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抑制消减杂交技术及其在动物繁育研究中的应用
1
作者 李林凤 刘希斌 +3 位作者 史文清 关伟军 马月辉 韩俊文 《上海畜牧兽医通讯》 2005年第5期7-9,共3页
关键词 抑制消减杂交技术 应用 动物 抑制性消减杂交技术 基因组DNA文库 差异表达基因 抑制消减杂交法 繁育 RT-PCR
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茶树休眠芽与萌动芽抑制消减杂交文库的构建与初步分析 被引量：14
2
作者 王新超 杨亚军 +2 位作者 陈亮 马春雷 姚明哲 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期129-135,共7页
为了解茶树越冬芽休眠及其解除的分子机理,以休眠芽和萌动芽为材料,构建了茶树休眠芽与萌发芽的正、反向抑制消减杂交文库,并从两个文库各随机挑选96个阳性克隆进行序列测定和生物信息学分析。建库质量分析结果表明,所构建的正、反向消... 为了解茶树越冬芽休眠及其解除的分子机理,以休眠芽和萌动芽为材料,构建了茶树休眠芽与萌发芽的正、反向抑制消减杂交文库,并从两个文库各随机挑选96个阳性克隆进行序列测定和生物信息学分析。建库质量分析结果表明,所构建的正、反向消减文库有效富集了差异基因,消减效率达到要求,插入片段集中于250-750bp之间,文库质量较好。对正、反向文库随机挑选的阳性克隆测序和分析结果表明,正、反向文库在基因表达谱上存在一定的差异,萌动芽文库在亚细胞器形成、转运载体等方面的基因与休眠芽文库有较大差异,而休眠芽文库在抗氧化、翻译调控以及胁迫响应等方面的基因与萌动芽文库有较大差异。这两个文库的建立为进一步了解茶树芽休眠与解除的分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 茶树(Camellia sinensis) 芽休眠 表达序列标签 抑制消减杂交
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应用抑制消减杂交技术构建肝癌差异表达基因消减cDNA文库 被引量：13
3
作者 李靖 韩本立 +5 位作者 黄桂君 钱桂生 徐晓霞 杨彤翰 梁平 陈杰 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期698-701,共4页
目的　构建肝癌及癌旁肝组织差异表达基因的消减cDNA文库。方法　采用新近建立的抑制消减杂交方法 ,以肝癌组织及癌旁肝组织作为对比材料 ,分离肝癌组织中差异表达基因的cDNA片段 ,将其与T载体进行T/A连接构建文库 ,将连接产物用电穿孔... 目的　构建肝癌及癌旁肝组织差异表达基因的消减cDNA文库。方法　采用新近建立的抑制消减杂交方法 ,以肝癌组织及癌旁肝组织作为对比材料 ,分离肝癌组织中差异表达基因的cDNA片段 ,将其与T载体进行T/A连接构建文库 ,将连接产物用电穿孔法转化大肠杆菌进行文库扩增后 ,随机挑取 1 0 0个白色克隆用菌落PCR进行鉴定。结果　扩增消减cDNA文库获得 30 0 0余个白色阳性克隆 ,随机挑取 1 0 0个白色克隆用PCR进行扩增 ,95%的克隆中均有 1 0 0～ 6 0 0bp的插入片段 ,这些片段可能是肝癌差异表达基因的cDNA片段。结论　用SSH法及T/A克隆技术成功构建了肝癌与癌旁肝组织差异表达基因消减cDNA文库 ,该消减cDNA文库的建立为进一步筛选、克隆肝癌差异表达的新基因奠定了基础。 展开更多
关键词 肝肿瘤 抑制消减杂交 基因文库 CDNA
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用抑制消减杂交法分离巴西橡胶树胶乳特异表达基因 被引量：8
4
作者 邓柳红 罗明武 +2 位作者 曾会才 杨卫帆 张春发 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第6期32-36,共5页
采用巴西橡胶树常割树胶乳的Poly(A+)RNA为Tester,叶片Poly(A+)RNA为Driver,通过抑制消减杂交法(suppressivesubtractivehybridization,SSH)构建了一个胶乳特异表达基因差减文库,通过菌落PCR及反式NorthernDot-Blot筛选鉴定阳性差异片段... 采用巴西橡胶树常割树胶乳的Poly(A+)RNA为Tester,叶片Poly(A+)RNA为Driver,通过抑制消减杂交法(suppressivesubtractivehybridization,SSH)构建了一个胶乳特异表达基因差减文库,通过菌落PCR及反式NorthernDot-Blot筛选鉴定阳性差异片段,获得79个胶乳特异表达阳性克隆,部分阳性克隆还通过NorthernBlot杂交及RT-PCR进一步验证。随机挑选部分阳性克隆序列比较分析,结果表明有部分克隆与巴西橡胶树中已知的基因相同,而多数克隆在巴西橡胶树中是新发现,它们与橡胶生物合成、物质代谢运输、信号传导和形态建成等相关。 展开更多
关键词 巴西橡胶树 抑制消减杂交法 胶乳 反式Northern Dot—Blot
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利用抑制消减杂交技术筛选鹅就巢行为相关基因 被引量：6
5
作者 郭军 汤青萍 +6 位作者 章双杰 马月辉 陆火林 苏建东 邹剑敏 陈宽维 李慧芳 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1477-1484,共8页
旨在利用抑制消减杂交技术构建鹅就巢与产蛋cDNA基因文库,筛选就巢母鹅上调与下调表达的基因。以就巢期和产蛋期鹅卵巢组织互为检测子和驱动子,进行正反双向消减杂交,获得鹅卵巢差异表达基因文库。从双向文库随机挑选单菌落进行PCR验证... 旨在利用抑制消减杂交技术构建鹅就巢与产蛋cDNA基因文库,筛选就巢母鹅上调与下调表达的基因。以就巢期和产蛋期鹅卵巢组织互为检测子和驱动子,进行正反双向消减杂交,获得鹅卵巢差异表达基因文库。从双向文库随机挑选单菌落进行PCR验证,结果表明文库质量良好。选取654个阳性克隆进行测序分析,获得641条表达序列标签(ESTs)。对ESTs进行去除载体序列、质量检测、聚类及拼接,经BLASTn比对,有166条ESTs找到与之匹配的同源序列,其中92个是功能基因。比较就巢与产蛋SSH文库,发现就巢SSH库中参与细胞凋亡、信号转导及细胞结构的基因出现频率较高;产蛋特异性基因文库中参与物质能量代谢、细胞防御的基因较多;尚有许多差异片段属于未知功能蛋白或理论推定蛋白。结果提示,催乳素受体、抗苗勒管激素以及雌激素受体基因在就巢期上调表达可能与鹅就巢行为的启动与维持有关。该结果为进一步研究鹅就巢行为分子调控机制奠定基础。 展开更多
关键词 鹅 就巢行为 卵巢 抑制消减杂交技术 表达序列标签
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应用抑制消减杂交(SSH)克隆肺腺癌多药耐药细胞特异表达基因 被引量：8
6
作者 陈杰 钱桂生 +3 位作者 黄桂君 熊玮 李靖 LI Jing 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期131-134,共4页
目的　克隆和筛选肺腺癌多药耐药细胞特异表达基因。方法　将肺腺癌多药耐药细胞 (SPC A 1/CDDP)作为实验组 ,肺腺癌细胞 (SPC A 1)作为对照组 ,应用抑制消减杂交技术 ,构建实验组特异表达cDNA消减文库 ;用斑点杂交初步筛选cDNA消减文库... 目的　克隆和筛选肺腺癌多药耐药细胞特异表达基因。方法　将肺腺癌多药耐药细胞 (SPC A 1/CDDP)作为实验组 ,肺腺癌细胞 (SPC A 1)作为对照组 ,应用抑制消减杂交技术 ,构建实验组特异表达cDNA消减文库 ;用斑点杂交初步筛选cDNA消减文库后 ,将获得的阳性克隆进行测序和同源性分析 (Genebank)。结果　建立了一个肺腺癌多药耐药细胞 (SPC A 1/CDDP)特异表达cDNA消减文库 ,斑点杂交初步筛选显示 2 3个克隆中有SPC A 1/CDDP特异表达cDNA片断 ,测序和同源性分析表明 2个cDNA片断为新序列 ,其余cDNA片断与已知基因有 96%～ 10 0 %的同源性。结论　 2个新的cDNA序列可能为未知肺腺癌多药耐药相关基因序列 ;抑制消减杂交是克隆特异表达基因的有效方法。 展开更多
关键词 人肺腺癌细胞 多药耐药相关基因 抑制消减杂交 SSH
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应用抑制消减杂交克隆内皮细胞内毒素刺激后相关基因 被引量：10
7
作者 梁自文 罗向东 杨宗城 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期336-338,共3页
提取人脐静脉内皮细胞经内毒素刺激 6h后的mRNA并合成cDNA ,与对照组进行抑制消减杂交 ,经菌落斑点杂交筛选出阳性克隆 ,进行测序和同源性分析 ,并采用Northern杂交验证新的cDNA序列。共获得 2 5条差异表达基因 ,涉及与编码炎症介质、... 提取人脐静脉内皮细胞经内毒素刺激 6h后的mRNA并合成cDNA ,与对照组进行抑制消减杂交 ,经菌落斑点杂交筛选出阳性克隆 ,进行测序和同源性分析 ,并采用Northern杂交验证新的cDNA序列。共获得 2 5条差异表达基因 ,涉及与编码炎症介质、胞内信号传导、细胞骨架、细胞凋亡和能量代谢相关的基因 ,其中 3条为新基因序列。结果表明 ,抑制消减杂交技术有效地克隆了内皮细胞内毒素刺激后相关基因 ,有助于阐明内毒素激活血管内皮细胞的机制 。 展开更多
关键词 抑制消减杂交 克隆 内皮细胞 内毒素 相关基因 分子机制
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大豆再生抑制消减杂交文库的构建 被引量：6
8
作者 武小霞 孙晶 +5 位作者 苏安玉 李静 刘明 张彬彬 李冬梅 李文滨 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期38-44,共7页
大豆再生受基因型限制，高效稳定再生体系建立难、遗传转化效率低，影响生物技术的应用。为获得与大豆再生相关基因，解析大豆再生基因分子机制，从而建立高效、稳定再生体系，为生物技术在大豆分子育种中的应用奠定基础。文章利用抑制... 大豆再生受基因型限制，高效稳定再生体系建立难、遗传转化效率低，影响生物技术的应用。为获得与大豆再生相关基因，解析大豆再生基因分子机制，从而建立高效、稳定再生体系，为生物技术在大豆分子育种中的应用奠定基础。文章利用抑制性消减杂交技术（Suppression subtractive hybridization，SSH），以东农50子叶节为材料构建消减杂交cDNA文库，从文库中随机挑取917个阳性克隆，PCR鉴定插入片段大部分集中在100~750 bp，利用BLAST在GenBank数据库进行序列相似性比对，经过同源性比对归并后得到411个高质量ESTs片段，功能分析表明，这些基因与信号转导、葡萄糖、蛋白质大分子生物合成代谢，光、叶形态发生相关；调控细胞凋亡、细胞自身防御、细胞壁分化；参与各种激素及细胞分裂素介导的信号通路。 展开更多
关键词 大豆 抑制消减杂交(SSH) CDNA文库 再生
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黄瓜芽黄突变体抑制消减杂交文库的构建及初步分析 被引量：5
9
作者 李娟娟 陈福龙 +5 位作者 李鑫 王蕾 贾俊忠 陈远良 陈芳 高剑峰 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期905-910,共6页
利用抑制消减杂交技术（suppression subtractive hybridization,SSH）分离了黄瓜芽黄突变体及其野生型之间差异表达的cDNA片段.以突变体和野生型分别作检测子和驱赶子,建立正向和反向两个消减杂交cDNA文库;经阳性克隆鉴定,在正向文库... 利用抑制消减杂交技术（suppression subtractive hybridization,SSH）分离了黄瓜芽黄突变体及其野生型之间差异表达的cDNA片段.以突变体和野生型分别作检测子和驱赶子,建立正向和反向两个消减杂交cDNA文库;经阳性克隆鉴定,在正向文库中获得特异表达的阳性克隆有133个,在反向文库中得到的阳性克隆有73个.测序后将所得到的159条非重复且非黄瓜的ESTs（登录号：GH270133~GH270291）进行序列同源性比对分析,发现这些ESTs分别与叶绿素合成、光合系统、信号转导、转录因子、氨基酸代谢、糖类代谢、脂类代谢等相关酶及蛋白基因高度同源. 展开更多
关键词 黄瓜 芽黄突变体 抑制消减杂交 差异表达基因
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应用抑制消减杂交技术构建耐多药结核杆菌差异表达基因消减cDNA文库 被引量：4
10
作者 张运玲 郑改焕 +4 位作者 刘芮汐 彭哲 李奇志 幸琳琳 朱朝敏 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期868-872,共5页
目的:构建结核杆菌耐多药株与敏感株的差异表达消减cDNA文库,进一步探索结核杆菌耐多药的分子机制。方法:以耐多药菌株cDNA为实验组(Tester),敏感株cDNA为驱动组(Driver)应用抑制消减杂交(Suppression subtractive hybridiza-tion,SSH)... 目的:构建结核杆菌耐多药株与敏感株的差异表达消减cDNA文库,进一步探索结核杆菌耐多药的分子机制。方法:以耐多药菌株cDNA为实验组(Tester),敏感株cDNA为驱动组(Driver)应用抑制消减杂交(Suppression subtractive hybridiza-tion,SSH)技术结合T/A克隆技术构建结核杆菌耐多药株与敏感株的差异表达消减cDNA文库。结果:成功构建了耐多药结核菌株差异表达消减cDNA文库,获得113个差异表达cDNA片段。结论:研究表明SSH技术是筛选新功能基因的有效方法;多种已知或未知基因均参与了结核杆菌耐多药的调节,大规模筛选与克隆这些基因为进一步研究结核杆菌耐多药机制的产生奠定了必要的理论基础。 展开更多
关键词 结核杆菌 抑制消减杂交 耐多药 差异表达基因
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抑制消减杂交技术筛选鹅产蛋期差异表达基因 被引量：5
11
作者 郭军 章双杰 +3 位作者 邹剑敏 陆火林 苏建东 汤青萍 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第8期4710-4713,共4页
[目的]鉴定筛选鹅产蛋与就巢差异表达基因。[方法]应用抑制消减杂交技术构建鹅产蛋与就巢鹅卵巢组织双向cDNA文库,获得差异表达基因。[结果]从双向文库随机挑选单菌落进行PCR验证,结果表明文库质量良好。选取654个阳性克隆进行测序分析... [目的]鉴定筛选鹅产蛋与就巢差异表达基因。[方法]应用抑制消减杂交技术构建鹅产蛋与就巢鹅卵巢组织双向cDNA文库,获得差异表达基因。[结果]从双向文库随机挑选单菌落进行PCR验证,结果表明文库质量良好。选取654个阳性克隆进行测序分析,获得641条表达序列标签(ESTs)。对ESTs进行去除载体序列、质量检测、聚类及拼接,经Blast比对,有166条ESTs找到与之匹配的同源序列,其中92个是功能基因。[结论]比较就巢与产蛋SSH文库,发现产蛋特异性基因文库中参与物质能量代谢、细胞防御的基因较多,而在就巢SSH库中参与细胞凋亡、信号转导及细胞结构的基因出现频率较高。该结果对进一步研究鹅卵泡发育及繁殖力分子标记筛选打下了基础。 展开更多
关键词 鹅 繁殖性能 卵巢 抑制消减杂交技术 表达序列标签
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应用抑制消减杂交克隆支气管哮喘病人嗜酸细胞差异表达基因 被引量：5
12
作者 徐劲松 蔡绍曦 +2 位作者 邹飞 佟万成 赵海金 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2004年第5期509-512,共4页
目的探讨嗜酸细胞在支气管哮喘发病中的分子机制。方法提取1名哮喘发作病人嗜酸细胞总RNA为实验子,治疗后作为对照的嗜酸细胞的RNA为驱动子。检测子、驱动子的总RNA由SMART cDNA合成方法合成双链cDNA,进而由抑制消减杂交方法获得消减杂... 目的探讨嗜酸细胞在支气管哮喘发病中的分子机制。方法提取1名哮喘发作病人嗜酸细胞总RNA为实验子,治疗后作为对照的嗜酸细胞的RNA为驱动子。检测子、驱动子的总RNA由SMART cDNA合成方法合成双链cDNA,进而由抑制消减杂交方法获得消减杂交产物。消减杂交产物克隆到T载体建立消减文库,对部分克隆进行杂交筛选及序列比对。结果消减杂交文库挑取400个克隆进行PCR扩增,阳性率约为80%。部分阳性克隆经2轮杂交筛选及序列对比后获得6个差异片段,涉及与编码炎症介质、细胞信号传导、能量代谢和细胞凋亡相关的基因。结论抑制消减杂交技术有效地克隆了支气管哮喘发作期和缓解期嗜酸细胞差异表达的基因,为阐明嗜酸细胞在支气管哮喘发病中的分子机制奠定了良好的基础,并为临床防治支气管哮喘、寻找新的药物和方法提供了依据。 展开更多
关键词 嗜酸细胞 抑制消减杂交 差异表达基因 支气管哮喘
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谷子十里香抗锈抑制消减杂交文库构建及初步分析 被引量：3
13
作者 李志勇 贾丽霞 +5 位作者 董立 王楠 白辉 全建章 刘磊 董志平 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2014年第6期126-130,共5页
为了研究十里香抗锈分子机理及其调控机制。以谷子抗锈十里香接种12,24,48,72,96 h叶片为材料,利用抑制差减杂交技术,构建了谷锈菌诱导的SSH文库,筛选十里香接种与未接种锈菌差异表达的基因片段,通过GenBank进行同源比对,对差异表达基... 为了研究十里香抗锈分子机理及其调控机制。以谷子抗锈十里香接种12,24,48,72,96 h叶片为材料,利用抑制差减杂交技术,构建了谷锈菌诱导的SSH文库,筛选十里香接种与未接种锈菌差异表达的基因片段,通过GenBank进行同源比对,对差异表达基因进行功能注释,并利用荧光定量PCR技术对部分差异表达片段进行表达分析。随机挑取差减文库中阳性克隆测序,共获得368个EST序列,插入片段大小为200-750 bp,通过网上Gen Bank非冗余数据库比对分析,发现其中32个EST与抗病相关。对与抗病相关的EST分析,推测WRKY转录因子、MAPK信号途径、钙信号途径、谷胱甘肽-S-转移酶、细胞色素P450、病程相关蛋白等可能参与了十里香与谷锈菌非亲和互作。进一步利用荧光定量PCR技术对SSH文库中4个基因做了表达分析,结果表明这些基因均受锈菌诱导表达。通过构建十里香受锈菌诱导的SSH文库,初步明确了十里香参与抗锈相关的基因,为下步谷子抗锈分子育种奠定基础。 展开更多
关键词 抑制消减杂交 谷锈 谷子 表达序列标签
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抑制消减杂交法筛选原发性肝细胞癌中差异表达的基因及其生物学意义 被引量：3
14
作者 苏艳蓉 董学员 +1 位作者 吴红彦 陈慰峰 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期119-126,共8页
为了筛选原发性肝细胞癌 (hepatocellularcarcinoma ,HCC)中差异表达的基因 ,以了解HCC发生发展的分子基础 ,选取了一例早期高分化肝癌标本作为材料 ,采用抑制消减杂交 (suppressionsubtractivehybridization ,SSH)技术 ,进行了前向及... 为了筛选原发性肝细胞癌 (hepatocellularcarcinoma ,HCC)中差异表达的基因 ,以了解HCC发生发展的分子基础 ,选取了一例早期高分化肝癌标本作为材料 ,采用抑制消减杂交 (suppressionsubtractivehybridization ,SSH)技术 ,进行了前向及反向消减杂交 ,结合反向Northern印迹筛选 ,得到多个差异表达的基因 .对有意义的基因用半定量RT PCR检测了肝癌中的表达 .结果显示 ,PON2、hSRP1alpha、H4 1在大部分肝癌中表达升高 ,IGFBP1、ITIH1在早期癌症中 ,大部分癌的表达升高 ,在晚期癌症中则表达下降 .EGR1在大部分肝癌中表达降低 .研究表明 ,不同分化程度、不同临床分期的肝癌 ,有共同的或不同的基因表达发生改变 ,明确这些差异表达的基因谱 ,对于肝癌发生发展机理的阐明及肝癌的预防、诊断、治疗都有重要意义 . 展开更多
关键词 抑制消减杂交法 筛选 原发性肝细胞癌 差异表达 基因 生物学意义
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应用抑制消减杂交技术构建哮喘病人嗜酸细胞差异表达基因消减cDNA文库 被引量：2
15
作者 徐劲松 蔡绍曦 +3 位作者 邹飞 佟万成 万为人 赵海金 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期82-85,共4页
目的构建哮喘病人治疗前后嗜酸细胞差异表达基因的消减cDNA文库。方法采用新近建立的抑制消减杂交方法,哮喘治疗前后的嗜酸细胞为试验和对比材料,分离哮喘病人嗜酸细胞中差异表达基因的cDNA片段,将其与T载体进行T／A连接构建文库,将连... 目的构建哮喘病人治疗前后嗜酸细胞差异表达基因的消减cDNA文库。方法采用新近建立的抑制消减杂交方法,哮喘治疗前后的嗜酸细胞为试验和对比材料,分离哮喘病人嗜酸细胞中差异表达基因的cDNA片段,将其与T载体进行T／A连接构建文库,将连接产物用氯化钙转化法转化大肠杆菌进行文库扩增和蓝白斑筛选,随机挑取100个白色克隆用菌落．PCR进行鉴定。结果扩增消减cDNA文库获得3 000余个白色阳性克隆,随机挑取100个白色克隆用 PCR进行扩增,90％的克隆中均有200-600 bp的插入片段,这些片段可能是哮喘嗜酸细胞差异表达基因的cDNA片段。结论用SSH法及T／A克隆技术成功构建了哮喘病人治疗前后嗜酸细胞差异表达基因消减cDNA文库．该消减 cDNA文库的建立为进一步筛选、克隆哮喘病人嗜酸细胞差异表达的新基因奠定了基础。 展开更多
关键词 哮喘 嗜酸细胞 抑制消减杂交 基因文库
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利用抑制消减杂交技术(SSH)研究与Ty21a免疫相关的基因 被引量：2
16
作者 王华 高杰英 +1 位作者 周洁 李海民 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第8期521-524,共4页
目的:利用抑制消减杂交技术（SSH）筛选与Ty21a免疫相关的新基因。方法:以Ty21a免疫小鼠的肠细胞为tester,以正常小鼠的肠细胞为diver,提取mRNA,反转录构建cDNA文库,利用SSH技术筛选Ty21a免疫相关的新基因。结果:通过SSH技术和cDNA微矩... 目的:利用抑制消减杂交技术（SSH）筛选与Ty21a免疫相关的新基因。方法:以Ty21a免疫小鼠的肠细胞为tester,以正常小鼠的肠细胞为diver,提取mRNA,反转录构建cDNA文库,利用SSH技术筛选Ty21a免疫相关的新基因。结果:通过SSH技术和cDNA微矩阵技术,发现了7条与GenBank中已公布的表达序列标签（expressed　sequence tag,EST）片段没有明显同源性,可能为Ty21a免疫相关的新基因。其中3条正在用RACE-PCR法进行获得全长cDNA的工作。结论:SSH技术是一种高效的差异基因筛选方法,基因表达谱芯片技术是高通量进行基因表达模式研究的方法,Ty21a可诱导多种免疫相关新基因的表达。 展开更多
关键词 抑制消减杂交技术 研究 TY21A 免疫相关 cDNA微矩阵 肠细胞 分子免疫 细胞免疫
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抑制消减杂交分离肿瘤血管生成相关基因 被引量：2
17
作者 刘海燕 胡东 +5 位作者 冉宇靓 遇珑 孙立新 刘军 张新宇 杨治华 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期120-127,共8页
为获得肿瘤血管生成相关基因 ,以便为抗血管形成治疗肿瘤的新策略提供有价值的靶位 ,采用人新鲜的肝癌、肺癌组织匀浆活化人脐静脉内皮细胞 (HUVEC) ,并构建了cDNA表达文库 .利用抑制消减杂交 (SSH)获得活化HUVEC高表达的基因片段 ,放... 为获得肿瘤血管生成相关基因 ,以便为抗血管形成治疗肿瘤的新策略提供有价值的靶位 ,采用人新鲜的肝癌、肺癌组织匀浆活化人脐静脉内皮细胞 (HUVEC) ,并构建了cDNA表达文库 .利用抑制消减杂交 (SSH)获得活化HUVEC高表达的基因片段 ,放射标记后筛选文库 .获得的阳性克隆进一步进行差异杂交筛选 ,去除假阳性 .共获得了 177个阳性克隆 ,对其中 74个克隆进行序列分析 ,发现它们代表 32个基因 ,其中多个与肿瘤血管生成相关 ,1个为与细胞色素c氧化酶亚单位Ⅲ同源的新基因 ,2个为功能未知的假定蛋白基因 .研究结果表明 ,用肿瘤组织匀浆模拟肿瘤内环境活化HUVEC ,并通过比较活化前后基因表达谱的差异可以分离到肿瘤血管生成相关的基因 . 展开更多
关键词 肿瘤组织匀浆 脐静脉内皮细胞 CDNA表达文库 抑制消减杂交 序列分析
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基于抑制消减杂交技术筛选AM真菌与紫穗槐共生相关基因 被引量：2
18
作者 宋福强 孔祥仕 +1 位作者 李季泽 常伟 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第11期64-74,共11页
利用抑制消减杂交技术筛选AM真菌在侵染紫穗槐的过程中紫穗槐差异表达的基因,共获得47个unigenes,其中35个显著匹配。根据GO分类信息、Blast注释信息和相关文献信息,显著匹配的35个unigenes基因按功能分为防御胁迫(24%)、物质代谢(17%)... 利用抑制消减杂交技术筛选AM真菌在侵染紫穗槐的过程中紫穗槐差异表达的基因,共获得47个unigenes,其中35个显著匹配。根据GO分类信息、Blast注释信息和相关文献信息,显著匹配的35个unigenes基因按功能分为防御胁迫(24%)、物质代谢(17%)、能量代谢(14%)、蛋白合成(11%)、信号转导(11%)、细胞结构构建(11%)、转录(6%)、蛋白折叠和降解(6%)8类。其中,胁迫防御相关基因和代谢相关基因所占比例最大,表明二者在AM真菌和紫穗槐共生互作过程中起重要作用。这些基因广泛参与生物体生命活动的各个过程,因此AM真菌与紫穗槐共生的过程是一个系统涉及各种生物过程的活动。 展开更多
关键词 紫穗槐 丛枝菌根真菌 抑制消减杂交技术 共生相关基因
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利用抑制消减杂交技术构建苹果同源四倍体差异表达基因文库研究 被引量：2
19
作者 薛浩 张志宏 +2 位作者 傅俊范 王丰 马跃 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期297-302,共6页
寒富苹果是沈阳农业大学育成的二倍体、抗寒大苹果品种,通过秋水仙素诱导获得寒富苹果同源四倍体在田间表现明显矮化等特性。为了探寻苹果同源四倍化后表型差异的分子机理,采用抑制消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH... 寒富苹果是沈阳农业大学育成的二倍体、抗寒大苹果品种,通过秋水仙素诱导获得寒富苹果同源四倍体在田间表现明显矮化等特性。为了探寻苹果同源四倍化后表型差异的分子机理,采用抑制消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术,分别建立寒富四倍体上调和下调表达cDNA文库。分别从这两个cDNA文库中各随机挑取200个阳性克隆测序,发现其中有211条序列与已知植物基因同源性大于80%,定量RT-PCR验证了部分uni ESTs的表达趋势和表达水平。初步筛选获得了与植株矮化相关的BKI1和DWF4基因,与植物光合特性相关的光系统II中的关键基因Psb Z;发现了四倍体中表达显著上调的Chitinase基因,推测四倍体可能在真菌病害的胁迫中表现更为优良的抗性。本研究为探究同源多倍体差异表型的分子机理奠定基础。 展开更多
关键词 抑制消减杂交 苹果同源四倍体 矮化
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马铃薯病毒诱导应答基因抑制消减杂交文库构建及分析 被引量：1
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作者 李忠旺 陈玉梁 +5 位作者 欧巧明 叶春雷 裴怀弟 刘新星 王红梅 罗俊杰 《草业学报》 CSCD 北大核心 2017年第12期152-159,共8页
马铃薯病毒积累引起的种薯退化是马铃薯生产中造成产量和品质下降的重要原因之一。本研究以马铃薯病毒病携带植株叶片c DNA为试验组(Tester)、脱毒种苗叶片c DNA为驱动组(Driver),采用抑制消减杂交(suppression subtractive hybridizati... 马铃薯病毒积累引起的种薯退化是马铃薯生产中造成产量和品质下降的重要原因之一。本研究以马铃薯病毒病携带植株叶片c DNA为试验组(Tester)、脱毒种苗叶片c DNA为驱动组(Driver),采用抑制消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术构建了马铃薯病毒诱导应答基因的c DNA文库;为验证文库构建效果,从文库中随机挑取了98个阳性克隆经PCR验证后测序,获得了45条高质量的有效非重复序列;经与Gen Bank进行同源比对后发现,其中14条非重复序列属于马铃薯病毒基因序列,22条与已知基因序列同源性较高,9条无同源参考基因;选取文库中出现频率较高的2个ESTs(expressed sequence tag,表达序列标签)用qRT-PCR技术分析发现,其表达量受马铃薯病毒侵染的诱导。结果表明,该SSH文库构建较为成功,为进一步筛选与马铃薯病毒致病、防御相关的应答基因,解析马铃薯与病毒互作的分子机理,利用生物技术手段培育抗病毒马铃薯奠定了基础。 展开更多
关键词 马铃薯 病毒 应答基因 抑制消减杂交
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