2024年安徽省H9N2亚型禽流感病毒遗传进化和抗原性分析

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作者 李玉冬 周迎春 +13 位作者 段倩倩 曹婕 董金泽 陈洪壮 束思成 佟琪 赵传阔 王维 刘畅 王军 陈静 蒲娟 何长生 朱良强 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第7期1-11,共11页

为了解析H9N2亚型禽流感病毒(AIV)在安徽省的遗传进化特征和抗原性变化,本试验于2024年在安徽省城乡农贸活禽市场、家禽规模养殖场和屠宰厂采集家禽咽拭子并进行AIV分离鉴定。挑选4株2024年安徽H9N2亚型AIV分离毒株进行全基因组测序后,... 为了解析H9N2亚型禽流感病毒(AIV)在安徽省的遗传进化特征和抗原性变化,本试验于2024年在安徽省城乡农贸活禽市场、家禽规模养殖场和屠宰厂采集家禽咽拭子并进行AIV分离鉴定。挑选4株2024年安徽H9N2亚型AIV分离毒株进行全基因组测序后,结合安徽省所有H9N2亚型AIV公开序列数据,进行8个基因片段(PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M、NS)的同源性分析、遗传进化分析、关键氨基酸和糖基化位点分析以及抗原性分析。结果显示,本试验共采集了1033份拭子样本,鉴定出334株H9N2亚型AIV,分离率为32.33%。4株2024年安徽H9N2亚型AIV分离毒株的PB1、PA、HA基因序列一致度差异较大(88.65%~98.05%),而PB2、NP、NA、M、NS基因序列一致度较为接近(92.19%~99.08%)。HA基因的遗传进化分析显示,2株鸡源和1株鸭源H9N2亚型AIV分离毒株属于B谱系的B4.7.2分支,1株鹅源H9N2亚型AIV分离毒株属于B谱系的B4.7.3分支;PB2、PB1、PA、NP、NA、M、NS基因遗传进化分析显示,2024年安徽H9N2亚型AIV分离毒株与近年来的人源H9N2亚型AIV分离毒株遗传距离接近,2024年2月鸡源H9N2亚型AIV分离毒株的PA基因与野鸟源H9N2亚型AIV的亲缘关系较近。关键氨基酸分析显示,与参考株序列相比,4株2024年安徽H9N2亚型AIV分离毒株HA蛋白的130-loop、150-loop和190-helix存在明显氨基酸多态性;鹅源H9N2亚型AIV分离毒株HA蛋白在第289~291位可能出现了N-糖基化修饰的缺失,值得关注。抗原性评估显示,2024年安徽H9N2亚型AIV分离毒株均属于当前优势流行的抗原群,鹅源H9N2亚型AIV分离毒株表现出明显的抗原漂移。结果表明,2024年安徽H9N2亚型AIV在不同宿主中显示出较高的遗传多样性,HA蛋白的受体结构域存在变异和抗原性漂移,有向家禽和人类传播扩散的风险隐患。 展开更多

关键词 H9N2亚型禽流感 遗传进化 抗原性分析

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猪流行性腹泻病毒N基因的表达及抗原性分析 被引量：10

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作者 吴玉璐 朱建平 +7 位作者 杨莘 王亚欣 徐彦召 虞凌雪 于海 刘光清 童光志 周艳君 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期299-303,共5页

为深入了解仔猪腹泻的病因,本研究在不同发病猪场采集了115份临床样品,通过RT-PCR方法对猪流行性腹泻病毒(PEDV)进行检测,结果显示总阳性率为81.7%。进一步从部分样品中对PEDV的N基因进行克隆和序列分析,结果显示采集的临床样品中各分... 为深入了解仔猪腹泻的病因,本研究在不同发病猪场采集了115份临床样品,通过RT-PCR方法对猪流行性腹泻病毒(PEDV)进行检测,结果显示总阳性率为81.7%。进一步从部分样品中对PEDV的N基因进行克隆和序列分析,结果显示采集的临床样品中各分离株之间的氨基酸同源性高达99%以上,与代表性病毒株CV777的氨基酸同源性为97.4%～98.1%,表明目前流行的PEDV其N基因仍然相对保守的。同时,构建了重组表达载体pGEX-N,经诱导表达显示该重组蛋白呈可溶性表达,重组蛋白大小约为81 ku,western blot分析结果表明该重组蛋白能够被PEDV阳性猪血清特异性识别。将纯化后的重组N蛋白作为包被抗原,对20份已知背景的临床猪血清抗体进行ELISA检测,结果显示有9份血清为抗体阳性,11份血清呈抗体阴性,与应用RT-PCR方法鉴定抗原的结果符合率为85%。本研究表达的重组N蛋白具有良好的抗原性,可以将其作为PEDV血清学诊断的候选抗原。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 重组N蛋白 抗原性分析

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H3N2亚型猪流感病毒HA基因序列测定及抗原性分析 被引量：10

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作者 刘大飞 杨涛 +3 位作者 刘明 刘春国 桑学波 刘大程 《动物医学进展》 CSCD 2008年第3期5-9,共5页

采用RT～PCR技术对4株H3N2亚型猪流感病毒的HA基因进行了扩增，将获得的PCR产物分别与pMD18-T克隆载体连接，进行序列测定。测序结果显示，4个毒株均含有完整的开放阅读框，并且均未发现核苷酸插入或缺失现象；分离毒株间核苷酸同源性... 采用RT～PCR技术对4株H3N2亚型猪流感病毒的HA基因进行了扩增，将获得的PCR产物分别与pMD18-T克隆载体连接，进行序列测定。测序结果显示，4个毒株均含有完整的开放阅读框，并且均未发现核苷酸插入或缺失现象；分离毒株间核苷酸同源性为99．4％～99．7％，氨基酸同源性为98．2％～99．3％。同源性分析表明，4个毒株与2003年的猪流感病毒广东分离株有很高同源性（均在99％以上），说明近段时间我国H3N2亚型的猪流感病毒变异不大，重组的频率不是很高，同时又与人流感病毒香港分离株有较高的同源性（均为99．4％）。交叉血凝抑制试验显示，S3株与其他3毒株抗原性差异明显。鉴于猪在流感病毒传播与复制间的特殊地位，应密切监测猪流感。 展开更多

关键词 猪流感病毒 HA基因 克隆 抗原性分析

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嗜水气单胞菌重组Aer毒素的纯化和抗原性分析 被引量：5

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作者 李莲瑞 卢强 +5 位作者 刘明远 付宝权 韩文瑜 孙树民 郭恒 崔国祯 《云南农业大学学报》 CAS CSCD 2005年第5期710-713,719,共5页

对原核表达的重组嗜水气单胞菌Aer毒素进行初步纯化,比较了它与天然Aer毒素的抗原性,为建立检测该毒素的免疫学方法奠定了基础。将原核表达的重组Aer毒素经SDS-PAGE后,切下目的蛋白,利用电洗脱法将蛋白洗脱出来,后经透析、PEG8000浓缩... 对原核表达的重组嗜水气单胞菌Aer毒素进行初步纯化,比较了它与天然Aer毒素的抗原性,为建立检测该毒素的免疫学方法奠定了基础。将原核表达的重组Aer毒素经SDS-PAGE后,切下目的蛋白,利用电洗脱法将蛋白洗脱出来,后经透析、PEG8000浓缩、定量,对獭兔进行免疫,采集血清,提纯IgG,在W estern b lotting试验中可与天然Aer毒素起反应,说明,体外表达的重组Aer毒素保留了天然Aer毒素所具有的抗原性。同时,将嗜水气单胞菌AHCS02菌接种于兔鲜血平板,30℃、培养15 h后,将具有β-溶血的单菌落于LB液体培养基中培养后,用饱和硫酸铵法提取上清液中的天然Aer毒素,用甲醛脱毒后,以同样免疫方法免疫獭兔,免疫结束后,采集血清提取IgG,在W estern b lotting试验中,可以检测到重组Aer毒素。试验说明:原核表达的重组Aer毒素和天然Aer毒素诱导獭兔产生的血清IgG抗体可以互相识别重组Aer毒素和天然Aer毒素,重组Aer毒素和天然Aer毒素有相似的抗原性。 展开更多

关键词 嗜水气单胞菌 重组毒素 纯化 天然毒素 抗原性分析

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猪细小病毒NJ-1株VP2基因克隆与抗原性分析 被引量：5

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作者 魏战勇 王学斌 +2 位作者 黄克和 金喜新 崔保安 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期56-60,共5页

参考Gen Bank公布的NADL-2株序列,设计出1对引物,并利用该引物扩增了猪细小病毒NJ-1株VP2主要抗原基因,将其克隆到pGEM-T Easy载体上,测序获得882 bp核苷酸序列,并推导出其氨基酸序列,共编码294aa,与NADL-2株相应的序列进行比较分析,两... 参考Gen Bank公布的NADL-2株序列,设计出1对引物,并利用该引物扩增了猪细小病毒NJ-1株VP2主要抗原基因,将其克隆到pGEM-T Easy载体上,测序获得882 bp核苷酸序列,并推导出其氨基酸序列,共编码294aa,与NADL-2株相应的序列进行比较分析,两者核苷酸同源性为99.2%,氨基酸同源性为99%;应用DNAStar软件对氨基酸的抗原表位进行了预测,共有9个抗原表位,分别在氨基酸N端的第34-40,62-70,88-92,137-157,167-181,189-200,206-219,258-272和280-294区段,此序列具有较好的免疫原性. 展开更多

关键词 猪细小病毒 VP2基因 抗原性分析

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鸡传染性支气管炎病毒Holte株S1基因在昆虫杆状病毒系统的表达及其抗原性分析 被引量：4

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作者 高雅 粟硕 +3 位作者 刘勇 陈洪振 高长春 魏萍 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期951-954,共4页

为真核表达鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S1蛋白并鉴定其抗原性,本研究采用RT-PCR方法扩增出IBV Holte株S1基因,并将其克隆于昆虫杆状病毒转移载体pFastBacHT中,通过大肠杆菌中同源重组构建重组杆粒Bacmid-S1,将重组杆粒转染至Sf9细胞中,... 为真核表达鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S1蛋白并鉴定其抗原性,本研究采用RT-PCR方法扩增出IBV Holte株S1基因,并将其克隆于昆虫杆状病毒转移载体pFastBacHT中,通过大肠杆菌中同源重组构建重组杆粒Bacmid-S1,将重组杆粒转染至Sf9细胞中,获得含S1基因的重组杆状病毒。将该重组杆状病毒感染Sf9细胞进行表达,经间接免疫荧光、SDS-PAGE和western blot鉴定结果表明:IBV Holte株的S1蛋白能够在Sf9中以可溶形式表达,蛋白大小约为64 ku,该蛋白具有天然蛋白的抗原性。本研究为生产检测IB的诊断试剂和研制新型IB重组亚单位疫苗奠定基础。 展开更多

关键词 鸡传染性支气管炎病毒 S1基因 真核表达 抗原性分析

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副结核分支杆菌Hed蛋白的抗原性分析及在间接ELISA中的应用 被引量：3

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作者 刘倩 唐泰山 +3 位作者 廉慧锋 王凯民 张常印 雷治海 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期113-117,共5页

从副结核分支杆菌K-10菌株克隆出840 bp的hed基因片段,插入原核表达载体pET-32a(+),转化至Escherichia coliBL21(DE3),在0.8 mmol.L-1 IPTG诱导下进行表达,纯化重组蛋白,将其进行Western-blot分析、小鼠免疫试验,包被ELISA板,建立间接EL... 从副结核分支杆菌K-10菌株克隆出840 bp的hed基因片段,插入原核表达载体pET-32a(+),转化至Escherichia coliBL21(DE3),在0.8 mmol.L-1 IPTG诱导下进行表达,纯化重组蛋白,将其进行Western-blot分析、小鼠免疫试验,包被ELISA板,建立间接ELISA方法。结果显示:重组蛋白具有良好的抗原性,方阵滴定法确定了间接ELISA方法的抗血清最佳稀释度(100倍)和抗原包被浓度(4.4μg.mL-1),该方法具有较好的特异性和敏感性。 展开更多

关键词 副结核分支杆菌 Hed蛋白 抗原性分析 间接ELISA

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羊痘病毒3个结构蛋白的克隆与抗原性分析 被引量：2

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作者 颜新敏 吴国华 +3 位作者 李健 朱海霞 朱彩珠 张强 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期889-891,共3页

为研究羊痘病毒结构蛋白的功能,本研究将羊痘病毒的ORF57、ORF95和ORF117分别克隆至pGEX4T-1原核表达载体后转染到大肠杆菌中。重组表达菌经1 mmol/L的IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳,结果显示3个重组蛋白均在原核细胞中获得有效表达。表... 为研究羊痘病毒结构蛋白的功能,本研究将羊痘病毒的ORF57、ORF95和ORF117分别克隆至pGEX4T-1原核表达载体后转染到大肠杆菌中。重组表达菌经1 mmol/L的IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳,结果显示3个重组蛋白均在原核细胞中获得有效表达。表达产物经western blot分析,羊痘病毒特异性血清只能识别融合蛋白ORF57和ORF95,不能识别ORF117。本研究为重组诊断抗原的筛选和亚单位疫苗的研制奠定了基础。 展开更多

关键词 ORF57 ORF95 ORF117 原核表达 抗原性分析

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猪流行性腹泻病毒CH/GX/2015/750A株S2蛋白的原核表达及抗原性分析 被引量：3

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作者 刘磊 秦毅斌 +9 位作者 卢冰霞 蒋冬福 陈忠伟 何颖 赵硕 周英宁 李斌 段群棚 梁家幸 赵武 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第6期1668-1676,共9页

本研究旨在了解猪流行性腹泻病毒(PEDV)S2蛋白的抗原性,为下一步诊断试剂盒及亚单位疫苗的研究奠定基础。试验通过反转录PCR的方法扩增PEDV CH/GX/2015/750A株S2基因部分片段(S2A),将其克隆后插入原核表达载体pET-32a(+)中,构建原核表... 本研究旨在了解猪流行性腹泻病毒(PEDV)S2蛋白的抗原性,为下一步诊断试剂盒及亚单位疫苗的研究奠定基础。试验通过反转录PCR的方法扩增PEDV CH/GX/2015/750A株S2基因部分片段(S2A),将其克隆后插入原核表达载体pET-32a(+)中,构建原核表达质粒pET32a-S2A。将原核表达质粒转化入大肠杆菌BL21感受态细胞中,IPTG诱导表达重组蛋白,Ni柱亲和层析法纯化重组蛋白,Western blotting检测重组蛋白S2A的反应原性。纯化复性的重组蛋白S2A免疫昆明小鼠制备多克隆抗体,用间接ELISA法检测获得的多克隆抗体效价,间接免疫荧光法验证制备的多克隆抗体的特异性。结果显示,重组S2A蛋白在IPTG终浓度为0.2 mmol/L时,37℃诱导表达3 h可获得最高表达量,该重组蛋白主要以包涵体的形式存在;Western blotting结果显示,纯化复性后的重组蛋白S2A能够与PEDV阳性血清发生特异性结合,具有良好的反应原性。制备的多克隆抗体效价可达1∶32000,间接免疫荧光结果表明,制备的多克隆抗体能够特异性识别和结合PEDV。结果表明,PEDV S2A蛋白具有良好的抗原性,可作为诊断试剂盒或亚单位疫苗的候选抗原。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒(PEDV) S2蛋白 原核表达 抗原性分析 多克隆抗体制备

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猪细小病毒HN-3株VP2基因克隆与抗原性分析 被引量：3

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作者 梁秀丽 方丽云 +3 位作者 王东方 貊鹏涛 付云飞 魏战勇 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2007年第11期100-103,共4页

参考GenBank公布的NADL-2株序列，设计出1对引物。利用该引物扩增了猪细小病毒HN-3株VP2主要抗原基因，将其克隆到pGEM-TEasy载体上；测序获得1438bp核苷酸序列，并推导出其氨基酸序列。共编码475氨基酸，与NADL-2株相应的序列进行比较... 参考GenBank公布的NADL-2株序列，设计出1对引物。利用该引物扩增了猪细小病毒HN-3株VP2主要抗原基因，将其克隆到pGEM-TEasy载体上；测序获得1438bp核苷酸序列，并推导出其氨基酸序列。共编码475氨基酸，与NADL-2株相应的序列进行比较分析，两者核苷酸同源性为99．4％，氨基酸同源性为99．3％。应用DNAStar软件对氨基酸的抗原表位进行了预测，共有11个抗原表位，分别在氨基酸N端的11～24，81～108，121～135，139～148，150～172，221～239，241～259，316～342，344～352，390～405和426～439区段，此序列具有较好的免疫原性。 展开更多

关键词 猪细小病毒 卯2基因 抗原性分析

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猪细小病毒Vaccine株VP2基因克隆与抗原性分析 被引量：3

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作者 梁秀丽 方丽云 +3 位作者 吕晓丽 龚国琴 付云飞 魏战勇 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第1期37-39,共3页

[目的]为研制和筛选猪细小病毒核酸疫苗提供依据。[方法]对猪细小病毒Vaccine株VP2进行克隆、测序以及抗原性分析。[结果]参考GenBank公布的NADL-2株序列，设计出1对引物，并利用该引物扩增了猪细小病毒vaccine株VP2主要抗原基因，将其... [目的]为研制和筛选猪细小病毒核酸疫苗提供依据。[方法]对猪细小病毒Vaccine株VP2进行克隆、测序以及抗原性分析。[结果]参考GenBank公布的NADL-2株序列，设计出1对引物，并利用该引物扩增了猪细小病毒vaccine株VP2主要抗原基因，将其克隆到pGEM-T Easv载体上，测序获得656 bp核苷酸序列，并推导出其氨基酸序列，共编码218氨基酸，与NADL-2株相应的序列进行比较分析，比NADL-2毒株缺失781 bp，两者核苷酸同源性为98，9％，氨基酸同源性为97，2％；应用DNAStar软件对氨基酸的抗原表位进行了预测，共有7个抗原表位，分别在氨基酸N端的第10～18、34～39、94～103、121～126、137～144、156～165和209～214区段，此序列具有较好的免疫原性、[结论]该研究为发展特异性和敏感性诊断系统和研制疫苗提供了有力的技术依据，为研究蛋白质特性分析提供了理论依据。 展开更多

关键词 猪细小病毒 VP2基因 抗原性分析

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空肠弯曲菌FliD蛋白的原核表达与抗原性分析 被引量：2

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作者 张小燕 杜雪晴 +3 位作者 唐虹 雷天垚 黄金林 焦新安 《中国家禽》 北大核心 2016年第15期21-25,共5页

为获得空肠弯曲菌FliD蛋白并分析其抗原性,研究扩增空肠弯曲菌标准菌株11168 fliD基因并构建原核表达质粒pColdⅠ-fliD和pGEX-6p-1-fliD,将重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达并纯化FliD重组蛋白;纯化后的His-FliD蛋白免疫6... 为获得空肠弯曲菌FliD蛋白并分析其抗原性,研究扩增空肠弯曲菌标准菌株11168 fliD基因并构建原核表达质粒pColdⅠ-fliD和pGEX-6p-1-fliD,将重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达并纯化FliD重组蛋白;纯化后的His-FliD蛋白免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,经3次免疫后收集小鼠血清,间接ELISA结果显示小鼠多抗血清效价为25 600,Westernblot结果显示多抗血清能够与重组蛋白His-FliD特异性结合。研究成功表达空肠弯曲菌FliD蛋白并初步分析其抗原性,为进一步研究空肠弯曲菌与宿主间相互作用及FliD蛋白作为候选亚单位疫苗奠定理论基础。 展开更多

关键词 空肠弯曲菌 FliD蛋白 原核表达 抗原性分析

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南非Ⅱ型口蹄疫主要抗原表位串联基因的表达及抗原性分析 被引量：2

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作者 林祥梅 邓俊花 +1 位作者 王彩霞 吴绍强 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第10期55-58,共4页

在对南非Ⅱ型口蹄疫病毒抗原分析基础上,将已经筛选出的6条抗原性良好的多肽采用柔性linker拼接,人工合成相应核苷酸后连入T载体中。将酶切回收的串联基因(VP1-VP3)克隆于表达载体pGEX-6P-1中,获得重组质粒pGEX-VP1-VP3。该质粒转化于... 在对南非Ⅱ型口蹄疫病毒抗原分析基础上,将已经筛选出的6条抗原性良好的多肽采用柔性linker拼接,人工合成相应核苷酸后连入T载体中。将酶切回收的串联基因(VP1-VP3)克隆于表达载体pGEX-6P-1中,获得重组质粒pGEX-VP1-VP3。该质粒转化于感受态细胞BL21(DE3)plysS中,经IPTG诱导后进行了可溶性分析和Western blotting分析,且对融合蛋白柱上酶切纯化后进行了抗原性分析。重组质粒pGEX-VP1-VP3的PCR和测序结果表明,VP1-VP3串联基因已成功插入pGEX-6p-1载体中;pGEX-VP1-VP3融合蛋白分子质量约为38.3ku,并以包涵体形式存在;Western blotting结果显示,该融合蛋白与南非Ⅱ型FMDV阳性血清能发生特异性反应;酶切纯化后蛋白间接ELISA鉴定结果表明,表达的VP1-VP3蛋白具有良好的免疫原性与反应原性。串联多肽的成功表达,将为南非型口蹄疫血清学检测方法建立奠定基础。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 南非型 合成多肽 表达 抗原性分析

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弓形虫GJS株表面抗原1基因的原核细胞表达及其抗原性分析 被引量：1

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作者 曹丽艳 张德林 +4 位作者 张燕丽 芦赟 蔡志杰 王艳华 赵晋军 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期804-809,共6页

目的构建弓形虫GJS株表面抗原1(SAG1)重组表达质粒,研究SAG1蛋白疫苗诱导的保护性免疫作用。方法根据RH株弓形虫SAG1基因序列设计1对引物,利用PCR方法获得SAG1基因,克隆入pMD18-T载体,测序后进行序列分析;重新设计引物将其亚克隆至原核... 目的构建弓形虫GJS株表面抗原1(SAG1)重组表达质粒,研究SAG1蛋白疫苗诱导的保护性免疫作用。方法根据RH株弓形虫SAG1基因序列设计1对引物,利用PCR方法获得SAG1基因,克隆入pMD18-T载体,测序后进行序列分析;重新设计引物将其亚克隆至原核表达载体pET-30a中,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达;重组抗原经纯化和复性后免疫小鼠,ELISA法测定其抗体滴度的变化,并用弓形虫速殖子攻击检测免疫保护力。结果与已知的SAG1基因核苷酸序列(S76248)及其编码氨基酸序列的同源性分别为99%、97%;表达的SAG1蛋白以包涵体形式存在,该重组抗原能被羊抗弓形虫阳性血清所识别;经间接ELISA检测,小鼠免疫后产生了较高的抗体;动物保护性实验表明,虽然与对照组相比免疫组小鼠存活时间有一定的延长,但差异无显著性。结论成功构建了弓形虫SAG1重组表达质粒,SAG1蛋白疫苗诱导小鼠的免疫保护力不强。 展开更多

关键词 弓形虫 表面抗原1 克隆表达 抗原性分析

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重组日本乙型脑炎病毒NS1的可溶性表达及抗原性分析 被引量：1

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作者 周丹娜 梁望旺 +6 位作者 郭锐 段正赢 罗明杰 杨克礼 袁芳艳 刘泽文 田永祥 《湖北农业科学》 北大核心 2012年第2期358-360,366,共4页

根据日本乙型脑炎病毒(JEV)Whe株非结构蛋白质1(NS1)的基因序列,设计引物,利用反转录PCR从实验室保藏JEV Whe株中克隆NS1全长序列,并将其插入pET28a表达载体,构建重组表达质粒NS1-pET28a,转化大肠杆菌BL21(ED3),经IPTG诱导,得到可溶性... 根据日本乙型脑炎病毒(JEV)Whe株非结构蛋白质1(NS1)的基因序列,设计引物,利用反转录PCR从实验室保藏JEV Whe株中克隆NS1全长序列,并将其插入pET28a表达载体,构建重组表达质粒NS1-pET28a,转化大肠杆菌BL21(ED3),经IPTG诱导,得到可溶性表达的融合蛋白质His-NS1。结果表明,该融合蛋白质分子量为46ku,大量表达于上清中。镍离子亲和层析柱进行纯化得到His-NS1蛋白质,经Western-blot检测,证明其具有良好的免疫学活性,这为进一步研究JEV NS1的功能及应用奠定了基础。 展开更多

关键词 日本乙型脑炎 非结构蛋白质1 可溶性表达 抗原性分析

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弓形虫速殖子表膜蛋白的组分和抗原性分析 被引量：1

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作者 王世海 熊美华 +2 位作者 唐丽娜 王秀珍 刘露露 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第10期923-925,共3页

目的试验分析弓形虫速殖子表膜蛋白的组分及其抗原性。方法用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析弓形虫速殖子表膜蛋白的组分和用弓形虫病人阳性血清及兔抗弓形虫表膜抗原血清识别硝酸纤维膜载体上的速殖子表膜抗原的免疫反应靶位。结果弓形虫速殖... 目的试验分析弓形虫速殖子表膜蛋白的组分及其抗原性。方法用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析弓形虫速殖子表膜蛋白的组分和用弓形虫病人阳性血清及兔抗弓形虫表膜抗原血清识别硝酸纤维膜载体上的速殖子表膜抗原的免疫反应靶位。结果弓形虫速殖子表膜抗原的独特蛋白区带分子为16和17kDa,弓形虫病人特异性抗血清识别的速殖子表膜抗原的免疫反应位点为16kDa,免抗血清识别出64,35,32,26,16kDa等8个位点。结论弓形虫速殖子表膜蛋白存在特异的抗原决定簇和可被特异性抗体识别的受体,证明速殖子表膜蛋白具有较好的抗原性,此对于弓形虫病的免疫学诊断具有重要的意义。 展开更多

关键词 弓形虫表膜抗原 抗原性分析

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牛传染性鼻气管炎病毒部分gB蛋白的原核表达及抗原性分析 被引量：1

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作者 何小丽 李凡飞 +3 位作者 王文佳 张凯 程成 许立华 《江苏农业科学》 2019年第17期189-192,共4页

为对牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)gB基因进行原核表达,并对表达产物进行抗原性分析,利用笔者所在实验室已构建好的gB-BL21重组阳性菌落,进行异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并对培养及诱导表达条件(IPTG最佳浓度、作用时间)等影响表... 为对牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)gB基因进行原核表达,并对表达产物进行抗原性分析,利用笔者所在实验室已构建好的gB-BL21重组阳性菌落,进行异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并对培养及诱导表达条件(IPTG最佳浓度、作用时间)等影响表达的因素进行优化,然后将表达的gB重组蛋白进行亲和层析纯化。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果表明,gB蛋白在大肠杆菌中高效表达,表达蛋白的相对分子量约为32.4ku,与预期的蛋白大小一致。经BCA(聚氰基丙烯酸正丁酯)蛋白含量测定试剂盒测定,gB重组蛋白浓度为1.84mg/mL。Western Blot结果显示,纯化后的gB重组蛋白能被标准IBR阳性血清识别,说明表达的目的蛋白具有良好的反应原性,可作为IBRV检测的特异性抗原。试验为建立牛传染性鼻气管炎诊断方法及研究gB蛋白的功能特性提供了材料和技术理论支持。 展开更多

关键词 牛传染性鼻气管炎 gB蛋白 原核表达 纯化 抗原性分析

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中国B.afzelii基因型莱姆病螺旋体GDsh1表面蛋白VlsE保守区段的克隆表达及抗原性分析

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作者 刘炜 张琳 +3 位作者 侯学霞 刘慧鑫 郝琴 万康林 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期13-16,27,共5页

目的克隆表达中国莱姆病螺旋体B.afzelii基因型菌株GDsh1的表面蛋白VlsE保守区段,并对其抗原性进行分析,为制备中国莱姆病重组抗原ELISA检测试剂盒提供依据。方法结合文献,下载并比对PubMed上所有莱姆病螺旋体B.a型菌株的VlsE基因序列,... 目的克隆表达中国莱姆病螺旋体B.afzelii基因型菌株GDsh1的表面蛋白VlsE保守区段,并对其抗原性进行分析,为制备中国莱姆病重组抗原ELISA检测试剂盒提供依据。方法结合文献,下载并比对PubMed上所有莱姆病螺旋体B.a型菌株的VlsE基因序列,确定保守区段,设计引物,扩增GDsh1的VlsE基因片段。将扩增产物与载体PET-32a连接,转入大肠杆菌BL21(DE3)中表达。对重组载体进行序列测定,表达产物用SDS-PAGE和Western blot分析。利用重组VlsE蛋白制备ELISA试剂盒,检测83份莱姆病阳性血清,90份阴性血清以及90份梅毒血清,计算重组试剂盒的灵敏度和特异性。并与科室已有的全菌蛋白ELISA试剂盒检测结果进行比较。结果成功克隆表达了B.afzelii型VlsE保守区蛋白,Western blot结果显示VlsE保守区蛋白与免疫兔血清有较强的抗原抗体反应。ELISA结果表明:重组VlsE蛋白的灵敏度60.2%低于全菌蛋白的灵敏度92.8%(P<0.001);特异性分别为73.3%、68.9%,差异无统计学意义(P=0.511)。在检测梅毒血清上特异性分别为83.3%、18.9%,重组蛋白的特异性远远高于全菌蛋白(P<0.001)。结论重组VlsE基因保守区段蛋白在莱姆病的检测中具有一定的灵敏度和特异性,且在区分梅毒血清与莱姆病血清上,其特异性远远高于全菌蛋白,在莱姆病血清学检测中具有不容忽视的重要意义。 展开更多

关键词 莱姆病螺旋体 VlsE蛋白 克隆表达 抗原性分析

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鸭肠炎病毒gE基因胞外区的原核表达与抗原性分析

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作者 乌伊罕 赵妍 +3 位作者 刘晓玫 张智慧 马波 王君伟 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2010年第10期22-24,共3页

关键词 鸭肠炎病毒 抗原性分析 原核表达 GE基因 胞外区 败血性传染病 疱疹病毒 病毒性肠炎

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犬瘟热病毒H基因5'端的表达纯化及抗原性分析

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作者 易立 程世鹏 +3 位作者 金卉 王建科 许红丽 杨莘 《特产研究》 2011年第3期6-9,共4页

为了获得高纯度的犬瘟热病毒5'端H蛋白,本研究通过参考GenBank中发表的CDV H蛋白基因序列,用Oligo 6.0软件设计一对特异性引物,从犬瘟热病毒疫苗毒株CDV3和野毒株CDVSD株提取总RNA,经RT-PCR扩增得到388bp的基因片段,将目的基因与原... 为了获得高纯度的犬瘟热病毒5'端H蛋白,本研究通过参考GenBank中发表的CDV H蛋白基因序列,用Oligo 6.0软件设计一对特异性引物,从犬瘟热病毒疫苗毒株CDV3和野毒株CDVSD株提取总RNA,经RT-PCR扩增得到388bp的基因片段,将目的基因与原核表达载体pET28a(+)连接构建了pET28a-CDV3-H5和pET28a-CDVSD-H5重组质粒,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行鉴定、测序I、PTG诱导表达。重组表达载体pET28a-CDVSD-H5在大肠杆菌中成功的表达,目的重组蛋白为22kD,而pET28a-CDV3-H5未能表达。经Ni-NTA洗脱纯化后r,CDVSD-H5蛋白被成功纯化。Western blot分析表明,表达产物能够被犬抗CDV阳性血清所识别,具有良好的抗原性。为血清学诊断方法的建立和基因工程疫苗的研究奠定基础。 展开更多

关键词 犬瘟热病毒 H基因5'端 表达纯化 抗原性分析

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