本研究以裸花紫珠(Callicarpae Nudiflorae Folium,CNF)的水提取物(CNF water extract,WCNF)和醇提取物(CNF ethanol extract,ECNF)作用于HepG2.2.15细胞,体外评价CNF提取物对HBV的抑制作用,同时结合网络药理学探究CNF抗HBV的潜在作用...本研究以裸花紫珠(Callicarpae Nudiflorae Folium,CNF)的水提取物(CNF water extract,WCNF)和醇提取物(CNF ethanol extract,ECNF)作用于HepG2.2.15细胞,体外评价CNF提取物对HBV的抑制作用,同时结合网络药理学探究CNF抗HBV的潜在作用机制。体外实验采用CCK-8法测定CNF提取物对细胞的毒性;酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测乙型肝炎病毒e抗原(hepatitis B e antigen,HBeAg)和乙型肝炎病毒表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)分泌量,实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,RT-PCR)法测定HBV DNA及关键靶点基因表达量。通过文献调研、TCMSP数据库检索CNF化学成分、Gene Cards数据库检索HBV相关靶点开展网络药理学研究;运用String数据库构建蛋白互作网络,DAVID数据库进行GO功能及KEGG通路富集分析,Cytoscape软件构建成分-靶点-通路网络可视化并进行拓扑学分析,AutoDock Vina软件进行CNF抗HBV关键成分与核心靶点的分子对接分析,并通过RT-PCR实验对关键靶点进行实验验证。体外实验结果表明CNF水醇提取物均可抑制HbeAg和HBsAg的分泌量,抑制HBV DNA的复制水平,并且水提物的抑制作用明显地强于醇提物。网络药理学结果显示,熊果酸、槲皮素、木犀草素、咖啡酸等化合物为CNF抗HBV的关键活性成分,肿瘤蛋白53(tumor protein 53,TP53)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)、热休克蛋白90Alpha家族A类成员1(heat shock protein 90 alpha family class A member 1,HSP90AA1)为核心靶点,涉及磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B,PI3K/AKT)、丝裂原蛋白活化激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)等信号通路。此外,实验结果显示CNF提取物可抑制HBV关键基因IL-6、TNF及HSP90AA1表达并提高TP53基因的mRNA表达水平。以上研究揭示了CNF通过多成分、多靶点、多途径发挥抗HBV的作用。后续将以本研究为基础,进一步对其药效物质基础及作用机制进行深入探讨,为CNF抗HBV的临床应用及新药开发提供坚实的理论依据。展开更多
文摘本研究以裸花紫珠(Callicarpae Nudiflorae Folium,CNF)的水提取物(CNF water extract,WCNF)和醇提取物(CNF ethanol extract,ECNF)作用于HepG2.2.15细胞,体外评价CNF提取物对HBV的抑制作用,同时结合网络药理学探究CNF抗HBV的潜在作用机制。体外实验采用CCK-8法测定CNF提取物对细胞的毒性;酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测乙型肝炎病毒e抗原(hepatitis B e antigen,HBeAg)和乙型肝炎病毒表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)分泌量,实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,RT-PCR)法测定HBV DNA及关键靶点基因表达量。通过文献调研、TCMSP数据库检索CNF化学成分、Gene Cards数据库检索HBV相关靶点开展网络药理学研究;运用String数据库构建蛋白互作网络,DAVID数据库进行GO功能及KEGG通路富集分析,Cytoscape软件构建成分-靶点-通路网络可视化并进行拓扑学分析,AutoDock Vina软件进行CNF抗HBV关键成分与核心靶点的分子对接分析,并通过RT-PCR实验对关键靶点进行实验验证。体外实验结果表明CNF水醇提取物均可抑制HbeAg和HBsAg的分泌量,抑制HBV DNA的复制水平,并且水提物的抑制作用明显地强于醇提物。网络药理学结果显示,熊果酸、槲皮素、木犀草素、咖啡酸等化合物为CNF抗HBV的关键活性成分,肿瘤蛋白53(tumor protein 53,TP53)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)、热休克蛋白90Alpha家族A类成员1(heat shock protein 90 alpha family class A member 1,HSP90AA1)为核心靶点,涉及磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B,PI3K/AKT)、丝裂原蛋白活化激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)等信号通路。此外,实验结果显示CNF提取物可抑制HBV关键基因IL-6、TNF及HSP90AA1表达并提高TP53基因的mRNA表达水平。以上研究揭示了CNF通过多成分、多靶点、多途径发挥抗HBV的作用。后续将以本研究为基础,进一步对其药效物质基础及作用机制进行深入探讨,为CNF抗HBV的临床应用及新药开发提供坚实的理论依据。
