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杆状病毒AcMNPV p35基因的克隆表达及多抗制备
被引量：
1
1
作者
李玲玲
李朝飞
庞义
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2007年第5期1-4,共4页
用PCR方法扩增得到苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californic anucleopolyhedrovirus,AcM N-PV)p35基因,将其克隆至质粒pET-32a(+)上,构建得到重组质粒pET-p35,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,表达了1条约为55 ku的蛋白带。以...
用PCR方法扩增得到苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californic anucleopolyhedrovirus,AcM N-PV)p35基因,将其克隆至质粒pET-32a(+)上,构建得到重组质粒pET-p35,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,表达了1条约为55 ku的蛋白带。以Ni2+-NTA偶连抗体检测证明所表达的蛋白为带有组氨酸的融合蛋白。采用割胶回收的方法纯化融合蛋白,以纯化的融合蛋白制备多克隆抗体,效价为1/1 024。免疫印迹分析表明,该抗血清能与感染苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒的细胞蛋白样品发生特异性反应。
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关键词
苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒p35
基因
基因
表达
多克隆
抗体
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职称材料
λ轻链抗原的克隆与表达
2
作者
韩焕兴
黄宗文
+4 位作者
郑大勇
罗荣城
叶伟民
陆慧琦
孔宪涛
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第10期528-530,共3页
目的:应用分子生物学方法克隆、表达λ轻链基因,探索有效制备高纯度轻链抗原技术.方法:应用已有pComb3抗-HBsFab表达载体,用限制性双酶切去除Fab中的H链基因,合成互补于两酶点粘端的短核苷酸链,并加以多聚组氨酸编码基因,通过复性、连...
目的:应用分子生物学方法克隆、表达λ轻链基因,探索有效制备高纯度轻链抗原技术.方法:应用已有pComb3抗-HBsFab表达载体,用限制性双酶切去除Fab中的H链基因,合成互补于两酶点粘端的短核苷酸链,并加以多聚组氨酸编码基因,通过复性、连接酶连接构建λ轻链表达载体.结果:重构建载体的单酶切、电泳表明分子的大小为4.4 kb,已切除H链基因;阳性株经IPTG诱导表达上清的免疫转印结果显示为抗轻链血清反应带;电泳位置与轻链的分子量吻合,成单一区带;直接ELISA结果表明,正确连接的克隆表达上清与抗Polyhis血清发生反应.结论:用生物工程技术克隆表达λ轻链具有简便、实用的特点,更易获得高纯度产品,是可以替代常规轻链抗原提纯的理想方法.
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关键词
λ轻链纯化
抗体基因表达
免疫转印
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职称材料
题名
杆状病毒AcMNPV p35基因的克隆表达及多抗制备
被引量：
1
1
作者
李玲玲
李朝飞
庞义
机构
华南师范大学激光生命科学教育部重点实验室
中山大学生物防治国家重点实验室
出处
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2007年第5期1-4,共4页
基金
国家重大基础研究项目(973项目
G2000016209)
文摘
用PCR方法扩增得到苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californic anucleopolyhedrovirus,AcM N-PV)p35基因,将其克隆至质粒pET-32a(+)上,构建得到重组质粒pET-p35,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,表达了1条约为55 ku的蛋白带。以Ni2+-NTA偶连抗体检测证明所表达的蛋白为带有组氨酸的融合蛋白。采用割胶回收的方法纯化融合蛋白,以纯化的融合蛋白制备多克隆抗体,效价为1/1 024。免疫印迹分析表明,该抗血清能与感染苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒的细胞蛋白样品发生特异性反应。
关键词
苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒p35
基因
基因
表达
多克隆
抗体
Keywords
Autographa californica nueleopolyhedrovirus
p35 gene
prokaryotie expression
multielonal antibody
分类号
Q93 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
λ轻链抗原的克隆与表达
2
作者
韩焕兴
黄宗文
郑大勇
罗荣城
叶伟民
陆慧琦
孔宪涛
机构
上海长征医院解放军临床免疫中心
上海长征医院呼吸科
广州南方医院肿瘤科
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第10期528-530,共3页
基金
国家自然科学基金
文摘
目的:应用分子生物学方法克隆、表达λ轻链基因,探索有效制备高纯度轻链抗原技术.方法:应用已有pComb3抗-HBsFab表达载体,用限制性双酶切去除Fab中的H链基因,合成互补于两酶点粘端的短核苷酸链,并加以多聚组氨酸编码基因,通过复性、连接酶连接构建λ轻链表达载体.结果:重构建载体的单酶切、电泳表明分子的大小为4.4 kb,已切除H链基因;阳性株经IPTG诱导表达上清的免疫转印结果显示为抗轻链血清反应带;电泳位置与轻链的分子量吻合,成单一区带;直接ELISA结果表明,正确连接的克隆表达上清与抗Polyhis血清发生反应.结论:用生物工程技术克隆表达λ轻链具有简便、实用的特点,更易获得高纯度产品,是可以替代常规轻链抗原提纯的理想方法.
关键词
λ轻链纯化
抗体基因表达
免疫转印
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
R392-33
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
杆状病毒AcMNPV p35基因的克隆表达及多抗制备
李玲玲
李朝飞
庞义
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2007
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
λ轻链抗原的克隆与表达
韩焕兴
黄宗文
郑大勇
罗荣城
叶伟民
陆慧琦
孔宪涛
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2001
0
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职称材料
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