时间5h时蛋白表达量最高,为54.57mg/L,得到纯度为95%以上的融合抗肿瘤19肽,并成功复性出融合蛋白。
文摘抗肿瘤蛋白Mere15是从海洋生物文蛤中获得的抗肿瘤多肽。前期研究表明,Mere15具有显著的体内外抗肿瘤活性,但其在文蛤体液中含量极低。利用简并引物技术克隆了Mere15的全基因序列,并在大肠杆菌中获得高效表达。利用亲和层析技术纯化目的蛋白,经透析除去盐和超滤浓缩,获得Mere融合蛋白,SDS-PAGE分析表明,目的蛋白分子量为33 k Da。MTT结果表明,目的蛋白对多种肿瘤细胞具有显著的抑制作用,为海洋抗肿瘤蛋白研究提供了新的思路,对抗肿瘤新药Mere15的开发应用也有一定的价值。
