RFFIT和MNT检测抗狂犬病毒中和抗体的比较研究 被引量：9

1

作者 程满荣 徐葛林 +5 位作者 吴杰 唐建蓉 郑新雄 董关木 吴小红 张永振 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期30-33,共4页

目的对RFFIT和MNT两种方法检测抗狂犬病毒中和抗体的相关性,敏感性和重复性进行比较。方法用MNT和RFFIT两种方法来检测已免疫的人血清52份,未免疫的人血清40份。结果显示这两种方法检测已免疫血清的一致性是88.5%,其相关性是r=0.886,MN... 目的对RFFIT和MNT两种方法检测抗狂犬病毒中和抗体的相关性,敏感性和重复性进行比较。方法用MNT和RFFIT两种方法来检测已免疫的人血清52份,未免疫的人血清40份。结果显示这两种方法检测已免疫血清的一致性是88.5%,其相关性是r=0.886,MNT的敏感性和特异性分别是84.9%,100%;RFFIT的灵敏度和特异性分别是100%,89.0%。MNT和RFFIT重复检测一个样品的变异系数(CV)分别是62.3%、13.3%。结论RFFIT与MNT的相关性较好,RFFIT的灵敏度和重复性均比MNT好,因此,RFFIT在大多数需要检测RV中和抗体的情况下可替代MNT。 展开更多

关键词 狂犬病毒 RFFIT MNT 中和抗体

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生猪伪狂犬病毒gB抗体与中和抗体的相关性分析 被引量：9

2

作者 杨涛涛 刘崇灵 +2 位作者 刘晓波 赵墩 余兴龙 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期303-306,共4页

为探索生猪伪狂犬病毒gB–ELISA抗体水平的高低与中和抗体效价的相关性,运用酶联免疫吸附测定(ELISA)法对177份生猪血清进行了伪狂犬病毒gB抗体的检测,同时,用中和试验对上述血清样品进行了伪狂犬病毒中和抗体的测定。试验结果通过生物... 为探索生猪伪狂犬病毒gB–ELISA抗体水平的高低与中和抗体效价的相关性,运用酶联免疫吸附测定(ELISA)法对177份生猪血清进行了伪狂犬病毒gB抗体的检测,同时,用中和试验对上述血清样品进行了伪狂犬病毒中和抗体的测定。试验结果通过生物统计学分析,gE抗体阴性血清的g B抗体平均S/P值和中和抗体效价(SN效价)倒数平均值的相关系数为0.926,说明g B免疫抗体S/P值与其中和抗体效价有很好的相关性。中和抗体水平的高低一般与免疫保护力呈正相关,研究结果表明gB–ELISA抗体水平可以用来评估生猪对当前流行PRV毒株的相对免疫保护力。 展开更多

关键词 猪 伪狂犬病毒 gB抗体 中和抗体 酶联免疫吸附测定

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猪伪狂犬病毒gB、gC和gD蛋白多抗制备及交叉中和抗体效价测定 被引量：8

3

作者 刘飞 童武 +3 位作者 梁超 杨莘 郑浩 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期73-76,共4页

为研究猪伪狂犬病毒（PRv）主要免疫原性基因的抗原变异情况，本研究构建了PRV变异株JS-2012和弱毒疫苗株Bartha—K61的gB、gc和gD基因重组真核表达质粒。通过基因枪途径免疫新西兰大白兔，对制备的兔源多克隆抗体进行交叉中和抗体效价... 为研究猪伪狂犬病毒（PRv）主要免疫原性基因的抗原变异情况，本研究构建了PRV变异株JS-2012和弱毒疫苗株Bartha—K61的gB、gc和gD基因重组真核表达质粒。通过基因枪途径免疫新西兰大白兔，对制备的兔源多克隆抗体进行交叉中和抗体效价的i／n,4定。结果显示，JS．2012和Bartha．K61株的gC蛋白和gD蛋白多抗对PRVJS．2012变异株、SC经典强毒株和Bartha．K61弱毒疫苗株的交叉中和效价均无显著差异；而两个病毒株的2B蛋白多抗对JS．2012和sc株的中和效价较低，分别为1：29．0～56．7和1：56．2～137．0，对Bartha—K61株以及其他毒力基因缺失弱毒疫苗株的中和效价较高，分别为1：75．0--490．0和1：198．6～986．9，差异显著，推测该结果可能与PRV毒力基因缺失有关。本研究为进一步鉴定PRV流行株的抗原变异奠定基础。 展开更多

关键词 猪伪狂犬病毒 多克隆抗体 中和抗体效价

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检测犬源狂犬病毒中和抗体ELISA方法的建立 被引量：4

4

作者 傅秋玲 郑佳琳 +5 位作者 林颖仪 张莹 阳佑天 潘姣姣 吴晓薇 郭霄峰 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期561-565,共5页

为了有效监测犬免疫狂犬病疫苗后的保护效力,以狂犬病毒(Rabies virus,RV)糖蛋白的主要优势抗原表位区G3蛋白(RV G3)作为包被抗原,建立了一种检测狂犬病毒中和抗体效价的间接ELISA方法.通过优化反应条件,确定抗原最佳包被量为8 mg/L,血... 为了有效监测犬免疫狂犬病疫苗后的保护效力,以狂犬病毒(Rabies virus,RV)糖蛋白的主要优势抗原表位区G3蛋白(RV G3)作为包被抗原,建立了一种检测狂犬病毒中和抗体效价的间接ELISA方法.通过优化反应条件,确定抗原最佳包被量为8 mg/L,血清的最佳稀释度为1∶100,酶标二抗的稀释度为1∶3 000.特异性试验表明,该抗原不与犬瘟热病毒、犬腺病毒、犬细小病毒阳性血清发生交叉反应;批内和批间重复性试验的平均变异系数都小于10%;敏感性达1∶1 280.此方法检测134份血清样品的结果与美国SYNBIOTICS试剂盒相比,总符合率达95.6%. 展开更多

关键词 狂犬病毒 糖蛋白 犬源 中和抗体 间接ELISA

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全人源抗狂犬病病毒G蛋白单链抗体制备及中和活性鉴定 被引量：5

5

作者 张倩倩 赵茜 +7 位作者 张晓 丁贵鹏 金秋 高畅 熊四平 陈玉平 朱进 冯振卿 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期927-931,共5页

目的:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,筛选针对狂犬病病毒G蛋白不同表位的单链抗体(scFv)并鉴定其中和活性。方法:分离130例经狂犬病疫苗免疫接种志愿者的外周血淋巴细胞,提取总RNA,逆转录制备cDNA,构建全人源抗狂犬病病毒scF... 目的:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,筛选针对狂犬病病毒G蛋白不同表位的单链抗体(scFv)并鉴定其中和活性。方法:分离130例经狂犬病疫苗免疫接种志愿者的外周血淋巴细胞,提取总RNA,逆转录制备cDNA,构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库。以纯化的狂犬病病毒G蛋白包板筛选,对阳性克隆进行可溶性表达,并鉴定中和活性。结果:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,库容为5.0×107,经核酸序列分析,证实插入片段为scFv。经过5轮筛选,从富集的次级抗体库中随机挑出140个克隆,通过phage-ELISA鉴定得到4株核酸序列不同的scFv抗体。经His-Trap纯化后进行中和活性鉴定,获得1株有中和活性的scFv,其中和效价为0.13 IU/mg。结论:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,获得1株具有中和活性的抗狂犬病病毒G蛋白scFv抗体,为进一步研发狂犬病治疗性抗体药物奠定了基础。 展开更多

关键词 狂犬病病毒G蛋白 噬菌体抗体库 单链抗体(scFv) 中和活性

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狂犬病病毒糖蛋白膜外区表达及中和抗体间接ELISA检测方法的建立 被引量：2

6

作者 高志强 谷强 +7 位作者 张鹤晓 赖平安 柏亚铎 蒲静 张伟 乔彩霞 汪琳 吴丹 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1514-1520,共7页

采用RT-PCR方法克隆了狂犬病病毒CVS株G蛋白基因编码区,进而将完整编码区和膜外区编码基因分别克隆于pET-32a,将其中含膜外区编码基因的重组质粒pET-32a-PG转化BL21(DE3),经1.0 mmol.L-1IPTG诱导,外源基因获得高效表达。通过Western-blo... 采用RT-PCR方法克隆了狂犬病病毒CVS株G蛋白基因编码区,进而将完整编码区和膜外区编码基因分别克隆于pET-32a,将其中含膜外区编码基因的重组质粒pET-32a-PG转化BL21(DE3),经1.0 mmol.L-1IPTG诱导,外源基因获得高效表达。通过Western-blot以及ELISA试验证明表达产物具有良好的反应原性。以纯化后的表达产物作为抗原包被酶标板,用已知中和抗体效价的OIE参考血清对该方法进行了标准化,建立了检测狂犬病病毒中和抗体的间接ELISA方法。结果表明,抗原的最佳包被量为3.74μg,血清的最佳稀释度为1:100,待检血清阳性临界值为0.50。用此方法检测了418份血清样品,并与荧光抗体病毒中和试验(FAVN)方法进行了比较,符合率为98.61%。 展开更多

关键词 狂犬病病毒 糖蛋白 膜外区表达 中和抗体 ELISA

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人源抗狂犬病毒G蛋白单链抗体的生物学鉴定及其小鼠体内中和活性测定 被引量：3

7

作者 闭兰 朱蓉 +4 位作者 张爱华 孙可芳 赵亚杰 王志友 余模松 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第5期397-399,共3页

目的对从噬菌体抗体库中筛选的人源抗狂犬病毒单链抗体A12进行生物学活性鉴定及小鼠体内中和活性检测。方法用免疫荧光法检测其结合感染狂犬病毒CVS的鼠脑组织的能力,用小鼠中和实验测定A12表达产物的体内中和活性。结果免疫荧光试验显... 目的对从噬菌体抗体库中筛选的人源抗狂犬病毒单链抗体A12进行生物学活性鉴定及小鼠体内中和活性检测。方法用免疫荧光法检测其结合感染狂犬病毒CVS的鼠脑组织的能力,用小鼠中和实验测定A12表达产物的体内中和活性。结果免疫荧光试验显示A12表达产物与感染CVS的鼠脑细胞有强的荧光反应。小鼠中和试验结果表明,A12ScFv样品组小鼠有9只存活,而对照组小鼠全部死亡。A12在729倍稀释时能100%保护小鼠抵抗致死量狂犬病毒的脑内攻击。结论A12对狂犬病毒具有一定的中和活性,有可能被用于暴露后狂犬病的预防。 展开更多

关键词 单链抗体 狂犬病毒G蛋白 免疫荧光反应 小鼠体内中和实验

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猪伪狂犬病毒抗体检测方法的研究进展 被引量：1

8

作者 卢立康 许楷惠 +4 位作者 黄元 蔡汝建 王晓虎 陈晶 向华 《广东畜牧兽医科技》 2024年第2期52-56,共5页

伪狂犬病,也称阿氏病(Aujeszky'sdisease),是由伪狂犬病毒(PRV)引起的一种高度传染性疾病。在没有特定宿主的情况下,伪狂犬病毒可以侵入多种哺乳动物,包括猪、牛、羊等,从而导致易感动物发生严重的临床症状和急性死亡。我国于20世... 伪狂犬病,也称阿氏病(Aujeszky'sdisease),是由伪狂犬病毒(PRV)引起的一种高度传染性疾病。在没有特定宿主的情况下,伪狂犬病毒可以侵入多种哺乳动物,包括猪、牛、羊等,从而导致易感动物发生严重的临床症状和急性死亡。我国于20世纪50年代首次报道猪伪狂犬病,且自2011年以来,部分地区出现新的猪伪狂犬病变异株,致使养猪业遭受严重的经济损失。尽管科学家们一直在致力于诊断方法的设计和相关疫苗的开发,但伪狂犬病仍在养猪业广泛存在,近些年发现其对人类的健康也存在着潜在威胁,从而引起了世界范围内的强烈关注。目前我国的猪场普遍实行伪狂犬疫苗免疫,因此检测免疫后疫苗产生的抗体水平至关重要。本文总结目前对PRV的抗体检测方法,针对其优缺点进行对比分析,以对猪场临床上选择抗体检测方法提供参考。 展开更多

关键词 伪狂犬病毒 抗体检测 病毒中和试验 ELISA

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三种ELISA方法与荧光抗体病毒中和试验检测狂犬病抗体的一致性分析 被引量：1

9

作者 洪伟彬 莫钻兰 +4 位作者 殷三鸿 叶毅飞 李敏 徐振娜 黄世品 《广东畜牧兽医科技》 2023年第2期70-73,共4页

为筛选合适狂犬病抗体检测的试剂盒,该研究以荧光抗体病毒中和试验(fluorescent antibody virus neutralization FAVN)方法为参照,与3个ELISA试剂盒方法进行比对,进行一致性分析,并计算了三种试剂盒的敏感性和特异性。结果显示:三种不... 为筛选合适狂犬病抗体检测的试剂盒,该研究以荧光抗体病毒中和试验(fluorescent antibody virus neutralization FAVN)方法为参照,与3个ELISA试剂盒方法进行比对,进行一致性分析,并计算了三种试剂盒的敏感性和特异性。结果显示:三种不同的试剂盒中,试剂盒A与FAVN一致性最好,Kappa值为0.605,有较高的一致性,符合率为86%;试剂盒B次之,Kappa值为0.485,为中度一致,符合率为80%;试剂盒C与FAVN的一致性最差,Kappa值为0.310,符合率也最低,为74%。在敏感性和特异性方面,试剂盒A的敏感性最高,为92.1%,试剂盒B的特异性最高,为72.7%。本研究为临床上科学的筛选试剂盒提供了依据。 展开更多

关键词 狂犬病病毒 Kappa检验 荧光抗体病毒中和试验 敏感性 特异性

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狂犬病暴露后预防性单克隆抗体药物研究进展 被引量：1

10

作者 吴梦 张浩 +3 位作者 刘雪芹 涂长春 刘艳 葛良鹏 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期100-106,共7页

简要介绍狂犬病的流行现状、发病机制、狂犬病病毒G蛋白中和抗原位点及其单克隆抗体的中和机制。重点介绍目前全球已上市或处于研发阶段的多种狂犬病病毒单克隆抗体药物的筛选发现技术、识别位点、作用方式以及体内外病毒中和效果,分析... 简要介绍狂犬病的流行现状、发病机制、狂犬病病毒G蛋白中和抗原位点及其单克隆抗体的中和机制。重点介绍目前全球已上市或处于研发阶段的多种狂犬病病毒单克隆抗体药物的筛选发现技术、识别位点、作用方式以及体内外病毒中和效果,分析上述单克隆抗体在目前狂犬病暴露后治疗的应用推广中存在的问题,并针对当前狂犬病免疫球蛋白存在的血源供应、中和效价、质量控制及潜在病毒感染等问题,指出狂犬病病毒单克隆抗体研发的重要性,尤其是抗体的中和效价和中和广度,进而提出针对狂犬病病毒遗传谱系Ⅱ/Ⅲ的全人源单克隆抗体开发,以及针对G蛋白多个抗原位点的单克隆抗体鸡尾酒(mAb cocktail)疗法是当前在狂犬病暴露后预防性单克隆抗体药物研发中亟待解决的问题。 展开更多

关键词 狂犬病 狂犬病病毒 单克隆抗体 中和抗体 抗原表位

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狂犬病毒中和抗体检测试验中病毒回归试验的重要性

11

作者 陈先国 支海兵 +2 位作者 滕颖 吴华伟 刘金玲 《中国兽药杂志》 2004年第4期22-24,共3页

　狂犬病毒中和试验的病毒回归试验表明,病毒攻毒液的实际剂量与理论剂量不完全一致。建议在新版《中华人民共和国兽用生物制品质量标准》中增加对病毒攻毒实际剂量范围的规定,以使结果的判定更为合理。

关键词 狂犬病毒 中和抗体 回归试验 理论剂量 实际剂量 兽用生物制品

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表达绿色荧光蛋白重组狂犬病病毒Flury-LEP的构建及其用于中和抗体检测的研究 被引量：2

12

作者 华涛 陶丽红 +3 位作者 葛金英 王喜军 沈向真 步志高 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期581-585,共5页

为确定狂犬病病毒(RV)Flury-LEP株外源基因的插入位点及其中和抗体快速检测方法,本研究在建立了RVFlury-LEP株反向遗传操作系统的基础上,构建了表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的重组LEP基因组cDNA克隆pCI-LEP-EGFP,并成功拯救出重组病毒(... 为确定狂犬病病毒(RV)Flury-LEP株外源基因的插入位点及其中和抗体快速检测方法,本研究在建立了RVFlury-LEP株反向遗传操作系统的基础上,构建了表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的重组LEP基因组cDNA克隆pCI-LEP-EGFP,并成功拯救出重组病毒(rLEP-EGFP)。rLEP-EGFP的生物学特性和野生型LEP(wtLEP)在NA细胞和BHK-21细胞中的生长动力学及对小鼠的致病性没有显著差异。rLEP-EGFP在BHK-21细胞中连续传代9次,各代次重组病毒均稳定表达EGFP。重组表达的EGFP可用于中和抗体检测,rLEP-EGFP免疫犬血清经间接免疫荧光(IFA)或荧光下直接观察检测RV中和抗体滴度,两种检测结果显示较好的相似性(p>0.05)。本研究为研制以Flury-LEP株活载体多价疫苗奠定了基础,并为病毒中和抗体的检测提供了更为快捷的新方法。 展开更多

关键词 狂犬病病毒 Flury-LEP株 EGFP 反向遗传操作 多价疫苗 病毒中和抗体

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狂犬病病毒中和抗体ELISA技术的建立 被引量：2

13

作者 罗金燕 王水明 +9 位作者 李向东 沈阳 邱亚峰 史子学 丁铲 艾峰 刘学辉 张帆 刘佩红 马志永 《中国动物检疫》 CAS 2011年第1期48-51,共4页

将狂犬病病毒(RV)糖蛋白(G蛋白)中和抗原表位串联表达的重组蛋白作为抗原,建立了检测RV中和抗体的间接ELISA技术。结果表明,最佳抗原包被量为2μg/孔,被检血清最佳稀释倍数为1:200。该方法与快速荧光灶抑制试验(RFFIT)的阳性符合率为88%... 将狂犬病病毒(RV)糖蛋白(G蛋白)中和抗原表位串联表达的重组蛋白作为抗原,建立了检测RV中和抗体的间接ELISA技术。结果表明,最佳抗原包被量为2μg/孔,被检血清最佳稀释倍数为1:200。该方法与快速荧光灶抑制试验(RFFIT)的阳性符合率为88%,阴性符合率为96%。特异性试验表明,该抗原不与犬腺病毒I型、犬细小病毒、犬瘟热病毒、犬副流感病毒和犬冠状病毒阳性血清发生交叉反应,具有良好的特异性。板内和板间重复性试验的平均变异系数分别为2.7%和4.2%,具有良好的重复性,为动物RV中和抗体检测提供了简单快捷的检测方法。 展开更多

关键词 狂犬病病毒 G蛋白 中和抗体 间接ELISA

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广东省部分城市犬和猫狂犬病病毒血清中和抗体的调查分析 被引量：2

14

作者 高咏露 张洪韧 +4 位作者 杜艺彤 杨国强 罗霖霜 齐德重 吕宗吉 《动物医学进展》 北大核心 2023年第4期114-118,共5页

通过对广东省部分城市宠物犬和猫狂犬病病毒中和抗体效价现状进行调查分析,探讨其风险点及改善点,为狂犬病的防控及公共卫生安全提供参考。调查于2020-2021年期间在广东省佛山市、深圳市、东莞市、云浮市、江门市等地城区采集宠物犬、... 通过对广东省部分城市宠物犬和猫狂犬病病毒中和抗体效价现状进行调查分析,探讨其风险点及改善点,为狂犬病的防控及公共卫生安全提供参考。调查于2020-2021年期间在广东省佛山市、深圳市、东莞市、云浮市、江门市等地城区采集宠物犬、猫血清735份,并对相关个体信息进行收集,采用荧光抗体病毒中和试验(FAVN)对所有血清样本进行了狂犬病中和抗体效价的测定和分析。结果显示,所有样本狂犬病抗体保护水平阳性率为46.9%,低于世界卫生组织推荐的70%保护水平阳性率;深圳市血清样本抗体保护水平阳性率为55.4%,为采样城市中保护水平阳性率最高;家养猫的保护水平阳性率比家养犬的阳性率低15.5%;犬养殖场样本阳性率比家庭饲养犬样本阳性率低20.8%;流浪动物的保护水平阳性率仅有8.1%。说明广东省部分城市犬、猫狂犬病免疫阳性率偏低,尚无法形成抵御狂犬病侵袭的有效屏障,需在流浪动物管理、猫饲养管理、犬猫饲养场管理等几个方面加强狂犬病的预防管制措施,加强政策引导工作,以提升狂犬病的综合防控能力。 展开更多

关键词 犬猫 狂犬病毒 中和抗体效价 免疫效果

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猪伪狂犬病病毒流行毒株体外中和抗体系列研究的启示 被引量：2

15

作者 林云雄 梁培新 +6 位作者 杨玉坚 向华 王一成 徐敏 刘亚彬 余庆 王科文 《养猪》 2015年第5期89-93,共5页

2011年以后,从北到南,我国多数养猪地区的许多原本伪狂犬病（Pseudorabies,PR）阴性的猪场逐渐转阳。随后有研究表明,本次流行的伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）毒株相对经典毒株（SC株）而言,多个基因有较大的差异,毒力也更强... 2011年以后,从北到南,我国多数养猪地区的许多原本伪狂犬病（Pseudorabies,PR）阴性的猪场逐渐转阳。随后有研究表明,本次流行的伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）毒株相对经典毒株（SC株）而言,多个基因有较大的差异,毒力也更强,且现有的商品化疫苗对其感染的保护力相对更差[1]（通过羊的免疫攻毒试验）。中和抗体作为评估疫苗免疫保护水平的一个重要指标, 展开更多

关键词 猪伪狂犬病病毒 流行毒株 中和抗体 体外 免疫攻毒试验 VIRUS 免疫保护 SC株

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抗伪狂犬病病毒gC抗体制备及其gC蛋白表达 被引量：5

16

作者 刘庆伟 邱亚峰 +6 位作者 王晓杜 郭林 刘超 沈阳 李向东 单虎 马志永 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第3期108-112,共5页

用纯化的重组蛋白His-gCN813制备抗PRV-gC抗体,并分析伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)gC蛋白在真核细胞的表达情况。本研究以提取的病毒基因组为模板,PCR克隆PRV gC全长基因,构建gC真核表达质粒p3xFLAG-gC,在真核细胞中表达gC基因... 用纯化的重组蛋白His-gCN813制备抗PRV-gC抗体,并分析伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)gC蛋白在真核细胞的表达情况。本研究以提取的病毒基因组为模板,PCR克隆PRV gC全长基因,构建gC真核表达质粒p3xFLAG-gC,在真核细胞中表达gC基因;纯化蛋白His-gCN813制备的抗体,Western blotting和间接免疫荧光(IFA)检测到p3xFLAG-gC转染真核细胞和PRV感染细胞中的gC蛋白。结果表明本试验成功构建了PRVgC基因真核表达系统,获得了特异性抗PRV gC抗体,重组gC真核表达质粒p3xFLAG-gC转染Vero细胞,表达的重组蛋白gC为72 ku,PRV感染Vero细胞,表达的gC蛋白为55、72和94 ku,主要定位在细胞浆,gC蛋白可以作为PRV感染的指示分子,为下一步研究PRV和宿主相互作用及PRV的复制奠定了基础。 展开更多

关键词 伪狂犬病病毒 抗PRVgC抗体 Westernblotting

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人源抗狂犬病毒二硫键稳定抗体在大肠杆菌中的融合表达 被引量：4

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作者 蔡昆 王慧 +3 位作者 史晶 包士中 侯晓军 荫俊 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期450-452,共3页

目的在大肠杆菌pMAL-P2x系统中表达anti-rabiesMBP-ScdsFv融合蛋白,酶切获得目的蛋白ScdsFv,进行纯化、鉴定及简单活性分析。方法利用DNA重组技术,将全长的ScdsFv蛋白基因克隆至原核表达载体pMAL-p2x中,重组质粒转化大肠杆菌E.coliER256... 目的在大肠杆菌pMAL-P2x系统中表达anti-rabiesMBP-ScdsFv融合蛋白,酶切获得目的蛋白ScdsFv,进行纯化、鉴定及简单活性分析。方法利用DNA重组技术,将全长的ScdsFv蛋白基因克隆至原核表达载体pMAL-p2x中,重组质粒转化大肠杆菌E.coliER2566,IPTG诱导表达。表达产物经Xa酶切后,经Ni柱、AmyloseResin亲和层析进行纯化,SDS-PAGE和Western blot对其进行鉴定,ELISA检测其结合活性。结果成功地构建了重组质粒pMAL-ScdsFv,经诱导表达、蛋白酶切、亲和纯化后获得目的蛋白。ELISA检测其具有抗原特异结合活性,其热稳定性有显著提高。结论抗狂犬病毒ScdsFv蛋白具有良好的结合活性和生物学活性稳定性,可作为候选分子用于狂犬病的防治研究。 展开更多

关键词 抗狂犬病毒二硫键稳定抗体 MBP融合蛋白 原核表达

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狂犬病毒ELISA抗体检测试剂盒的初步应用 被引量：4

18

作者 张德宝 朱秀同 +5 位作者 刘涛 李艳莉 柳珊 何平有 郁宏伟 梁武 《中国动物保健》 2015年第10期76-78,共3页

以灭活纯化的狂犬病毒SRV9株作为包被抗原，制备了5批次狂犬病毒ELISA抗体检测试剂盒中试产品。与FAVN法、商品化进口试剂盒相比，该试剂盒与二者总符合率为90.80%和94.25%，且敏感性较高。5批次试剂盒批内变异系数为1.47%~8.34%，批间... 以灭活纯化的狂犬病毒SRV9株作为包被抗原，制备了5批次狂犬病毒ELISA抗体检测试剂盒中试产品。与FAVN法、商品化进口试剂盒相比，该试剂盒与二者总符合率为90.80%和94.25%，且敏感性较高。5批次试剂盒批内变异系数为1.47%~8.34%，批间变异系数为2.05%~8.64%，说明该试剂盒重复性良好，可用于血清中狂犬病毒抗体常规检测。 展开更多

关键词 狂犬病毒 酶联免疫吸附试验(ELISA) 荧光抗体病毒中和试验(FAVN)

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狂犬病病毒糖蛋白单克隆抗体的制备

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作者 米立娟 王永志 +2 位作者 刘晔 张守峰 扈荣良 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第8期35-38,共4页

用狂犬病病毒BD06株脑毒免疫BALB/c小鼠,制备G蛋白单克隆抗体。将灭活的BD06脑毒免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,通过间接ELISA法和荧光抗体病毒中和试验法进行4轮筛选,获得6F12、1B12共2株具有中和活性的糖蛋... 用狂犬病病毒BD06株脑毒免疫BALB/c小鼠,制备G蛋白单克隆抗体。将灭活的BD06脑毒免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,通过间接ELISA法和荧光抗体病毒中和试验法进行4轮筛选,获得6F12、1B12共2株具有中和活性的糖蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞。通过Western blotting分析和直接免疫荧光检测结果显示,获得一株针对狂犬病病毒糖蛋白构象表位的单抗6F12和一株针对糖蛋白线性表位的单抗1B12。小鼠中和试验结果显示,两株杂交瘤细胞分泌的抗体均具有狂犬病病毒中和活性。结果表明,获得了两株针对狂犬病病毒G蛋白不同抗原表位的中和活性单克隆抗体,为狂犬病病毒特性研究和检测奠定了基础。 展开更多

关键词 狂犬病病毒 糖蛋白 中和抗体 单克隆抗体

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抗猪伪狂犬病病毒gH抗体的制备及gH在感染细胞中表达分析

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作者 刘庆伟 邱亚峰 +6 位作者 王晓杜 郭林 刘超 沈阳 李向东 单虎 马志永 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期383-387,共5页

为检测伪狂犬病病毒(PRV)在体外细胞中糖蛋白H(gH)的表达情况,本研究构建原核表达重组质粒pET-gHN660,并在大肠杆菌中诱导表达重组蛋白,纯化的gH重组蛋白免疫实验动物制备抗PRVgH抗体,经westernblot和IFA检测到病毒感染细胞中gH蛋白的表... 为检测伪狂犬病病毒(PRV)在体外细胞中糖蛋白H(gH)的表达情况,本研究构建原核表达重组质粒pET-gHN660,并在大肠杆菌中诱导表达重组蛋白,纯化的gH重组蛋白免疫实验动物制备抗PRVgH抗体,经westernblot和IFA检测到病毒感染细胞中gH蛋白的表达,病毒感染细胞后表达的gH蛋白大小为95ku,定位于细胞浆中,gH蛋白在病毒感染细胞4h可以检出,随PRV的复制gH蛋白表达增加,gH蛋白可以作为PRV复制的指示蛋白。本研究利用制备的抗体分析感染细胞中gH蛋白的表达情况,初步探讨感染细胞中PRV的复制,为PRV和宿主相互作用的研究奠定基础。 展开更多

关键词 伪狂犬病病毒 GH基因 抗PRVgH抗体

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