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Hsp70-肿瘤抗原肽复合物修饰的DC疫苗体内外特异性抗瘤作用 被引量:17
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作者 黄波 冯作化 张桂梅 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第9期614-617,共4页
目的 :探讨树突状细胞 (DC)及Hsp70 肿瘤抗原肽复合物修饰后的体内外特异性抗瘤作用。方法 :采用一定的生化技术 ,从H2 2肝癌细胞中提取肿瘤抗原肽 ,并在体外与Hsp70进行结合 ;采用细胞培养技术 ,培养rmGM CSF、rmIL 4诱导的小鼠骨髓细... 目的 :探讨树突状细胞 (DC)及Hsp70 肿瘤抗原肽复合物修饰后的体内外特异性抗瘤作用。方法 :采用一定的生化技术 ,从H2 2肝癌细胞中提取肿瘤抗原肽 ,并在体外与Hsp70进行结合 ;采用细胞培养技术 ,培养rmGM CSF、rmIL 4诱导的小鼠骨髓细胞 ,体外获取大量的DC ,后者经Hsp70 肿瘤抗原肽复合物修饰后刺激小鼠脾淋巴细胞 ,通过MTT法进行检测淋巴细胞的激活 ;收集上述刺激传代培养的淋巴细胞 ,检测其对H2 2瘤细胞和艾氏腹水癌细胞的杀伤功能 ;采用H2 2瘤细胞肌肉接种和H2 2瘤细胞、艾氏腹水癌细胞腹腔接种 ,对接种小鼠给予经体外修饰的DC回输 ,观察其抑制肿瘤的效果。结果 :Hsp70 肿瘤抗原肽复合物可使DC成熟 ,大量分泌IL 12、TNF α、IL 1β等细胞因子 ,并能够使DC激活小鼠脾淋巴细胞 ;激活后传代培养的淋巴细胞对H2 2瘤细胞能够特异性地杀伤 ,而对艾氏腹水癌细胞无效 ;经Hsp 70 肿瘤抗原肽复合物修饰后的DC可作为一种有效的瘤苗 ,体内能特异性地抑制小鼠H2 2肿瘤生长。结论 :Hsp70 肿瘤抗原肽复合物能够很好地修饰体外诱导获取的DC ,使后者成为一种有效的瘤苗 ,体外能够特异性地激活淋巴细胞 。 展开更多
关键词 树突状细胞 肿瘤免疫学 Hsp70-肿瘤抗原肽复合物 DC疫苗 特异性抗瘤作用
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可溶性HLA-G1抗原肽复合物的体外折叠及其功能研究 被引量:4
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作者 杨敬宁 吴雄文 +3 位作者 梁智辉 韩军艳 黄亚非 龚非力 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期265-268,共4页
目的:体外折叠形成可溶性HLA G1抗原肽复合物,并研究其生物学功能。方法:以原核表达的可溶性HLA-G1的重链及轻链β2m,与人工合成的抗原九肽体外进行共折叠复性。将折叠产物通过SephadexG75层析柱纯化,经Westernblot进行构象鉴定。探讨... 目的:体外折叠形成可溶性HLA G1抗原肽复合物,并研究其生物学功能。方法:以原核表达的可溶性HLA-G1的重链及轻链β2m,与人工合成的抗原九肽体外进行共折叠复性。将折叠产物通过SephadexG75层析柱纯化,经Westernblot进行构象鉴定。探讨可溶性HLA-G1分子对NK细胞杀伤活性的影响,对混合淋巴细胞培养中T细胞增殖的影响,以及对活化T细胞凋亡的影响。结果:折叠产物可与mAbW6/32特异性结合,在Westernblot的鉴定中呈阳性反应。可溶性HLA-G1可有效地抑制NK细胞的细胞毒作用,抑制混合淋巴细胞培养中T细胞的增殖,促进活化T细胞发生凋亡。结论:体外折叠成功地形成可溶性HLA-G1抗原肽复合物,该复合物具有抑制NK细胞和T细胞的活性。 展开更多
关键词 sHLA-G1-抗原肽复合物 折叠复性 细胞毒作用 增殖 凋亡
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黑色素瘤B16细胞热休克蛋白-抗原肽复合物的体内外抑瘤效应 被引量:1
3
作者 杨英 李秀娟 +2 位作者 孙祖玥 龚守良 李修义 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2000年第2期121-123,共3页
目的:黑色素瘤B16细胞胞浆HSP-抗原肽复合物(HAC)的制备、免疫原性的诱导及其抑瘤作用的研究。方法:采用Tris-HCI提取和Sephacryl S-200凝胶过滤制备B16细胞HAC,通过C57BL/6J小鼠... 目的:黑色素瘤B16细胞胞浆HSP-抗原肽复合物(HAC)的制备、免疫原性的诱导及其抑瘤作用的研究。方法:采用Tris-HCI提取和Sephacryl S-200凝胶过滤制备B16细胞HAC,通过C57BL/6J小鼠体内诱导特异性CTL,再经体内、体外实验检测其抑癌作用。结果:凝胶过滤获得的含60~97kD蛋白的41,47和53管的HAC可以降低肿瘤发生率、延长肿瘤出现时间及降低小鼠死亡率。结论:B16细胞胞浆中的60~97kD的HAC具有免疫原性及抑瘤作用,为制备肿瘤疫苗提供了实验依据。 展开更多
关键词 热休克蛋白-抗原肽复合物 黑色素瘤 B16细胞 CTL
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人类白细胞抗原-抗原肽复合物特异性细胞毒性T细胞的诱生及克隆 被引量:1
4
作者 房崇芸 吴雄文 龚非力 《同济医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期407-409,共3页
为建立一种有效诱导及克隆人类白细胞抗原 ( HL A) -抗原肽复合物特异性细胞毒性 T细胞 ( CTL)的方法。用 EB病毒转化的 B淋巴母样细胞系细胞作为刺激细胞 ,采用长期混合淋巴细胞培养法诱导自身外周血 T细胞库中抗原肽 - HL A复合物特异... 为建立一种有效诱导及克隆人类白细胞抗原 ( HL A) -抗原肽复合物特异性细胞毒性 T细胞 ( CTL)的方法。用 EB病毒转化的 B淋巴母样细胞系细胞作为刺激细胞 ,采用长期混合淋巴细胞培养法诱导自身外周血 T细胞库中抗原肽 - HL A复合物特异性 CTL 增殖、分化 ,并用有限稀释法对之进行克隆。通过细胞毒实验证实获得的 CD3 +、CD8+ T细胞克隆具有高度抗原特异性并受某些 HL A型别的限制。 展开更多
关键词 细胞毒性 诱生 克隆细胞 人白细胞抗原 抗原肽复合物
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感染非典型新城疫蛋鸡组织中HSP70抗原肽复合物提取与纯化 被引量:1
5
作者 石娇 于维军 +1 位作者 吴高峰 冯影 《中国家禽》 北大核心 2009年第16期19-21,共3页
为建立从患有非典型新城疫的蛋鸡组织细胞中提取、纯化热休克蛋白HSP70抗原肽复合物的方法,采取三步蛋白纯化法从非典型新城疫蛋鸡肝脏组织中提取、纯化HSP70抗原肽复合物。经分级硫酸铵盐析后,依次用ConA-Sepharose亲和层析和DEAE-Seph... 为建立从患有非典型新城疫的蛋鸡组织细胞中提取、纯化热休克蛋白HSP70抗原肽复合物的方法,采取三步蛋白纯化法从非典型新城疫蛋鸡肝脏组织中提取、纯化HSP70抗原肽复合物。经分级硫酸铵盐析后,依次用ConA-Sepharose亲和层析和DEAE-Sephacel离子交换层析分离纯化。所得蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blotting进行蛋白分子量及性质鉴定,Bradford法测定蛋白浓度。分离、纯化得到的蛋白经SDS-PAGE、银染鉴定为单一带,分子量为70ku;Western blotting结果证实为HSP70。每克新鲜肝脏细胞最终获得90~110μgHSP70。使用本分离纯化方法可获得高纯度HSP70抗原肽复合物。 展开更多
关键词 HSP70抗原肽复合物 非典型新城疫 蛋鸡
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预先形成的重链二硫键有助于HLA-A2-抗原肽复合物体外折叠 被引量:1
6
作者 费世江 吴雄文 +4 位作者 翁秀芳 蔡蕾 梁智辉 韩军艳 龚非力 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期167-170,共4页
 目的: 提高可溶性HLA -A2 肽复合物体外折叠效率。方法: 在变性非还原条件下提取原核表达的HLA重链(HC)。通过离子交换及硫酸铵沉淀初步纯化后, 在β2微球蛋白(β2m)及特异性抗原肽 (Try369-377 )存在的情况下, 于pH6. 6的折叠缓冲体...  目的: 提高可溶性HLA -A2 肽复合物体外折叠效率。方法: 在变性非还原条件下提取原核表达的HLA重链(HC)。通过离子交换及硫酸铵沉淀初步纯化后, 在β2微球蛋白(β2m)及特异性抗原肽 (Try369-377 )存在的情况下, 于pH6. 6的折叠缓冲体系中稀释复性。利用Westernblot及ELISA检测折叠产物。结果: 折叠复合物中主要含有HLA-A2 抗原肽复合物和β2m, 较少含有HC聚合体; 折叠效率较传统方法提高 2. 5倍。结论: 通过与传统方法作比较, 证实此法折叠效率比传统方法高, 为进一步HLA 肽四聚体及人工抗原提呈细胞的制备可提供足够可溶性的HLA -A2 肽单体。 展开更多
关键词 HLA-A2-抗原肽复合物 体外折叠 二硫键形成
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可溶性HLA-A2-肽复合物的体外折叠与生物素化 被引量:10
7
作者 翁秀芳 陈浩 +4 位作者 吴雄文 梁智辉 韩军艳 黄亚非 龚非力 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期265-268,共4页
目的 :可溶性HLA A2 抗原肽复合物的体外折叠复性与生物素化。方法 :原核高效表达的HLAH链及 β2m,在抗原肽 (EB病毒的膜潜伏蛋白LMP2A的NH2 CLGGLLTMV COOH残基 )的存在下 ,通过稀释复性折叠成HLA A2 抗原肽复合物 ,并在BirA酶的作... 目的 :可溶性HLA A2 抗原肽复合物的体外折叠复性与生物素化。方法 :原核高效表达的HLAH链及 β2m,在抗原肽 (EB病毒的膜潜伏蛋白LMP2A的NH2 CLGGLLTMV COOH残基 )的存在下 ,通过稀释复性折叠成HLA A2 抗原肽复合物 ,并在BirA酶的作用下进行生物素化 ,使生物素结合到HLA A2 抗原肽复合物中的H链C端。利用特异性抗体 (mAbW6 / 32和兔抗人 β2m抗体 )及链霉亲合素进行ELISA和Westernblot,检测稀释复性和生物素化的折叠产物。结果 :折叠复合物中 ,主要含有HLAH链聚合体、HLA A2 肽复合物单体及 β2m3种成分 ,其中H链聚合体与HLA A2单体可生物素化。结论 :成功地获得生物素化的HLA A2 抗原肽复合物单体 ,为进一步构建四聚体及制备人工抗原提呈细胞奠定了基础 ,也为过程复杂的HLA 展开更多
关键词 HLA—A2-抗原肽复合物 生物素化 BirA酶
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sHLA-A*0201-抗原肽四聚体的构建与功能检测 被引量:1
8
作者 翁秀芳 吴雄文 +4 位作者 梁智辉 蔡蕾 费世江 陈国安 龚非力 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期244-247,251,共5页
目的:构建有功能的sHLA-A*0201-抗原肽四聚体,建立一套HLAⅠ类分子/抗原肽的四聚体制备技术。方法:利用基因工程及体外折叠技术构建sHLA-A*0201-LMP2A426-434复合物分子,并在BirA酶的作用下生物素化,与荧光标记的亲和素衍生物以分子数4... 目的:构建有功能的sHLA-A*0201-抗原肽四聚体,建立一套HLAⅠ类分子/抗原肽的四聚体制备技术。方法:利用基因工程及体外折叠技术构建sHLA-A*0201-LMP2A426-434复合物分子,并在BirA酶的作用下生物素化,与荧光标记的亲和素衍生物以分子数4∶1结合而形成HLA-A*0201-LMP2A426-434四聚体。获得的四聚体对长期混合淋巴细胞培养中增殖的抗原特异性CTL进行检测,同时用细胞毒实验验证。结果:荧光标记的亲和素与生物素化的HLA-A*0201-抗原肽复合物分子正确结合,制备的四聚体能够与长期混合淋巴细胞培养出的特异性T细胞结合。结论:从结构与功能上证实成功地获得有功能的HLA-A*0201-抗原肽复合物四聚体。为进一步研究T细胞识别机制与功能奠定了基础,也为过程复杂的HLA-抗原肽四聚体制备提供了可行的免疫学监控方法。 展开更多
关键词 HLA-A*0201-抗原肽复合物 生物素化 BirA HLA-A*0201-抗原四聚体 抗原特异性CTL
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HBc-HLA-A* 1101-β2m复合物单体及其四聚体的制备和鉴定 被引量:1
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作者 郝友华 杨新星 +4 位作者 丁红晖 宋娜 朱帆 喻植群 杨东亮 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期352-354,356,共4页
目的制备HBc-HLA-A * 1101-β2m复合物单体和四聚体,并对其特异性进行了鉴定。方法原核高效表达的HLA-A * 1101-BSP和β2m蛋白,在抗原肽(乙型肝炎病毒的核心蛋白HBc88-96)的存在下,体外复性折叠成可溶性的HLA-A * 1101抗原肽复合... 目的制备HBc-HLA-A * 1101-β2m复合物单体和四聚体,并对其特异性进行了鉴定。方法原核高效表达的HLA-A * 1101-BSP和β2m蛋白,在抗原肽(乙型肝炎病毒的核心蛋白HBc88-96)的存在下,体外复性折叠成可溶性的HLA-A * 1101抗原肽复合物单体,经BirA酶作用并通过凝胶过滤层析法纯化复合物单体;然后将此复合物单体与藻红蛋白标记的链霉亲和素按一定比例耦合构建成四聚体;最后用流式细胞仪检测分析该四聚体结合特异性CTL的能力。结果Western blot和Dot-ELISA检测显示所制备的HLA-A * 1101抗原肽复合物单体具有天然构象,且可被生物素化;流式细胞仪分析显示所制备的四聚体可与HLA-A11^+供者的抗原特异性CTL结合。结论成功制备了具有完整构象的生物素化HLA-A * 1101抗原肽复合物单体;此四聚体可以特异检测抗原特异性的细胞毒性T细胞。 展开更多
关键词 HLA-A* 1101抗原肽复合物单体 四聚体
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可溶性HLA-A*0201-PR1复合物的构建与鉴定 被引量:1
10
作者 孙万军 徐东刚 +6 位作者 胡海兰 邹民吉 杜建芳 王金凤 蔡欣 王嘉玺 艾辉胜 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2007年第2期352-356,共5页
为制备HLA-A*0201-PR1四聚体,本课题构建了可溶性的HLA-A*0201-PR1复合物。以原核表达的HLA-A*0201-BSP融合蛋白为重链,β2-微球蛋白(β2m)为轻链,与人工合成的HLA-A2限制性抗原肽PR1(蛋白酶3的第169-177氨基酸,VLQELNVTV)进行共折叠复... 为制备HLA-A*0201-PR1四聚体,本课题构建了可溶性的HLA-A*0201-PR1复合物。以原核表达的HLA-A*0201-BSP融合蛋白为重链,β2-微球蛋白(β2m)为轻链,与人工合成的HLA-A2限制性抗原肽PR1(蛋白酶3的第169-177氨基酸,VLQELNVTV)进行共折叠复性,以生成可溶性HLA-A*0201-PR1复合物。应用BirA酶对复性混和物进行生物素化,再经阴离子交换柱纯化,得到生物素化的可溶性HLA-A*0201-PR1复合物。应用凝胶过滤高效液相色谱分析可溶性HLA-A*0201-PR1复合物的生成率。利用HLA-A2构象特异性抗体(BB7.2)及链霉亲和素进行Western blot和ELISA分析,对生物素化的可溶性HLA-A*0201-PR1复合物进行鉴定。结果表明:在折叠体系中,主要含有HLA-A*0201-BSP聚合体、HLA-A*0201-PR1复合物及β2m,其中可溶性复合物生成率约18%。获得的HLA-A*0201-PR1复合物可在BirA酶作用下被有效生物素化。结论:成功地获得了生物素化的可溶性HLA-A*0201-PR1复合物,为进一步制备HLA-A*0201-PR1四聚体创立了基础。 展开更多
关键词 HLA.抗原肽复合物 HLA-A*0201-PRl复合物 HLA-A*0201-PRl四聚体
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CTL对同种异体靶细胞杀伤作用的实验研究 被引量:2
11
作者 房崇芸 吴雄文 +4 位作者 韩军艳 刘敏 杨志章 梁智辉 龚非力 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期119-122,共4页
目的 :研究特异性CTL杀伤的效应与HLA型别之间的关系。方法 :用已知型别的EB病毒转化的B淋巴母样细胞 (Epstein Barr transformedBlymphoblastoidcellline ,EBV LCL)与同种异体外周血单个核细胞 (PBMC)共培养 ,激活同种异体抗原特异性... 目的 :研究特异性CTL杀伤的效应与HLA型别之间的关系。方法 :用已知型别的EB病毒转化的B淋巴母样细胞 (Epstein Barr transformedBlymphoblastoidcellline ,EBV LCL)与同种异体外周血单个核细胞 (PBMC)共培养 ,激活同种异体抗原特异性细胞毒性T细胞 (cytotoxicityTcell,CTL) ,然后利用同位素释放法观察CTL对HLA I类表型不同的EBV LCL的杀伤活性。结果 :用EBV LCL 1刺激自身PBMC 1所诱导的CTL 1a,只能杀伤EBV LCL 1,而不能杀伤HLA I类表型不同的EBV LCL 2 ;但用EBV LCL 2刺激PBMC 1所诱导的CTL 1b ,却能有效杀伤HLA I类表型不同的EBV LCL 2。结论 :①MHC表型不同的免疫细胞之间可以发生相互作用 ;②TCR既不单独识别靶细胞表面的抗原肽 ,也不直接识别靶细胞表面的MHC分子 (MHC特异性抗原决定簇 ) ,而是识别MHC 抗原肽复合物的表面综合信息 ,后者可能是由MHC 抗原肽复合物表面的空间构象、电荷性质及其分布等信息所构成 ;③所谓CTL的特异性杀伤作用 ,是MHC 抗原肽复合物表面信息激活该信息特异性T细胞克隆的结果。 展开更多
关键词 CTL限制性杀伤 HLA型别 TCR MHC-抗原肽复合物 表面信息
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TCR/CD3介导T细胞活化的信号途径 被引量:7
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作者 陈采凤 刘彦信 郑德先 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期970-975,共6页
关键词 TCR/CD3复合物 T细胞活化 信号途径 介导作用 MHC-抗原肽复合物 协同刺激信号 激活诱导的细胞死亡 特异性抗原
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Effects of heat shock protein-antigen peptide complexes (HACs) in melanoma B16 cell line on transplanted tumor development in mice
13
作者 GONG Shou liang,YANG Ying,LI Xiu juan,FU Shi bo,SUN Zu yue,CHEN Sha li,LI Xiu yi (MH Radiobiology Research Unit,Jilin University,Changchun 130021 China) 《白求恩医科大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第5期457-460,共4页
目的 :建立黑色素瘤 B16细胞热休克蛋白 -抗原肽复合物 (HACs)的制备方法并测其抑瘤效应。方法 :应用 Sephacryl S- 2 0 0凝胶过滤制备 HAC粗提物 ,应用 SDS- PAGE纯化 HACs,并测其抑瘤效应。结果 :应用 SDS- PAGE纯化的 HAC6 0、 HAC75... 目的 :建立黑色素瘤 B16细胞热休克蛋白 -抗原肽复合物 (HACs)的制备方法并测其抑瘤效应。方法 :应用 Sephacryl S- 2 0 0凝胶过滤制备 HAC粗提物 ,应用 SDS- PAGE纯化 HACs,并测其抑瘤效应。结果 :应用 SDS- PAGE纯化的 HAC6 0、 HAC75和 HAC97不同程度地降低肿瘤发生率 ,延迟肿瘤发生时间和减慢肿瘤生长速度。结论 :6 0 0 0 0~ 970 0 0 展开更多
关键词 黑色素瘤 B16细胞 热休克蛋白-抗原肽复合物 HACs 抑瘤效应
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免疫学
14
《中国医学文摘(基础医学)》 CSCD 2005年第4期230-235,共6页
猪FasL基因在猪软骨细胞上的表达和鉴定;重组蓖麻毒紊A链的融合表达、纯化及活性研究;凋亡抑制蛋白survivin在活化T细胞中的表达及其意义;人CD59基因的突变和表达及其活性研究;预先形成的重链二硫键有助于HLA-A2-抗原肽复合物体外... 猪FasL基因在猪软骨细胞上的表达和鉴定;重组蓖麻毒紊A链的融合表达、纯化及活性研究;凋亡抑制蛋白survivin在活化T细胞中的表达及其意义;人CD59基因的突变和表达及其活性研究;预先形成的重链二硫键有助于HLA-A2-抗原肽复合物体外折叠;人源噬菌体抗体库的构建及抗人NH-LBP抗体的筛选与鉴定;抗禽流感病毒轻链抗体库的构建;CTL识别的HLA-A2限制性人卵巢癌相关抗原OVA66表位的鉴定;含多抗原表位的嵌合SARS-CoV基因疫苗的构建和免疫原性研究;TM-TNF-α介导的反向信号协同增强sTNF-α,对U937细胞的激活作用;NK92细胞的胞吐效应与SNAP-23蛋白转位相关;CXCL16抗体可阻断BCG和LPS诱导的小鼠免疫性肝损伤;GM-CSF对抗原化抗体基因免疫TH细胞应答的调节作用;趋化性细胞因子受体在Tc1和Tc2亚群的差异表达;在单个细胞水平上分析抗原特异性Th1/Th2细胞因子产生的关联性;人OX40-Fc分子的构建、真核表达及活性研究;人免疫缺陷病毒Ⅱ型核心蛋白DNA疫苗的实验免疫研究;PD-L1 mAb的制备、鉴定及其特性的研究;噬菌体呈现的多聚多肽3A8诱导Jurkat细胞的凋亡效应;T细胞受体Dβ-Jβ sjTRECs连接区多样性;α-Dystroglycan在胸腺T细胞的表达及其对胸腺发育的作用;Bcl-2家族蛋白参与调节CD3ε和5-氟尿嘧啶介导的T淋巴细胞凋亡;人白细胞介素21在真核细胞中表达及其体外促T细胞增殖作用;小干扰RNA特异性抑制淋巴细胞共刺激分子CD28基因表达的研究;猪-猕猴延迟性异种移植排斥反应的发生机制;天花粉蛋白在不同小鼠品系中区分性下调树突状细胞IL-12分泌和CD80表达;复合HA-2氨基多肽可增强chitosan-DNA疫苗的免疫保护效果;CD4^+CD25^+调节性T细胞抑制小鼠自身免疫性甲状腺炎的发生;人β2-微球蛋白在pET-22b(+)表达载体中的克隆、表达与纯化;B7-1/B7-H1相对比例变化对Hsp70-肽复合物抗肿瘤免疫效应的影响。 展开更多
关键词 HLA-A2-抗原肽复合物 chitosan-DNA疫苗 淋巴细胞共刺激分子 TH1/TH2细胞因子 噬菌体抗体库 免疫学 HLA-A2限制性 趋化性细胞因子受体 人免疫缺陷病毒Ⅱ型
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