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斑点免疫金渗滤法检测抗乳铁蛋白多克隆抗体特异性研究 被引量：4
1
作者 李岩 李宏基 +2 位作者 韩立强 王静 杨国宇 《化学与生物工程》 CAS 2008年第2期32-34,共3页
采用斑点免疫金渗滤法对抗乳铁蛋白多克隆抗体特异性进行检测。结果表明金探针具有很强的选择性,斑点免疫金渗滤法能准确快速地检测出多克隆抗体的特异性。
关键词 斑点免疫金渗滤法 抗乳铁蛋白多克隆抗体 特异性 检测
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乳铁蛋白:作为癌症治疗剂与抗癌药物递送系统的潜力
2
作者 苏津贤 马小梅 +3 位作者 舒星富 陈遥 张海霞 柏家林 《中国免疫学杂志》 北大核心 2025年第1期209-215,共7页
目前恶性肿瘤疾病频发且呈逐年递增态势,传统药物放化疗方式价格高昂、毒副作用大,且易降低患者耐受性。天然药物在抗肿瘤过程中具有多靶点、高选择性和低毒副作用等优点,是抗肿瘤药物来源的重要途径之一。作为一种多肽类物质,乳铁蛋白... 目前恶性肿瘤疾病频发且呈逐年递增态势,传统药物放化疗方式价格高昂、毒副作用大,且易降低患者耐受性。天然药物在抗肿瘤过程中具有多靶点、高选择性和低毒副作用等优点,是抗肿瘤药物来源的重要途径之一。作为一种多肽类物质,乳铁蛋白具有显著的抗肿瘤作用,而且在纳米药物递送领域发挥巨大作用。乳铁蛋白受体广泛表达于多种癌细胞表面,除其本体具有强烈的抗肿瘤作用外,还广泛用于修饰纳米载体。本文主要综述乳铁蛋白抗肿瘤的机制及其作为抗癌药物递送系统的最新研究进展。 展开更多
关键词 乳铁蛋白 抗肿瘤作用 药物载体
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不同乳源乳铁蛋白抗氧化与抗菌活性比较研究
3
作者 周雯婧 张丽娜 +8 位作者 彭小雨 高宇 王杉杉 张书凝 周鹏 吴桐 汪家琦 李威 董玲 《中国乳品工业》 北大核心 2025年第11期14-21,共8页
采集来自牛、山羊及人类志愿者的成熟乳并通过阳离子交换柱分离纯化获得乳铁蛋白,测定各样品对自由基(1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl radical,DPPH)、羟自由基、超氧阴离子自由基的抑制率以表征抗氧化活性,并测定不同浓度下各样品对... 采集来自牛、山羊及人类志愿者的成熟乳并通过阳离子交换柱分离纯化获得乳铁蛋白,测定各样品对自由基(1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl radical,DPPH)、羟自由基、超氧阴离子自由基的抑制率以表征抗氧化活性,并测定不同浓度下各样品对有益菌生长的促进作用和对有害菌生长的抑制作用。1 mg/mL人乳铁蛋白(Human lactoferrin,HLF)与山羊乳铁蛋白(Goat lactoferrin,GLF)抑制DPPH自由基的效果分别可达97%和95%,且0.5 mg/mL HLF和100 mg/mL GLF对羟自由基和超氧阴离子自由基的抑制率各自为同组中最高,分别达53.81%和53.07%。GLF减少所有6种有害菌的效果皆强于牛乳铁蛋白(Bovine lactoferrin,BLF)和HLF。1 mg/mL GLF对80%有益菌的促进效果均优于HLF和BLF。HLF抑制DPPH自由基和羟自由基的效果最强,GLF抑制超氧阴离子自由基效果最强。GLF的促有益菌和抗有害菌效果均优于HLF和BLF。文章为探究牛、羊、人源乳铁蛋白生物活性之间的差异提供了理论依据。 展开更多
关键词 乳铁蛋白 抗氧化 抗有害菌 促有益菌 自由基
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热处理、体外消化对驼乳乳铁蛋白抗氧化活性及IEC-6细胞氧化损伤保护的影响
4
作者 张小芳 孙艳 +3 位作者 朱海霞 李亚丽 陈树兴 李岳桦 《保鲜与加工》 北大核心 2025年第8期121-128,共8页
为研究不同热处理、体外消化对驼乳乳铁蛋白抗氧化活性及过氧化氢(H2O2)诱导的小肠上皮细胞(Intestinal epithelial cells,IEC-6)氧化损伤保护作用。以驼乳乳铁蛋白为原料,采用4种热处理(63℃/30 min、72℃/15 s、85℃/15 s、95℃/15 s)... 为研究不同热处理、体外消化对驼乳乳铁蛋白抗氧化活性及过氧化氢(H2O2)诱导的小肠上皮细胞(Intestinal epithelial cells,IEC-6)氧化损伤保护作用。以驼乳乳铁蛋白为原料,采用4种热处理(63℃/30 min、72℃/15 s、85℃/15 s、95℃/15 s),并构建体外消化模型和H2O2诱导的IEC-6细胞氧化应激模型,研究热处理、体外消化对驼乳乳铁蛋白水解度、2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)(2,2’-Azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS)阳离子自由基清除能力、铁离子还原抗氧化能力(Ferric ion reducing antioxidant power,FRAP)值及氧化损伤IEC-6细胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)含量和超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活性的影响。结果表明,驼乳乳铁蛋白经85℃/15 s、95℃/15 s热处理后,抗氧化成分部分被降解,但未完全失活,仍具有一定的抗氧化活性。在0.15 mg/mL最佳质量浓度下,4种热处理后的驼乳乳铁蛋白及消化产物均能提升IEC-6细胞活力,并有效缓解H2O2诱导的细胞氧化损伤。研究结果可为驼乳乳铁蛋白作为新型抗氧化剂应用于功能食品提供理论依据。 展开更多
关键词 驼乳乳铁蛋白 热处理 体外消化 抗氧化活性 氧化损伤
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牛乳铁蛋白多克隆抗体的制备、纯化及定量检测 被引量：1
5
作者 王建 郝丽媛 +1 位作者 魏婧雅 孙鹏 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期100-106,共7页
本试验旨在制备高纯度和特异性的牛乳铁蛋白多克隆抗体,为鉴定并定量检测牛奶样品中及奶牛乳腺组织中合成的乳铁蛋白提供试验材料。选用4只健康新西兰大白兔,初次免疫乳铁蛋白4周后进行加强免疫,每2周加强免疫1次,待血清达到抗体效价后... 本试验旨在制备高纯度和特异性的牛乳铁蛋白多克隆抗体,为鉴定并定量检测牛奶样品中及奶牛乳腺组织中合成的乳铁蛋白提供试验材料。选用4只健康新西兰大白兔,初次免疫乳铁蛋白4周后进行加强免疫,每2周加强免疫1次,待血清达到抗体效价后,对兔进行心脏采血并分离血清,利用饱和硫酸铵法和蛋白A树脂纯化抗体,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western-blot)法分别用于鉴定纯化后抗体的纯度和特异性。测定纯化后抗体效价,并绘制抗体抑制曲线。最后利用所得抗体对市售液态奶、奶牛乳腺组织匀浆液、奶粉样品中的乳铁蛋白进行定量检测。结果表明,本试验制备的兔抗牛乳铁蛋白多克隆抗体纯度较高、特异性较强,抗体浓度为11.02 mg/m L,效价达到1∶128 000;采用该抗体测定的乳腺组织样品中乳铁蛋白浓度为16.13μg/g,液态奶中接近于0μg/g,奶粉中为5.28μg/g。总之,本试验采用经过饱和硫酸铵法和蛋白A树脂2步纯化后得到了纯度较高、特异性较强的兔抗牛乳铁蛋白多克隆抗体,可以用于牛奶等产品的乳铁蛋白鉴定。 展开更多
关键词 乳铁蛋白 多克隆抗体 抗体纯化
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牛乳铁蛋白单克隆抗体的制备及双抗夹心ELISA检测方法的建立 被引量：1
6
作者 项开合 张乃生 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2014年第10期34-36,共3页
本试验以牛乳铁蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体,获得了3株稳定分泌乳铁蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为3C6、3F8和4D3,最后用相对亲和力最强的3C6所产生的抗体作为包被抗体,用辣根过氧化物酶... 本试验以牛乳铁蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体,获得了3株稳定分泌乳铁蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为3C6、3F8和4D3,最后用相对亲和力最强的3C6所产生的抗体作为包被抗体,用辣根过氧化物酶标记过的多克隆抗体作为酶标抗体,最终建立了用于检测牛乳汁中乳铁蛋白含量的双抗夹心ELISA检测方法,该法对牛乳铁蛋白最低检测限为4 ng/m L,最适检测范围为4~256 ng/m L。 展开更多
关键词 乳铁蛋白 单克隆抗体 多克隆抗体 双抗夹心ELISA检测方法
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牛乳铁蛋白单克隆抗体的制备
7
作者 沈阳 张英华 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期39-44,共6页
以LF(牛乳铁蛋白)为抗原对BALB/C小鼠进行免疫,利用杂交瘤技术进行融合,制备了3株抗牛LF的杂交瘤细胞,并对其浓度、上清效价、腹水效价、抗体亚类、分泌单克隆抗体稳性定、单克隆抗体分子量等进行鉴定。结果表明,抗体分泌稳定,腹水效价... 以LF(牛乳铁蛋白)为抗原对BALB/C小鼠进行免疫,利用杂交瘤技术进行融合,制备了3株抗牛LF的杂交瘤细胞,并对其浓度、上清效价、腹水效价、抗体亚类、分泌单克隆抗体稳性定、单克隆抗体分子量等进行鉴定。结果表明,抗体分泌稳定,腹水效价达到106,间接ELISA、Western blot结果显示3株单抗均与FL发生特异性结合;Ig亚类鉴定均为IgG,且轻链均为K链。 展开更多
关键词 牛乳铁蛋白 免疫 鉴定 单克隆抗体
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抗髓过氧化物酶及乳铁蛋白抗体对自身免疫性肝炎检测的临床研究 被引量：9
8
作者 谭立明 张玉红 +5 位作者 陈冬莲 明凤 李华 陈娟娟 王外梅 熊金旺 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期839-843,847,共6页
目的:探讨抗髓过氧化物酶抗体(AMPA)及抗乳铁蛋白抗体(ALA)对自身免疫性肝炎(AIH)检测的临床意义及评估。方法:对63例AIH(53例AIH-Ⅰ和10例AIH-Ⅱ)、206例非AIH患者和50例健康体检者均采用ELISA法检测AM-PA和ALA;间接免疫荧光法(IIF)检... 目的:探讨抗髓过氧化物酶抗体(AMPA)及抗乳铁蛋白抗体(ALA)对自身免疫性肝炎(AIH)检测的临床意义及评估。方法:对63例AIH(53例AIH-Ⅰ和10例AIH-Ⅱ)、206例非AIH患者和50例健康体检者均采用ELISA法检测AM-PA和ALA;间接免疫荧光法(IIF)检测抗核抗体(ANA)、抗平滑肌抗体(ASMA)和抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA),观察临床评价指标,并对结果进行回顾性分析。结果:63例AIH和206例非AIH检测AMPA阳性率分别是61.9%(39/63)和3.40%(7/206),经χ2检验,P<0.01;AIH组中AIH-Ⅰ组阳性率73.6%(39/53)。63例AIH患者检测ALA阳性12例(19.0%),AIH-Ⅰ中阳性11例(20.8%)。AIH自身抗体临床评价指标显示ALA敏感性最低为19.05%,但其特异性最高为99.6%,AM-PA特异性为97.27%。结论:AMPA、ALA与AIH的发生发展存在相关性,两者联合其他自身抗体检测对AIH的诊断及其亚型的鉴别有重要意义。 展开更多
关键词 抗髓过氧化物酶抗体 抗乳铁蛋白抗体 自身免疫性肝炎 抗核抗体 抗平滑肌抗体 抗中性粒细胞胞质抗体
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奶山羊乳铁蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备
9
作者 钟玉玲 代邦国 +3 位作者 杜伟伟 张华文 李纯 史怀平 《家畜生态学报》 北大核心 2022年第2期13-19,共7页
为了制备奶山羊乳铁蛋白的多克隆抗体,为进一步的试验提供材料,该研究运用软件分析并选取最适合原核表达的LF序列进行扩增,将扩增出的序列与pET-32a(+)质粒连接,形成原核表达质粒pET-32a-LF,将质粒转化入大肠杆菌,在最适条件(37℃、0.5 ... 为了制备奶山羊乳铁蛋白的多克隆抗体,为进一步的试验提供材料,该研究运用软件分析并选取最适合原核表达的LF序列进行扩增,将扩增出的序列与pET-32a(+)质粒连接,形成原核表达质粒pET-32a-LF,将质粒转化入大肠杆菌,在最适条件(37℃、0.5 mmol/L IPTG、4 h)下诱导表达出大量蛋白。通过Ni-NTA Resin法将蛋白纯化后皮下注射4月龄新西兰大耳兔,免疫注射结束后采集抗体血清,并用间接酶联免疫吸附法和免疫印迹法检测多抗的效价及特异性。结果显示克隆得到适合原核表达的279 bp的LF CDS片段,pET-32a(+)-LF原核表达载体成功构建并顺利表达(未形成包涵体),表达的截短蛋白大小为10 kD。抗体效价达到1:10^(7);免疫印迹试验结果显示,原核表达的LF蛋白和山羊乳腺上皮细胞中的LF蛋白能够被该抗体特异性识别。 展开更多
关键词 奶山羊 乳铁蛋白(LF) 抗体制备
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脑药物转运载体——抗转铁蛋白受体单链抗体的克隆表达及鉴定 被引量：4
10
作者 颜冰 黄培堂 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期303-307,共5页
为构建特异性的脑药物转运载体 ,分段合成了抗大鼠转铁蛋白受体的单链抗体基因 (Ox2 6 scfv) .经重叠PCR拼接成完整片段 ,克隆入pUC19载体中 ,测序正确后克隆到大肠杆菌表达载体pET 15b E .tag上 .IPTG诱导 ,表达产物分子量为 2 9kD ,... 为构建特异性的脑药物转运载体 ,分段合成了抗大鼠转铁蛋白受体的单链抗体基因 (Ox2 6 scfv) .经重叠PCR拼接成完整片段 ,克隆入pUC19载体中 ,测序正确后克隆到大肠杆菌表达载体pET 15b E .tag上 .IPTG诱导 ,表达产物分子量为 2 9kD ,约占菌体总蛋白量的 4 0 % .包涵体经 6mol L盐酸胍变性后 ,过SephacrylS 30 0HR分子筛柱复性蛋白 .免疫酶染色实验表明 ,该单链抗体能与转铁蛋白受体特异性结合 。 展开更多
关键词 药物转运载体 抗转铁蛋白受体 克隆表达 鉴定 单链抗体 血脑屏障
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酸性同功铁蛋白单克隆抗体免疫学特性的研究
11
作者 游上游 张楚瑜 +1 位作者 黄巍 易先平 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第12期537-538,共2页
目的：探讨抗不同组织酸性同功铁蛋白（ＡＩＦ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的免疫学特性。方法：应用聚焦层析技术分别从人胎盘和原发性肝癌组织中分离出低ｐＩ值的ＡＩＦ，常规制备ＭｃＡｂ和进行免疫组织化学测定。结果：共筛选到５株抗... 目的：探讨抗不同组织酸性同功铁蛋白（ＡＩＦ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的免疫学特性。方法：应用聚焦层析技术分别从人胎盘和原发性肝癌组织中分离出低ｐＩ值的ＡＩＦ，常规制备ＭｃＡｂ和进行免疫组织化学测定。结果：共筛选到５株抗人胎盘ＡＩＦ和２株抗人原发性肝癌（ＰＨＣ）ＡＩＦ的ＭｃＡｂ，即２ｆ８、４ｇ７、４ｇ８、５ｃ３、７ａ９和４ｃ９、４ｅ２。抗ＡＩＦＭｃＡｂｓ均与各自ＡＩＦ分子上不同抗原决定簇结合，其中针对不同组织ＡＩＦ的ＭｃＡb５ｃ３和４ｅ２作用于同一抗原决定簇。使用ＭｃＡｂ２ｆ８和４ｃ９，对正常肝组织、慢性肝炎与肝硬化和ＰＨＣ肝组织进行了免疫组织化学检查，其阳性率分别为２ｆ８：０、１０．０％、７６．３％；４ｃ９：０．６．７％、８１．６％。结论：人胎盘和ＰＨＣ组织ＡＩＦ中存在着共同的抗原决定簇，抗ＰＨＣＡＩＦＭｃＡｂ在免疫诊断中优于抗人胎盘ＡＩＦＭｃＡｂ。 展开更多
关键词 酸性同功铁蛋白 单克隆抗体 免疫组织化学
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兔抗LGALS1蛋白多克隆抗体的制备
12
作者 代丹 姬格金 +4 位作者 郑维豪 张煜杭 罗芬 陆建 鲜思美 《贵州畜牧兽医》 2024年第1期15-17,共3页
为制备兔抗LGALS1蛋白多克隆抗体,将纯化LGALS1蛋白作为抗原,联合弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂免疫新西兰大白兔,经过3次免疫后采集兔血清,采用间接ELISA测定抗血清效价,Western blot检测分析抗体特异性,IFA检测抗体应用效果。结果:血... 为制备兔抗LGALS1蛋白多克隆抗体,将纯化LGALS1蛋白作为抗原,联合弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂免疫新西兰大白兔,经过3次免疫后采集兔血清,采用间接ELISA测定抗血清效价,Western blot检测分析抗体特异性,IFA检测抗体应用效果。结果:血清效价为1∶102 400,Western blot检测可见特异性条带,IFA检测显示细胞质呈特异绿色荧光。结论:试验成功制备了兔抗LGALS1蛋白多克隆抗体,抗体特异性好,效价高。 展开更多
关键词 兔抗LGALS1蛋白 多克隆抗体
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抗CCL20单克隆抗体对血清淀粉样蛋白A相关的结节病中促炎性细胞因子的抑制作用
13
作者 魏佳 马成星 +2 位作者 郑颖 那雨琪 丁晶晶 《医学研究与战创伤救治》 CAS 北大核心 2024年第1期1-6,共6页
目的探讨抗CCL20单克隆抗体是否可抑制高水平血清淀粉样蛋白A(SAA)相关的结节病外周血单个核细胞(PBMC)中促炎性细胞因子的表达。方法提取健康人和结节病患者的PBMC,并进行分组。除空白对照组(正常人PBMC)和结节病PBMC对照组(患者PBMC)... 目的探讨抗CCL20单克隆抗体是否可抑制高水平血清淀粉样蛋白A(SAA)相关的结节病外周血单个核细胞(PBMC)中促炎性细胞因子的表达。方法提取健康人和结节病患者的PBMC,并进行分组。除空白对照组(正常人PBMC)和结节病PBMC对照组(患者PBMC)外,另将结节病组PBMC中分别加入SAA、SAA+抗CCL20单克隆抗体、SAA+NF-κB抑制剂BAY11-7082或地塞米松,经培养48 h后收集各组细胞,分别作为PBMC+SAA刺激组、PBMC+SAA+NF-κB抑制剂BAY11-7082组、PBMC+SAA+抗CCL20单抗组、PBMC+地塞米松干预组,使用ELISA分别测定各组细胞上清液中细胞因子IL-17A、IL-23、IL-6、CCL20和TGF-β1的表达,使用RT-PCR测定各组细胞中CCR6、IL-17、ROR-γt和Foxp3的mRNA表达水平,使用Western blot检测各组细胞中p-NF-κB和NF-κB蛋白的表达水平。结果PBMC+SAA+抗CCL20单抗组与PBMC+SAA组相比,细胞上清液中的IL-17A、IL-23和IL-6的水平显著降低(P<0.01),而TGF-β1的含量显著升高(P<0.01)。PBMC+SAA+抗CCL20单抗组相较于PBMC+SAA组,细胞中CCR6、IL-17A、ROR-γtmRNA水平显著降低(P<0.01),而Foxp3 mRNA差异无统计学意义(P>0.05)。PBMC+SAA+抗CCL20单抗组中p-NF-κB蛋白表达水平较PBMC+SAA组明显降低(P<0.01)。结论抗CCL20单克隆抗体可抑制高水平SAA相关的结节病PBMC中促炎性细胞因子的表达。 展开更多
关键词 结节病 血清淀粉样蛋白A 核因子ΚB 抗CCL20单克隆抗体
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牛乳铁蛋白抗体的制备及其特性测定
14
作者 李亚璞 刘玲君 +3 位作者 宋晓青 吴萌 程华 李春生 《湖南农业科学》 2015年第12期5-7,共3页
利用BLF抗原免疫BALB/c小鼠,采用常规细胞融合技术制备了6株抗BLF的单克隆抗体细胞株,并用此抗原免疫新西兰大白兔获得了55 m L的兔多抗血清。针对腹水单抗及多抗血清进行了一系列特性分析,结果显示,5株抗体效价基本上在1∶10^6以上;间... 利用BLF抗原免疫BALB/c小鼠,采用常规细胞融合技术制备了6株抗BLF的单克隆抗体细胞株,并用此抗原免疫新西兰大白兔获得了55 m L的兔多抗血清。针对腹水单抗及多抗血清进行了一系列特性分析,结果显示,5株抗体效价基本上在1∶10^6以上;间接ELISA测定6株抗体与酪蛋白、乳白蛋白和β-乳球蛋白基本无交叉反应,抗体特异性良好;抗体为IgG1亚类,2B12抗体亲和力优于其他抗体。多抗血清效价可达到1∶10^7以上,抗体也具有一定的特异性。 展开更多
关键词 牛乳铁蛋白 单克隆抗体 多克隆抗体 特性
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牛乳铁蛋白抗菌肽(Lactoferricin)基因的克隆与表达质粒构建 被引量：4
15
作者 邓强 王春晓 +3 位作者 鲁建章 朱政 刘承初 刘景晶 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第11期4442-4444,4476,共4页
按大肠杆菌偏爱密码子设计了牛乳铁蛋白肽的3段引物序列,通过PCR合成BeL1-2-3,经双酶切后克隆入pED质粒的BamHⅠ和HindⅢ位点之间,构建出牛乳铁蛋白肽的表达载体,转化至E.coliBL-2(1 DE3),获得牛的乳铁蛋白肽基因克隆菌。该克隆菌经诱导... 按大肠杆菌偏爱密码子设计了牛乳铁蛋白肽的3段引物序列,通过PCR合成BeL1-2-3,经双酶切后克隆入pED质粒的BamHⅠ和HindⅢ位点之间,构建出牛乳铁蛋白肽的表达载体,转化至E.coliBL-2(1 DE3),获得牛的乳铁蛋白肽基因克隆菌。该克隆菌经诱导后,可表达出可观的融合蛋白,且表达量与诱导时间呈一定相关性。 展开更多
关键词 乳铁蛋白 牛乳铁蛋白肽 基因克隆 融合表达
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线粒体铁转运蛋白2(mitoferrin 2/SLC25A28)的原核表达及兔多克隆抗体制备 被引量：1
16
作者 刘磊 聂雅婷 +3 位作者 丁兰 谷雨 袁媛 叶菁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期268-274,共7页
目的构建人线粒体铁转运蛋白2(mitoferrin 2/SLC25A28)的原核表达质粒,进行蛋白表达和纯化,制备兔抗多克隆抗体并进行初步鉴定。方法构建pET28a(+)-SLC25A28-His原核表达质粒,转化至BL21(DE3)大肠杆菌,采用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG... 目的构建人线粒体铁转运蛋白2(mitoferrin 2/SLC25A28)的原核表达质粒,进行蛋白表达和纯化,制备兔抗多克隆抗体并进行初步鉴定。方法构建pET28a(+)-SLC25A28-His原核表达质粒,转化至BL21(DE3)大肠杆菌,采用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达。提取蛋白包涵体,并用8 mol/L尿素溶解,His-NTA柱纯化。获得纯化SLC25A28蛋白免疫新西兰大白兔制备SLC25A28多克隆抗体,Western blot法鉴定SLC25A28抗体特异性。结果成功构建pET28a(+)-SLC25A28-His原核表达载体质粒,并在BL21(DE3)大肠杆菌中成功诱导表达SLC25A28蛋白,蛋白纯度约为90%,Western blot法证明制备的抗体能特异性识别小鼠睾丸组织中的SLC25A28蛋白。结论成功对人SLC25A28进行了原核表达,并制备了具有特异性的兔抗人SLC25A28多克隆抗体。 展开更多
关键词 线粒体铁转运蛋白2(mitoferrin 2/SLC25A28) 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体 免疫特异性
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人乳铁蛋白基因克隆及细胞表达研究 被引量：28
17
作者 曹阳 高华颖 +4 位作者 于黎 袁晓东 李庆伟 汤敏谦 安利佳 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期9-14,共6页
通过PCR法直接克隆了 2 .36 6kb的人乳铁蛋白基因cDNA序列及 80 0bp的山羊 β.M乳球蛋白基因 5′端调控序列 ,并连接到表达载体pLNCX中。利用脂质体包裹含人乳铁蛋白基因cDNA的重组质粒pLNCXHLF ,并导入到小鼠乳腺癌细胞株MA.M 782中 ,G... 通过PCR法直接克隆了 2 .36 6kb的人乳铁蛋白基因cDNA序列及 80 0bp的山羊 β.M乳球蛋白基因 5′端调控序列 ,并连接到表达载体pLNCX中。利用脂质体包裹含人乳铁蛋白基因cDNA的重组质粒pLNCXHLF ,并导入到小鼠乳腺癌细胞株MA.M 782中 ,G418及PCR筛选获得阳性单克隆细胞 ,增殖后 ,转染细胞利用海藻酸钠固定化包埋培养 ,经激素诱导 ,培养液上清通过Western印记检测证明 ,转染细胞表达并分泌出人乳铁蛋白 ,分子质量为34kDa;ELISA法测出 ,每升培养基 (含 10 5个细胞 )重组蛋白最高表达量为 6 5mg ;抗菌实验表明 ,所获得的重组人乳铁蛋白具有抑制大肠杆菌生长的作用 ,而且比人乳铁蛋白标准品作用更强。 展开更多
关键词 人乳铁蛋白 脂质体 固定化 细胞表达 基因克隆
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牛乳中乳铁蛋白的纯化和抗菌活性研究 被引量：17
18
作者 杨安树 李欣 +1 位作者 陈红兵 刘志勇 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期70-73,共4页
采用凝胶过滤层析和离子交换法层析分离纯化乳铁蛋白,通过SDS-PAGE和IEF-PAGE鉴定所得样品;同时利用抗菌实验(滤纸片法)进行样品的抗菌活性研究,并研究了乳铁蛋白分离纯化过程中抗菌活性的变化。结果表明,离子交换层析纯化乳铁蛋白的效... 采用凝胶过滤层析和离子交换法层析分离纯化乳铁蛋白,通过SDS-PAGE和IEF-PAGE鉴定所得样品;同时利用抗菌实验(滤纸片法)进行样品的抗菌活性研究,并研究了乳铁蛋白分离纯化过程中抗菌活性的变化。结果表明,离子交换层析纯化乳铁蛋白的效果优于凝胶过滤层析,抗菌活性证实乳铁蛋白样品具有广谱抗菌作用,以蜡状芽孢杆菌为指示菌时,比活为3077.3AU/mg(试管法),纯化倍数提高了20.2倍。 展开更多
关键词 乳铁蛋白 纯化 抗菌活性
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酶法制备乳铁蛋白抗菌肽的工艺 被引量：10
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作者 王新保 卢蓉蓉 +2 位作者 任举 杨瑞金 张文斌 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期73-78,共6页
乳铁蛋白具有抗菌活性,胃蛋白酶酶解乳铁蛋白时得到的乳铁蛋白多肽的抗菌活性远高于其自身。通过响应面回归分析,得到了胃蛋白酶酶解乳铁蛋白的优化条件为:底物浓度30 mg/mL、水解时间2 h、温度45℃、加酶量1%(w/w)、pH 2.5。在优化酶... 乳铁蛋白具有抗菌活性,胃蛋白酶酶解乳铁蛋白时得到的乳铁蛋白多肽的抗菌活性远高于其自身。通过响应面回归分析,得到了胃蛋白酶酶解乳铁蛋白的优化条件为:底物浓度30 mg/mL、水解时间2 h、温度45℃、加酶量1%(w/w)、pH 2.5。在优化酶解条件下,水解度约为11%,抑菌率为98.8%。高效液相排阻色谱分析表明,多肽的分子质量主要分布在200～6 000 u。 展开更多
关键词 乳铁蛋白 抗菌肽 水解度 抑菌率 胃蛋白酶
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乳铁蛋白的抗病毒活性 被引量：10
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作者 庞广昌 胡志和 陈庆森 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第1期253-257,共5页
和很多金属结合蛋白一样,乳铁蛋白是一种结合铁离子的糖蛋白,这种糖蛋白发现在人和牛乳中,由中性粒细胞和几种粘膜细胞分泌。已经发现乳铁蛋白有很多功能,属于非特异性免疫系统,具有与众不同的抗病毒活性。本文将就目前有关乳铁蛋白抗... 和很多金属结合蛋白一样,乳铁蛋白是一种结合铁离子的糖蛋白,这种糖蛋白发现在人和牛乳中,由中性粒细胞和几种粘膜细胞分泌。已经发现乳铁蛋白有很多功能,属于非特异性免疫系统,具有与众不同的抗病毒活性。本文将就目前有关乳铁蛋白抗不同病毒的活性和抗病毒模式进行综述。乳铁蛋白表现出抗人免疫缺陷病毒(HIV)、抗RNA和DNA病毒、包括呼吸道合胞体病毒和疱疹病毒等。乳铁蛋白最主要的抗病毒机理就是作用于病毒侵染的早期,防止病毒对宿主细胞的识别和入侵。这种钝化病毒侵染能力的机制是通过切断病毒对受体的接触和识别或直接结合到病毒粒子上使其失去侵染能力。这显然是一种全新的不同于以前的细胞因子,如干扰素的抗病毒机制。 展开更多
关键词 乳铁蛋白 抗病毒 综述 乳 机制
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