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题名黑暗链霉菌DNA同源重组系统的构建
被引量：11
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作者
朱碧银
洪文荣
严绍德
朱宝泉
林玉双
封成军
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机构
福州大学生物科学与工程学院
上海医药工业研究院
常州方圆制药有限公司
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出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第4期162-166,共5页
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基金
国家自然科学基金项目(31070093/30801449)
福建省教育厅科研项目(2007F5070)
国家综合性新药研究开发技术大平台项目(2009ZX09301-007)
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文摘
以黑暗链霉菌Tt-49基因组为模板,利用PCR方法,扩增安普霉素生物合成关键基因aprF-G的上、下游序列,作为同源交换臂,并将红霉素抗性基因筛选标记及其启动子插入两交换臂之间,以温敏型质粒pKC1139为基础,构建用于阻断黑暗链霉菌Tt-49安普霉素生物合成的重组质粒pFD8。该质粒通过E.coli ET12567/pUZ8002去甲基化修饰后,经接合转移进入黑暗链霉菌Tt-49,利用红霉素抗性筛选得到3株阳性转化子,分别命名为Tt-49 AG1、Tt-49 AG2和Tt-49 AG3。通过PCR鉴定,证明pFD8已插入黑暗链霉菌Tt-49基因组的目标位点。以亲株作对照,对3株工程菌进行红霉素抗性能力考察,发现3株工程菌的抗红霉素能力均高达1 000μg/mL以上。
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关键词
黑暗链霉菌
抗生素基因组学
同源重组
安普霉素
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Keywords
Streptomyces tenebrarius Antibiotic genomics Homologous recombination Apramycin
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分类号
TQ927
[轻工技术与工程—发酵工程]
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