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鸭肠炎病毒gB抗原优势区的表达及其多克隆抗体的反应特性被引量：4: 1; 作者张树栋曹春秋 +5 位作者董井泉高明春张文龙郑铁鑫马波王君伟《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期430-437,共8页; 拟制备鸭肠炎病毒(DEV)gB抗原优势区的多克隆抗体,初步应用于该病毒的检测。以本实验室克隆的DEVC-KCE株ul27基因序列为参考序列设计特异性引物,通过PCR获得DEV gB优势表位区域基因片段gB-AD(331—570bp),并在pET-32a(+)/Rosetta(DE3)pL... 展开更多; 关键词鸭肠炎病毒 GB 抗原优势区原核表达多克隆抗体检测; 在线阅读下载PDF 职称材料

兔出血症病毒VP60抗原优势区和Th细胞表位融合蛋白的原核表达及免疫效力测定被引量：2: 2; 作者孟春春程英杰 +5 位作者李传峰王玢瑸缪秋红陈宗艳吴润刘光清《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期239-242,共4页; 为检测兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白VP60两个抗原优势区串联通用Th细胞表位的融合蛋白AB-Th的免疫效力,本研究采用融合PCR的方法以pBL-RHDV为模板扩增AB-Th基因并亚克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,大量表达AB... 展开更多; 关键词 VP60优势抗原区 Th细胞表位原核表达免疫效力测定; 在线阅读下载PDF 职称材料

Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1蛋白优势抗原区的鉴定及抗体检测ELISA方法的建立被引量：6: 3; 作者董井泉张蕾 +2 位作者马波师东方王君伟《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期542-546,共5页; 为鉴定Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)VP1蛋白优势抗原区及建立DHV-Ⅰ抗体检测ELISA方法,本研究以重组质粒pEasy-VP1为模板,将其分为5段(VP1-a^e)及全长VP1经PCR扩增,并分别克隆于pET-32a(+)进行原核表达。经western blot分析表明,截短表达的蛋... 展开更多; 关键词鸭肝炎病毒 VP1蛋白抗原优势区间接ELISA; 在线阅读下载PDF 职称材料

基于兔出血症病毒衣壳蛋白优势抗原区的间接ELISA方法建立被引量：1: 4; 作者李宁孟春春 +8 位作者梁瑞英李传峰陈宗艳缪秋红毕庄莉朱英奇郭慧敏刘光清王桂军《中国动物传染病学报》 CAS 2014年第3期1-7,共7页; 为建立一种检测兔出血症病毒（Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV）抗体的间接ELISA方法,首先扩增了VP60的优势抗原区A（31～250 aa）和B（470～579 aa）两个片段,然后应用融合PCR方法将A、B片段连接起来,克隆至pET-30a（＋）,转染... 展开更多; 关键词兔出血症病毒 VP60 优势抗原区间接ELISA; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名鸭肠炎病毒gB抗原优势区的表达及其多克隆抗体的反应特性被引量：4: 1; 作者张树栋曹春秋董井泉高明春张文龙郑铁鑫马波王君伟; 机构东北农业大学动物医学学院哈药集团生物疫苗有限公司; 出处《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期430-437,共8页; 基金 2013年度黑龙江省博士后资助项目(LBH-Z13021) 高等学校博士学科点专项科研基金资助课题(20102325110004); 文摘拟制备鸭肠炎病毒(DEV)gB抗原优势区的多克隆抗体,初步应用于该病毒的检测。以本实验室克隆的DEVC-KCE株ul27基因序列为参考序列设计特异性引物,通过PCR获得DEV gB优势表位区域基因片段gB-AD(331—570bp),并在pET-32a(+)/Rosetta(DE3)pLysS系统中进行原核表达。经IPTG诱导获得与预期大小相符的重组蛋白质,以Ni-NTA柱亲和层析法纯化重组蛋白质,利用DEV阳性血清检测重组蛋白质的抗原性,并用切胶纯化的重组蛋白质免疫家兔,制备兔抗DEV gB-AD血清。结果显示,重组蛋白质可被DEV阳性血清特异性识别,制备的兔源多克隆抗体I-ELISA效价为1∶10 240,且其具有中和活性;兔源多克隆抗体在还原电泳条件下显示DEV gB的相对分子质量约为66ku,而在非还原电泳条件下DEV gB显示为相对分子质量约120和66ku的两条目的带,通过间接免疫荧光试验和中和试验进一步证实制备的兔源多克隆抗体可特异性识别鸭肠炎病毒感染细胞所合成的gB蛋白。结果表明,所制备的兔抗DEV gB-AD多克隆抗体可作为检测DEV的试剂,为DEV检测及gB的功能研究提供必要的基础数据和材料。; 关键词鸭肠炎病毒 GB 抗原优势区原核表达多克隆抗体检测; Keywords duck enteritis virus gB antigenic domain region prokaryotic expression polyclonal antibody detection; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名兔出血症病毒VP60抗原优势区和Th细胞表位融合蛋白的原核表达及免疫效力测定被引量：2: 2; 作者孟春春程英杰李传峰王玢瑸缪秋红陈宗艳吴润刘光清; 机构中国农业科学院上海兽医研究所甘肃农业大学动医医学院西北农林科技大学动物医学院; 出处《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期239-242,共4页; 基金农业公益性行业科研专项课题(201303046 201003012) +1 种基金 "863"计划(2011AA10A209) 国家自然科学基金(C010802); 文摘为检测兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白VP60两个抗原优势区串联通用Th细胞表位的融合蛋白AB-Th的免疫效力,本研究采用融合PCR的方法以pBL-RHDV为模板扩增AB-Th基因并亚克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,大量表达AB-Th融合蛋白。结果显示,融合蛋白以包涵体形式表达,并且具有良好的免疫原性。使用纯化后的融合蛋白免疫实验兔,并分别利用ELISA方法和MTS法检测兔免疫后的抗体水平和淋巴细胞增殖能力。结果表明该融合蛋白能够使兔产生针对RHDV VP60蛋白的特异性抗体和导致高水平的淋巴细胞增殖,并能够为实验兔提供100%的保护。; 关键词 VP60优势抗原区 Th细胞表位原核表达免疫效力测定; Keywords the dominant antigen regions of VP60 capsid protein Th cell epitope prokaryotes expression evaluate immuneefficacy; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1蛋白优势抗原区的鉴定及抗体检测ELISA方法的建立被引量：6: 3; 作者董井泉张蕾马波师东方王君伟; 机构东北农业大学动物医学院; 出处《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期542-546,共5页; 基金黑龙江省"十二五"科技攻关项目(GA09B302) 高校博士学科点专项基金(20102325110004) 黑龙江省青年基金(QC04C32); 文摘为鉴定Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)VP1蛋白优势抗原区及建立DHV-Ⅰ抗体检测ELISA方法,本研究以重组质粒pEasy-VP1为模板,将其分为5段(VP1-a^e)及全长VP1经PCR扩增,并分别克隆于pET-32a(+)进行原核表达。经western blot分析表明,截短表达的蛋白VP1-c(80 aa^150 aa)抗原性良好。将其纯化作为包被抗原建立了DHV-Ⅰ抗体的间接ELISA检测方法。经反应条件优化确定:VP1-c包被浓度为2μg/mL,DHV-Ⅰ抗血清稀释度为1∶20,其临界值为0.208。该方法能够特异性检测DHV抗体,与其他常见的几种鸭病阳性血清无交叉反应;其批内和批间重复性试验变异系数均小于9%。应用建立的ELISA方法对48份鸭血清进行了检测,与中和试验相比较,符合率为86.9%。表明该方法可以初步应用于DHV抗体的检测和血清流行病学调查。; 关键词鸭肝炎病毒 VP1蛋白抗原优势区间接ELISA; Keywords duck hepatitis virus type Ⅰ VP1 protein antigenic dominant region indirect ELISA; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名基于兔出血症病毒衣壳蛋白优势抗原区的间接ELISA方法建立被引量：1: 4; 作者李宁孟春春梁瑞英李传峰陈宗艳缪秋红毕庄莉朱英奇郭慧敏刘光清王桂军; 机构安徽农业大学动物科技学院中国农业科学院上海兽医研究所; 出处《中国动物传染病学报》 CAS 2014年第3期1-7,共7页; 基金农业部公益性行业科研专项(201003012 201303046) +3 种基金国家自然科学基金项目(31270194 31101848 31300141) 863计划(2011AA10A200); 文摘为建立一种检测兔出血症病毒（Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV）抗体的间接ELISA方法,首先扩增了VP60的优势抗原区A（31～250 aa）和B（470～579 aa）两个片段,然后应用融合PCR方法将A、B片段连接起来,克隆至pET-30a（＋）,转染BL21感受态细胞,进行原核表达。用Western blot方法对表达产物（AB）的免疫原性进行鉴定,再以纯化的AB为诊断抗原,通过对抗原-抗体反应条件的多重优化,建立检测RHDV抗体的间接ELISA方法。试验结果表明,本研究成功表达了RHDV VP60的优势抗原区（AB）,重组蛋白的分子量约为36 kDa,该蛋白能与RHDV抗体发生特异性反应。以纯化的AB为包被抗原,成功建立了检测RHDV抗体的间接ELISA方法。经过对部分田间样品的检测和应用,证明该方法具有特异性强、重复性好、敏感性高等优点。本研究为将来开展RHDV的流行病学调查和疫苗研究等提供了良好的技术手段。; 关键词兔出血症病毒 VP60 优势抗原区间接ELISA; Keywords Rabbit hemorrhagic disease virus VP60 capsid protein dominant antigen regions indirect enzyme linked immunosorbent assay （ELISA）; 分类号 S852.659.1 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	鸭肠炎病毒gB抗原优势区的表达及其多克隆抗体的反应特性	张树栋曹春秋董井泉高明春张文龙郑铁鑫马波王君伟	《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2015	4	在线阅读下载PDF 职称材料
2	兔出血症病毒VP60抗原优势区和Th细胞表位融合蛋白的原核表达及免疫效力测定	孟春春程英杰李传峰王玢瑸缪秋红陈宗艳吴润刘光清	《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2014	2	在线阅读下载PDF 职称材料
3	Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1蛋白优势抗原区的鉴定及抗体检测ELISA方法的建立	董井泉张蕾马波师东方王君伟	《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2014	6	在线阅读下载PDF 职称材料
4	基于兔出血症病毒衣壳蛋白优势抗原区的间接ELISA方法建立	李宁孟春春梁瑞英李传峰陈宗艳缪秋红毕庄莉朱英奇郭慧敏刘光清王桂军	《中国动物传染病学报》 CAS	2014	1	在线阅读下载PDF 职称材料