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人源抗EB病毒潜伏膜蛋白1特异性基因工程抗体Fab的筛选与特性
被引量：
1
1
作者
毛圆
张大为
+5 位作者
曹清
唐小军
林红
陈仁杰
徐凛峰
冯振卿
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第12期1646-1651,共6页
目的:应用噬菌体展示技术制备抗EB病毒编码的潜伏膜蛋白1(latert membrare protern 1,LMP1)特异性、高亲和力的全人抗体Fab片段。方法:利用稳定转染表达LMP1的SUNE-1细胞及原核表达的LMP1胞外区蛋白作为抗原对大容量人源Fab抗体库进行...
目的:应用噬菌体展示技术制备抗EB病毒编码的潜伏膜蛋白1(latert membrare protern 1,LMP1)特异性、高亲和力的全人抗体Fab片段。方法:利用稳定转染表达LMP1的SUNE-1细胞及原核表达的LMP1胞外区蛋白作为抗原对大容量人源Fab抗体库进行差减筛选及固相筛选,经过5轮细胞筛选和3轮固相筛选,随机挑选30个克隆经酶联免疫吸附法鉴定,阳性克隆进行可溶性表达,用LMP1阳性表达的人鼻咽癌细胞株HNE2/LMP1鉴定抗LMP1抗体Fab的结合活性。结果:Western blot、免疫荧光结果显示,从大容量人源Fab抗体库中筛选出1株抗LMP1抗体Fab,细胞ELISA、荧光激活细胞分类术、免疫荧光分析、免疫组化检测结果显示Fab与人鼻咽癌细胞表面LMP1分子有较好的结合活性。结论:从人源Fab抗体库中筛选的Fab抗体能够与鼻咽癌细胞表面LMP1分子特异性结合,为研制用于EBV相关肿瘤如鼻咽癌生物治疗的靶向药物,提供了候选分子。
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关键词
噬菌体抗体库
EB病毒
潜伏膜蛋白1
抗原结合片段
靶向治疗
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职称材料
凝胶过滤层析一步纯化MC-LR Fab的方法及吸附机制初探
2
作者
焦文阳
陆宁
+3 位作者
王兰腾
关甜
雷红涛
沈兴
《食品工业科技》
CAS
北大核心
2019年第21期84-89,共6页
为高效制备高纯微囊藻毒素(MC-LR)Fab片段,采用木瓜蛋白酶酶解腹水中纯化获得的单克隆抗体,利用该Fab片段与凝胶过滤层析介质结合的特殊现象分离酶解混合物。通过单因素实验考察流动相中离子强度和pH对Fab片段在柱中保留行为的影响,结合...
为高效制备高纯微囊藻毒素(MC-LR)Fab片段,采用木瓜蛋白酶酶解腹水中纯化获得的单克隆抗体,利用该Fab片段与凝胶过滤层析介质结合的特殊现象分离酶解混合物。通过单因素实验考察流动相中离子强度和pH对Fab片段在柱中保留行为的影响,结合Fab片段等电点(pI)及聚集性质分析二者结合机制。结果表明,腹水经protein G纯化得到纯度大于90%的IgG,IgG经木瓜蛋白酶酶解,主要产物为Fab片段、Fc片段和少量IgG,酶解混合物经凝胶过滤层析一步纯化获得纯度为94.5%,回收率为51%,对MC-LR抑制率为94%的Fab片段。Fab片段pI为6.02,由于表面较强疏水性产生聚集,疏水吸附导致Fab片段与凝胶过滤层析介质结合,降低流动相中离子强度,减弱疏水作用同时提高pH增强离子排阻作用可使Fab片段消除吸附,实现了Fab片段的高效制备。
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关键词
抗原结合片段
(
Fab)
凝胶过滤层析
纯化
疏水作用
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职称材料
题名
人源抗EB病毒潜伏膜蛋白1特异性基因工程抗体Fab的筛选与特性
被引量：
1
1
作者
毛圆
张大为
曹清
唐小军
林红
陈仁杰
徐凛峰
冯振卿
机构
江苏省省级机关医院耳鼻咽喉-头颈外科
南京医科大学第二附属医院耳鼻咽喉-头颈外科
南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室
江苏省血液中心
南京医科大学第二附属医院普外科
出处
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第12期1646-1651,共6页
基金
江苏省科技厅社会发展支撑计划项目(BE2009152)
南京医科大学青年基金资助项目(QN201004)
文摘
目的:应用噬菌体展示技术制备抗EB病毒编码的潜伏膜蛋白1(latert membrare protern 1,LMP1)特异性、高亲和力的全人抗体Fab片段。方法:利用稳定转染表达LMP1的SUNE-1细胞及原核表达的LMP1胞外区蛋白作为抗原对大容量人源Fab抗体库进行差减筛选及固相筛选,经过5轮细胞筛选和3轮固相筛选,随机挑选30个克隆经酶联免疫吸附法鉴定,阳性克隆进行可溶性表达,用LMP1阳性表达的人鼻咽癌细胞株HNE2/LMP1鉴定抗LMP1抗体Fab的结合活性。结果:Western blot、免疫荧光结果显示,从大容量人源Fab抗体库中筛选出1株抗LMP1抗体Fab,细胞ELISA、荧光激活细胞分类术、免疫荧光分析、免疫组化检测结果显示Fab与人鼻咽癌细胞表面LMP1分子有较好的结合活性。结论:从人源Fab抗体库中筛选的Fab抗体能够与鼻咽癌细胞表面LMP1分子特异性结合,为研制用于EBV相关肿瘤如鼻咽癌生物治疗的靶向药物,提供了候选分子。
关键词
噬菌体抗体库
EB病毒
潜伏膜蛋白1
抗原结合片段
靶向治疗
Keywords
phage antibody library
EBV
LMP1
Fab
targeted therapy
分类号
Q781 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
凝胶过滤层析一步纯化MC-LR Fab的方法及吸附机制初探
2
作者
焦文阳
陆宁
王兰腾
关甜
雷红涛
沈兴
机构
华南农业大学食品学院
出处
《食品工业科技》
CAS
北大核心
2019年第21期84-89,共6页
基金
国家自然科学基金(31601555)
文摘
为高效制备高纯微囊藻毒素(MC-LR)Fab片段,采用木瓜蛋白酶酶解腹水中纯化获得的单克隆抗体,利用该Fab片段与凝胶过滤层析介质结合的特殊现象分离酶解混合物。通过单因素实验考察流动相中离子强度和pH对Fab片段在柱中保留行为的影响,结合Fab片段等电点(pI)及聚集性质分析二者结合机制。结果表明,腹水经protein G纯化得到纯度大于90%的IgG,IgG经木瓜蛋白酶酶解,主要产物为Fab片段、Fc片段和少量IgG,酶解混合物经凝胶过滤层析一步纯化获得纯度为94.5%,回收率为51%,对MC-LR抑制率为94%的Fab片段。Fab片段pI为6.02,由于表面较强疏水性产生聚集,疏水吸附导致Fab片段与凝胶过滤层析介质结合,降低流动相中离子强度,减弱疏水作用同时提高pH增强离子排阻作用可使Fab片段消除吸附,实现了Fab片段的高效制备。
关键词
抗原结合片段
(
Fab)
凝胶过滤层析
纯化
疏水作用
Keywords
antigen-binding fragment(Fab)
gel filtration chromatography
purification
hydrophobic interaction
分类号
TS201.3 [轻工技术与工程—食品科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人源抗EB病毒潜伏膜蛋白1特异性基因工程抗体Fab的筛选与特性
毛圆
张大为
曹清
唐小军
林红
陈仁杰
徐凛峰
冯振卿
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2012
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
凝胶过滤层析一步纯化MC-LR Fab的方法及吸附机制初探
焦文阳
陆宁
王兰腾
关甜
雷红涛
沈兴
《食品工业科技》
CAS
北大核心
2019
0
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职称材料
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