利用抑制消减杂交技术筛选鹅就巢行为相关基因 被引量：6

1

作者 郭军 汤青萍 +6 位作者 章双杰 马月辉 陆火林 苏建东 邹剑敏 陈宽维 李慧芳 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1477-1484,共8页

旨在利用抑制消减杂交技术构建鹅就巢与产蛋cDNA基因文库,筛选就巢母鹅上调与下调表达的基因。以就巢期和产蛋期鹅卵巢组织互为检测子和驱动子,进行正反双向消减杂交,获得鹅卵巢差异表达基因文库。从双向文库随机挑选单菌落进行PCR验证... 旨在利用抑制消减杂交技术构建鹅就巢与产蛋cDNA基因文库,筛选就巢母鹅上调与下调表达的基因。以就巢期和产蛋期鹅卵巢组织互为检测子和驱动子,进行正反双向消减杂交,获得鹅卵巢差异表达基因文库。从双向文库随机挑选单菌落进行PCR验证,结果表明文库质量良好。选取654个阳性克隆进行测序分析,获得641条表达序列标签(ESTs)。对ESTs进行去除载体序列、质量检测、聚类及拼接,经BLASTn比对,有166条ESTs找到与之匹配的同源序列,其中92个是功能基因。比较就巢与产蛋SSH文库,发现就巢SSH库中参与细胞凋亡、信号转导及细胞结构的基因出现频率较高;产蛋特异性基因文库中参与物质能量代谢、细胞防御的基因较多;尚有许多差异片段属于未知功能蛋白或理论推定蛋白。结果提示,催乳素受体、抗苗勒管激素以及雌激素受体基因在就巢期上调表达可能与鹅就巢行为的启动与维持有关。该结果为进一步研究鹅就巢行为分子调控机制奠定基础。 展开更多

关键词 鹅 就巢行为 卵巢 抑制消减杂交技术 表达序列标签

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抑制消减杂交技术筛选鹅产蛋期差异表达基因 被引量：5

2

作者 郭军 章双杰 +3 位作者 邹剑敏 陆火林 苏建东 汤青萍 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第8期4710-4713,共4页

[目的]鉴定筛选鹅产蛋与就巢差异表达基因。[方法]应用抑制消减杂交技术构建鹅产蛋与就巢鹅卵巢组织双向cDNA文库,获得差异表达基因。[结果]从双向文库随机挑选单菌落进行PCR验证,结果表明文库质量良好。选取654个阳性克隆进行测序分析... [目的]鉴定筛选鹅产蛋与就巢差异表达基因。[方法]应用抑制消减杂交技术构建鹅产蛋与就巢鹅卵巢组织双向cDNA文库,获得差异表达基因。[结果]从双向文库随机挑选单菌落进行PCR验证,结果表明文库质量良好。选取654个阳性克隆进行测序分析,获得641条表达序列标签(ESTs)。对ESTs进行去除载体序列、质量检测、聚类及拼接,经Blast比对,有166条ESTs找到与之匹配的同源序列,其中92个是功能基因。[结论]比较就巢与产蛋SSH文库,发现产蛋特异性基因文库中参与物质能量代谢、细胞防御的基因较多,而在就巢SSH库中参与细胞凋亡、信号转导及细胞结构的基因出现频率较高。该结果对进一步研究鹅卵泡发育及繁殖力分子标记筛选打下了基础。 展开更多

关键词 鹅 繁殖性能 卵巢 抑制消减杂交技术 表达序列标签

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利用抑制消减杂交技术(SSH)研究与Ty21a免疫相关的基因 被引量：2

3

作者 王华 高杰英 +1 位作者 周洁 李海民 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第8期521-524,共4页

目的:利用抑制消减杂交技术（SSH）筛选与Ty21a免疫相关的新基因。方法:以Ty21a免疫小鼠的肠细胞为tester,以正常小鼠的肠细胞为diver,提取mRNA,反转录构建cDNA文库,利用SSH技术筛选Ty21a免疫相关的新基因。结果:通过SSH技术和cDNA微矩... 目的:利用抑制消减杂交技术（SSH）筛选与Ty21a免疫相关的新基因。方法:以Ty21a免疫小鼠的肠细胞为tester,以正常小鼠的肠细胞为diver,提取mRNA,反转录构建cDNA文库,利用SSH技术筛选Ty21a免疫相关的新基因。结果:通过SSH技术和cDNA微矩阵技术,发现了7条与GenBank中已公布的表达序列标签（expressed　sequence tag,EST）片段没有明显同源性,可能为Ty21a免疫相关的新基因。其中3条正在用RACE-PCR法进行获得全长cDNA的工作。结论:SSH技术是一种高效的差异基因筛选方法,基因表达谱芯片技术是高通量进行基因表达模式研究的方法,Ty21a可诱导多种免疫相关新基因的表达。 展开更多

关键词 抑制消减杂交技术 研究 TY21A 免疫相关 cDNA微矩阵 肠细胞 分子免疫 细胞免疫

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基于抑制消减杂交技术筛选AM真菌与紫穗槐共生相关基因 被引量：2

4

作者 宋福强 孔祥仕 +1 位作者 李季泽 常伟 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第11期64-74,共11页

利用抑制消减杂交技术筛选AM真菌在侵染紫穗槐的过程中紫穗槐差异表达的基因,共获得47个unigenes,其中35个显著匹配。根据GO分类信息、Blast注释信息和相关文献信息,显著匹配的35个unigenes基因按功能分为防御胁迫(24%)、物质代谢(17%)... 利用抑制消减杂交技术筛选AM真菌在侵染紫穗槐的过程中紫穗槐差异表达的基因,共获得47个unigenes,其中35个显著匹配。根据GO分类信息、Blast注释信息和相关文献信息,显著匹配的35个unigenes基因按功能分为防御胁迫(24%)、物质代谢(17%)、能量代谢(14%)、蛋白合成(11%)、信号转导(11%)、细胞结构构建(11%)、转录(6%)、蛋白折叠和降解(6%)8类。其中,胁迫防御相关基因和代谢相关基因所占比例最大,表明二者在AM真菌和紫穗槐共生互作过程中起重要作用。这些基因广泛参与生物体生命活动的各个过程,因此AM真菌与紫穗槐共生的过程是一个系统涉及各种生物过程的活动。 展开更多

关键词 紫穗槐 丛枝菌根真菌 抑制消减杂交技术 共生相关基因

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应用抑制消减杂交技术构建哮喘病人嗜酸细胞差异表达基因消减cDNA文库 被引量：1

5

作者 徐劲松 蔡绍曦 +3 位作者 邹飞 佟万成 万为人 赵海金 《实用医学杂志》 CAS 2004年第8期857-860,共4页

目的 :构建哮喘病人治疗前后嗜酸细胞差异表达基因的消减cDNA文库。方法 :采用新近建立的抑制消减杂交方法 ,哮喘治疗前后的嗜酸细胞为试验和对比材料 ,分离哮喘病人嗜酸细胞中差异表达基因的cDNA片段 ,将其与T载体进行T/A连接构建文库 ... 目的 :构建哮喘病人治疗前后嗜酸细胞差异表达基因的消减cDNA文库。方法 :采用新近建立的抑制消减杂交方法 ,哮喘治疗前后的嗜酸细胞为试验和对比材料 ,分离哮喘病人嗜酸细胞中差异表达基因的cDNA片段 ,将其与T载体进行T/A连接构建文库 ,将连接产物用氯化钙转化法转化大肠杆菌进行文库扩增和蓝白斑筛选 ,随机挑取 10 0个白色克隆用菌落PCR进行鉴定。结果 :扩增消减cDNA文库获得 3 0 0余个白色阳性克隆 ,随机挑取10 0个白色克隆用PCR进行扩增 ,90 %的克隆中均有 2 0 0～ 60 0bp的插入片段 ,这些片段可能是哮喘嗜酸细胞差异表达基因的cDNA片段。结论 :用SSH法及T/A克隆技术成功构建了哮喘病人治疗前后嗜酸细胞差异表达基因消减cDNA文库 ,该消减cDNA文库的建立为进一步筛选。 展开更多

关键词 抑制消减杂交技术 哮喘 嗜酸细胞 差异表达 基因消减 eDNA文库 SSH

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抑制消减杂交技术在昆虫差异表达基因研究中的应用 被引量：2

6

作者 樊莹 董霞 《贵州农业科学》 CAS 2015年第8期122-125,共4页

抑制消减杂交技术(SSH)是建立在抑制PCR的基础上用于筛选差异表达基因的技术。对SSH技术在分离筛选昆虫不同级型、不同发育阶段、不同性别及外界的胁迫下差异表达基因中的应用进行综述,为SSH技术在分离昆虫差异表达基因的更广泛应用提... 抑制消减杂交技术(SSH)是建立在抑制PCR的基础上用于筛选差异表达基因的技术。对SSH技术在分离筛选昆虫不同级型、不同发育阶段、不同性别及外界的胁迫下差异表达基因中的应用进行综述,为SSH技术在分离昆虫差异表达基因的更广泛应用提供理论依据。 展开更多

关键词 抑制消减杂交技术 昆虫 差异表达基因

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抑制消减杂交技术及其在动物繁育研究中的应用

7

作者 李林凤 刘希斌 +3 位作者 史文清 关伟军 马月辉 韩俊文 《上海畜牧兽医通讯》 2005年第5期7-9,共3页

关键词 抑制消减杂交技术 应用 动物 抑制性消减杂交技术 基因组DNA文库 差异表达基因 抑制消减杂交法 繁育 RT-PCR

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抑制消减杂交技术在植物病害研究中的应用

8

作者 王芳 《黑龙江农业科学》 2011年第11期136-138,142,共4页

抑制消减杂交技术以抑制性PCR技术和杂交二级动力学原理为基础,该技术具有高灵敏性、高效率、易操作等特点,是有效分离、克隆基因差异表达的方法之一。该文对其技术的原理、特点及其在植物寄生性线虫和植物抗病机制研究中的应用进行了... 抑制消减杂交技术以抑制性PCR技术和杂交二级动力学原理为基础,该技术具有高灵敏性、高效率、易操作等特点,是有效分离、克隆基因差异表达的方法之一。该文对其技术的原理、特点及其在植物寄生性线虫和植物抗病机制研究中的应用进行了综述。 展开更多

关键词 抑制消减杂交技术 PCR 基因 植物

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利用抑制消减杂交技术研究一氧化碳对小鼠小脑基因表达的影响

9

作者 李曙光 梁宏 张恒太 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期313-313,共1页

目的　筛选 2 5mmol·L- 1一氧化碳小鼠吸入染毒 72h后 ,小鼠小脑中的差异表达基因。方法6 0只成年雄性昆明种小鼠随机分为对照组和染毒组 ,30只 /组。由Qiagen公司mRNAMiniKit直接提取小脑组织的mRNA ,PCR SelectTM cDNASubtractio... 目的　筛选 2 5mmol·L- 1一氧化碳小鼠吸入染毒 72h后 ,小鼠小脑中的差异表达基因。方法6 0只成年雄性昆明种小鼠随机分为对照组和染毒组 ,30只 /组。由Qiagen公司mRNAMiniKit直接提取小脑组织的mRNA ,PCR SelectTM cDNASubtractionKit构建消减文库 ,GenBank分析差异表达基因。结果　实验中共得到 2 0个阳性克隆 ,抽提重组质粒后测序 ,除去 3条重复的克隆片段 ,获得了 17个表达序列标签。其中 ,16条序列同源分数较高 ,是已知序列或与已知的表达序列标签有部分重叠的。 1条(T15 )同源分数较低。结论　抑制消减杂交是一种优良的寻找新基因的方法。一氧化碳主要影响的差异表达基因的类别包括细胞间通讯的基因差异表达、线粒体看家基因异常表达。 展开更多

关键词 一氧化碳 小脑 基因表达 抑制消减杂交技术 线粒体看家基因 胎盘组织蛋白酶J

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抑制消减杂交技术在鲤鱼抗寒研究中的应用

10

作者 牛凤英 《养殖技术顾问》 2014年第12期331-331,共1页

鲤鱼属于变温生物,其对外界环境温度较为敏感,外界环境对其生长有重要影响。在低温环境下,一些源于热带的鱼类,如罗非鱼、鲮鱼等对环境温度非常敏感,在温带以北地区的水域根本无法安全越冬。随着生物学、生态学等学科的发展,对于鱼类如... 鲤鱼属于变温生物,其对外界环境温度较为敏感,外界环境对其生长有重要影响。在低温环境下,一些源于热带的鱼类,如罗非鱼、鲮鱼等对环境温度非常敏感,在温带以北地区的水域根本无法安全越冬。随着生物学、生态学等学科的发展,对于鱼类如何适应外界环境的研究成果越来越多。本文以鲤鱼的抗寒研究为例,分析抑制消减杂交技术的应用。 展开更多

关键词 抑制消减杂交技术 鲤鱼 应用 抗寒 环境温度 外界环境 低温环境 安全越冬

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抑制性消减杂交技术及其应用研究进展 被引量：4

11

作者 周变华 王宏伟 +3 位作者 杨自军 王国永 郝雪琴 孔涛 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2011年第12期40-42,共3页

抑制性消减杂交(SSH)技术是结合抑制性PCR和消减杂交技术发展起来的一种高效分离差异表达基因的方法,具有特异性高、假阳性率低、操作简便、速度快、效率高等优点。利用SSH技术进行不同状态下基因的表达变化分析、差异基因的克隆和鉴定... 抑制性消减杂交(SSH)技术是结合抑制性PCR和消减杂交技术发展起来的一种高效分离差异表达基因的方法,具有特异性高、假阳性率低、操作简便、速度快、效率高等优点。利用SSH技术进行不同状态下基因的表达变化分析、差异基因的克隆和鉴定对了解基因表达调控有着重要意义。为此,综述了SSH技术的原理及其在发育调控基因、疾病发生机制、药物研发、性状筛选及环境生物修复等方面的应用研究进展。 展开更多

关键词 抑制性消减杂交技术 抑制性PCR 分子生物学

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抑制性消减杂交技术及其在肺癌研究中的应用 被引量：2

12

作者 梁锐 金克炜 畅继武 《中国肺癌杂志》 CAS 2007年第1期68-71,共4页

关键词 抑制性消减杂交技术 差异表达基因 病理学类型 肺癌 基因差异表达 SSH技术 相互作用 异常表达

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应用抑制性消减杂交技术克隆人肺鳞癌差异性表达基因 被引量：1

13

作者 沈晨阳 刘军 +4 位作者 王丹蕾 赵辉 姜冠潮 王俊 张国良 《中国肺癌杂志》 CAS 2002年第1期10-13,共4页

目的　克隆人肺鳞癌肿瘤差异性表达基因。方法　应用抑制性消减杂交技术 (suppressionsub tractivehybridization,SSH)构建人肺鳞癌cDNA消减杂交文库 ,筛选后挑选阳性克隆进行测序 ,并在GenBank数据库中进行同源性比较 ,最后经RT PCR验... 目的　克隆人肺鳞癌肿瘤差异性表达基因。方法　应用抑制性消减杂交技术 (suppressionsub tractivehybridization,SSH)构建人肺鳞癌cDNA消减杂交文库 ,筛选后挑选阳性克隆进行测序 ,并在GenBank数据库中进行同源性比较 ,最后经RT PCR验证。结果　成功克隆 1 0个差异基因片段 ,其中 2个为新基因 (Gen Bank登录号分别为 :C2 0 :AF3630 68;C34 :AY0 32 661 )。 展开更多

关键词 差异性表达基因 抑制性消减杂交技术 肺癌状细胞癌 基因克隆 肺肿瘤 互补DNA

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应用抑制性消减杂交技术筛选HBxAg蛋白结合蛋白XBP1的上调基因 被引量：1

14

作者 樊万虎 成军 +2 位作者 刘小静 张树林 王琦 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期671-675,共5页

目的应用酵母双杂交及生物信息学(bioinformatics)技术获得HBxAg蛋白结合蛋白XBP1,为了解该基因的反式调节机制,利用抑制性消减杂交技术筛选并克隆XBP1蛋白反式激活的靶基因。方法以XBP1表达质粒pcD-NA3.1(-)-myc-his(A)-XBP1转染HepG2... 目的应用酵母双杂交及生物信息学(bioinformatics)技术获得HBxAg蛋白结合蛋白XBP1,为了解该基因的反式调节机制,利用抑制性消减杂交技术筛选并克隆XBP1蛋白反式激活的靶基因。方法以XBP1表达质粒pcD-NA3.1(-)-myc-his(A)-XBP1转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)-myc-his(A)为对照;制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并合成cDNA,经RsaⅠ酶切后将实验组cDNA分成两组,分别衔接两种不同接头,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次PCR反应,产物与T/A克隆载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆经PCR鉴定后进行测序及同源性分析。结果成功构建人XBP1蛋白反式激活相关基因差异表达的cDNA。扩增后得到80个200～1 000bp插入片段的克隆,随机挑选其中30个插入片段测序,并通过生物信息学分析获得其全长基因序列,结果共获得28个已知编码序列基因和2个未知的新基因。结论 XBP1在肝细胞内表达后能够上调HepG2细胞中许多不同基因表达的变化,这些基因与细胞信号转导、细胞增殖与分化、免疫应答、能量代谢、细胞凋亡、肿瘤发生等生物过程密切相关。 展开更多

关键词 XBP1基因 HEPG2细胞 抑制性消减杂交技术 反式调节

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抑制性消减杂交技术在研究热适应机制中的应用 被引量：2

15

作者 肖军 邹飞 蔡绍曦 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第10期1035-1037,共3页

目的探索热适应动物体内在常温静息状态下是否存在与热适应相关的基因差异表达,评估从基因差异表达角度研究热适应机理的可行性。方法在大鼠肝组织标本上提取mRNA,反转录成双链cDNA,应用抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hyb... 目的探索热适应动物体内在常温静息状态下是否存在与热适应相关的基因差异表达,评估从基因差异表达角度研究热适应机理的可行性。方法在大鼠肝组织标本上提取mRNA,反转录成双链cDNA,应用抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH)比较热适应组与常温对照组基因的差异,构建差异表达基因消减文库。采用PCR-Select Differential Screening技术鉴定是否存在差异表达的基因。结果初期实验证实6个cDNA片段为差异表达。结论热适应大鼠在常温静息状态下肝脏组织中存在热适应相关基因的差异表达,推测可能与大鼠保持热适应能力有关。提示通过分离热适应相关的差异表达基因研究热适应机制是一种可行的思路。 展开更多

关键词 抑制性消减杂交技术 热适应 基因表达 文库 动物模型

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抑制性消减杂交技术(SSH)及其在烟草生物学研究中的应用 被引量：3

16

作者 李立芹 鲁黎明 《中国烟草科学》 CSCD 北大核心 2011年第3期89-94,共6页

抑制性消减杂交技术(SSH)是基于抑制性PCR及差减杂交技术建立的一种新技术。目前,由于该技术具有速度快、假阳性率低、灵敏程度高等优点,在植物学研究的各个领域得到了广泛的应用。对该技术的原理和方法、主要优缺点及其在烟草研究中的... 抑制性消减杂交技术(SSH)是基于抑制性PCR及差减杂交技术建立的一种新技术。目前,由于该技术具有速度快、假阳性率低、灵敏程度高等优点,在植物学研究的各个领域得到了广泛的应用。对该技术的原理和方法、主要优缺点及其在烟草研究中的应用进行了综述。 展开更多

关键词 抑制性消减杂交技术 基因差异表达 烟草

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抑制性消减杂交技术(SSH)在辣椒抗病基因研究中的应用 被引量：2

17

作者 肖仲久 李小霞 +1 位作者 张素勤 蒋选利 《长江蔬菜》 2009年第06X期1-4,共4页

基于抑制性PCR及差减杂交技术建立的抑制性消减杂交技术,因其假阳性率低、敏感性高、效率高等优点广泛应用于植物基因差异表达研究。对该技术的原理、主要优缺点及其在辣椒植物抗病性机制研究中的应用进行了综述。

关键词 抑制性消减杂交技术 植物抗病性 辣椒

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抑制性消减杂交技术在植物基因克隆中的应用 被引量：2

18

作者 刘文荣 张木清 《亚热带农业研究》 2006年第2期146-151,共6页

抑制性消减杂交(SSH)技术是近十年来才发展起来的一种克隆差异新基因的快速、高效的技术。本文通过与其他几种目前主要的差异基因分离技术的比较,介绍了SSH技术基本原理、基本过程及优缺点,并对SSH技术在植物基因研究应用上的最新进展... 抑制性消减杂交(SSH)技术是近十年来才发展起来的一种克隆差异新基因的快速、高效的技术。本文通过与其他几种目前主要的差异基因分离技术的比较,介绍了SSH技术基本原理、基本过程及优缺点,并对SSH技术在植物基因研究应用上的最新进展进行评述。 展开更多

关键词 抑制性消减杂交(SSH)技术 基因克隆

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应用抑制性消减杂交技术筛选流感病毒感染宿主应答基因

19

作者 陈忠斌 杨静 +2 位作者 王华 孙偶军 王升启 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期156-161,共6页

从宿主系统寻找病毒感染特异性相关的生物大分子是研究病毒药物靶标和诊断标志物的新方向 .为了筛选宿主细胞中流感病毒感染特异性基因 ,采用抑制性消减杂交技术 (SSH) ,以流感病毒A 鲁防 93 9(H3N2 )感染MDCK细胞及正常MDCK细胞为材... 从宿主系统寻找病毒感染特异性相关的生物大分子是研究病毒药物靶标和诊断标志物的新方向 .为了筛选宿主细胞中流感病毒感染特异性基因 ,采用抑制性消减杂交技术 (SSH) ,以流感病毒A 鲁防 93 9(H3N2 )感染MDCK细胞及正常MDCK细胞为材料 ,构建病毒感染特异性差减cDNA文库 ,PCR法扩增鉴定其中插入片段大小 .从差减文库中随机挑取 10 0个克隆进行测序 ,用生物信息学方法对其同源性和基因功能进行分析和预测 .结果显示 ,成功构建了流感病毒感染特异性差减cDNA文库 ,文库中cDNA片段长度在 2 5 0～ 10 0 0bp之间 .从文库中随机选取 10 0个克隆测序 ,获得了 95个有效序列 ,经blast同源性分析发现 ,大部分基因为参与宿主细胞能量代谢和蛋白质生物合成过程中的基因 ;其中 19个为无任何功能线索的新基因片段 .流感病毒感染特异性差减cDNA文库的建立和筛选出病毒感染应答候选新基因cDNA片段 。 展开更多

关键词 流感病毒 抑制性消减杂交技术 病毒感染应答基因 宿主系统 药物靶标 诊断标志物 筛选

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抑制性消减杂交技术在水产无脊椎动物中的应用

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作者 秦艳杰 马俊峰 +1 位作者 李霞 张慧敏 《安徽农业科学》 CAS 2012年第9期5222-5225,共4页

抑制性消减杂交技术(SSH)是近年来兴起的一种分离、克隆差异基因的新技术。系统阐述了该技术的原理和优缺点,综述了该技术在水产无脊椎动物差异表达基因筛选方面应用的研究进展,并对该领域面临的问题进行剖析。

关键词 抑制性消减杂交技术 水产无脊椎动物 研究进展

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