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菊苣质体同源片段的克隆及非抗生素标记的质体定点整合表达载体构建 被引量：3
1
作者 王玉华 郝建国 贾敬芬 《草业学报》 CSCD 北大核心 2009年第6期72-81,共10页
依据烟草、玉米、拟南芥和大豆质体基因组rps7基因和16S rDNA基因的保守序列设计引物,以菊苣质体基因组DNA为模板,PCR扩增到1段4.8 kb的片段。序列分析表明,该片段全长4 751 bp(GenBank登录号为GQ199478),包括449 bp的rps7基因5′端序列... 依据烟草、玉米、拟南芥和大豆质体基因组rps7基因和16S rDNA基因的保守序列设计引物,以菊苣质体基因组DNA为模板,PCR扩增到1段4.8 kb的片段。序列分析表明,该片段全长4 751 bp(GenBank登录号为GQ199478),包括449 bp的rps7基因5′端序列、793 bp的rps12基因、72 bp的trnV基因、1 315 bp的16S rDNA基因5′端以及大部分的基因间隔区,该序列与烟草对应区段的相似性为92%,与莴苣对应区段的相似性为97%。以此片段作为定点整合外源基因的同源重组片段,构建了非抗生素标记的菊苣质体定点整合表达载体pJBADH-GFP,酶切分析及PCR检测证明构建的载体符合预期设计。该载体的构建为建立高效、稳定的菊苣质体转化和无抗生素筛选体系奠定基础,为进一步通过质体基因工程手段将更多感兴趣的基因导入菊苣进行遗传改良,或以菊苣质体作生物反应器生产动物口服疫苗等搭建技术平台。 展开更多
关键词 菊苣 质体同源片段 非抗生素标记 定点整合 表达载体
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甜菜碱合成酶CMO、BADH基因无抗生素标记植物表达载体的构建
2
作者 邓川 高翎 +2 位作者 张君 宋冰 王丕武 《种子》 CSCD 北大核心 2011年第6期13-15,18,共4页
利用基因工程技术,对植物表达载体进行改造,去除NptⅡ、Hyg等抗生素标记,获得安全载体骨架,分别构建了无抗生素选择标记的CMO、BADH以及双价基因的植物表达载体pROK-CMO、pCAMBIA-1301-BADH1、pCAMBIA-1301-CMO+BADH。通过冻融法将其转... 利用基因工程技术,对植物表达载体进行改造,去除NptⅡ、Hyg等抗生素标记,获得安全载体骨架,分别构建了无抗生素选择标记的CMO、BADH以及双价基因的植物表达载体pROK-CMO、pCAMBIA-1301-BADH1、pCAMBIA-1301-CMO+BADH。通过冻融法将其转入根癌农杆菌LBA4404中得到工程菌株,为下一步安全转化奠定基础。 展开更多
关键词 甜菜碱 CMO BADH 无抗生素标记 植物表达载体
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小球藻的沼液驯化、抗生素敏感性分析和选择标记筛选
3
作者 张红兵 史秀英 +2 位作者 李会宣 李磊 李文涛 《化学与生物工程》 CAS 2020年第4期22-27,共6页
通过平板划线法从河北的部分河流中筛选到5株小球藻,经奶牛养殖废水沼液驯化后得到优势藻株,通过18S rDNA序列分析和系统发育树构建对优势藻株种属进行鉴定,并比较了其对G418、氨苄青霉素和潮霉素的敏感性。结果表明,藻株X-1在奶牛养殖... 通过平板划线法从河北的部分河流中筛选到5株小球藻,经奶牛养殖废水沼液驯化后得到优势藻株,通过18S rDNA序列分析和系统发育树构建对优势藻株种属进行鉴定,并比较了其对G418、氨苄青霉素和潮霉素的敏感性。结果表明,藻株X-1在奶牛养殖废水沼液中的适应能力最强,对沼液中总氮、总磷和COD的去除能力最强;藻株X-1与Chlorella sp.的相似度最高;小球藻X-1对G418的敏感性最强,G418可作为小球藻X-1基因工程中的选择标记抗生素,最佳浓度为160μg·mL^-1。该研究为小球藻X-1利用G418作为选择标记构建表达载体、转化小球藻、培养无菌藻系提供了实验依据。 展开更多
关键词 小球藻 沼液驯化 抗生素敏感性分析 抗生素标记 筛选
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裙带菜(Undaria pinnatifida)配子体对四种抗生素的敏感性研究 被引量：5
4
作者 李大鹏 熊艳 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期255-260,共6页
采用显微计数的方法获得潮霉素、氯霉素、卡那霉素、硫酸链霉素等抗生素对裙带菜雌、雄配子体的致死率,通过统计分析研究了雌雄配子体对这些抗生素的敏感性。结果表明,裙带菜雌雄配子体对潮霉素和氯霉素敏感,482.7μg/ml潮霉素分别在第9... 采用显微计数的方法获得潮霉素、氯霉素、卡那霉素、硫酸链霉素等抗生素对裙带菜雌、雄配子体的致死率,通过统计分析研究了雌雄配子体对这些抗生素的敏感性。结果表明,裙带菜雌雄配子体对潮霉素和氯霉素敏感,482.7μg/ml潮霉素分别在第9、10天使雄配子体、雌配子体全部致死;雌雄配子体对氯霉素的敏感性还存在明显的差异,第8天氯霉素对雌雄配子体的半致死剂量分别是218.78μg/ml和371.54μg/ml。配子体对卡那霉素,硫酸链霉素相对不敏感,6000kU/L卡那霉素和800μg/ml的硫酸链霉素作用10天后雌雄配子体均无明显死亡现象。潮霉素和氯霉素可以作为裙带菜配子体的筛选试剂。 展开更多
关键词 裙带菜 雌雄配子体 抗生素 选择标记
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棉花黄萎病拮抗细菌Z-5菌株的定殖能力检测 被引量：13
5
作者 张冬冬 刘涛 +4 位作者 高同国 姜军坡 雷白时 王世英 朱宝成 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2013年第6期510-516,共7页
拮抗微生物能否在植株根围成功定殖是植物病害生物防治的第一步。以棉田土壤中分离的对棉花黄萎病有较高生物防治效果的芽孢杆菌Z-5菌株为材料,采用抗利福平和抗病原真菌法标记Z-5菌株,筛选出在300μg·mL-1利福平的NA培养基上稳定... 拮抗微生物能否在植株根围成功定殖是植物病害生物防治的第一步。以棉田土壤中分离的对棉花黄萎病有较高生物防治效果的芽孢杆菌Z-5菌株为材料,采用抗利福平和抗病原真菌法标记Z-5菌株,筛选出在300μg·mL-1利福平的NA培养基上稳定生长,对棉花黄萎病病原真菌有拮抗作用、菌落形态和菌体形态均未改变的Z-5突变体菌株。利用标记的Z-5菌株对棉花种子进行浸种、拌种和浇土处理,在含有利福平的平板上通过稀释涂布法定期检测棉花植株根际土壤、根、茎、叶中Z-5菌株的数量。结果表明,浇土组棉花根际土壤拮抗细菌Z-5平均数量为49.72×104cfu·g-1,浸种组为0.49×104cfu·g-1,拌种组为2.07×104cfu·g-1。浇土组根内Z-5平均数量为4.93×104cfu·g-1,浸种组为4.12×104cfu·g-1,拌种组为3.29×104cfu·g-1。浇土组茎内Z-5平均数量为1.32×104cfu·g-1,浸种组为0.17×104cfu·g-1,拌种组为0.74×104cfu·g-1。浇土组叶片Z-5平均数量为0.27×104cfu·g-1,浸种组为0.17×104cfu·g-1,拌种组为0.22×104cfu·g-1。表明Z-5菌株能够在棉花根际土壤及植株体内有效定殖;采用浇土法处理棉花种子,Z-5菌株在棉花植株体内及根际土壤定殖效果最好,优于浸种法和拌种法。 展开更多
关键词 棉花黄萎病 拮抗 定殖 抗生素标记
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海洋细菌L_1-9双抗菌株的定殖能力及其对黄瓜枯萎病的防治作用 被引量：5
6
作者 王军强 汪晶晶 +4 位作者 王琦 马桂珍 暴增海 王淑芳 周向红 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期193-198,共6页
采用抗生素标记法,对海洋多黏类芽孢杆菌L1-9菌株进行标记,抗性菌株L1-9Str,rif对链霉素和利福平的抗性浓度分别为160μg/m L和20μg/m L。双抗菌株L1-9Str,rif的抑菌特性及其对链霉素和利福平的抗性经多次传代仍比较稳定。盆栽试验表明... 采用抗生素标记法,对海洋多黏类芽孢杆菌L1-9菌株进行标记,抗性菌株L1-9Str,rif对链霉素和利福平的抗性浓度分别为160μg/m L和20μg/m L。双抗菌株L1-9Str,rif的抑菌特性及其对链霉素和利福平的抗性经多次传代仍比较稳定。盆栽试验表明,该双抗菌株能在黄瓜根部土壤及根组织、茎基部、子叶和真叶组织中定殖。菌株L1-9Str,rif在黄瓜外根际、根际和根表土壤及黄瓜组织中的定殖动态基本一致,初期黄瓜组织中L1-9Str,rif菌量较少,随着时间的延长,菌量逐渐增加,达到高峰后逐渐减少。菌株L1-9Str,rif在根表土壤中菌量最多(1.76×109 CFU/g),其次是根际土壤,外根际土壤中菌量较少;在黄瓜组织中,菌株L1-9Str,rif其在子叶中的定殖能力最强(5.63×104 CFU/g),其次是根和茎基部(0-2 cm);调查至第26 d时在根部土壤中的含菌量仍保持在稳定的水平,其中根表土壤中含菌量最高(2.41×107 CFU/g),在黄瓜组织样品中,子叶中的含菌量最高(4.15×104 CFU/g);温室防病实验结果表明,菌株L1-9和L1-9Str,rif菌株对黄瓜枯萎病具有良好的防治效果,不同时期防效均达70%以上。上述结果表明来自海洋的多黏类芽孢杆菌L1-9菌株能在黄瓜根部土壤及幼苗组织中定殖,是一株有潜力的黄瓜枯萎病生防菌株。 展开更多
关键词 海洋细菌 多黏类芽孢杆菌 抗生素标记 黄瓜枯萎病 定殖
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一株枯草芽孢杆菌GX7在鸡粪中的定殖及发酵作用的研究 被引量：3
7
作者 敖静 李杨 +1 位作者 刘晓辉 高晓梅 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2019年第5期867-873,共7页
【目的】研究枯草芽孢杆菌GX7在鸡粪中的定殖情况,及其在鸡粪发酵过程中的作用。【方法】对枯草芽孢杆菌GX7进行抗生素标记,并在鸡粪发酵中添加菌剂,通过鸡粪的堆肥发酵试验,测定未加菌剂、加入GX7菌剂与加入复合菌剂的物料发酵中含水... 【目的】研究枯草芽孢杆菌GX7在鸡粪中的定殖情况,及其在鸡粪发酵过程中的作用。【方法】对枯草芽孢杆菌GX7进行抗生素标记,并在鸡粪发酵中添加菌剂,通过鸡粪的堆肥发酵试验,测定未加菌剂、加入GX7菌剂与加入复合菌剂的物料发酵中含水量、全氮、全磷、全钾以及有机碳等参数。【结果】GX7在鸡粪中有很好的定殖能力,回接至鸡粪中10 d后,存活菌数仍有1.3×10^2 CFU/g。鸡粪堆肥发酵试验中,加入复合菌剂的处理发酵时间缩短了3~5 d;含水量分别下降到29.0%、23.2%和22.1%;全磷含量提高到0.98%、1.02%和1.12%;全钾含量提高到2.53%、2.55%和2.65%;有机碳含量均下降了约10%。【结论】GX7作为单一菌株的菌剂,在堆肥发酵的高温阶段有一定作用,但发挥作用较局限。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 抗生素标记 定殖能力
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拮抗葡萄灰霉病贝莱斯芽孢杆菌的生长特征及对相关防御酶活性的影响 被引量：10
8
作者 邹强 牛新湘 +11 位作者 刘萍 杨红梅 楚敏 王宁 林青 包慧芳 詹发强 张雨萌 王静怡 佐长赓 娄恺 史应武 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2023年第15期126-133,共8页
为了明确贝莱斯芽孢杆菌TP-1对葡萄灰霉病的抗病机制,通过抗生素标记法筛选抗性标记菌株,成功获得能抗300μg/mL利福平的标记菌株TP-1R,研究了标记菌株的抗性遗传稳定性及其对葡萄灰霉病的拮抗作用,并分析其在葡萄中的定殖情况以及对葡... 为了明确贝莱斯芽孢杆菌TP-1对葡萄灰霉病的抗病机制,通过抗生素标记法筛选抗性标记菌株,成功获得能抗300μg/mL利福平的标记菌株TP-1R,研究了标记菌株的抗性遗传稳定性及其对葡萄灰霉病的拮抗作用,并分析其在葡萄中的定殖情况以及对葡萄果实内防御酶活性的影响。结果表明,标记菌株在经15次传代培养后,仍能在含利福平的培养基中稳定生长,且标记菌株对灰霉病的拮抗作用与原始菌株无明显差异。检测到标记菌株在葡萄上的定殖量于贮藏(20℃)第15 d达到峰值,为4.32×10^(6)CFU/g,在贮藏第30 d菌株定殖数量仍可达到3.11×10^(6)CFU/g,菌株TP-1能在葡萄上稳定定殖;接种菌株TP-1发酵液能有效抑制灰霉病的发生,降低葡萄采后腐烂率。在贮藏期间,葡萄防御酶PAL、PPO、APX活性均呈先上升后下降的趋势,拮抗菌TP-1处理组的3种酶活性显著高于CK(P<0.05),在第15 d时,拮抗菌处理组PAL、PPO、APX活性是CK的1.23、1.19、2.01倍。菌株TP-1在葡萄上的定殖可诱导葡萄PAL、PPO、APX活性的提高,在一定程度上增强了葡萄对灰霉病的抗性。本研究为揭示贝莱斯芽孢杆菌TP-1的生防机理及应用提供了科学依据。 展开更多
关键词 贝莱斯芽孢杆菌 定殖 酶活性 灰霉病 抗生素标记
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热球菌目(Thermococcales)遗传操作系统研究与应用进展
9
作者 付寅坤 肖湘 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期28-34,共7页
热球菌目(Thermococcales)是一类分离自浅海热泉或者深海热液口的超嗜热微生物,包括火球菌(Pyrococcus)、热球菌(Thermococcus)、古老球菌(Palaeococcus)。研究其生命活动的分子机制,基因的功能等必须借助遗传操作系统。由于选择标记的... 热球菌目(Thermococcales)是一类分离自浅海热泉或者深海热液口的超嗜热微生物,包括火球菌(Pyrococcus)、热球菌(Thermococcus)、古老球菌(Palaeococcus)。研究其生命活动的分子机制,基因的功能等必须借助遗传操作系统。由于选择标记的限制,Thermococcales遗传操作系统落后于其他菌株。近年来,在Thermococcales发现了内源质粒并可以将其改造用作遗传工具。如在Thermococcus kodakarensis及Pyrococcus furious等菌株内都建立了成熟的遗传系统,并用于基因敲除以及基因表达。将就Thermococcales内源质粒的发现和遗传操作系统的发展与应用加以阐述。 展开更多
关键词 Thermococcales 遗传操作系统 营养缺陷标记 抗生素标记 穿梭载体
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