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凡纳滨对虾肌质钙结合蛋白纯化鉴定、理化特性及抗原表位分析
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作者 陈伟 周军君 +2 位作者 陈雅纯 贾英民 马爱进 《食品科学》 EI CAS 北大核心 2025年第2期30-37,共8页
以凡纳滨对虾(Penaeus vannamei)为原料,分离纯化和鉴定过敏原肌质钙结合蛋白(sarcoplasmiccalcium-binding protein,SCP),对其理化性质(免疫活性、热稳定性、pH值稳定性及消化稳定性)、二级结构和抗原表位进行研究。结果表明:采用蛋白... 以凡纳滨对虾(Penaeus vannamei)为原料,分离纯化和鉴定过敏原肌质钙结合蛋白(sarcoplasmiccalcium-binding protein,SCP),对其理化性质(免疫活性、热稳定性、pH值稳定性及消化稳定性)、二级结构和抗原表位进行研究。结果表明:采用蛋白粗提、硫酸铵分级沉淀、阴离子交换层析等步骤纯化得到的蛋白分子质量为21.6 kDa,经鉴定,该蛋白为凡纳滨对虾SCP,肽段覆盖率达93.26%。凡纳滨对虾SCP具有较强的免疫活性,在热处理温度≥65℃和强酸强碱条件下免疫活性减弱;SCP对肠液消化具有较强的稳定性,而对胃液消化稳定性较差。凡纳滨对虾SCP的二级结构中α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规卷曲的相对含量分别为26%、16.9%、17.5%、39.6%。利用生物信息学工具结合免疫学技术最终预测识别出8条凡纳滨对虾SCP抗原表位。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 肌质钙结合蛋白 稳定性 抗原表位
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非洲猪瘟病毒p22蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定 被引量:1
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作者 王小格 司煊瑛 +8 位作者 闫志伟 王飞 尤龙琪 刘梗 蔡茂 梁珺珹 梁玉秀 杜永坤 张改平 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第2期781-791,共11页
[目的]采用原核表达系统表达并获得非洲猪瘟病毒(ASFV)p22重组蛋白,并进一步制备、鉴定p22重组蛋白的单克隆抗体。[方法]采用PCR方法扩增ASFV p22蛋白编码基因,构建重组表达质粒pET-28a(+)-p22,并通过IPTG诱导表达p22蛋白。将纯化后重... [目的]采用原核表达系统表达并获得非洲猪瘟病毒(ASFV)p22重组蛋白,并进一步制备、鉴定p22重组蛋白的单克隆抗体。[方法]采用PCR方法扩增ASFV p22蛋白编码基因,构建重组表达质粒pET-28a(+)-p22,并通过IPTG诱导表达p22蛋白。将纯化后重组蛋白免疫小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合制备单克隆抗体。通过Western blotting鉴定单克隆抗体特异性,通过ELISA方法测定腹水效价;利用在线软件预测p22蛋白抗原表位分布情况并合成重叠多肽,通过Dot blotting鉴定抗体识别的抗原表位。[结果]本研究成功构建了p22重组蛋白的原核表达质粒,获得原核系统表达的p22重组蛋白,分子质量约为22 ku。用纯化后p22蛋白作为免疫原免疫小鼠,成功筛选到4株阳性单克隆杂交瘤细胞株,分别为1G3D7G11、2G5H6H8、6D10G7D6和8F6F8B9,其腹水效价均达到1∶500 000。Western blotting结果显示,4株单克隆抗体均能与p22蛋白发生特异性反应。单克隆亚型鉴定结果显示,1G3D7G11、2G5H6H8和6D10G7D6株单克隆抗体的重链均为IgG1类,8F6F8B9株单克隆抗体的重链为IgG2a类,4株单克隆抗体轻链均为Kappa型。Dot blotting检测结果显示,1G3D7G11、2G5H6H8株单克隆抗体识别抗原表位位于第58—89位氨基酸处;8F6F8B9株单克隆抗体识别抗原表位位于第126—150位氨基酸处。[结论]本研究成功制备了4株ASFV p22蛋白的单克隆抗体,并初步鉴定了单克隆抗体所识别的B细胞表位区间。研究结果为p22蛋白的生物学功能研究和ASFV血清学检测提供了参考依据。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 p22蛋白 单克隆抗体 抗原表位
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禽白血病病毒p27蛋白单克隆抗体制备及抗原表位的鉴定
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作者 陈桂娥 容芳 +3 位作者 苟鑫 孙荣航 李作生 陈瑞爱 《动物医学进展》 北大核心 2025年第1期23-28,共6页
为制备禽白血病病毒(ALV)p27蛋白特异性单克隆抗体,利用原核表达系统表达并纯化ALV p27蛋白,将其作为免疫原免疫注射Balb/c小鼠,用杂交瘤细胞融合和ELISA等筛选出阳性单克隆抗体细胞,对制备的单克隆抗体的抗体亚型、效价及特异性进行鉴... 为制备禽白血病病毒(ALV)p27蛋白特异性单克隆抗体,利用原核表达系统表达并纯化ALV p27蛋白,将其作为免疫原免疫注射Balb/c小鼠,用杂交瘤细胞融合和ELISA等筛选出阳性单克隆抗体细胞,对制备的单克隆抗体的抗体亚型、效价及特异性进行鉴定,将目的蛋白截短成4段,初步鉴定单克隆抗体识别的抗原表位区域。结果表明,共筛选出4株单克隆细胞,其抗体亚类皆为IgG1型,其中3A1抗体效价为1∶64000,3B2为1∶256000,5F1为1∶128000,5G2为1∶8000;4株单克隆抗体识别的抗原表位在1-60 aa之间。研究结果为进一步建立ALV相关免疫学检测方法提供了重要的材料。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 P27蛋白 单克隆抗体 抗原表位
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口蹄疫病毒Asia1型猪源中和抗体的筛选与抗原表位鉴定
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作者 董开恒 黄书伦 +7 位作者 李凤娟 李坤 刘果 张强 包慧芳 李洪炫 卢曾军 张小丽 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期5211-5221,共11页
Asia1型口蹄疫病毒(FMDV)仍然在我国周边国家存在,对我国畜牧业造成长期威胁。本研究旨在利用单个B细胞抗体技术研制Asia1型FMDV的中和性单克隆抗体,以此为工具,鉴定Asia1型FMDV的保护性抗原位点。以FMDV Asia1/JS/05为诱饵抗原,通过流... Asia1型口蹄疫病毒(FMDV)仍然在我国周边国家存在,对我国畜牧业造成长期威胁。本研究旨在利用单个B细胞抗体技术研制Asia1型FMDV的中和性单克隆抗体,以此为工具,鉴定Asia1型FMDV的保护性抗原位点。以FMDV Asia1/JS/05为诱饵抗原,通过流式细胞术分选免疫猪PBMCs中的抗原特异性B细胞,通过巢式PCR扩增单个B细胞IgG抗体重链与轻链可变区基因序列,分别构建IgG抗体重链与轻链表达质粒,将其共转染CHO-S细胞进行抗体表达;通过间接ELISA、间接免疫荧光试验(IFA)、病毒中和试验(VNT)验证抗体反应性和中和活性,利用免疫印迹、中和抗体逃逸突变株筛选鉴定中和抗体所识别的抗原表位类型和抗原表位关键氨基酸。结果显示:获得了5株反应性良好的Asia1型FMDV特异性抗体,其中PD3和PD7为中和抗体,两株中和抗体识别相同表位,关键氨基酸为VP2蛋白72位残基(D)。本研究首次获得Asia1型FMDV特异性猪源中和抗体,鉴定VP272D是中和表位的关键氨基酸,进一步丰富了Asia1型FMDV抗原位点信息,为FMDV Asia1型分子疫苗和新诊断检测技术研究的奠定了基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 Asia1型 猪源单克隆抗体 抗原表位
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猫杯状病毒VP1蛋白的单克隆抗体制备及抗原表位鉴定
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作者 张泽宇 董宁宁 +5 位作者 谈晓梅 李传锋 朱杰 刘光清 张伟 孟春春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期5784-5791,共8页
本研究旨在制备并鉴定针对猫杯状病毒(feline calicivirus,FCV)VP1蛋白的单克隆抗体(monoclonal antibodies,mAbs)。本研究使用SH14株FCV全病毒作为免疫原,通过腹腔注射法免疫BALB/c小鼠,制备了针对VP1蛋白的mAb。通过ELISA筛选,成功获... 本研究旨在制备并鉴定针对猫杯状病毒(feline calicivirus,FCV)VP1蛋白的单克隆抗体(monoclonal antibodies,mAbs)。本研究使用SH14株FCV全病毒作为免疫原,通过腹腔注射法免疫BALB/c小鼠,制备了针对VP1蛋白的mAb。通过ELISA筛选,成功获得特异性单克隆抗体3A3C1株。对3A3C1株mAb进行了全面的生物学特性鉴定,3A3C1株mAb确认为IgG_(1)型,轻链为κ链。Western blot和间接免疫荧光检测的结果显示,3A3C1株mAb能特异性地识别并结合FCV SH14株、F9株和GZ22。此外,本研究还深入探究了3A3C1株mAb的线性抗原表位。通过分段表达VP1蛋白并进行详细的Western blot分析,最终确定3A3C1株mAb的线性抗原表位位于VP1蛋白的^(426)PSRLTPAGDYAITSG^(440)区域。本研究制备的3A3C1株mAb不仅是理解FCV免疫学特性的重要工具,也对发展FCV诊断方法和疫苗策略具有潜在应用价值。 展开更多
关键词 猫杯状病毒 单克隆抗体 抗原表位 衣壳蛋白
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一株猪CD56单克隆抗体的制备及抗原表位的初步鉴定
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作者 辛航阔 谢青青 +4 位作者 刘坤 林圣宇 陈炜 郑小惠 朱婷 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期2662-2671,共10页
CD56作为NK细胞的重要表面分子,在NK细胞的发育、亚群分型和功能发挥等方面发挥重要的作用。因此,为了便于筛选不同亚群的猪NK细胞并探究其生物学功能,本研究制备了猪CD56单克隆抗体并对其抗原表位进行了初步鉴定。首先,通过生物信息软... CD56作为NK细胞的重要表面分子,在NK细胞的发育、亚群分型和功能发挥等方面发挥重要的作用。因此,为了便于筛选不同亚群的猪NK细胞并探究其生物学功能,本研究制备了猪CD56单克隆抗体并对其抗原表位进行了初步鉴定。首先,通过生物信息软件预测并选取猪CD56蛋白胞外区的优势抗原表位的氨基酸序列(50-499aa),利用原核表达系统表达猪CD56胞外区的优势抗原表位蛋白并进行纯化和复性,之后,将猪CD56重组蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合、亚克隆等试验,获得一株稳定分泌猪CD56单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为1G8。Western blot结果显示,制备的猪CD56单抗可以与猪脑和脾总蛋白发生特异性结合;为了进一步验证CD56单抗的特异性,作者分离了猪外周血NK细胞,以制备的猪CD56单抗作为一抗进行间接免疫荧光试验,结果显示,制备的单抗能够与NK细胞膜特异性结合。最后,为了进一步探究单抗识别的抗原表位,作者将选取的猪CD56基因进一步截短为四个截短体(50-192 aa、193-294 aa、295-397 aa、398-499 aa)并构建真核表达重组质粒,然后转染至293T细胞进行真核表达,Western blot和间接免疫荧光结果显示,制备的CD56单抗识别的抗原表位为猪CD56蛋白的193-294 aa。综上,本研究成功制备了猪CD56单克隆抗体,并对其特异性及抗原表位进行了初步鉴定,对猪NK细胞亚群的筛选及探究猪NK细胞的生物学功能具有重要意义。 展开更多
关键词 NK细胞 CD56 单克隆抗体 抗原表位
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HPV53进化关系分析及B细胞与T细胞抗原表位预测
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作者 蓝锶菡 冯敏 《协和医学杂志》 CSCD 北大核心 2024年第6期1364-1371,共8页
目的基于全长序列分析人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)53不同分离株的进化关系,并对代表性分离株病毒蛋白(E1、E2、E4、E6、E7、L1和L2)的理化性质、二级结构及B细胞与T细胞抗原表位进行预测。方法检索美国国立生物技术信息中心... 目的基于全长序列分析人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)53不同分离株的进化关系,并对代表性分离株病毒蛋白(E1、E2、E4、E6、E7、L1和L2)的理化性质、二级结构及B细胞与T细胞抗原表位进行预测。方法检索美国国立生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)数据库,获取HPV53全长序列并构建进化树。采用ProtParam软件分析蛋白的理化性质,PSIPRED和SOPMA软件预测其二级结构。采用ABCpred和IEDB软件预测B、T细胞抗原表位,并结合肽段柔韧性、亲水性、表面可及性、抗原性及Vaxijen评分等参数进一步筛选潜在的优势抗原表位;最后对潜在优势抗原表位与13个高危型HPV进行同源性分析。结果检索NCBI数据库共下载54条HPV53全长序列,经去重后保留48条,来自不同国家/地区的HPV53分离株可划分为A、B、C三个主要进化分支。三个分支代表株病毒的蛋白理化性质相似,E1、E6和E7蛋白的二级结构以α螺旋为主,E2、E4、L1和L2以无规则卷曲为主。经预测和筛选后,共得到6个B细胞潜在优势抗原表位和9个T细胞潜在优势抗原表位,同源性分析发现,E4和E6区域的B细胞抗原表位TTPIRPPPPPRPWAPT和CYRCQHPLTPEEKQLH,及L2区域的T细胞抗原表位SGVHSYEEIPMQ与HPV56具有较高同源性(均>90%)。结论通过生物信息学方法分析和预测发现HPV53分离株可分为A、B、C三个主要进化分支,其理化性质相似,二级结构存在部分小差异,且病毒蛋白中含有B、T细胞抗原表位,为HPV53相关多肽形式的疫苗和抗体药物开发提供了更多理论依据。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒53型 进化分析 B细胞 T细胞 抗原表位预测
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猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5羧基端抗原表位的鉴定 被引量:17
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作者 王玉娥 杨汉春 +2 位作者 郭鑫 查振林 陈艳红 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期439-442,共4页
为了鉴定和分析猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5羧基端的抗原表位,采用Goldkey软件分析PRRSVGP5羧基端抗原表位,经人工合成的方法获得编码GP5的部分基因,Eag 酶切后插入经Eag 线性化处理的噬菌体M13KEgIII克隆载体,转化至ER2738细胞,... 为了鉴定和分析猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5羧基端的抗原表位,采用Goldkey软件分析PRRSVGP5羧基端抗原表位,经人工合成的方法获得编码GP5的部分基因,Eag 酶切后插入经Eag 线性化处理的噬菌体M13KEgIII克隆载体,转化至ER2738细胞,得到多株重组噬菌体,提取噬菌体的ssDNA进行PCR及序列鉴定,获得了展示GP5羧基端11个氨基酸的重组噬菌体,用PRRS阳性血清检测重组噬菌体,结果显示噬菌体展示的表位可被PRRSV感染血清所识别,从而证明GP5羧基末端的11个氨基酸是PRRSV的一个抗原表位。 展开更多
关键词 繁殖呼吸综合征病毒 GP5羧基端 抗原表位 鉴定 噬菌体展示技术
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鹅细小病毒非结构蛋白和结构蛋白B细胞线性抗原表位的鉴定 被引量:15
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作者 于天飞 仇铮 +3 位作者 马波 袁率珍 李俚 王君伟 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期757-763,共7页
鹅细小病毒是小鹅瘟的病原体,其基因组含有2个主要开放阅读框(ORF),分别编码非结构蛋白(NS)和结构蛋白(VP)。为了对这2种蛋白进行抗原表位作图,设计了34个覆盖非结构蛋白NS和结构蛋白VP的50-60个氨基酸残基的重叠短肽,并进行了融... 鹅细小病毒是小鹅瘟的病原体,其基因组含有2个主要开放阅读框(ORF),分别编码非结构蛋白(NS)和结构蛋白(VP)。为了对这2种蛋白进行抗原表位作图,设计了34个覆盖非结构蛋白NS和结构蛋白VP的50-60个氨基酸残基的重叠短肽,并进行了融合表达。用攻毒10周龄鹅血清对这34个融合蛋白进行蛋白质印迹分析,结果鉴定出NS蛋白线性抗原表位位于C末端的453-627氨基酸区域;VP蛋白线性抗原表位位于35—198、423—491、531—595、616—669和678—732氨基酸区域。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 非结构蛋白 结构蛋白 线性抗原表位
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鸭坦布苏病毒E蛋白特异性抗原表位鉴定及Epitope-ELISA血清学诊断方法建立 被引量:14
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作者 李晨曦 白小飞 +3 位作者 邵周伍林 张青山 刘明 张云 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1958-1968,共11页
旨在建立鸭坦布苏病毒(DTMUV)的特异性血清学诊断方法。本研究以纯化的单克隆抗体1A5为固相筛选分子,利用噬菌体展示技术鉴定DTMUV囊膜(E)蛋白的特异性抗原表位,并利用DNAStar分析抗原表位序列在DTMUV中保守性和与其他黄病毒的E蛋白相... 旨在建立鸭坦布苏病毒(DTMUV)的特异性血清学诊断方法。本研究以纯化的单克隆抗体1A5为固相筛选分子,利用噬菌体展示技术鉴定DTMUV囊膜(E)蛋白的特异性抗原表位,并利用DNAStar分析抗原表位序列在DTMUV中保守性和与其他黄病毒的E蛋白相应位点的氨基酸序列相似性。结果成功筛选到DTMUV E蛋白的一个线性抗原表位_(87)YAEYI_(91),该抗原表位在DTMUV中具有高度的保守性,无氨基酸位点差异,而与其他黄病毒E蛋白相应位点的氨基酸序列不具有相似性。Dot-Blotting结果表明表位_(87)YAEYI_(91)与DTMUV阳性血清具有良好的亲和性,而与JEV、DENV、WNV等黄病毒阳性血清间不出现交叉反应,可见抗原表位_(87)YAEYI_(91)为DTMUV所特有的抗原表位。利用DTMUV特异性抗原表位87YAEYI_(91)建立Epitope-ELISA血清学诊断方法并对126份鸭血清样品进行检测,以中和试验作为标准进行比较,结果显示Epitope-ELISA检测方法的相对特异性为100%,相对敏感度为96%,并且Epitope-ELISA与其他黄病毒血清间不出现交叉反应性,表明本研究建立的Epitope-ELISA检测方法是一种特异的、灵敏的ELISA血清学诊断方法。 展开更多
关键词 鸭坦布苏病毒 抗原表位 交叉反应性 Epitope-ELISA
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传染性法氏囊病毒VP2蛋白抗原表位多肽P22的免疫原性及生物学功能鉴定 被引量:8
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作者 宋幸辉 王睿 +6 位作者 王选年 鲍登克 杨苏珍 卢清侠 王寅彪 赵东 张改平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期692-697,共6页
为鉴定IBDV VP2蛋白线性B细胞抗原表位肽P22的免疫原性及生物学功能,作者采用固相多肽合成方法合成多肽P22,经纯化后用SMCC法分别与牛血清白蛋白(BSA)和细胞穿膜肽(PNT)进行偶联,得到免疫抗原P22-BSA和检测抗原P22-PNT;用P22-BSA免疫BAL... 为鉴定IBDV VP2蛋白线性B细胞抗原表位肽P22的免疫原性及生物学功能,作者采用固相多肽合成方法合成多肽P22,经纯化后用SMCC法分别与牛血清白蛋白(BSA)和细胞穿膜肽(PNT)进行偶联,得到免疫抗原P22-BSA和检测抗原P22-PNT;用P22-BSA免疫BALB/c小鼠3只,经3次免疫后得到多抗血清3份。应用ELISA检测了抗P22抗体的特异性,并通过抗P22多肽抗体作为特异性抗体检测了P22多肽结合CEF细胞的特性。结果经鉴定3份多抗血清均与P22多肽特异性反应,效价均达到1∶105,且能特异性检测P22多肽与CEF细胞的特异性结合。本试验成功制备了P22免疫原,获得了效价高、特异性较好的鼠源抗P22多抗血清,并证明P22多肽与CEF细胞能够特异性结合,为进一步研究多肽疫苗的设计或试纸条的研制及表位单抗的制备提供了新的思路和基础。 展开更多
关键词 IBDV VP2蛋白 P22多肽 抗原表位 免疫
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抗原表位鉴定方法的研究进展 被引量:28
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作者 文雪霞 陈化兰 +1 位作者 熊永忠 王秀荣 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第7期66-70,共5页
抗原表位是抗原分子中能与相应淋巴细胞表面的受体结合的特殊化学基团,一般由几个氨基酸残基序列或其空间结构组成。它是引起免疫应答的物质基础,其性质决定了抗原的特异性。抗原表位的鉴定方法主要有肽扫描技术、氨基酸定点突变技术、X... 抗原表位是抗原分子中能与相应淋巴细胞表面的受体结合的特殊化学基团,一般由几个氨基酸残基序列或其空间结构组成。它是引起免疫应答的物质基础,其性质决定了抗原的特异性。抗原表位的鉴定方法主要有肽扫描技术、氨基酸定点突变技术、X-ray衍射或核磁共振技术、质谱技术、噬菌体展示肽技术及生物信息技术预测等,文章将从这几方面入手对近几年来鉴定抗原表位的方法作一综述。 展开更多
关键词 抗原表位 鉴定方法 研究进展
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运用单克隆抗体分析流感病毒H1亚型HA蛋白的抗原表位 被引量:6
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作者 李慧瑾 郭春艳 +5 位作者 赵彭花 李研 高锦伟 胡巧侠 李元 胡军 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期291-294,共4页
目的对甲型流感病毒H1亚型血凝素蛋白的抗原表位进行分析。方法以前期获得的97株抗H1亚型HA抗原的单克隆抗体为研究工具,用间接ELISA方法对不同亚型的血凝素抗原进行反应,将H1亚型HA蛋白的抗原表位进行粗分类,用ELISA阻断试验对抗原表... 目的对甲型流感病毒H1亚型血凝素蛋白的抗原表位进行分析。方法以前期获得的97株抗H1亚型HA抗原的单克隆抗体为研究工具,用间接ELISA方法对不同亚型的血凝素抗原进行反应,将H1亚型HA蛋白的抗原表位进行粗分类,用ELISA阻断试验对抗原表位进行细分类。选取两类抗原表位的抗体,通过计算机模拟分析抗体与抗原结合的结构域,推测抗体结合的具体氨基酸位点。结果根据抗体的交叉反应性不同,将流感病毒H1亚型的HA的抗原表位分为8类;根据ELISA阻断试验的初步结果,H1亚型HA抗原的抗原表位又被细分为15类,通过计算机模拟分析预测的抗体与流感病毒HA抗原结合的氨基酸位点结果与ELISA阻断试验结果相吻合。结论证明流感病毒H1N1亚型HA抗原上至少含有15个抗原表位,且通过ELISA阻断试验和计算机模拟分析得到了相互印证,为流感病毒血凝素HA抗原表位预测方法的完善及通用疫苗的研制提供了实验数据。 展开更多
关键词 流感病毒 H1亚型 HA抗原 抗原表位 单克隆抗体
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新城疫病毒F蛋白结构域基因原核表达与抗原表位分析 被引量:5
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作者 张桂芝 陈亚波 +2 位作者 徐程 张朝政 方维焕 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期82-87,共6页
以含新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)基因的重组质粒为模板,设计特异引物进行重叠-延伸PCR扩增获得F基因的抗原结构域基因片段Fa、Fb和Fa-l-Fb,经SalⅠ和NotⅠ酶切后,定向插入原核表达载体pGEX-6P-1,获得重组质粒pGEX-Fa、pGEX-Fb和pGEX-Fa-... 以含新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)基因的重组质粒为模板,设计特异引物进行重叠-延伸PCR扩增获得F基因的抗原结构域基因片段Fa、Fb和Fa-l-Fb,经SalⅠ和NotⅠ酶切后,定向插入原核表达载体pGEX-6P-1,获得重组质粒pGEX-Fa、pGEX-Fb和pGEX-Fa-l-Fb;用定点突变方法获得重组质粒pGEX-Fa-mut.将重组质粒转化大肠杆菌BL21,转化菌经IPTG诱导、提取表达产物进行蛋白电泳和免疫印迹分析.结果表明:Fa-mut、Fb和Fa-l-Fb结构域基因均获得了融合表达,表达产物与NDV阳性血清具有免疫反应性;与pGEX-Fa-mut不同,pGEX-Fa重组质粒在大肠杆菌中未能表达,且转化菌在IPTG诱导过程中未见生长,提示未经突变的Fa片段可能为毒性蛋白.三维结构预测结果显示,目的蛋白片段中均保留F蛋白中原有相应的抗原表位. 展开更多
关键词 新城疫病毒 融合蛋白 结构域 抗原表位 原核
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禽腺病毒1型和4型六邻体蛋白抗原表位和密码子偏爱性分析 被引量:13
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作者 文艳玲 谢芝勋 +6 位作者 黄琦 童桂香 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢丽基 董建宝 《动物医学进展》 CSCD 2007年第11期17-20,共4页
为了研究禽腺病毒1型和4型(AAV-1和AAV-4)六邻体抗原表位和同义密码子的使用情况,运用生物学软件Antheprot5.0和EMBOSS的CHIPS、CUSP程序分别对AAV-1和AAV-4六邻体进行了分析,并将分析结果与大肠埃希菌、酵母及人的密码子偏爱性进行比... 为了研究禽腺病毒1型和4型(AAV-1和AAV-4)六邻体抗原表位和同义密码子的使用情况,运用生物学软件Antheprot5.0和EMBOSS的CHIPS、CUSP程序分别对AAV-1和AAV-4六邻体进行了分析,并将分析结果与大肠埃希菌、酵母及人的密码子偏爱性进行比较。结果显示,AAV-1、AAV-4六邻体的抗原表位区都主要集中在前段、中段,推测具有型和群特异性表位,可作为诊断型和群的首选蛋白。AAV-1和AAV-4六邻体的Enc值分别为43.553和38.475,在编码密码子使用频率上都存在明显差异,与大肠埃希菌、酵母及人的密码子偏爱性也不同,其表达系统选择大肠埃希菌较为合适。 展开更多
关键词 禽腺病毒1型和4型 抗原表位 同义密码子 偏爱性
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腰果过敏原Ana o 2结构及抗原表位预测 被引量:5
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作者 朱倩倩 吴序栎 +4 位作者 肖杰 成小娟 lujun 刘志刚 徐宏 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期141-145,共5页
腰果是引起人们过敏的主要食物之一。作者采用生物信息学方法,通过Pubmed网络服务器、生物信息分析软件SOPMA、swiss-model网络服务器、DNAStar生物分析软件等对腰果主要过敏原Ana o 2的结构和抗原表位进行预测,分析Ana o 2蛋白的抗原... 腰果是引起人们过敏的主要食物之一。作者采用生物信息学方法,通过Pubmed网络服务器、生物信息分析软件SOPMA、swiss-model网络服务器、DNAStar生物分析软件等对腰果主要过敏原Ana o 2的结构和抗原表位进行预测,分析Ana o 2蛋白的抗原表位可能是108-111,181-186,217-218,234-238,244-255,283-287。这为腰果过敏原的进一步研究提供理论参考,并对开发低过敏腰果制品提供帮助。 展开更多
关键词 腰果 Anao2 结构 抗原表位
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鲤春病毒血症病毒Shlj1株糖蛋白空间结构及其B细胞抗原表位的预测 被引量:6
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作者 纪锋 徐黎明 +4 位作者 赵景壮 刘淼 卢彤岩 贺文斌 尹家胜 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期440-446,共7页
为预测鲤春病毒血症病毒(Spring Viremia of Carp Virus,SVCV)Shlj1株糖蛋白(Glycoprotein,G)的空间结构及B细胞抗原表位,采用RT-PCR法从接种SVCV的鲤上皮细胞悬液提取的病毒总RNA中扩增糖蛋白基因,并通过序列测定获得Shlj1株糖蛋白基... 为预测鲤春病毒血症病毒(Spring Viremia of Carp Virus,SVCV)Shlj1株糖蛋白(Glycoprotein,G)的空间结构及B细胞抗原表位,采用RT-PCR法从接种SVCV的鲤上皮细胞悬液提取的病毒总RNA中扩增糖蛋白基因,并通过序列测定获得Shlj1株糖蛋白基因的核苷酸序列及氨基酸序列,利用Phyre2对Shlj1分离株的糖蛋白空间结构进行预测,使用DNAStar软件综合分析糖蛋白的柔性区域、亲水性、表面可能性和抗原指数参数。结果表明:获得的SVCV Shlj1株糖蛋白核苷酸序列长1527 bp,推导出其氨基酸序列为509aa;空间结构预测显示,SVCV Shlj1株糖蛋白存在一定数量的α-螺旋、β-折叠、β-转角及大量无规则卷曲结构,空间构象较规则;抗原指数及抗原表位指数分析显示,糖蛋白中存在许多抗原指数较高的区域,该区域平均抗原指数为1.025,最大值达1.250,其中5个区域(4~26、145~157、293~302、315~327、407~491氨基酸区段)可能是B细胞抗原表位的主要分布区域。本研究结果为SVCV糖蛋白表位疫苗的设计及单克隆抗体的制备奠定了理论基础。 展开更多
关键词 鲤春病毒血症病毒 糖蛋白 空间结构 B细胞抗原表位
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鸭坦布苏病毒E蛋白线性化B细胞抗原表位的鉴定 被引量:5
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作者 张琳 余斌 +6 位作者 倪征 陈柳 云涛 叶伟成 华炯钢 崔言顺 张存 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第12期2009-2014,共6页
为鉴定鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus,DTMUV)的B细胞抗原表位,以纯化的DTMUV YY5株为抗原制备了2株单克隆抗体AE4和BD10,研究证实BD10为线性化表位,其结合的抗原表位位于E蛋白的第三结构域(DomainⅢ,D_Ⅲ)。将DTMUV E蛋白D_Ⅲ结构域... 为鉴定鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus,DTMUV)的B细胞抗原表位,以纯化的DTMUV YY5株为抗原制备了2株单克隆抗体AE4和BD10,研究证实BD10为线性化表位,其结合的抗原表位位于E蛋白的第三结构域(DomainⅢ,D_Ⅲ)。将DTMUV E蛋白D_Ⅲ结构域基因截短为具有末端相互重叠的15段,与MBP融合表达后以单克隆抗体BD10进行肽库扫描,结果筛选出DTMUV一个B细胞线性表位_(385)LVGSGKGQI_(393)(EP385)。该表位原核融合表达产物免疫小鼠制备的抗体,能够和DTMUV E蛋白反应,表明EP385表位具有良好的免疫原性,可为DTMUV多肽疫苗的研制及特异血清学诊断方法的开发奠定基础。 展开更多
关键词 鸭坦布苏病毒 单克隆抗体 肽库扫描 抗原表位
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猪流行性腹泻病毒流行毒株S基因的遗传变异和B细胞线性抗原表位分析 被引量:7
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作者 程小娜 张志 +8 位作者 樊雅婷 刘自立 吴发兴 刘爽 董雅琴 邵卫星 杨雨辉 王树双 李晓成 《动物医学进展》 北大核心 2015年第8期45-50,共6页
为了解我国猪流行性腹泻病毒(PEDV)的遗传变异规律,应用连续RTPCR 方法扩增分离的4株PEDV 流行毒株的S基因,并对S基因进行测序、同源进化和B 细胞抗原表位分析.结果显示,4个流行毒株S基因长4161(4158)个碱基,在59-62位(GENQ)和... 为了解我国猪流行性腹泻病毒(PEDV)的遗传变异规律,应用连续RTPCR 方法扩增分离的4株PEDV 流行毒株的S基因,并对S基因进行测序、同源进化和B 细胞抗原表位分析.结果显示,4个流行毒株S基因长4161(4158)个碱基,在59-62位(GENQ)和140(N)位的插入突变和163-164位(NI)缺失突变,属于与CV777、DR13和KPEDV-9等参考疫苗毒株不同的进化分支G2群,与参考疫苗毒株之间的氨基酸同源性为92.4%~93.3%;B细胞线性抗原表位分析显示,流行毒株52-62、360-365、752-781位抗原表位显著高于疫苗毒株,提示可能与流行毒株的致病性、受体结合能力和侵染性等相关. 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 S基因 遗传变异 突变 B细胞抗原表位
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口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域单克隆抗体识别的抗原表位分析 被引量:6
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作者 赵建勇 伏小平 +3 位作者 独军政 高闪电 冯艳丽 常惠芸 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第4期1583-1585,共3页
[目的]分析测定口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域单克隆抗体(mAb)的抗原识别位点、饱和值、亲和力常数。[方法]利用叠加ELISA法、间接ELISA法、硫氰酸盐洗脱法测定C2D8、B7B6、B8C9、C4C7、E7C7 5株mAb的抗原识别位点、饱... [目的]分析测定口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域单克隆抗体(mAb)的抗原识别位点、饱和值、亲和力常数。[方法]利用叠加ELISA法、间接ELISA法、硫氰酸盐洗脱法测定C2D8、B7B6、B8C9、C4C7、E7C7 5株mAb的抗原识别位点、饱和值、亲和力常数。[结果]5株mAb间具有相似或不同的抗原识别位点,其中C4C7与E7C7、C4C7与B8C9、E7C7与B8C9等mAb间的识别位点相似,而C4C7与B7B6、E7C7与C2D8等mAb间的识别位点不同。5株mAb C2D8、E7C7、B8C9、C4C7、B7B6的饱和值分别为1∶200、1∶400、1∶800、1∶800、1∶800,亲和力为B8C9>C4C7>B7B6≥E7C7>C2D8。[结论]分析测定了5株mAb的抗原识别位点、饱和值、亲和力常数,从而为利用mAb深入研究整联蛋白αvβ6在口蹄疫病毒感染过程中的作用奠定基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 整联蛋白 受体 单克隆抗体 抗原表位
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