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贵州野生天麻抗真菌肽基因表达载体的构建 被引量:1
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作者 何光志 田维毅 +12 位作者 王平 王文佳 奚锦 愈奇 刘蕾 黄高 蔡琨 韩洁 王乾宇 刘安胜 安传伟 查高武 张鹏 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2011年第8期6-8,共3页
为了构建凤冈野生天麻的抗真菌肽基因(gaf)的表达载体,经BamHI和HindIII酶切的pMD18-T-gaf和pET32a(+)质粒的纯化回收产物并进行连接,连接产物pET32a(+)-gaf转化大肠杆菌感受态细胞DH5α后,采用菌落PCR、酶切鉴定和阳性质粒测序分析。... 为了构建凤冈野生天麻的抗真菌肽基因(gaf)的表达载体,经BamHI和HindIII酶切的pMD18-T-gaf和pET32a(+)质粒的纯化回收产物并进行连接,连接产物pET32a(+)-gaf转化大肠杆菌感受态细胞DH5α后,采用菌落PCR、酶切鉴定和阳性质粒测序分析。结果表明:构建的凤冈野生天麻抗真菌肽基因表达载体通过菌落PCR、酶切鉴定和阳性质粒测序分析,目的片段成功插入载体,目的片段与预期的gaf基因大小(545 bp)相符。试验成功构建了贵州野生天麻抗真菌肽基因表达载体,pET32a(+)-gaf可以用来制备抗真菌蛋白。 展开更多
关键词 野生天麻 抗真菌肽基因 表达载体 构建 贵州
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凤冈野生天麻抗真菌肽基因(gaf)的克隆与序列分析 被引量:1
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作者 何光志 田维毅 +10 位作者 王平 王文佳 奚锦 俞琦 黄高 蔡琨 王乾宇 刘安胜 安传伟 查高武 张鹏 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2011年第7期28-30,33,共4页
为了克隆凤冈野生天麻的抗真菌肽基因(gaf),以凤冈野生天麻的RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增抗真菌肽基因(gaf),经克隆和测序结果显示:RT-PCR产物电泳扩增的目标条带长度为545 bp;经测序和序列分析,该基因与Genebank中公布的序列编码天... 为了克隆凤冈野生天麻的抗真菌肽基因(gaf),以凤冈野生天麻的RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增抗真菌肽基因(gaf),经克隆和测序结果显示:RT-PCR产物电泳扩增的目标条带长度为545 bp;经测序和序列分析,该基因与Genebank中公布的序列编码天麻抗真菌蛋白的基因序列(AY032588)同源性达97%。此研究成功地克隆了凤冈野生天麻抗真菌肽编码基因。 展开更多
关键词 野生天麻 抗真菌肽基因(gaf) 克隆 序列分析
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黑腹果蝇抗真菌肽基因Drs和Drs-lC在原核中的表达及抗菌活性的初步测定
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作者 邓小娟 桑延霞 +4 位作者 杨婉莹 钟仰进 黄亚东 曹阳 温硕洋 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期264-267,共4页
对黑腹果蝇(Drosophila m elanogaster)抗真菌肽基因Drs和它的同系物基因Drs-lC在pET-21d载体中与T7.Tag标签序列进行了融合表达,并对融合表达产物进行Xa因子切割前后的抗菌活性测定。首先通过长引物PCR获得5′端带有Xa因子识别切割序列... 对黑腹果蝇(Drosophila m elanogaster)抗真菌肽基因Drs和它的同系物基因Drs-lC在pET-21d载体中与T7.Tag标签序列进行了融合表达,并对融合表达产物进行Xa因子切割前后的抗菌活性测定。首先通过长引物PCR获得5′端带有Xa因子识别切割序列的Drs和Drs-lC,分别克隆至pET-21d表达载体上,然后转化E.coliO rigam i(DE3),筛选得到阳性克隆。以IPTG诱导目的基因与载体上的T7.Tag标签序列融合表达,将表达产物进行初步纯化后,以Xa因子进行切割处理,然后测定处理前后样品的抗菌活性。结果显示与T7.Tag标签序列融合表达的D rs、D rs-lC样品和经Xa因子切割后的样品对供试真菌黄色镰刀菌(Fusarium culm orum)、尖孢镰孢菌(Fusarium oxs-porum)和粗糙脉孢菌(Neuropora crassa)均有明显的抑制作用。 展开更多
关键词 黑腹果蝇 抗真菌肽基因 DRS Drs-lC 融合表达 抗菌活性
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