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猪乙型脑炎病毒广西分离株FC792 E基因主要抗原域的原核表达及抗原性鉴定
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作者 卢冰霞 李斌 +10 位作者 秦毅斌 赵武 梁家幸 韦超文 何颖 苏乾莲 梁保忠 李莹莹 姜佳佳 杨盛斌 黄伟坚 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第3期1258-1263,共6页
对广西猪JEV FC792株的E基因主要抗原域Ⅰ、Ⅱ基因(Ea基因)进行原核表达及抗原性鉴定,为猪流行性乙型脑炎病毒(JEV)诊断抗原和基因工程疫苗的研制奠定基础。结果:成功构建广西猪JEV FC792株Ea基因的克隆重组质粒pMD18-T-Ea及表达重组质... 对广西猪JEV FC792株的E基因主要抗原域Ⅰ、Ⅱ基因(Ea基因)进行原核表达及抗原性鉴定,为猪流行性乙型脑炎病毒(JEV)诊断抗原和基因工程疫苗的研制奠定基础。结果:成功构建广西猪JEV FC792株Ea基因的克隆重组质粒pMD18-T-Ea及表达重组质粒pET32a-Ea,经SDS-PAGE及Western blot鉴定表明,JEV FC792株Ea蛋白在Rosetta(DE3)菌中成功进行融合表达,表达出约58 KDa的融合蛋白;经抗原性鉴定表明,表达的融合蛋白Ea能与猪JEV阳性血清抗体发生特异性反应,融合蛋白Ea具有良好的JEV抗原性。 展开更多
关键词 猪流行性乙型脑炎病毒 Ea基因 原核表达 抗原性鉴定
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赤羽病病毒Gc_(405aa—480aa)肽段的高效可溶性表达及抗原性鉴定 被引量:1
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作者 王建华 张俊哲 +2 位作者 赵丹 王玉玲 肖妍 《中国动物检疫》 CAS 2019年第3期79-83,共5页
为表达和鉴定赤羽病病毒Gc蛋白强抗原性肽段,对Gc蛋白的1个75氨基酸肽段(405aa—480aa)编码序列,经密码子优化后进行基因合成,构建重组表达载体p ET-Gc_(405aa—480aa),转化表达菌株BL21(DE3),在28℃用0.1 mmol/L IPTG诱导重组肽段表达... 为表达和鉴定赤羽病病毒Gc蛋白强抗原性肽段,对Gc蛋白的1个75氨基酸肽段(405aa—480aa)编码序列,经密码子优化后进行基因合成,构建重组表达载体p ET-Gc_(405aa—480aa),转化表达菌株BL21(DE3),在28℃用0.1 mmol/L IPTG诱导重组肽段表达。将重组rHis-Gc_(405aa—480aa)肽段,通过Ni^+-NTA树脂亲和层析方法纯化后,用Western-bloting和ELISA分析其抗原性。SDS-PAGE显示,重组rHis-Gc_(405aa—480aa)肽段以完全可溶性形式在大肠杆菌中得到高效表达;用Ni+-NTA树脂亲和层析方法纯化,获得了较高纯度的重组rHis-Gc_(405aa—480aa)肽段;Western-blotting显示,该重组肽段对赤羽病病毒阳性血清具有很强的反应原性。本研究表达、纯化和鉴定了具有强抗原性的重组rHis-Gc_(405aa—480aa)肽段,为进一步开展Gc蛋白单克隆抗体制备、B细胞表位鉴定和诊断试剂研制奠定了基础。 展开更多
关键词 赤羽病病毒 Gc蛋白 重组肽段 原核表达 纯化 抗原性鉴定
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一例鸭鼠伤寒沙门氏菌的分离鉴定及抗原性分析 被引量:2
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作者 卢受昇 孔令辰 +1 位作者 罗晶璐 孙彦伟 《广东畜牧兽医科技》 2013年第6期30-33,共4页
对出现精神沉郁、食欲减退、拉稀、脚软和共济失调症状,其后死亡,的鸭病例,进行常规诊断、动物试验,结果分离到一株细菌,命名为GDYJS-1。分离株通过生长特性、凝集试验、染色特性及VITEK-32微生物鉴定系统生化试验鉴定为沙门氏菌;16S r... 对出现精神沉郁、食欲减退、拉稀、脚软和共济失调症状,其后死亡,的鸭病例,进行常规诊断、动物试验,结果分离到一株细菌,命名为GDYJS-1。分离株通过生长特性、凝集试验、染色特性及VITEK-32微生物鉴定系统生化试验鉴定为沙门氏菌;16S rRNA基因序列的测定与分析,鉴定为鼠伤寒沙门氏菌。 展开更多
关键词 沙门氏菌 分离鉴定 抗原性分析
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贝纳柯克斯体重组抗原Com1和急性Q热抗原A(adaA)的纯化和鉴定 被引量:3
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作者 刘静娴 姬艺洪 +1 位作者 史智扬 焦永军 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期726-730,共5页
目的原核表达并纯化2种贝纳柯克斯体(C.burnetii)抗原主要外膜蛋白质Com1和急性Q热抗原A(adaA),并对重组Com1和adaA进行质谱鉴定以及抗原性鉴定。方法全基因合成编码Com1和adaA的基因序列,并将其分别构建到原核表达载体pET-20b(+),将构... 目的原核表达并纯化2种贝纳柯克斯体(C.burnetii)抗原主要外膜蛋白质Com1和急性Q热抗原A(adaA),并对重组Com1和adaA进行质谱鉴定以及抗原性鉴定。方法全基因合成编码Com1和adaA的基因序列,并将其分别构建到原核表达载体pET-20b(+),将构建好的载体分别转化大肠杆菌BL21(DE3),异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组Com1和adaA。通过镍亲和柱层析纯化重组Com1和adaA,切取纯化的蛋白质条带进行质谱鉴定。将纯化的重组Com1和adaA与Q热阳性牛血清进行Western blot分析,检测其免疫反应特性。结果构建了原核表达载体pET-20b(+)-Com1以及pET-20b(+)-adaA,重组抗原Com1和adaA均以可溶形式得到了高效地表达和纯化,SDS-PAGE结果显示其相对分子质量(Mr)分别为27 000与25 000,质谱鉴定结果确证其为C.burnetii的抗原蛋白Com1和adaA。重组Com1和adaA与Q热阳性牛血清均有阳性反应条带,条带Mr大小与SDS-PAGE结果一致。结论成功高效表达了可溶重组Com1和adaA并证实其免疫反应特异性。 展开更多
关键词 贝纳柯克斯体(C.burnetii) 重组抗原Com1和adaA 质谱鉴定 抗原性鉴定
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禽腺病毒贵州分离株HS-1的核酸酶切分析与蛋白抗原鉴定 被引量:1
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作者 吴彤 韩丽珍 +1 位作者 周碧君 李永明 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2001年第1期5-8,共4页
本研究利用 10 % SDS- PAGE及 Western- Blotting技术鉴定 3株不同的减蛋综合征病毒 (贵州株 HS- 1、南京分离毒GC2 、国际标准毒 AV- 12 7)的蛋白抗原性 ,结果表明 ,3株毒的蛋白多肽分子量均在 10 6~ 12 KD范围内 ,但各条多肽的组成... 本研究利用 10 % SDS- PAGE及 Western- Blotting技术鉴定 3株不同的减蛋综合征病毒 (贵州株 HS- 1、南京分离毒GC2 、国际标准毒 AV- 12 7)的蛋白抗原性 ,结果表明 ,3株毒的蛋白多肽分子量均在 10 6~ 12 KD范围内 ,但各条多肽的组成上略有差异 ;它们都具有两条相同的免疫原性多肽 ,分子量分别为 10 6和 10 0 KD。同时 ,运用 Eco R 、Bam H 、Hind 、Pst 和Sm a 等 5种限制性内切酶进行了酶切分析 ,证实 3株 EDS病毒用 Pst 和 Sma 酶切的片段大小及长度略有不同 ,而其它 展开更多
关键词 禽腺病毒 贵州分离株HS-1 核酸酶切分析 蛋白 抗原性鉴定 减蛋综合征
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大豆球蛋白G5A3亚基加工破坏表位的初步定位 被引量:2
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作者 王一超 席俊 +3 位作者 陈慧彬 李英英 段宇莹 孙富宇 《中国粮油学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期92-98,共7页
大豆球蛋白是重要的大豆过敏原,为探究大豆球蛋白G5亚基中A3酸性多肽链的破坏表位,对A3亚基的基因进行重叠分段并设计合成引物、构建克隆载体后进行双酶切,与T7 vector arms连接构建重组噬菌体并表达目的蛋白;制作热处理及超高压联合热... 大豆球蛋白是重要的大豆过敏原,为探究大豆球蛋白G5亚基中A3酸性多肽链的破坏表位,对A3亚基的基因进行重叠分段并设计合成引物、构建克隆载体后进行双酶切,与T7 vector arms连接构建重组噬菌体并表达目的蛋白;制作热处理及超高压联合热处理破坏抗原表位的特异性抗体,用间接竞争ELISA法检测不同肽段的抗原性高低及加工破坏表位。结果表明,A3链与其3个分段基因的长度分别为:960、420、450、450 bp,与预期片段大小相符;经间接竞争ELISA法检测后,片段1抗原性最高,通过阴性对照,超高压联合热处理对该亚基的破坏效果优于单独热处理试验,其中对片段1的破坏效果最好。因此,超高压联合热处理的方法对蛋白抗原性破坏效果显著,且对片段1破坏最强。 展开更多
关键词 过敏原G5A3 重叠分段 重组噬菌体 抗原性鉴定 破坏表位筛选
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