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抑制性消减杂交技术(SSH)及其在烟草生物学研究中的应用 被引量：3
1
作者 李立芹 鲁黎明 《中国烟草科学》 CSCD 北大核心 2011年第3期89-94,共6页
抑制性消减杂交技术(SSH)是基于抑制性PCR及差减杂交技术建立的一种新技术。目前,由于该技术具有速度快、假阳性率低、灵敏程度高等优点,在植物学研究的各个领域得到了广泛的应用。对该技术的原理和方法、主要优缺点及其在烟草研究中的... 抑制性消减杂交技术(SSH)是基于抑制性PCR及差减杂交技术建立的一种新技术。目前,由于该技术具有速度快、假阳性率低、灵敏程度高等优点,在植物学研究的各个领域得到了广泛的应用。对该技术的原理和方法、主要优缺点及其在烟草研究中的应用进行了综述。 展开更多
关键词 抑制性消减杂交技术 基因差异表达 烟草
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抑制性消减杂交技术(SSH)及其在植物抗病性机制研究中的应用 被引量：2
2
作者 强磊 林凡云 伦玮 《陕西农业科学》 2006年第2期29-30,共2页
抑制性差减杂交是建立在抑制PCR及差减杂交技术基础上的,研究未知基因表达的一门技术。该方法具有灵敏性高、操作简单、稳定、可靠等特点,适合于从整体水平研究基因的差异表达。笔者就该技术的原理、发展、优缺点及其在植物抗病性机制... 抑制性差减杂交是建立在抑制PCR及差减杂交技术基础上的,研究未知基因表达的一门技术。该方法具有灵敏性高、操作简单、稳定、可靠等特点,适合于从整体水平研究基因的差异表达。笔者就该技术的原理、发展、优缺点及其在植物抗病性机制研究中的应用进行了综述。 展开更多
关键词 抑制性消减杂交 植物抗病性 基因 克隆
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抑制性消减杂交技术(SSH)在辣椒抗病基因研究中的应用 被引量：2
3
作者 肖仲久 李小霞 +1 位作者 张素勤 蒋选利 《长江蔬菜》 2009年第06X期1-4,共4页
基于抑制性PCR及差减杂交技术建立的抑制性消减杂交技术,因其假阳性率低、敏感性高、效率高等优点广泛应用于植物基因差异表达研究。对该技术的原理、主要优缺点及其在辣椒植物抗病性机制研究中的应用进行了综述。
关键词 抑制性消减杂交技术 植物抗病性 辣椒
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抑制性消减杂交技术(SSH)在动物免疫相关基因方面的研究进展 被引量：1
4
作者 谷笑笑 张娇 +1 位作者 王振华 潘康成 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期269-274,共6页
对于一个生物个体来讲,尽管所有细胞的基因组成是相同的,但在不同的细胞、同一细胞不同的分化阶段或受到外界的不同刺激时,相关基因的表达及蛋白质的功能都会有所差异（[1]）。基因的差异表达是调控生物生命活动的核心机制,个体的生长... 对于一个生物个体来讲,尽管所有细胞的基因组成是相同的,但在不同的细胞、同一细胞不同的分化阶段或受到外界的不同刺激时,相关基因的表达及蛋白质的功能都会有所差异（[1]）。基因的差异表达是调控生物生命活动的核心机制,个体的生长发育和衰老死亡,以及对各种环境因子的应答,本质上都离不开差异基因的表达。为了阐明各种生命过程的分子机制,必须对差异表达基因进行分离、克隆并进一步研究,抑制性消减杂交（Suppression subtractive hybridization,SSH）应运而生, 展开更多
关键词 动物免疫 免疫相关 抑制性消减杂交技术 ssh 相关基因 研究进展
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应用抑制性消减杂交技术筛选膦甲酸钠免疫调节基因 被引量：5
5
作者 刘妍 成军 +4 位作者 陆荫英 王刚 王建军 张喜全 王祥建 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期527-529,共3页
目的　应用抑制性消减杂交 (SSH)技术构建膦甲酸钠 (PFA)处理的人T淋巴细胞Jurkat差异表达基因的cDNA消减文库 ,筛选并克隆PFA免疫调节相关基因 ,阐明PFA免疫调节的分子生物学机制。方法　以PFA处理Jurkat细胞 ,同时以生理盐水处理的相... 目的　应用抑制性消减杂交 (SSH)技术构建膦甲酸钠 (PFA)处理的人T淋巴细胞Jurkat差异表达基因的cDNA消减文库 ,筛选并克隆PFA免疫调节相关基因 ,阐明PFA免疫调节的分子生物学机制。方法　以PFA处理Jurkat细胞 ,同时以生理盐水处理的相同细胞作为对照 ;2 4h后制备细胞裂解液 ,提取mRNA并逆转录为cDNA ,经RsaI酶切后 ,将实验组cDNA分成两组 ,分别与两种不同的接头衔接 ,再与对照组cDNA进行 2次消减杂交及 2次抑制性多聚酶链反应 (PCR)扩增 ,将产物与T/A载体连接 ,构建cDNA消减文库 ,并转染大肠杆菌进行文库扩增 ,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果　成功构建了PFA处理淋巴细胞差异表达基因的cDNA消减文库。文库扩增后得到 4 6个阳性克隆 ,进行菌落PCR分析 ,均得到 2 0 0～ 1 0 0 0bp插入片段。挑取含有插入片段的 1 4个克隆进行测序 ,并通过生物信息学分析获得 1 1种已知基因序列和 3个未知基因。结论　应用SSH技术成功构建了PFA处理的淋巴细胞差异表达基因的cDNA消减文库 。 展开更多
关键词 膦甲酸钠 免疫调节 抑制性消减杂交 基因克隆
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应用抑制性消减杂交技术研究甘草甜素免疫调节靶基因 被引量：4
6
作者 刘妍 成军 +5 位作者 白桂芹 张黎颖 纪冬 郭江 周静 肖炜 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期329-330,共2页
目的应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建甘草甜素刺激的人T淋巴细胞Jurkat差异表达基因的cDNA消减文库,筛选并克隆甘草甜素免疫调节靶基因,阐明甘草甜素免疫调节的分子生物学机制。方法以甘草甜素刺激Jurkat细胞,同时以生理盐水刺激的相... 目的应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建甘草甜素刺激的人T淋巴细胞Jurkat差异表达基因的cDNA消减文库,筛选并克隆甘草甜素免疫调节靶基因,阐明甘草甜素免疫调节的分子生物学机制。方法以甘草甜素刺激Jurkat细胞,同时以生理盐水刺激的相同细胞作为对照;24h后提取mRNA并逆转录为cDNA,进行抑制性消减杂交分析并构建cDNA消减文库,随机挑选文库克隆,PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果文库扩增后得到28个阳性克隆,进行菌落PCR分析,均得到200～1000bp插入片段。挑取含有插入片段的22个克隆进行测序,并通过生物信息学分析获得11种已知蛋白基因编码序列。主要包括IL-12、IL-18、胸腺素等免疫调节基因。结论应用SSH技术成功构建了甘草甜素处理的淋巴细胞差异表达基因的cDNA消减文库。为进一步阐明甘草甜素的免疫调节机制及深入了解甘草甜素用于防治病毒性肝炎的药理作用机制提供了依据。 展开更多
关键词 甘草甜素 免疫调节 抑制性消减杂交 基因克隆
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应用抑制性消减杂交技术分析涎腺腺样囊性癌转移相关基因 被引量：5
7
作者 秦兴军 张恩礁 +4 位作者 杨捷琳 王绪凯 孙长伏 李瑞武 关晓峰 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期392-394,共3页
目的:克隆涎腺腺样囊性癌转移相关的基因。方法:应用mRNA抑制性消减杂交技术,研究涎腺腺样囊性癌高、低转移细胞系基因表达上的差异。结果:以高转移细胞ACC-M为测试子,低转移细胞ACC-2为驱赶子,获得高表达的基因序列有7个,均为已知序列... 目的:克隆涎腺腺样囊性癌转移相关的基因。方法:应用mRNA抑制性消减杂交技术,研究涎腺腺样囊性癌高、低转移细胞系基因表达上的差异。结果:以高转移细胞ACC-M为测试子,低转移细胞ACC-2为驱赶子,获得高表达的基因序列有7个,均为已知序列同源基因。其中XAGE-1b基因为肿瘤睾丸抗原家族中的一个重要基因。结论:与ACC-2相比ACC-M中部分基因的高表达与涎腺腺样囊性癌高转移特性的获得有关,此结果为进一步探索腺样囊性癌肿瘤转移分子机理以及肿瘤转移控制和基因治疗提供了重要的依据。 展开更多
关键词 涎腺腺样囊性癌 抑制性消减杂交 肿瘤转移
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抑制性消减杂交技术及其应用研究进展 被引量：4
8
作者 周变华 王宏伟 +3 位作者 杨自军 王国永 郝雪琴 孔涛 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2011年第12期40-42,共3页
抑制性消减杂交(SSH)技术是结合抑制性PCR和消减杂交技术发展起来的一种高效分离差异表达基因的方法,具有特异性高、假阳性率低、操作简便、速度快、效率高等优点。利用SSH技术进行不同状态下基因的表达变化分析、差异基因的克隆和鉴定... 抑制性消减杂交(SSH)技术是结合抑制性PCR和消减杂交技术发展起来的一种高效分离差异表达基因的方法,具有特异性高、假阳性率低、操作简便、速度快、效率高等优点。利用SSH技术进行不同状态下基因的表达变化分析、差异基因的克隆和鉴定对了解基因表达调控有着重要意义。为此,综述了SSH技术的原理及其在发育调控基因、疾病发生机制、药物研发、性状筛选及环境生物修复等方面的应用研究进展。 展开更多
关键词 抑制性消减杂交技术 抑制性PCR 分子生物学
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应用抑制性消减杂交技术筛选XTP3的反式激活基因 被引量：3
9
作者 王春花 成军 +3 位作者 闫惠平 闫杰 石英 程胜禹 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期127-129,共3页
目的　应用抑制性消减杂交技术构建乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因XTP3的差异表达的cDNA消减文库 ,克隆XTP3反式激活相关基因。方法　以XTP3表达质粒pcDNA3 1(- ) XTP3转染HepG2细胞 ,以空载体pcDNA3 1(- )为对照 ;制备转染后的细胞裂... 目的　应用抑制性消减杂交技术构建乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因XTP3的差异表达的cDNA消减文库 ,克隆XTP3反式激活相关基因。方法　以XTP3表达质粒pcDNA3 1(- ) XTP3转染HepG2细胞 ,以空载体pcDNA3 1(- )为对照 ;制备转染后的细胞裂解液 ,提取mRNA并逆转录为cDNA ,经RsaⅠ酶切后 ,将实验组cDNA分成两组 ,分别与两种不同的接头衔接 ,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR ,将产物与T/A载体连接 ,构建cDNA消减文库 ,并转染大肠杆菌进行文库扩增 ,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果　文库扩增后得到 30个白色克隆 ,经菌落PCR分析 ,得到 2 3个 2 0 0～ 10 0 0bp插入片段。对所得片段测序 ,并进行同源性分析 ,共得到 2 0种已知基因序列和 2种未知功能基因序列 ,可能是XTP3反式激活靶基因。结论　成功构建了乙型肝炎病毒XTP3反式激活基因差异表达的cDNA消减文库 ,为今后进一步分析、研究病毒蛋白的致病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 抑制性消减杂交 克隆 XTP3 反式激活
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应用抑制性消减杂交技术研究哮喘发作外周血嗜酸细胞与细胞粘附及免疫调节相关基因的差异表达 被引量：3
10
作者 赵海金 蔡绍曦 +3 位作者 邹飞 李文军 肖军 佟万成 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期1382-1387,共6页
目的:研究哮喘发作时外周血嗜酸细胞(EOS)与细胞粘附及免疫调节相关基因的差异表达。方法:利用Percoll密度梯度离心分离哮喘患者发作时与治疗缓解外周血嗜酸性粒细胞,提取总RNA,并利用SuperSMARTcDNASynthesis技术合成cDNA第1链及优化... 目的:研究哮喘发作时外周血嗜酸细胞(EOS)与细胞粘附及免疫调节相关基因的差异表达。方法:利用Percoll密度梯度离心分离哮喘患者发作时与治疗缓解外周血嗜酸性粒细胞,提取总RNA,并利用SuperSMARTcDNASynthesis技术合成cDNA第1链及优化扩增第2链。按照SSH常规方法构建cDNA消减文库,筛选阳性克隆并加以鉴定以得到带有差异表达的基因克隆。结果:成功构建具有高消减效率的哮喘发作患者外周血EOScDNA文库,筛选鉴定后确认15个差异表达基因,测序并同源性比对分别为夏科-莱登结晶蛋白(CLCprotein,galectin-10)、假定mRNA前剪接调节子female-lethal(2D)[putativepre-mRNAsplicingregulatorfemale-lethal(2D)]、水通道蛋白9(AQP-9)、IL-8、slingshot磷酸酶(SSH-2L)、蛋白磷酸酶1催化亚基β亚型(PP1CB)、RNA解旋酶HELZ、β2-微球蛋白(β2-MG)及一个线粒体相关基因。结论:这些基因的差异表达证明了EOS的趋化、迁移、粘附及免疫调节功能参与了哮喘病理生理调节,对这些途径的干预可能为未来哮喘靶向性治疗提供依据。 展开更多
关键词 哮喘 嗜酸细胞 免疫调节 抑制性消减杂交
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抑制性消减杂交技术及其在肺癌研究中的应用 被引量：2
11
作者 梁锐 金克炜 畅继武 《中国肺癌杂志》 CAS 2007年第1期68-71,共4页
关键词 抑制性消减杂交技术 差异表达基因 病理学类型 肺癌 基因差异表达 ssh技术 相互作用 异常表达
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抑制性消减杂交技术在寄生虫学研究中的应用 被引量：4
12
作者 韩红玉 林矫矫 黄兵 《生物技术通报》 CAS CSCD 2006年第2期50-55,共6页
抑制性消减杂交技术(SSH)是一种适用于分离两个遗传背景相关的DNA样品之间差异从而表达基因的方法。目前,该技术在寄生虫学研究中的应用不是很多,主要应用在寻找与寄生虫不同发育阶段相关的差异表达基因和与寄生虫抗药性相关的差异表达... 抑制性消减杂交技术(SSH)是一种适用于分离两个遗传背景相关的DNA样品之间差异从而表达基因的方法。目前,该技术在寄生虫学研究中的应用不是很多,主要应用在寻找与寄生虫不同发育阶段相关的差异表达基因和与寄生虫抗药性相关的差异表达基因以及其他相关基因的研究,如与不同虫株、不同宿主、或性别差异相关的基因。本文从这几个方面综述了SSH技术在寄生虫学研究中的进展情况。了解这些信息,有助于将来更好地利用该技术研究寄生虫学,为寄生虫病的防治提供一定的理论依据。 展开更多
关键词 抑制性消减杂交 差异表达基因 寄生虫 发育阶段 抗药性
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抑制性消减杂交技术的应用 被引量：8
13
作者 李小庆 景志忠 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期46-50,共5页
基因的差异表达是调控各种生命活动的核心分子机制,而分离、克隆并进一步研究差异表达基因已成为现代分子生物学研究的热点,也是功能基因组学研究的重要内容。在研究差异表达基因的诸多项技术中,抑制性消减杂交(SSH)技术具有特异性强、... 基因的差异表达是调控各种生命活动的核心分子机制,而分离、克隆并进一步研究差异表达基因已成为现代分子生物学研究的热点,也是功能基因组学研究的重要内容。在研究差异表达基因的诸多项技术中,抑制性消减杂交(SSH)技术具有特异性强、假阳性率低、灵敏度高和快速简便等优点,被广泛地应用于生命科学和医学领域的基因差异表达的研究中。近年来,抑制性消减杂交(SSH)技术得到了相应的改进和完善,而在许多研究领域,该技术在广度和深度上都有了一些新进展。主要就抑制性消减杂交技术的产生背景、原理、技术流程、特点及其最新应用研究进展等方面作简要综述。 展开更多
关键词 抑制性消减杂交 差异表达 功能基因DSN均一化技术 CDNA微阵列
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抑制性消减杂交技术在对虾基因克隆中的应用 被引量：2
14
作者 赵永贞 蒋伟明 +4 位作者 陈秀荔 李咏梅 张彦明 黎铭 陈晓汉 《动物医学进展》 CSCD 2008年第4期76-80,共5页
抑制性消减杂交技术是一项筛选、分离未知差异表达基因的试验方法,该技术具有快速、简便、灵敏、特异、高效,所需起始样本量较少等优点。利用该技术构建对虾组织消减cDNA文库,鉴定差异表达相关基因及其表达特性。通过对对虾差异性表达... 抑制性消减杂交技术是一项筛选、分离未知差异表达基因的试验方法,该技术具有快速、简便、灵敏、特异、高效,所需起始样本量较少等优点。利用该技术构建对虾组织消减cDNA文库,鉴定差异表达相关基因及其表达特性。通过对对虾差异性表达的免疫相关基因、抗病基因及其他性状基因的了解,旨在为进一步研究对虾抗病机理奠定基础,为利用抗病基因进行抗病育种提供一个有效途径,为提高对虾的经济效益提供前景。 展开更多
关键词 抑制性消减杂交 对虾 差异表达基因 CDNA文库
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抑制性消减杂交技术研究Cd^(2+)胁迫下星星草基因表达 被引量：1
15
作者 曲跃军 杜人杰 +3 位作者 王雷 吕澈妍 吴丽丽 姜廷波 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期9-10,19,共3页
通过对Cd2+胁迫下星星草抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)cDNA文库的分析,从正向和反向消减文库中筛选出33个特异表达的阳性克隆,26个镉胁迫诱导表达,7个为镉胁迫抑制表达。序列分析表明,有29个与数据库中有... 通过对Cd2+胁迫下星星草抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)cDNA文库的分析,从正向和反向消减文库中筛选出33个特异表达的阳性克隆,26个镉胁迫诱导表达,7个为镉胁迫抑制表达。序列分析表明,有29个与数据库中有同源性,其中功能已知的25个,未知功能有4个,剩余4个为无同源序列的新基因。已知功能序列中,19个为胁迫后诱导表达,6个为胁迫后抑制表达,其中谷胱甘肽还原酶(GSR)基因、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-ECS)基因、细胞膜CP5蛋白基因和ABC家族蛋白基因等与星星草抗镉离子胁迫密切相关。 展开更多
关键词 镉胁迫 星星草 抑制性消减杂交
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应用抑制性消减杂交技术筛选HBxAg蛋白结合蛋白XBP1的上调基因 被引量：1
16
作者 樊万虎 成军 +2 位作者 刘小静 张树林 王琦 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期671-675,共5页
目的应用酵母双杂交及生物信息学(bioinformatics)技术获得HBxAg蛋白结合蛋白XBP1,为了解该基因的反式调节机制,利用抑制性消减杂交技术筛选并克隆XBP1蛋白反式激活的靶基因。方法以XBP1表达质粒pcD-NA3.1(-)-myc-his(A)-XBP1转染HepG2... 目的应用酵母双杂交及生物信息学(bioinformatics)技术获得HBxAg蛋白结合蛋白XBP1,为了解该基因的反式调节机制,利用抑制性消减杂交技术筛选并克隆XBP1蛋白反式激活的靶基因。方法以XBP1表达质粒pcD-NA3.1(-)-myc-his(A)-XBP1转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)-myc-his(A)为对照;制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并合成cDNA,经RsaⅠ酶切后将实验组cDNA分成两组,分别衔接两种不同接头,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次PCR反应,产物与T/A克隆载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆经PCR鉴定后进行测序及同源性分析。结果成功构建人XBP1蛋白反式激活相关基因差异表达的cDNA。扩增后得到80个200～1 000bp插入片段的克隆,随机挑选其中30个插入片段测序,并通过生物信息学分析获得其全长基因序列,结果共获得28个已知编码序列基因和2个未知的新基因。结论 XBP1在肝细胞内表达后能够上调HepG2细胞中许多不同基因表达的变化,这些基因与细胞信号转导、细胞增殖与分化、免疫应答、能量代谢、细胞凋亡、肿瘤发生等生物过程密切相关。 展开更多
关键词 XBP1基因 HEPG2细胞 抑制性消减杂交技术 反式调节
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应用抑制性消减杂交技术克隆人肺鳞癌差异性表达基因 被引量：1
17
作者 沈晨阳 刘军 +4 位作者 王丹蕾 赵辉 姜冠潮 王俊 张国良 《中国肺癌杂志》 CAS 2002年第1期10-13,共4页
目的　克隆人肺鳞癌肿瘤差异性表达基因。方法　应用抑制性消减杂交技术 (suppressionsub tractivehybridization,SSH)构建人肺鳞癌cDNA消减杂交文库 ,筛选后挑选阳性克隆进行测序 ,并在GenBank数据库中进行同源性比较 ,最后经RT PCR验... 目的　克隆人肺鳞癌肿瘤差异性表达基因。方法　应用抑制性消减杂交技术 (suppressionsub tractivehybridization,SSH)构建人肺鳞癌cDNA消减杂交文库 ,筛选后挑选阳性克隆进行测序 ,并在GenBank数据库中进行同源性比较 ,最后经RT PCR验证。结果　成功克隆 1 0个差异基因片段 ,其中 2个为新基因 (Gen Bank登录号分别为 :C2 0 :AF3630 68;C34 :AY0 32 661 )。 展开更多
关键词 差异性表达基因 抑制性消减杂交技术 肺癌状细胞癌 基因克隆 肺肿瘤 互补DNA
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抑制性消减杂交技术筛选XTP4蛋白反式调节基因 被引量：1
18
作者 韩萍 刘妍 +3 位作者 成军 李莉 朱传琳 吴勤 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期887-888,共2页
目的　筛选、克隆乙型肝炎病毒 (HBV)X蛋白 (HBxAg)反式激活基因XTP4转染肝癌细胞后的反式调节基因 ,探索XTP4基因表达对肝细胞基因表达谱的影响。方法　常规的分子生物学技术构建真核表达载体pcDNA3 1( ) XTP4 ,应用抑制性消减杂交(S... 目的　筛选、克隆乙型肝炎病毒 (HBV)X蛋白 (HBxAg)反式激活基因XTP4转染肝癌细胞后的反式调节基因 ,探索XTP4基因表达对肝细胞基因表达谱的影响。方法　常规的分子生物学技术构建真核表达载体pcDNA3 1( ) XTP4 ,应用抑制性消减杂交(SSH)技术对重组表达质粒pcDNA3 1( ) XTP4转染的HepG2细胞和空载体转染的相同细胞差异表达的mRNA进行研究 ,将富集的二次PCR产物与T/A载体连接 ,并转化大肠杆菌进行文库扩增 ,随机挑取克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果　消减文库扩增后得到 2 1个阳性克隆 ,PCR分析显示其中 16个克隆含有 2 0 0～ 10 0 0bp的插入片段。对插入片段进行测序及生物信息学分析 ,结果共获得 9种蛋白编码基因。这些差异表达的基因与肝细胞纤维化形成、肿瘤发生、线粒体氧化还原代谢、细胞生长调节密切相关。结论　应用SSH技术成功筛选了XTP4对肝癌细胞的反式调节基因 ,为进一步阐明HBxAg对肝细胞蛋白的反式调节作用提供了理论依据。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 X蛋白 反式激活 抑制性消减杂交
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应用抑制性消减杂交技术筛选NS5ABP37的反式调节基因 被引量：1
19
作者 张雷 马清涌 +2 位作者 孟宪魁 李康 成军 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期399-401,410,共4页
目的应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建NS5ABP37反式激活相关基因差异表达的cDNA文库,筛选NS5ABP37蛋白反式激活相关基因。方法以表达质粒pcDNA3.1(-)-NS5ABP37转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照,从转染后的细胞裂解液中提取mRNA... 目的应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建NS5ABP37反式激活相关基因差异表达的cDNA文库,筛选NS5ABP37蛋白反式激活相关基因。方法以表达质粒pcDNA3.1(-)-NS5ABP37转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照,从转染后的细胞裂解液中提取mRNA并合成cDNA,经RsaⅠ酶切消化后将实验组cDNA分成两组,分别衔接两种不同接头,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR反应;第2次PCR产物与pGEM-Teasy克隆载体连接,构建cDNA消减文库,并转化大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆经PCR鉴定后进行测序及同源性分析。结果成功构建了人NS5ABP37蛋白反式激活相关基因差异表达的cDNA文库。扩增后得到60个200～1000bp插入片段的克隆,随机挑选其中20个测序,并通过生物信息学分析获得其全长基因序列,结果共获得9种已知功能编码基因。结论NS5ABP37基因功能涉及细胞生长调节、信号转导和能量代谢。 展开更多
关键词 抑制性消减杂交 NS5ABP37 丙型肝炎病毒 CDNA文库
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利用抑制消减杂交技术(SSH)研究与Ty21a免疫相关的基因 被引量：2
20
作者 王华 高杰英 +1 位作者 周洁 李海民 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第8期521-524,共4页
目的:利用抑制消减杂交技术（SSH）筛选与Ty21a免疫相关的新基因。方法:以Ty21a免疫小鼠的肠细胞为tester,以正常小鼠的肠细胞为diver,提取mRNA,反转录构建cDNA文库,利用SSH技术筛选Ty21a免疫相关的新基因。结果:通过SSH技术和cDNA微矩... 目的:利用抑制消减杂交技术（SSH）筛选与Ty21a免疫相关的新基因。方法:以Ty21a免疫小鼠的肠细胞为tester,以正常小鼠的肠细胞为diver,提取mRNA,反转录构建cDNA文库,利用SSH技术筛选Ty21a免疫相关的新基因。结果:通过SSH技术和cDNA微矩阵技术,发现了7条与GenBank中已公布的表达序列标签（expressed　sequence tag,EST）片段没有明显同源性,可能为Ty21a免疫相关的新基因。其中3条正在用RACE-PCR法进行获得全长cDNA的工作。结论:SSH技术是一种高效的差异基因筛选方法,基因表达谱芯片技术是高通量进行基因表达模式研究的方法,Ty21a可诱导多种免疫相关新基因的表达。 展开更多
关键词 抑制消减杂交技术 研究 TY21A 免疫相关 cDNA微矩阵 肠细胞 分子免疫 细胞免疫
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