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抗独特型抗体在食用农产品危害物监控中的应用研究 被引量:4
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作者 徐重新 张霄 +8 位作者 刘媛 胡晓丹 朱庆 仲建锋 卢丽娜 林曼曼 高美静 谢雅晶 刘贤金 《食品科学技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期103-110,共8页
食用农产品质量安全危害物来源广、种类多,从产地环境到农业投入品再到收储运环节,生物、化学污染物危害风险几乎伴随整个产供链。对危害物的高效监测,以及探索更为安全的危害物(特别是高毒投入品)替代功能效应物是食用农产品质量安全... 食用农产品质量安全危害物来源广、种类多,从产地环境到农业投入品再到收储运环节,生物、化学污染物危害风险几乎伴随整个产供链。对危害物的高效监测,以及探索更为安全的危害物(特别是高毒投入品)替代功能效应物是食用农产品质量安全监控可持续发展的必然要求。基于“免疫网络学说”的抗独特型抗体,因具有模拟抗原表位构象乃至生物活性的特性,已被证实可以用于免疫原功能效应物创制,这为食用农产品质量安全危害物检测或功能替代材料研发提供了新思路。系统梳理了食用农产品产供过程中可能涉及的危害物及其安全风险;全面整理并介绍了抗独特型抗体技术及其在食用农产品质量安全危害物监控中的应用状况;结合作者及所在团队近年科研成果,探讨了抗独特型抗体在食用农产品质量安全危害物监控中的应用前景、存在问题以及拟解决对策。 展开更多
关键词 抗独特型抗体 食用农产品 质量安全 免疫分析 生物防控
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抗独特型抗体ELISA检测日本血吸虫病治疗后病人血清抗体 被引量:5
2
作者 施文艳 黄连春 +1 位作者 陶如华 黄珺 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期166-167,共2页
关键词 检测 日本血吸虫病 血清 抗独特型抗体 酶联免疫吸附试验
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抗独特型抗体对小鼠移植低免疫反应状态的诱导作用 被引量:1
3
作者 杨雁灵 窦科峰 +2 位作者 李开宗 董光龙 张新海 《医学研究生学报》 CAS 2002年第5期398-401,共4页
目的 :探讨抗独特型抗体对小鼠移植耐受的诱导作用。 方法 :以C5 7BL/ 6小鼠脾细胞免疫BALB/c小鼠制备抗同种异品系抗体 (Ab1) ,Ab1交联KLH后 ,免疫BALB/c小鼠诱导产生抗独特型多克隆抗体 (Ab2 ) ,以此为移植受体 ,观察Ab2对小鼠心脏... 目的 :探讨抗独特型抗体对小鼠移植耐受的诱导作用。 方法 :以C5 7BL/ 6小鼠脾细胞免疫BALB/c小鼠制备抗同种异品系抗体 (Ab1) ,Ab1交联KLH后 ,免疫BALB/c小鼠诱导产生抗独特型多克隆抗体 (Ab2 ) ,以此为移植受体 ,观察Ab2对小鼠心脏移植耐受的诱导作用。 结果 :Ab1交联KLH和弗氏佐剂免疫可有效地诱导Ab2 ,与对照组相比 ,Ab2诱导组的小鼠移植物存活时间明显延长。 结论 :移植前在受体体内诱导产生以移植物抗原为模拟抗原的Ab2 。 展开更多
关键词 抗独特型抗体 小鼠 移植 低免疫反应状态 诱导作用 排斥反应 抗独特型抗体
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抗独特型抗体对猪繁殖与呼吸综合征病毒感染的免疫作用 被引量:1
4
作者 胡永浩 龚振华 蒋正军 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期272-277,共6页
用PRRSV感染SPF猪,血清检测结果显示,机体不仅产生抗PRRSV抗原的各种抗体(Ab1),而且产生针对这些抗体的抗独特型抗体(Ab2).根据各种蛋白质的等电点不同,应用IEF技术分离纯化出PRRSV感染猪血清中的不同IgG.分别以纯化的抗PRRSV-GP5蛋白、... 用PRRSV感染SPF猪,血清检测结果显示,机体不仅产生抗PRRSV抗原的各种抗体(Ab1),而且产生针对这些抗体的抗独特型抗体(Ab2).根据各种蛋白质的等电点不同,应用IEF技术分离纯化出PRRSV感染猪血清中的不同IgG.分别以纯化的抗PRRSV-GP5蛋白、抗PRRSV-M蛋白的Ab2免疫SPF猪各5头,7 d后经鼻腔感染PRRSV,定期采集血样进行病毒分离或鉴定试验.抗PRRSV-GP5蛋白的Ab2免疫的猪,其血样自感染后3~7 d均检出PRRSV;3头猪在感染后14~63 d未检出PRRSV 2头猪在感染后14~35 d检出PRRSV,从42~56d转为阴性,其中1头猪在63 d时检出PRRSV.抗PRRSV-M蛋白的Ab2免疫的猪,其血样自感染后3~7 d均检出PRRSV;2头猪在感染后14~63 d未检出PRRSV 3头猪在感染后14~35 d检出PRRSV,从42~56 d转为阴性,其中1头猪在63 d时检出PRRSV.抗PRRSV-GP5和抗PRRSV-M蛋白的Ab2免疫作用显著,可作为PRRSV-GP5和PRRSV-M蛋白的替代抗原产生具有中和效应的抗体,保护机体免受PRRSV的感染. 展开更多
关键词 检出 感染后 GP M蛋白 抗独特型抗体 免疫作用 血样 PRRSV SPF猪 猪繁殖与呼吸综合征病毒
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抗兔出血症病毒抗体的抗独特型抗体的杂交瘤细胞的建立(英文)
5
作者 盛祖恬 周明龙 +4 位作者 唐建东 肖振国 杜念兴 杜青云 何秉耀 《浙江农业学报》 CSCD 1995年第3期217-221,共5页
为研究抗独特型抗体的作用,采用纯化的兔出血症病毒(RHDV)免疫小鼠所得的杂交瘤细胞及其对兔抗RHDV抗体的结合能力的试验。结果表明,该试验能产生独特型抗体(Ab2),称之AI-1,作者认为这是首次以病毒抗原免疫小鼠直接获得抗独特... 为研究抗独特型抗体的作用,采用纯化的兔出血症病毒(RHDV)免疫小鼠所得的杂交瘤细胞及其对兔抗RHDV抗体的结合能力的试验。结果表明,该试验能产生独特型抗体(Ab2),称之AI-1,作者认为这是首次以病毒抗原免疫小鼠直接获得抗独特型抗体。 展开更多
关键词 出血症病毒 抗独特型抗体 单克隆抗体 兔病
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抗大田软海绵酸单抗独特型抗体的制备及鉴定 被引量:4
6
作者 林超 王东旭 +6 位作者 任洪林 柳增善 周玉 李岩松 闫东明 王里奇 卢士英 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第11期110-113,共4页
目的:研制大田软海绵酸(okadaic acid,OA)单抗的独特型抗体并鉴定其模拟抗原特性,为建立无毒检测提供借鉴。方法:利用小鼠腹水法大量制备抗OA单抗,经辛酸饱和硫酸铵法纯化后用胃蛋白酶酶切制备F(ab’)2片段,免疫日本大耳白兔,取其血清,... 目的:研制大田软海绵酸(okadaic acid,OA)单抗的独特型抗体并鉴定其模拟抗原特性,为建立无毒检测提供借鉴。方法:利用小鼠腹水法大量制备抗OA单抗,经辛酸饱和硫酸铵法纯化后用胃蛋白酶酶切制备F(ab’)2片段,免疫日本大耳白兔,取其血清,琼脂扩散法检测血清抗体与抗OA单抗反应活性,ELISA方法鉴定血清抗体与抗OA单抗反应活性及与OA竞争活性。结果:该抗独特型抗体与抗OA单抗呈阳性反应,且可抑制抗OA单抗与固相抗原OA-OVA的结合。结论:制备的抗OA单抗的独特型抗体与OA抗原存在内影像的关系,可替代毒素用于检测。 展开更多
关键词 大田软海绵酸 F(ab’)2片段 抗独特型抗体 内影像
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抗独特型抗体及其在兽医领域中的应用前景
7
作者 钱纪元 邵华斌 《湖北畜牧兽医》 1997年第4期22-25,共4页
抗体分子可变区(V区)不仅能高度专一性地识别一种抗原并与之特异性结合,同时本身还可表现出抗原性.存在于抗体V区上的若干抗原决定簇称为独特位.它们的总和称为该抗体分子的个体基因型或独特型(id-iotype,Id).“免疫网络学说”
关键词 抗体 抗独特型抗体 兽医 生物技术
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抗玉米赤霉烯酮单抗独特型抗体制备与鉴定 被引量:2
8
作者 余涛 李大刚 +4 位作者 邓宁 向军俭 宋其芳 贾彦琼 王宏 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第3期184-187,共4页
目的:研制抗玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)单抗独特型抗体并鉴定其特性,为建立ZEN无毒检测方法提供理论依据。方法:在研制抗ZEN单抗的基础上,将IgG与KLH偶联作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,制备抗ZEN单抗独特型抗体;同时将经Protein G纯化... 目的:研制抗玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)单抗独特型抗体并鉴定其特性,为建立ZEN无毒检测方法提供理论依据。方法:在研制抗ZEN单抗的基础上,将IgG与KLH偶联作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,制备抗ZEN单抗独特型抗体;同时将经Protein G纯化的单抗用胃蛋白酶酶切获取Fab片段,作为检测原,并采用间接ELISA和间接竞争ELISA对抗独特型抗体特性进行鉴定。结果:所研制的抗独特型抗体能够与ZEN竞争结合ZEN单抗,与ZEN之间存在"内影像"关系。结论:成功研制抗ZEN单抗独特型抗体,可以替代ZEN标准品应用于ELISA检测。 展开更多
关键词 玉米赤霉烯酮 抗独特型抗体 FAB片段 内影像
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抗独特型抗体及其免疫学意义
9
作者 王钦富 《大连大学学报》 1993年第3期26-32,共7页
抗独特型抗体从发现至今,发展很快,是免疫学研究领域热点之一.业已在免疫应答调节理论、生物受体、自身免疫病、肿瘤免疫、AIDS 病、器官移植、疫苗制备和免疫学监测等方面取得了进展.深入广泛研究抗独特型抗体对某些疾病的发生、发展... 抗独特型抗体从发现至今,发展很快,是免疫学研究领域热点之一.业已在免疫应答调节理论、生物受体、自身免疫病、肿瘤免疫、AIDS 病、器官移植、疫苗制备和免疫学监测等方面取得了进展.深入广泛研究抗独特型抗体对某些疾病的发生、发展、监测及其防治具有重要的指导意义. 展开更多
关键词 抗独特型抗体 独特型
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抗独特型抗体的制备和应用
10
作者 王一成 《浙江畜牧兽医》 1994年第1期2-4,共3页
抗独特型抗体的制备和应用(浙江省农科院牧医所)王一成抗独特型(抗-Id)抗体是近年来生物技术研究的一个新领域,无论理论研究还是应用研究,都非常活跃,尤其作为人、畜疾病防治的一种新制剂,已展示出十分诱人的前景。关于独特... 抗独特型抗体的制备和应用(浙江省农科院牧医所)王一成抗独特型(抗-Id)抗体是近年来生物技术研究的一个新领域,无论理论研究还是应用研究,都非常活跃,尤其作为人、畜疾病防治的一种新制剂,已展示出十分诱人的前景。关于独特型的结构基础,抗独特型抗体的分类和... 展开更多
关键词 抗体 制备 抗独特型抗体 应用
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抗独特型抗体在小分子农药、真菌毒素免疫检测中的应用 被引量:5
11
作者 刘媛 梁颖 +2 位作者 王耘 贺江 刘贤进 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第3期398-402,共5页
小分子农药、真菌毒素免疫分析技术的发展,存在难以实现多残留检测、标准品昂贵且不易获得和检测灵敏度受限制等制约因素,而抗独特型抗体技术可以为这些问题的解决提供新的思路。文章阐述了抗独特型抗体的基本原理,该技术在小分子食品... 小分子农药、真菌毒素免疫分析技术的发展,存在难以实现多残留检测、标准品昂贵且不易获得和检测灵敏度受限制等制约因素,而抗独特型抗体技术可以为这些问题的解决提供新的思路。文章阐述了抗独特型抗体的基本原理,该技术在小分子食品污染物免疫分析技术中的应用及优势,国内外在此领域的研究进展,以及该技术存在的制约因素与发展前景。 展开更多
关键词 抗独特型抗体 农药 真菌毒素 免疫分析
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抗HBs-抗独特型抗体与各型乙肝病毒感染者的关系
12
作者 冯掉 蒋自钟 +1 位作者 何少璋 徐建英 《广州医学院学报》 1993年第1期30-31,共2页
我们对133例各型乙肝病毒感染者进行了抗HBs-搞独特型抗体(抗HBs-抗Id检测),结果表明抗HBs-抗Id阳性率在乙型肝炎表面抗原(HBsAg)携带者、慢活肝、慢迁肝和急肝中分别为46.15%、32.50%、25.53%和12.12%;并且抗HBs-抗Id阳性率在乙型肝炎... 我们对133例各型乙肝病毒感染者进行了抗HBs-搞独特型抗体(抗HBs-抗Id检测),结果表明抗HBs-抗Id阳性率在乙型肝炎表面抗原(HBsAg)携带者、慢活肝、慢迁肝和急肝中分别为46.15%、32.50%、25.53%和12.12%;并且抗HBs-抗Id阳性率在乙型肝炎e抗原(HBeAg)和前S_2抗原(Pre-S_2-Ag)均阳性者中为62.07%(18/29),在HBeAg及乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV·DNA)阴性者中为12.12%(4/33)。提示抗HBs-抗Id与HBsAg持续状态有关,并与HBV的复制关系密切。 展开更多
关键词 HBs-抗独特型抗体 乙型肝炎病毒
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抗独特型抗体在鼠体内诱导产生口蹄疫病毒中和抗体
13
作者 A.E.Garmendia 郭伟干 《中国兽药杂志》 北大核心 1990年第4期56-58,共3页
应用口蹄疫病毒中和性单克隆抗体(AB_1)在兔体内诱生抗独特型抗体(a-IdAb)。以蛋白 A-Sepharose 分离兔 a-IdAb(AB_2),并通过亲和层析法反复提纯。经固相放射免疫试验和竞争性放射免疫试验测定 AB_2具有 AB_1表位特异性。以不同的方法... 应用口蹄疫病毒中和性单克隆抗体(AB_1)在兔体内诱生抗独特型抗体(a-IdAb)。以蛋白 A-Sepharose 分离兔 a-IdAb(AB_2),并通过亲和层析法反复提纯。经固相放射免疫试验和竞争性放射免疫试验测定 AB_2具有 AB_1表位特异性。以不同的方法和剂量给小鼠接种 AB_2(a-2 PD_(11))后,借放射免疫试验最先在第五周从接种50μgAB_2的小鼠检测到抗病毒抗体 AB_3),第六周 AB_3在接种50μg和5μg的免疫小鼠均达到最高水平,而接种50μg者 AB_3水平又比接种5μg的高三倍。此外,AB_3在组织培养和乳鼠保护试验中对口蹄疫病毒感染呈现中和作用。总之,经 AB_2免疫接种的小鼠产生不同程度的免疫反应。试验还以结合钥孔血蓝蛋白(KLH)的 a-2 PD_(11)给小鼠进行免疫接种,结果经皮下多点注射和脚掌注射的比经皮下单点注射的更早检出 AB_3。这些结果为口蹄疫疫苗制备中有可能以 a-IdAb 代替病毒的主要决定簇提供了证据。 展开更多
关键词 抗独特型抗体 诱导 口蹄疫病毒
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基于SpyCatcher/SpyTag的ZEN/DON抗独特型纳米抗体的体外自组装
14
作者 吴箫 梁赟 +3 位作者 钟于红 郭原臻 黄斌辉 何庆华 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2024年第24期147-156,共10页
为了提升真菌毒素抗独特型纳米抗体的免疫分析性能,并实现双特异性检测抗原的模拟,本研究以玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)的抗独特型纳米抗体N28、Z6为研究对象,将SpyCatcher/SpyTag标签与N28... 为了提升真菌毒素抗独特型纳米抗体的免疫分析性能,并实现双特异性检测抗原的模拟,本研究以玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)的抗独特型纳米抗体N28、Z6为研究对象,将SpyCatcher/SpyTag标签与N28、Z6分别进行融合表达,在此基础上基于体外自组装的方式,开展N28、Z6的双价、双特异性抗独特型纳米抗体的构建研究。结果表明,实现了四种SpyCatcher/SpyTag标签融合抗独特型纳米抗体N28-SpyCatcher、N28-SpyTag、Z6-SpyCatcher、Z6-SpyTag的原核可溶表达。基于Z6-SpyCatcher、Z6-SpyTag所建立的竞争抑制标准曲线的IC_(50)分别为0.18、0.20 ng/mL,其灵敏度高于单体Z6的IC_(50)(0.28 ng/mL);SpyCatcher标签与N28融合后有利于N28检测灵敏度的提升,IC_(50)值由94.39降低至42.33 ng/mL,而SpyTag标签与N28融合后,则抑制了其与DON抗体的结合。此外,在4℃反应12 h的简单反应条件下,基于SpyCatcher/SpyTag的体外自组装特性,成功制备了Z6、N28的双价、双特异性抗独特型纳米抗体Z6-Z6、N28-28与N28-Z6、Z6-N28。ELISA的鉴定结果表明,双价抗独特型纳米抗体均保留了与对应抗体的结合特性,其中N28-Z6还实现了同时与ZEN、DON抗体的结合活性,由于SpyTag标签与N28结合会阻碍其与DON抗体的结合,因此Z6-N28仅保留了与ZEN抗体结合的活性。综上,本研究基于SpyCatcher/SpyTag实现了ZEN/DON双价、双特异性抗独特型纳米抗体的简便快速制备,同时提示SpyCatcher标签对于ZEN/DON抗独特型纳米抗体的免疫分析性能提升具有促进作用。 展开更多
关键词 独特型纳米抗体 SpyCatcher/SpyTag 真菌毒素 玉米赤霉烯酮 脱氧雪腐镰刀菌烯醇
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抗独特型疫苗在兽医领域的研究进展 被引量:3
15
作者 李淑娜 蒋文灿 +1 位作者 郑维维 刘义铃 《动物医学进展》 CSCD 2008年第2期61-63,共3页
抗独特型抗体作为疫苗以其独特的优点为疫病的预防开辟了新的途径,它不仅能诱导体液免疫应答,亦能诱导细胞免疫应答。抗独特型疫苗能够刺激机体产生抗病毒、细菌、寄生虫感染的特异性和保护性免疫。近年来,在动物体内的试验结果表明,抗... 抗独特型抗体作为疫苗以其独特的优点为疫病的预防开辟了新的途径,它不仅能诱导体液免疫应答,亦能诱导细胞免疫应答。抗独特型疫苗能够刺激机体产生抗病毒、细菌、寄生虫感染的特异性和保护性免疫。近年来,在动物体内的试验结果表明,抗独特型疫苗能够刺激机体产生足够的免疫力,显示了巨大的研究和临床应用潜力。 展开更多
关键词 独特型疫苗 抗独特型抗体 单克隆抗体 杂交瘤技术
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动物抗独特型疫苗的研究进展
16
作者 李明 《养殖技术顾问》 2010年第7期97-97,共1页
抗独特型疫苗(anti-idiotype vaccine)是免疫调节网络学说发展到新阶段的产物。抗独特型抗体可以模拟抗原,刺激机体产生与抗原特异性抗体具有同等免疫效应的抗体,由此制成的疫苗称为抗独特型疫苗,又称内影像疫苗。抗独特型疫苗不仅能... 抗独特型疫苗(anti-idiotype vaccine)是免疫调节网络学说发展到新阶段的产物。抗独特型抗体可以模拟抗原,刺激机体产生与抗原特异性抗体具有同等免疫效应的抗体,由此制成的疫苗称为抗独特型疫苗,又称内影像疫苗。抗独特型疫苗不仅能诱导体液免疫应答,亦能诱导细胞免疫应答。近年来,国内外对有关独特型疫苗的报道越来越多。抗独特型疫苗可分为以下几类。 展开更多
关键词 抗独特型抗体 疫苗 动物 体液免疫应答 细胞免疫应答 特异性抗体 免疫调节 免疫效应
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兽医领域的几种抗独特型疫苗
17
作者 王吉庆 《养殖技术顾问》 2012年第1期228-228,共1页
在兽医领域,抗独特型抗体为研制新型动物疫苗、药物及免疫检测试剂提供了新思路,与兽医生物技术相融合,显示出广阔的发展前景。目前,已有许多用抗独特型抗体制作的实验室疫苗接种动物能抵抗病原的感染。但至今仍没有商品化产品,其主要... 在兽医领域,抗独特型抗体为研制新型动物疫苗、药物及免疫检测试剂提供了新思路,与兽医生物技术相融合,显示出广阔的发展前景。目前,已有许多用抗独特型抗体制作的实验室疫苗接种动物能抵抗病原的感染。但至今仍没有商品化产品,其主要原因可能是抗独特型抗体筛选的难度比较大。 展开更多
关键词 抗独特型抗体 动物疫苗 兽医 商品化产品 检测试剂 生物技术 发展前景 疫苗接种
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“多宝鱼”抗体疫苗有望面世
18
《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第12期129-129,共1页
能够有效预防包括“多宝鱼”在内的“海鱼细菌病多联抗独特型抗体疫苗”成果转化工作取得实质性进展。由解放军第四军医大学和北京卓越海洋生物科技有限公司共同研发的针对牙鲆鱼的“海鱼细菌病多联独特型抗体疫苗”目前正在申请国家农... 能够有效预防包括“多宝鱼”在内的“海鱼细菌病多联抗独特型抗体疫苗”成果转化工作取得实质性进展。由解放军第四军医大学和北京卓越海洋生物科技有限公司共同研发的针对牙鲆鱼的“海鱼细菌病多联独特型抗体疫苗”目前正在申请国家农业部的《新兽药注册证书》。 展开更多
关键词 抗独特型抗体疫苗 海鱼 第四军医大学 转化工作 生物科技 细菌病 农业部 牙鲆鱼
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黄曲霉毒素B_1标准替代物的制备及其在花生样品检测中的应用 被引量:4
19
作者 管笛 李培武 +2 位作者 张奇 张文 丁小霞 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期503-506,共4页
以抗黄曲霉毒素B1(AFB1)单克隆抗体的F(ab')2片段为抗原免疫兔子,得到AFB1抗独特型抗体。经过酶联免疫吸附法(ELISA)条件的优化,建立AFB1抗独特型抗体最佳竞争抑制曲线。该曲线与AFB1竞争抑制曲线相比较可知,AFB1抗独特型抗体与AFB... 以抗黄曲霉毒素B1(AFB1)单克隆抗体的F(ab')2片段为抗原免疫兔子,得到AFB1抗独特型抗体。经过酶联免疫吸附法(ELISA)条件的优化,建立AFB1抗独特型抗体最佳竞争抑制曲线。该曲线与AFB1竞争抑制曲线相比较可知,AFB1抗独特型抗体与AFB1之间存在指数增长关系,且相关性系数R为0.999 8。以AFB1抗独特型抗体浓度与其相应的抑制率作标准曲线,ELISA法测定花生中AFB1添加回收率,范围在90.4%~100.2%之间。综上,AFB1抗独特型抗体可以作为AFB1无毒替代标准品。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素B1 抗独特型抗体 替代物 花生
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鸡源Bursin-ScFv噬菌体展示文库的构建及初步筛选 被引量:1
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作者 邬向东 曲悦 +2 位作者 谌南辉 王萍 何后军 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期488-493,共6页
本研究利用抗三肽囊素(Bursin)单克隆抗体免疫SPF来航鸡,获得产生抗独特型抗体的脾细胞,从中提取总RNA,经反转录合成cDNA第一链。以cDNA第一链为模板,根据来航鸡IgG抗体重链(VH)、轻链(VL)可变区基因FR设计引物,进行PCR扩增。在体外扩... 本研究利用抗三肽囊素(Bursin)单克隆抗体免疫SPF来航鸡,获得产生抗独特型抗体的脾细胞,从中提取总RNA,经反转录合成cDNA第一链。以cDNA第一链为模板,根据来航鸡IgG抗体重链(VH)、轻链(VL)可变区基因FR设计引物,进行PCR扩增。在体外扩增出该抗体的可变区VH和VL基因(大小分别约为370和320 bp)。通过重叠延伸反应(SOE),以(Gly4Ser)3为连接肽,将VH和VL基因连接成为VH-Linker-VLScFv,将ScFv DNA与噬菌粒载体pHEN1的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体M13K07感染后,获得重组的鸡源抗三肽囊素独特型抗体全套单链噬菌体抗体库。并测得该库容量约为5×105,噬菌体中ScFv基因的插入率为80%,用辅助噬菌体援救后,得到滴度为1011PFU/mL的初级噬菌体抗体库。用抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2)进行4轮"吸附-洗脱-扩增"的淘筛,出现特异性富集。经ELISA、动物试验表明所筛选的5个阳性克隆可与抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2)特异性结合,并能促进抗体的生产。 展开更多
关键词 三肽囊素 抗独特型抗体 可变区 重链 轻链 单链抗体 单克隆抗体 噬菌体抗体
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