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抗人肝癌单克隆抗体HAb18 Fd及轻链基因的克隆与鉴定
被引量：
9
1
作者
陈志南
邢金良
+2 位作者
杨向民
宋斐
张思河
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
2003年第2期105-109,共5页
目的 :克隆抗人肝癌单抗HAb18Fd及轻链基因 ,并对其可靠性和准确性进行验证。方法 :从分泌单抗HAb18的杂交瘤细胞株中提取总RNA ,利用RT PCR扩增抗体Fd及轻链基因 ,连入 pMD18T载体后 ,挑选阳性克隆进行序列测定并利用相应的软件对序列...
目的 :克隆抗人肝癌单抗HAb18Fd及轻链基因 ,并对其可靠性和准确性进行验证。方法 :从分泌单抗HAb18的杂交瘤细胞株中提取总RNA ,利用RT PCR扩增抗体Fd及轻链基因 ,连入 pMD18T载体后 ,挑选阳性克隆进行序列测定并利用相应的软件对序列进行分析。然后将轻链及Fd基因依次克隆到噬菌体展示载体 pComb3中 ,转化大肠杆菌XL1 blue并利用辅助噬菌体M 13K0 7进行挽救 ,收获噬菌体后利用间接ELISA方法检测其抗原特异性。结果 :扩增的HAb18全长轻链和Fd基因大小分别为 6 6 5bp和 6 6 8bp ,序列分析显示 :VH及VL均含有 2个特征性的半胱氨酸 ,CH1属于IgG1亚类 ,CL属于κ亚型。ELISA证实 ,Fab基因表达产物具有与相应抗原特异结合的活性。结论 :成功克隆了肝癌单抗HAb18的Fd及轻链基因 ,为下一步构建多种形式的基因工程抗体奠定了良好的基础。
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关键词
抗人肝癌单克隆抗体
HAb18Fd
轻链基因
克隆
鉴定
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职称材料
题名
抗人肝癌单克隆抗体HAb18 Fd及轻链基因的克隆与鉴定
被引量：
9
1
作者
陈志南
邢金良
杨向民
宋斐
张思河
机构
第四军医大学细胞工程研究中心
出处
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
2003年第2期105-109,共5页
基金
国家"8 63"计划重点课题 (No .2 0 0 1AA2 15 10 1)
国家自然科学基金面上项目 (No.3 0 2 0 3 3 0 )资助
文摘
目的 :克隆抗人肝癌单抗HAb18Fd及轻链基因 ,并对其可靠性和准确性进行验证。方法 :从分泌单抗HAb18的杂交瘤细胞株中提取总RNA ,利用RT PCR扩增抗体Fd及轻链基因 ,连入 pMD18T载体后 ,挑选阳性克隆进行序列测定并利用相应的软件对序列进行分析。然后将轻链及Fd基因依次克隆到噬菌体展示载体 pComb3中 ,转化大肠杆菌XL1 blue并利用辅助噬菌体M 13K0 7进行挽救 ,收获噬菌体后利用间接ELISA方法检测其抗原特异性。结果 :扩增的HAb18全长轻链和Fd基因大小分别为 6 6 5bp和 6 6 8bp ,序列分析显示 :VH及VL均含有 2个特征性的半胱氨酸 ,CH1属于IgG1亚类 ,CL属于κ亚型。ELISA证实 ,Fab基因表达产物具有与相应抗原特异结合的活性。结论 :成功克隆了肝癌单抗HAb18的Fd及轻链基因 ,为下一步构建多种形式的基因工程抗体奠定了良好的基础。
关键词
抗人肝癌单克隆抗体
HAb18Fd
轻链基因
克隆
鉴定
Keywords
hepatoma
monoclonal antibody
gene
cloning
分类号
R735.7 [医药卫生—肿瘤]
Q786 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
抗人肝癌单克隆抗体HAb18 Fd及轻链基因的克隆与鉴定
陈志南
邢金良
杨向民
宋斐
张思河
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
2003
9
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