东毕吸虫成虫抗原纯化的试验研究

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作者 耿进明 李泽鸿 +2 位作者 史学增 黄伟 鲍文杰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第4期357-361,共5页

本研究首次以葡聚糖Ｇ２００纯化东毕吸虫成虫抗原，用７５１分光光度计测各管的ＯＤ值，结果共出现四个洗脱峰，其中以第一峰峰值最高（ＯＤ２８０＝１．７５），蛋白浓度为１．３２９ｍｇ／ｍｌ。将纯化的抗原与东毕吸虫阳性血清、阴... 本研究首次以葡聚糖Ｇ２００纯化东毕吸虫成虫抗原，用７５１分光光度计测各管的ＯＤ值，结果共出现四个洗脱峰，其中以第一峰峰值最高（ＯＤ２８０＝１．７５），蛋白浓度为１．３２９ｍｇ／ｍｌ。将纯化的抗原与东毕吸虫阳性血清、阴性血清采用ＩＨＡ的方法测定其抗原的特异性与敏感性。结果表明：纯化抗原（第一峰）在ＩＨＡ试验中具有特异性强（９３． 展开更多

关键词 东毕吸虫病 抗原纯化 牛病

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GEM技术浓缩纯化O型口蹄疫病毒灭活抗原方法的建立 被引量：4

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作者 汪浩 乔绪稳 +5 位作者 陈瑾 李图帅 张元鹏 侯继波 郑其升 孙卫东 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期147-153,共7页

[目的]验证利用革兰氏阳性增强基质颗粒(GEM)浓缩纯化口蹄疫病毒(FMDV)抗原的可行性。[方法]将含有3个自溶素基序的锚钩蛋白基因(PA)与针对O型口蹄疫病毒特异性纳米抗体基因(VHH)串联克隆入原核表达载体p ET-32a(+)中,构建原核表达载体p... [目的]验证利用革兰氏阳性增强基质颗粒(GEM)浓缩纯化口蹄疫病毒(FMDV)抗原的可行性。[方法]将含有3个自溶素基序的锚钩蛋白基因(PA)与针对O型口蹄疫病毒特异性纳米抗体基因(VHH)串联克隆入原核表达载体p ET-32a(+)中,构建原核表达载体p ET-VPA,将其转化大肠杆菌宿主菌BL21(DE3),表达获得融合重组蛋白VPA。先将GEM颗粒与重组蛋白VPA在37℃孵育30 min,离心,取沉淀用适量的FMDV抗原液重悬,再经一步低速离心,获得沉淀即为浓缩纯化的口蹄疫病毒抗原。利用SDS-PAGE、Western-blot、蛋白含量测定及146S测定等方法对浓缩纯化方法的可行性进行鉴定,并通过动物免疫试验初步验证浓缩纯化后抗原的免疫原性。[结果]VPA融合蛋白能够在大肠杆菌中部分可溶性表达。作为接头蛋白,VPA既能与GEM颗粒结合,又能与FMDV抗原结合。SDS-PAGE与Western-blot结果表明:FMDV通过GEM法得到有效纯化;146S测定结果表明FMDV的回收效率达到99%;总蛋白含量测定结果显示口蹄疫抗原杂蛋白去除率达到90%;动物免疫试验结果显示GEM技术纯化后的FMDV具有良好的免疫原性。[结论]利用GEM技术浓缩纯化口蹄疫病毒抗原是可行的。 展开更多

关键词 GEM技术 口蹄疫病毒 抗原纯化

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二棘血蜱叮咬中华硬蜱纯化抗原免疫接种宿主后的交叉免疫反应

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作者 刘志刚 叶炳辉 +1 位作者 崔晓民 徐敏 《中国生物防治》 CSCD 北大核心 2004年第2期95-98,共4页

选用中华硬蜱105kD柱层析纯化抗原对新西兰兔进行免疫接种,再用二棘血蜱进行叮咬,并与单纯二棘血蜱叮咬组和佐剂对照组进行对比,以探讨不同种属硬蜱之间的交叉免疫抗性。结果显示:单纯二棘血蜱叮咬组吸血量为181 3±44 3mg,而二棘... 选用中华硬蜱105kD柱层析纯化抗原对新西兰兔进行免疫接种,再用二棘血蜱进行叮咬,并与单纯二棘血蜱叮咬组和佐剂对照组进行对比,以探讨不同种属硬蜱之间的交叉免疫抗性。结果显示:单纯二棘血蜱叮咬组吸血量为181 3±44 3mg,而二棘血蜱叮咬由中华硬蜱105kD纯化抗原免疫接种组和佐剂对照组新西兰兔后其吸血量分别为102 1±25 3mg和168 5±40 9mg,纯化抗原免疫接种组较单纯二棘血蜱叮咬组和佐剂对照组吸血量分别下降43 7%和39 4%(P<0 01)。同时,纯化抗原免疫接种组也较单纯二棘血蜱叮咬组和佐剂对照组产卵量有显著下降。该研究结果表明中华硬蜱和二棘血蜱之间存在着交叉免疫反应。 展开更多

关键词 中华硬蜱 二棘血蜱 105kD纯化抗原 免疫接种 交叉免疫反应

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水牛梭形住肉孢子虫包囊纯化抗原的SDS-PAGE分析

4

作者 胡庭俊 赵四喜 +4 位作者 程富胜 段习文 董明显 潘光 武樊红 《中兽医医药杂志》 北大核心 1997年第4期15-16,共2页

应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析了水牛梭形住肉孢子虫包囊纯化抗原的蛋白质组分。采用垂直板型电泳，连续凝胶系统法，以考马斯亮兰Ｒ－２５０染色进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析的结果表明，水牛梭形住肉孢子虫包囊纯化抗原至少由１０种蛋白质组... 应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析了水牛梭形住肉孢子虫包囊纯化抗原的蛋白质组分。采用垂直板型电泳，连续凝胶系统法，以考马斯亮兰Ｒ－２５０染色进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析的结果表明，水牛梭形住肉孢子虫包囊纯化抗原至少由１０种蛋白质组成，分子量范围为１７．５ＫＤ～１３５ＫＤ。其中主要蛋白质组分有５种，分子量分别为１２５ＫＤ、９８ＫＤ、９０ＫＤ、６９ＫＤ及３５ＫＤ。 展开更多

关键词 水牛 梭形住肉孢子虫 包囊 纯化抗原 牛病

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蓝舌病病毒在细胞内生长特性和在抗原快速纯化中的应用

5

作者 苗海生 李乐 +2 位作者 朱剑波 肖雷 李华春 《畜牧兽医杂志》 2013年第3期1-3,共3页

为了解决原来蓝舌病病毒抗原提取中,步骤繁琐效率低的特点,研究了一种高效提取蓝舌病病毒抗原的方法。进行了蓝舌病病毒在细胞内生长特性的研究,采用酶染色等方法对不同接种量、不同培养时间的细胞内病毒含量进行测定,发现可以在感染细... 为了解决原来蓝舌病病毒抗原提取中,步骤繁琐效率低的特点,研究了一种高效提取蓝舌病病毒抗原的方法。进行了蓝舌病病毒在细胞内生长特性的研究,采用酶染色等方法对不同接种量、不同培养时间的细胞内病毒含量进行测定,发现可以在感染细胞未产生病变前收获细胞,通过简单加工获得高浓度的病毒抗原。该方法快速高效,适用于蓝舌病的抗原生产,用于蓝舌病C-ELISA以及琼脂扩散实验中。该方法可推广用于其它病毒的纯化中。 展开更多

关键词 蓝舌病 抗原纯化 应用

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细胞连续流悬浮培养技术和抗原浓缩纯化技术在口蹄疫疫苗生产中的应用 被引量：2

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作者 辛俊宝 胡晗 +10 位作者 赵权 张起伟 杨军义 史永贵 刘海芳 倪春霞 郭纪珂 隋心 黄建斌 李涛涛 丛日华 《中兽医医药杂志》 CAS 2022年第4期12-16,共5页

为了获得高质量的口蹄疫疫苗,对悬浮培养技术和抗原的浓缩纯化技术进行改进优化,细胞悬浮培养方式由批式培养改为连续流悬浮培养,增加离心纯化次数和超滤系统,最终可缩短48 h以上的细胞培养时间,获得高纯度和高含量的浓缩抗原,所制备的... 为了获得高质量的口蹄疫疫苗,对悬浮培养技术和抗原的浓缩纯化技术进行改进优化,细胞悬浮培养方式由批式培养改为连续流悬浮培养,增加离心纯化次数和超滤系统,最终可缩短48 h以上的细胞培养时间,获得高纯度和高含量的浓缩抗原,所制备的疫苗理化性状、安全性、有效性、保存期等质量指标均获得显著改善。这一技术的改进为生产高质量的口蹄疫疫苗提供了技术支持,并可实现规模化生产。 展开更多

关键词 口蹄疫灭活疫苗 连续流细胞悬浮培养 抗原浓缩纯化 疫苗质量检测

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中华硬蜱叮咬105kD纯化抗原免疫接种宿主后其吸血、生殖能力变化的实验研究

7

作者 童华章 刘志刚 叶炳辉 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2002年第5期12-15,共4页

目的　观察中华硬蜱叮咬免疫接种宿主后的吸血、生殖能力变化。方法　选用中华硬蜱 10 5kD柱层析纯化抗原对新西兰兔进行常规免疫接种 (3次 )后 ,用中华硬蜱成虫感染 (叮咬 )新西兰兔 ,分别观察空白对照组、佐剂对照组、10 5kD纯化抗原... 目的　观察中华硬蜱叮咬免疫接种宿主后的吸血、生殖能力变化。方法　选用中华硬蜱 10 5kD柱层析纯化抗原对新西兰兔进行常规免疫接种 (3次 )后 ,用中华硬蜱成虫感染 (叮咬 )新西兰兔 ,分别观察空白对照组、佐剂对照组、10 5kD纯化抗原组中华硬蜱雌性成虫的吸血、生殖情况。结果　中华硬蜱 10 5kD纯化抗原可诱导新西兰兔产生显著的抗蜱免疫力 ,使其吸血、生殖能力显著降低 ,其中吸血量较空白叮咬对照组分别下降 6 7 9%、6 5 9% ,产卵量分别下降 74 6 %、73 7% ,并且中华硬蜱吸血时间延长 ,产卵量指数降低。而中华硬蜱叮咬佐剂免疫接种组兔后 ,其吸血、生殖能力较空白对照组相比无显著性差异 (P >0 0 5 )。结论　中华硬蜱 10 展开更多

关键词 中华硬蜱 105kD纯化抗原 免疫接种 生殖能力 动物实验 吸血能力

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大肠杆菌K88ac、K99和987P纤毛抗原的纯化及抗血清的制备

8

作者 邝明慧 李淑霞 +1 位作者 呼西旦 吴铭齐 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1989年第S1期109-110,共2页

产肠毒素大肠杆菌(ETEC)是新生畜(仔猪、羔羊和犊牛)腹泻的主要病因之一,其致病因子包括纤毛抗原和肠毒素。我们参照国外学者De Graaf和Isaacson等人的方法分别纯化了K88ac、K99和987P三种纤毛抗原并制备出三种高特异性抗血清。纯化用K8... 产肠毒素大肠杆菌(ETEC)是新生畜(仔猪、羔羊和犊牛)腹泻的主要病因之一,其致病因子包括纤毛抗原和肠毒素。我们参照国外学者De Graaf和Isaacson等人的方法分别纯化了K88ac、K99和987P三种纤毛抗原并制备出三种高特异性抗血清。纯化用K88菌株C83549(0149:K91,K88ac),K99菌株C83644(0101:K99),987P菌株C83710(020:987P)均由中国兽医药品监察所提供。K88菌用改良Minca培养基,K99菌用Minca培养基,987P用胰酶水解大豆酪蛋白胨肉汤培养基。 展开更多

关键词 纤毛抗原 K88ac K99 ETEC 肉汤培养基 致病因子 特异性抗血清 酪蛋白胨 兽医药品 纯化抗原

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广州管圆线虫M_r32000抗原的免疫诊断效果评价 被引量：15

9

作者 李华 陈晓光 +3 位作者 沈浩贤 陈代雄 裘玉蓉 胡小佳 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第4期380-383,共4页

目的评价广州管圆线虫Mr32000抗原(AC32)的诊断价值。方法利用切胶纯化法从广州管圆线虫成虫抗原中获取AC32,用Westernblotting和ELISA方法检测61例广州管圆线虫感染大鼠血清、5例正常鼠血清、1例广州管圆线虫病人血清、50例其他寄生虫... 目的评价广州管圆线虫Mr32000抗原(AC32)的诊断价值。方法利用切胶纯化法从广州管圆线虫成虫抗原中获取AC32,用Westernblotting和ELISA方法检测61例广州管圆线虫感染大鼠血清、5例正常鼠血清、1例广州管圆线虫病人血清、50例其他寄生虫体阳性患者血清和50例献血员血清。结果AC32和成虫粗抗原包被的ELISA检测61份感染大鼠血清和1例临床诊断为广州管圆线虫病人血清均为阳性;AC32-ELISA检测的50例献血员、20例急性血吸虫病人、11例弓形虫病人和所检测的其他寄生虫抗体阳性患者血清均为阴性。结论AC32在广州管圆线虫病的血清学诊断中具有较高的敏感性和特异性。 展开更多

关键词 广州管圆线虫 抗原/纯化 免疫诊断

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两种来源的IBDV抗原制备单克隆抗体的比较 被引量：1

10

作者 黄成斌 潘玲 余为一 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第28期15679-15680,15682,共3页

[目的]比较以原核表达蛋白与纯化病毒制备单克隆抗体的特性。[方法]RT-PCR扩增IBDVVP2基因,通过原核表达系统表达目的蛋白,并亲和纯化重组蛋白。尿囊液扩增IBDV,并通过超速离心纯化病毒。分别用纯化的重组VP2蛋白和IBDV免疫Balb/c小鼠,E... [目的]比较以原核表达蛋白与纯化病毒制备单克隆抗体的特性。[方法]RT-PCR扩增IBDVVP2基因,通过原核表达系统表达目的蛋白,并亲和纯化重组蛋白。尿囊液扩增IBDV,并通过超速离心纯化病毒。分别用纯化的重组VP2蛋白和IBDV免疫Balb/c小鼠,ELISA筛选杂交瘤细胞株。[结果]获得了2株分泌VP2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,腹水ELISA效价均为1∶2×104;4株分泌IBDV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,腹水ELISA效价分别为1∶2×106,1∶6×104,1∶1×105,1∶4×103。所有单克隆抗体均与其制备用免疫原反应,不与空载体或其他病毒抗原反应。经10～20次传代,仍保持稳定的效价。[结论]纯化的原核表达VP2蛋白和IBDV均能诱导小鼠产生免疫应答;用原核表达的VP2蛋白作为免疫原,可以获得特异的VP2抗体。 展开更多

关键词 传染性法氏囊病病毒 VP2蛋白 原核表达 纯化抗原 单克隆抗体

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离子交换纯化猪伪狂犬病病毒的免疫原性鉴定

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作者 夏伟 宋松林 +3 位作者 廉维 王富猛 何玉友 董雅文 《畜牧兽医科技信息》 2022年第11期69-72,共4页

采用离子交换法纯化猪伪狂犬病病毒,将收获的猪伪狂犬病病毒细胞培养物经过高压均质机进行破碎,破碎的病毒细胞培养物经1000rpm/min离心,取上清,进行预装柱上样,然后用8%的(20mmol/L PBS+2mol/L NaCl)洗脱杂质,再用20mmol/L PBS+2mol/L ... 采用离子交换法纯化猪伪狂犬病病毒,将收获的猪伪狂犬病病毒细胞培养物经过高压均质机进行破碎,破碎的病毒细胞培养物经1000rpm/min离心,取上清,进行预装柱上样,然后用8%的(20mmol/L PBS+2mol/L NaCl)洗脱杂质,再用20mmol/L PBS+2mol/L NaCl缓冲液对猪伪狂犬病病毒抗原进行洗脱,获得纯化后的病毒滴度可达到1×10^(8.0)TCID50/mL。将纯化后的病毒液制备成灭活疫苗,免疫试验猪,结果表明,疫苗安全性显著提高,并诱导产生的中和抗体效价均不低于1:32,该疫苗具有较好的免疫效力。 展开更多

关键词 猪伪狂犬病病毒 抗原纯化 离子交换 中和抗体

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流行性出血热(EHF)病毒间接ELISA抗原制备的研究 被引量：1

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作者 张义军 朱德钟 刘启富 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1989年第1期32-34,共3页

本文报告用硫酸鱼精蛋白结合高浓度盐溶液方法从感染鼠脑组织中提取用于EHF间接ELISA的病毒抗原,对抗原提取条件进行了研究,并成功地将提取的病毒抗原用于检测HFRS病人血清特异性IgG抗体的间接ELISA。

关键词 流行性出血热 ELISA 抗原纯化

全文增补中

C19orf18蛋白的表达与纯化及多克隆抗体制备 被引量：1

13

作者 童霄霞 杨远勤 +3 位作者 陈勉 王怀远 胡海军 章康健 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期176-182,共7页

旨在得到较高浓度和纯度的C19orf18蛋白,再将得到的目的蛋白用于制备其特异性的多克隆抗体。利用PCR技术扩增出C19orf18基因的胞内段和胞外段,中间用柔性肽连接,再将目的片段克隆到p ET28a(+)与p ET32a(+)载体上,通过诱导表达少量的目... 旨在得到较高浓度和纯度的C19orf18蛋白,再将得到的目的蛋白用于制备其特异性的多克隆抗体。利用PCR技术扩增出C19orf18基因的胞内段和胞外段,中间用柔性肽连接,再将目的片段克隆到p ET28a(+)与p ET32a(+)载体上,通过诱导表达少量的目的蛋白,筛选出表达量较高的载体,再用筛选得到的表达量较高的载体大量表达目的蛋白,通过镍柱纯化得到较纯的C19orf18蛋白。用得到的蛋白免疫新西兰白兔,得到的抗血清先经过Protein A纯化,再进行抗原亲和纯化得到C19orf18蛋白多克隆抗体。结果显示,载体p ET28a-C19orf18蛋白表达量高于p ET32a-C19orf18,经过镍柱纯化后得到了较高浓度与纯度的目的蛋白,利用得到的目的蛋白作为抗原成功制备了其特异性的多克隆抗体。在原核细胞中成功表达了C19orf18重组蛋白,并得到了其特异性多克隆抗体,所制备的多克隆抗体可应用于ELISA、蛋白免疫印迹实验。 展开更多

关键词 C19orf18蛋白 原核表达 抗原亲和纯化

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表达Strep-tag II的重组塞内卡病毒的构建与鉴定

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作者 史家宝 蒙靓 +4 位作者 肖培宇 范峻豪 安同庆 王海伟 于力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期140-146,共7页

为构建表达Strep-tag II的重组塞内卡病毒(SVA),本研究在感染性cDNA克隆p SVA-I212V/S460L的基础上,采用重叠延伸PCR扩增Strep-tag II并采用无缝克隆法将其插入SVA VP1基因C端,构建感染性cDNA克隆,命名为p SVA-Strep,并采用双酶切和测... 为构建表达Strep-tag II的重组塞内卡病毒(SVA),本研究在感染性cDNA克隆p SVA-I212V/S460L的基础上,采用重叠延伸PCR扩增Strep-tag II并采用无缝克隆法将其插入SVA VP1基因C端,构建感染性cDNA克隆,命名为p SVA-Strep,并采用双酶切和测序鉴定正确后,将p SVA-Strep转染BHK-21细胞拯救重组病毒,收集病变细胞上清,并将含有病毒的细胞上清和野生型SVA(SVA-WT)分别感染BHK-21细胞,以未感染病毒的BHK-21细胞作为阴性对照,感染后24 h分别以鼠源SVA VP2蛋白单克隆抗体(MAb)5D10(1∶1000)、鼠源Strep-tag II MAb(1∶2000)作为一抗,以FITC标记的山羊抗小鼠Ig G(1∶2000)为二抗,采用间接免疫荧光试验(IFA)对重组病毒鉴定。IFA结果显示,以鼠源SVA VP2蛋白MAb 5D10为一抗,SVA-WT和重组病毒感染的细胞均出现绿色荧光,以Strep-tag II MAb作为一抗时,仅有重组病毒感染的细胞出现绿色荧光,经SVA-WT感染的BHK-21细胞及阴性对照细胞均无绿色荧光,表明拯救了Strep-tag II标记的重组病毒,并将其命名为r SVA-Strep。将r SVA-Strep在BHK-21细胞中连续传10代,每隔2代采用引物VP1-F/R经PCR鉴定并对第10代重组病毒的VP1基因测序以鉴定r SVA-Strep的遗传稳定性。结果显示,每隔两代的重组病毒经PCR扩增后均出现约780 bp的目的条带,第10代重组病毒扩增的VP1基因测序结果显示Strep-tag II基因仍在重组病毒中,且无基因突变,表明r SVA-Strep的遗传稳定性较强;将SVA-WT和r SVA-Strep分别以MOI 0.01感染BHK-21细胞,在感染后4 h、8 h、12 h、24 h、36 h、48 h和72 h收获病毒测定病毒滴度并绘制生长曲线,结果显示在病毒感染36 h内r SVA-Strep和SVA-WT生长动力学基本一致,表明Strep-tag II的引入在病毒感染36 h内对SVA的复制基本无影响。采用0.2%甲醛充分灭活r SVA-Strep,并利用Strep-TactinRXT Purification纯化试剂盒纯化该灭活病毒,将r SVA-Strep灭活病毒上清加至Strep-Tactin亲和层析柱,分别用不同体积洗脱缓冲液依次洗脱病毒并通过western blot鉴定病毒的纯化效果。对纯化过程中不同洗脱液洗脱病毒的western blot结果显示,不同体积的洗脱液中E1、E2和E3均出现VP0和VP2两条带,且E1和E2的条带最明显,表明洗脱缓冲液的最佳洗脱体积约为2.2 CV;以上结果表明r SVA-Strep可通过Strep-Tactin亲和层析柱一步法纯化。本研究在SVA中插入Strep-tag II标签,为SVA灭活疫苗的快速纯化提供技术手段,也为其他病原的快速纯化方法的建立提供参考。 展开更多

关键词 塞内卡病毒 Strep-tag II 感染性克隆 抗原纯化

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鸭坦布苏病毒病灭活疫苗生产工艺的优化研究

15

作者 何平有 赵玉龙 +4 位作者 邹立宏 郁宏伟 吴雅清 焦玉兰 翟含流 《中国畜禽种业》 2023年第10期175-178,共4页

为提升鸭坦布苏病毒病灭活疫苗的产品质量,在全悬浮培养工艺生产病毒液的基础上,对病毒纯化工艺和佐剂进行研究。试验结果显示,采用新纯化工艺,通过深层过滤和超滤的方式处理抗原,抗原损失不超过0.2个滴度,抗原总蛋白下降到0.50mg/mL以... 为提升鸭坦布苏病毒病灭活疫苗的产品质量,在全悬浮培养工艺生产病毒液的基础上,对病毒纯化工艺和佐剂进行研究。试验结果显示,采用新纯化工艺,通过深层过滤和超滤的方式处理抗原,抗原损失不超过0.2个滴度,抗原总蛋白下降到0.50mg/mL以下,有效去除80%以上杂蛋白;采用2种油佐剂(佐剂A和佐剂B)和1种水性佐剂(佐剂C)进行试验,佐剂B疫苗单次免疫后21日鸭坦布苏病毒HI抗体几何平均值达1∶320,攻毒保护率达10/10;进口佐剂B为优选佐剂,安全性和免疫效果均表现良好。 展开更多

关键词 鸭坦布苏病毒病 灭活疫苗 生产工艺优化 抗原纯化 免疫佐剂

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斑点免疫吸附试验诊断羊脑多头蚴病的研究 被引量：6

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作者 姚新华 苑淑贤 +2 位作者 周维 冯玉军 杨金生 《吉林畜牧兽医》 2001年第12期3-5,共3页

以原头节可溶性粗抗原经 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２００层析纯化抗原为包被抗原，兔抗羊 ＩｇＧ－ＨＲＰ结合物为显色剂，建立检测羊脑多头蚴病血清抗体的 Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ，并以 ＥＬＩＳＡ作平行对照。结果，粗抗原和层析纯化抗原检... 以原头节可溶性粗抗原经 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２００层析纯化抗原为包被抗原，兔抗羊 ＩｇＧ－ＨＲＰ结合物为显色剂，建立检测羊脑多头蚴病血清抗体的 Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ，并以 ＥＬＩＳＡ作平行对照。结果，粗抗原和层析纯化抗原检测 ８６头份羊脑多头蚴病阳性血清，其敏感性分别为 ９４．１８％和９３．０２％，两种抗原的敏感性无显著差异；检测１２２头份绦虫蚴病阴性血清，１８头份棘球蚴病阳性血清，３５头份细颈囊尾蚴病阳性血清，其特异性分别为９０．２９％和９５．４３％。两种抗原的特异性差异显著。Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和ＥＬＩＳＡ两种方法的符合率为１００％。层析纯化抗原比粗抗原的特异性有了明显提高，而敏感性没有降低。层析纯化抗原和操作术式都具有良好的重复性，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和 ＥＬＩＳＡ对比试验结果相近，且具简便、快速及不需要复杂设备等优点，是一种检测羊脑多头蚴病血清抗体的理想方法。 展开更多

关键词 羊 脑多头蚴病 原头节层析纯化抗原 斑点免疫 吸附试验

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旋毛虫单克隆抗体特性鉴定

17

作者 王克领 李春华 +3 位作者 马增全 闫玉河 袁文甫 许威光 《华北农学报》 CSCD 北大核心 1994年第S1期96-99,共4页

用已建立的抗旋毛虫单克隆抗体杂交瘤细胞株(D_4,E_2)所分泌的单克隆抗体(McAb),经纯化后电泳分析,其重链分子量为55KD,轻链分子量为29KD,符合IgG抗体特点。两株单克隆抗体与旋毛虫阳性猪血清所针对的旋毛虫抗原决定簇相同,都不与猪的... 用已建立的抗旋毛虫单克隆抗体杂交瘤细胞株(D_4,E_2)所分泌的单克隆抗体(McAb),经纯化后电泳分析,其重链分子量为55KD,轻链分子量为29KD,符合IgG抗体特点。两株单克隆抗体与旋毛虫阳性猪血清所针对的旋毛虫抗原决定簇相同,都不与猪的其它寄生虫发生交叉反应,与抗原的相对亲和力E_2>D_4,单克隆抗体亲和层析纯化抗原的分子量为49KD,经免疫斑点染色证明为糖蛋白。 展开更多

关键词 旋毛虫 杂交瘤细胞株 单克隆抗体 亲和纯化抗原

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抗猴逆转病毒Ⅰ型(SRV-1)杂交瘤细胞株的建立及应用

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作者 何伏秋 蒋虹 +4 位作者 徐新明 张永蓉 秦川 马兰华 吴小闲 《中国比较医学杂志》 CAS 1992年第Z1期24-24,共1页

以SRV-1蔗糖梯度离心纯化抗原免疫SPF级的BALB/c小鼠,用SP2/0骨髓瘤细胞与免疫小鼠脾细胞融合。应用间接免疫荧光法（IFA）检测抗体,抗原为感染SRV-110d的Raji细胞。筛选出两株SRV-1小鼠杂交瘤细胞株及单克隆抗体（McAb）C<sub>4&... 以SRV-1蔗糖梯度离心纯化抗原免疫SPF级的BALB/c小鼠,用SP2/0骨髓瘤细胞与免疫小鼠脾细胞融合。应用间接免疫荧光法（IFA）检测抗体,抗原为感染SRV-110d的Raji细胞。筛选出两株SRV-1小鼠杂交瘤细胞株及单克隆抗体（McAb）C₄和C₁₅。两株杂交瘤细胞经3次克隆后分别注入同品系的小鼠腹腔,所产生的腹水经IFA和ELISA法测定其滴度为1:800～1:1600。经琼脂免疫双扩散法鉴定,C₄ 展开更多

关键词 杂交瘤细胞株 SRV-1 蔗糖梯度离心 单克隆抗体 小鼠脾细胞 骨髓瘤细胞 间接免疫荧光法 小鼠腹腔 琼脂免疫双扩散 纯化抗原

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猪瘟感染和免疫状况的血清学调查

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作者 张家峥（摘） 《养猪》 2005年第5期49-49,共1页

从宁波市11个县（市）的17个集约化猪场随机采集猪血分离血清，共3437份．其中母猪878份，育肥猪1017份，生长猪778份，哺乳仔猪764份。受检猪均进行过猪瘟疫苗免疫。检验使用猪瘟弱毒或强毒单抗纯化的酶联抗原建立的间接ELISA诊断试剂... 从宁波市11个县（市）的17个集约化猪场随机采集猪血分离血清，共3437份．其中母猪878份，育肥猪1017份，生长猪778份，哺乳仔猪764份。受检猪均进行过猪瘟疫苗免疫。检验使用猪瘟弱毒或强毒单抗纯化的酶联抗原建立的间接ELISA诊断试剂盒，所用的纯化抗原，阴、阳性标准血清和相关试剂均购自中国兽药监察所。检测结果，猪瘟强毒（野毒）感染率平均14．1％，其中哺乳仔猪（45日龄内）为9．82％。 展开更多

关键词 血清学调查 感染率 猪瘟 ELISA诊断试剂盒 免疫状况 纯化抗原 哺乳仔猪 集约化猪场 兽药监察所

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猪旋毛虫病单克隆抗体快速ELISA诊断试剂盒的研制及应用

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作者 马增全 《畜牧兽医科技信息》 1997年第9期3-4,共2页

1987年河南农科院畜牧兽医研究所研制出了旋毛虫肌幼虫排泄—分泌抗原并建立了ELISA检测法,经过多年的推广应用,已普及全国许多省份,并被国家列入生物制品的制造与检疫规程中。在原有的基础上,应用单克隆抗体(McAb)纯化抗原,并对包被技... 1987年河南农科院畜牧兽医研究所研制出了旋毛虫肌幼虫排泄—分泌抗原并建立了ELISA检测法,经过多年的推广应用,已普及全国许多省份,并被国家列入生物制品的制造与检疫规程中。在原有的基础上,应用单克隆抗体(McAb)纯化抗原,并对包被技术、诊断试剂和操作方法等作了根本改进,研制出了旋毛虫病单克隆抗体快速ELISA诊断试剂盒。现将情况报告如下: 展开更多

关键词 单克隆抗体 诊断试剂盒 猪旋毛虫病 快速ELISA 旋毛虫肌幼虫 农业科学 快速法 纯化抗原 常规法 ES抗原

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