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TLR2单克隆抗体对大鼠角膜移植术后植片存活的保护作用 被引量:2
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作者 白浪 郑艳华 梁伟怡 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期887-891,共5页
背景 Toll样受体2(TLR2)在移植免疫相关疾病中的作用越来越受到关注,阻断TLR2对心脏和肾脏移植物的保护作用已有研究报道,但TLR2是否具有抑制角膜移植排斥反应的作用尚未证实.目的 观察TLR2单克隆抗体对同种异体大鼠角膜移植术后植片... 背景 Toll样受体2(TLR2)在移植免疫相关疾病中的作用越来越受到关注,阻断TLR2对心脏和肾脏移植物的保护作用已有研究报道,但TLR2是否具有抑制角膜移植排斥反应的作用尚未证实.目的 观察TLR2单克隆抗体对同种异体大鼠角膜移植术后植片存活情况的影响.方法 取24只SPF级雌性Wistar大鼠作为受体,12只SPF级SD大鼠作为供体,体质量均为180~220 g.采用同种异体角膜移植的方法在Wistar大鼠右眼实施穿透角膜移植术,制备大鼠角膜移植模型.采用随机数字表法将模型眼分为单纯模型组和TLR2单克隆抗体组,TLR2单克隆抗体组分别于术后0、2、4、6、8d球结膜下注射TLR2单克隆抗体15 μg/30μl,单纯模型组大鼠同法注射等容量生理盐水.术后每日于裂隙灯显微镜下观察各组大鼠角膜植片水肿程度、透明度和新生血管形成情况,参照Holland等的评分标准对排斥反应指数(RI)进行评分;分别于术后第9天、第15天收集各组3只大鼠角膜组织,另取3只正常Wistar大鼠眼球作为正常对照,行常规组织病理学检查.各组取6只大鼠用于生存分析观察.结果 术后1~4 d,裂隙灯显微镜下2个组角膜均轻度水肿,术后9~14d,单纯模型组大鼠角膜植片布满新生血管,可见植片水肿、混浊,而TLR2单克隆抗体组大鼠植片至术后第15天开始混浊.术后5、9、15d,单纯模型组大鼠RI评分均明显高于TLR2单克隆抗体组,差异均有统计学意义(t=4.183、4.954、13.506,均P<0.05);TLR2单克隆抗体组角膜植存活时间为15.5d,95%可信区间(CI)为14.9~16.1,单纯模型组角膜植片存活时间为9.5d,95% CI为8.7~10.3,2个组间差异有统计学意义(Z=12.728,P=0.001).角膜组织病理学检查显示,单纯模型组大鼠角膜基质层水肿明显,角膜组织中可见大量炎性细胞浸润和新生血管管腔形成,而在TLR2单克隆抗体组中仅见少量炎性细胞和新生血管.结论 TLR2单克隆抗体能减轻角膜移植术后的炎症反应,延长角膜植片的存活时间. 展开更多
关键词 TOLL样受体2 单克隆抗体/用法和用量 穿透角膜移植/病理 植片排斥/病理 植片存活 /药物作用 动物模型
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植物叶片染色质免疫共沉淀方法的优化 被引量:2
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作者 张媛媛 黄冬梅 +3 位作者 邓班 李丹静 张玉 缪颖 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2018年第3期329-335,共7页
以拟南芥成熟叶片为材料,探索3种不同型号超声破碎仪器的染色质免疫共沉淀(Ch IP)超声破碎条件.根据超声破碎结果推荐使用Covaris M220 Focused-ultrasonicator仪器,并将该仪器破碎条件设置为10%duty cycle、75 Watts Intensity Peak In... 以拟南芥成熟叶片为材料,探索3种不同型号超声破碎仪器的染色质免疫共沉淀(Ch IP)超声破碎条件.根据超声破碎结果推荐使用Covaris M220 Focused-ultrasonicator仪器,并将该仪器破碎条件设置为10%duty cycle、75 Watts Intensity Peak Incident power、200 cycle per Burst、7℃bath temperature、破碎时间12 min时,可获得约500 bp的DNA片段.同时,为检测不同H3K9ac抗体用量对染色质免疫沉淀效率的影响,通过半定量和实时荧光定量PCR检测确定初始量0.25 g的拟南芥叶片所需H3K9ac抗体的最适用量为3μL.此外,以不同衰老程度的水稻旗叶为材料,根据上述破碎条件,进一步优化超声破碎时间,同样可以获得合适的DNA片段,根据优化的样品与抗体用量比例,通过免疫沉淀可以获得适用于后期实时定量PCR(Ch IP-q PCR)和高通量测序(Ch IP-seq)分析的DNA样品. 展开更多
关键词 叶片 染色质免疫共沉淀 超声破碎条件 抗体用量 免疫沉淀效率
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