应用斑点酶联免疫吸附试验快速检测饲料中的沙门氏菌 被引量：11

1

作者 雷风 韩志辉 张红见 《中国奶牛》 2005年第5期9-11,共3页

选用硝酸纤维素(N C)膜作固相载体,建立检测沙门氏菌的斑点酶联免疫吸附试验诊断方法,检测成品饲料100份,对沙门氏菌的最低检出量为400个/m L,沙门氏菌阳性检出率43.00%(43/100),常规分离培养阳性检出率为38.00%(38/100),两者符合率为83... 选用硝酸纤维素(N C)膜作固相载体,建立检测沙门氏菌的斑点酶联免疫吸附试验诊断方法,检测成品饲料100份,对沙门氏菌的最低检出量为400个/m L,沙门氏菌阳性检出率43.00%(43/100),常规分离培养阳性检出率为38.00%(38/100),两者符合率为83.72%,差异不显著(P>0.05)。试验表明该方法简便、特异、快速、结果直观,便于在基层推广使用。 展开更多

关键词 斑点酶联免疫吸附试验 检测 成品饲料 沙门氏菌

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斑点酶联A蛋白免疫吸附试验(Dot-PPA-ELISA)检测猪衣原体抗体方法的建立

2

作者 张焕容 文心田 曹三杰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期637-640,共4页

本研究建立了斑点酶联A蛋白免疫吸附试验(Dot-PPA-ELISA),对猪衣原体IgG的最小检测量为1.21 ng。以间接血凝试验方法为对照,两种方法同时检测120头份猪血清样品,Dot-PPA-ELISA检出43头份(35.83%),效价≥256;间接血凝试验检出26头份(21.6... 本研究建立了斑点酶联A蛋白免疫吸附试验(Dot-PPA-ELISA),对猪衣原体IgG的最小检测量为1.21 ng。以间接血凝试验方法为对照,两种方法同时检测120头份猪血清样品,Dot-PPA-ELISA检出43头份(35.83%),效价≥256;间接血凝试验检出26头份(21.67%),效价≥64。诊断膜片与猪瘟、猪布氏杆菌病、猪口蹄疫和猪弓形体病标准阳性血清均不出现有意义的交叉反应。诊断膜片置室温、4℃和-20℃下至少保存3个月其抗原效价不变。试验表明本方法重复符合率为94.44%,且反应效果不受反应板质量和新旧的影响;试剂用量节省,各步骤均可做到严格定量,操作简便,3 h内可出结果,肉眼即可判断,不需要特殊检测仪器。由于辣根过氧化物酶标记的葡萄球菌A蛋白(PPA)是一种广谱诊断试剂,因此Dot-PPA-ELISA还可以用于其它哺乳动物衣原体抗体的检测。 展开更多

关键词 斑点酶联A蛋白免疫吸附试验 猪衣原体病 检测 抗体

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免疫胶体金渗滤斑点试验对抗精子抗体的检测 被引量：2

3

作者 许国强 黄红莹 +5 位作者 马远方 惠学志 白慧玲 赵粤萍 李秀敏 杜耀武 《河南医科大学学报》 北大核心 2001年第5期581-582,共2页

目的 :建立一种快速鉴定抗精子抗体的新方法。方法 :用化学试剂提纯精子抗原 ,将其结合于硝酸纤维素膜上 ;以胶体金颗粒结合的羊抗人IgG作为标记抗体 ,建立检测人血清抗精子抗体的免疫胶体金渗滤斑点试验。结果 :抗原抗体通过渗滤在膜... 目的 :建立一种快速鉴定抗精子抗体的新方法。方法 :用化学试剂提纯精子抗原 ,将其结合于硝酸纤维素膜上 ;以胶体金颗粒结合的羊抗人IgG作为标记抗体 ,建立检测人血清抗精子抗体的免疫胶体金渗滤斑点试验。结果 :抗原抗体通过渗滤在膜上反应 ,10min肉眼即可观察到结果 ,10 0例临床血清标本的检测结果 ,本法与ELISA法基本相符。结论 :免疫胶体金渗滤斑点试验可快速测定抗精子抗体 。 展开更多

关键词 免疫胶体金渗滤斑点试验 酶联免疫吸附试验 抗人精子抗体 不育症

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蚯蚓抗原抑制性Dot-ELISA检测蠕虫病患者血清抗体的实验研究 被引量：5

4

作者 姜昌富 魏兰英 +3 位作者 朱晓华 雷家慧 时红波 潘红 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期71-73,共3页

目的　建立蚯蚓抗原抑制性Dot-ELISA ,并观察其对日本血吸虫病、肺吸虫病、旋毛虫病人血清抗体检测特异性的影响。方法　应用Pa -Ag抑制性Dot-ELISA对 15 8份日本血吸虫病人、97份肺吸虫病人和 6 2份旋毛虫病人阳性血清进行检测 ,并将... 目的　建立蚯蚓抗原抑制性Dot-ELISA ,并观察其对日本血吸虫病、肺吸虫病、旋毛虫病人血清抗体检测特异性的影响。方法　应用Pa -Ag抑制性Dot-ELISA对 15 8份日本血吸虫病人、97份肺吸虫病人和 6 2份旋毛虫病人阳性血清进行检测 ,并将结果与Dot-ELISA所获结果予以比较分析 ,观察两种方法之间有无显著性差异。结果　Pa -Ag抑制性Dot -ELISA在SEA、Pw -Ag和Ts-Ag的交叉反应抑制率 (39 90 %～ 94 72 % )与Dot -ELISA比较有显著性差异 (P >0 0 5～0 0 1)。结论　Pa -Ag抑制性Dot-ELISA在显著提高寄生蠕虫病血清免疫学诊断特异性的同时 ,又保证了其 10 0 展开更多

关键词 蠕虫病 蚯蚓抗原 抑制性斑点酶免疫吸附试验 抗体 免疫学诊断

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斑点金免疫渗滤法检测不孕症患者血清抗子宫内膜抗体 被引量：3

5

作者 许国强 杜耀武 +3 位作者 马远方 张军 白慧玲 赵粤萍 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2002年第4期452-454,共3页

目的 :建立一种快速测定抗子宫内膜抗体 (antiendometrialantibody ,EMAb)的新方法。 方法 :采用经抗人血清抗体 Sepharose4B免疫吸附柱亲和层析纯化的人子宫内膜抗原 (endometriumantigen ,EMAg) ,以胶体金颗粒结合的羊抗人IgG为标记抗... 目的 :建立一种快速测定抗子宫内膜抗体 (antiendometrialantibody ,EMAb)的新方法。 方法 :采用经抗人血清抗体 Sepharose4B免疫吸附柱亲和层析纯化的人子宫内膜抗原 (endometriumantigen ,EMAg) ,以胶体金颗粒结合的羊抗人IgG为标记抗体 ,根据免疫渗滤原理 ,建立斑点金免疫渗滤法 (Dot immunogoldfiltrationassay ,DIG FA)检测人血清EMAb。共检测 5 86份不孕者血清并与酶联免疫吸附试验 (ELISA)作对比研究。结果 :纯化的人子宫内膜抗原与患者血清中特异性EMAb通过渗滤在硝酸纤维素膜上反应 ,8min内即可直接观察结果。在 5 86份血清的检测中 ,阳性率为 36 .8%,与ELISA的结果基本一致 (χ2 =3.45 ,P >0 .0 5 ) ,符合率 95 .0 %。特异性为94.7%,敏感性为 95 .6 %。交叉试验与重复试验结果显示DIGFA具有较好的特异性及稳定性。结论 :DIGFA可快速测定EMAb ,具有推广使用的价值。 展开更多

关键词 斑点金免疫渗滤试验 酶联免疫吸附试验 抗子宫膜抗体 不孕症

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血清旋毛虫p49抗原IgG抗体的斑点金免疫渗滤法检测 被引量：5

6

作者 刘英杰 赵粤萍 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第6期533-534,518,共3页

目的 建立一种快速诊断人体旋毛虫感染的新途径。方法 以基因工程表达的猪旋毛虫融合蛋白p49/GST为抗原,将其结合于硝酸纤维素膜上,以胶体金颗粒结合的羊抗人IgG作为标记抗体,建立斑点金免疫渗滤法(Dot-immunogoldfiltration assay,DIGF... 目的 建立一种快速诊断人体旋毛虫感染的新途径。方法 以基因工程表达的猪旋毛虫融合蛋白p49/GST为抗原,将其结合于硝酸纤维素膜上,以胶体金颗粒结合的羊抗人IgG作为标记抗体,建立斑点金免疫渗滤法(Dot-immunogoldfiltration assay,DIGFA),检测人血清抗旋毛虫p49抗原IgG抗体。共检测76份旋毛虫患者血清并与酶联免疫吸附试验(ELISA)作对比研究。结果 抗原抗体通过渗滤在膜上反应,10min肉眼即可观察到结果,在76份患者血清的检测中,阳性率为98.68％,显著高于ELISA法的检出阳性率86.84％,(X2=7.94,P<0.01)。交叉试验与重复试验结果显示DIGFA具有较好的特异性及稳定性。结论 以纯化的融合蛋白p49/GST为抗原建立的DIGFA可快速准确检测旋毛虫病人血清特异性旋毛虫IgG抗体,具有推广应用的价值。 展开更多

关键词 斑点金免疫渗滤试验 酶联免疫吸附试验 旋毛虫抗体 融合蛋白p49/GST

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牙鲆腹水病病原免疫血清的制备和纯化试验研究

7

作者 朱壮春 陈阳 +6 位作者 郝东升 马玉妹 王艳茹 曹向可 穆艮艮 李金坤 史相国 《水产科学》 CAS 北大核心 2010年第6期363-365,共3页

用迟钝爱德华氏菌免疫家兔,制备出高效价迟钝爱德华氏菌免疫血清。先制备迟钝爱德华氏菌抗原,耳缘静脉注射免疫家兔。经微量反应板法检测血清效价,效价达到1∶2560;用Millipore Montage抗体纯化试剂纯化抗体,纯化的抗体经SDS-PAGE电泳,... 用迟钝爱德华氏菌免疫家兔,制备出高效价迟钝爱德华氏菌免疫血清。先制备迟钝爱德华氏菌抗原,耳缘静脉注射免疫家兔。经微量反应板法检测血清效价,效价达到1∶2560;用Millipore Montage抗体纯化试剂纯化抗体,纯化的抗体经SDS-PAGE电泳,杂带较少,条带主要集中于50 kD处;用斑点酶联免疫吸附试验检测时,迟钝爱德华氏菌呈阳性,温和气单胞菌、嗜水气单胞菌、河流弧菌、溶藻弧菌、鳗弧菌、腐败希瓦氏菌、产碱普罗威斯登菌、阪崎肠杆菌和大肠杆菌均呈阴性。试验结果表明,特异、高效价的迟钝爱德华氏菌免疫血清,为快速检测牙鲆腹水病病原奠定了基础。 展开更多

关键词 牙鲆 迟钝爱德华氏菌 免疫血清 纯化 斑点酶联免疫吸附试验

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山羊痘快速诊断新方法—斑点凝集试验

8

作者 邱昌庆 《畜牧兽医科技信息》 1996年第17期7-7,共1页

目前,实验室诊断山羊痘的方法包括琼脂凝胶沉淀(AGPT)试验,对流免疫电泳(CIE)试验,酶联免疫吸附试验(ELESA)和斑点酶联免疫吸附试验(dot—ELISA)和反相被动血凝(RPHA)试验。虽然有些试验方法很敏感和可靠,但是需要价格昂贵的化学试剂和... 目前,实验室诊断山羊痘的方法包括琼脂凝胶沉淀(AGPT)试验,对流免疫电泳(CIE)试验,酶联免疫吸附试验(ELESA)和斑点酶联免疫吸附试验(dot—ELISA)和反相被动血凝(RPHA)试验。虽然有些试验方法很敏感和可靠,但是需要价格昂贵的化学试剂和设备。 展开更多

关键词 山羊痘 新方法 免疫吸附试验 对流免疫电泳 实验室诊断 速诊 琼脂凝胶 斑点酶联 被动血凝 凝集试验

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两种γ-干扰素释放试验方法在结核病诊断中的应用价值比较 被引量：17

9

作者 卫卫 肖和平 +11 位作者 李红 胡海琍 顾瑾 刘一典 桂徐蔚 沈芸 郝晓晖 沈彦恒 楼海 王鹏 孙勤 沙巍 《中国防痨杂志》 CAS 2015年第7期768-773,共6页

目的对比研究两种γ干扰素释放试验方法IGRA-ELISA技术和结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT．TB）在结核病诊断中的应用价值。方法前瞻性研究纳入2014年1月1日至2014年12月31日在上海市肺科医院结核科门诊及住院诊治的疑似结核病患者81例... 目的对比研究两种γ干扰素释放试验方法IGRA-ELISA技术和结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT．TB）在结核病诊断中的应用价值。方法前瞻性研究纳入2014年1月1日至2014年12月31日在上海市肺科医院结核科门诊及住院诊治的疑似结核病患者81例，最终53例确诊为活动性结核病、28例为非活动性结核病。每例患者分别采用IGRA-ELISA技术和T-SPOT．TB两种方法进行平行检测，采用卡方检验比较两种诊断方法的检测结果，两种方法检测结果一致性评价采用Kappa一致性检验。结果81例疑似结核病患者中，IGRA-ELISA检测阳性52例，阴性29例；T-SPOT．TB检测阳性54例，阴性27例，两种方法阳性符合率92．6％（50／54），阴性符合率92．6％（25／27），总符合率为92．6％（75／81）。两种诊断方法检测结果比较，差异无统计学意义（χ^2=55．984，P〉0．05），诊断一致性高（Kappa值=0．836）。IGRA-ELISA技术和T-SPOT．TB检测活动性结核病的阳性检出率分别为81．1％（43／53）和84．9％（45／53），远高于涂片（21．2％，11／52）、核酸检测（16．7％，6／36）和结核抗体检测（36．5％，19／52），两种诊断技术检测非活动性结核病的阴性检出率均为67．9％（19／28）。结论IGRA-ELISA技术和T-SPOT．TB检测性能相似，在结核病诊断方面均具有较高的敏感度，对临床有较好的应用价值。 展开更多

关键词 结核/诊断 干扰素γ释放试验 酶联免疫吸附测定 酶联免疫斑点测定

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PstS1-ESAT-6抗原血清学和γ-干扰素释放试验辅助诊断结核病的价值 被引量：5

10

作者 何秀云 黄香玉 +5 位作者 朱传智 陈红兵 张翠英 肖漓 高钰 孔祥瑞 《中国防痨杂志》 CAS 2016年第10期805-812,共8页

目的分析重组融合蛋白PstS1-ESAT-6抗原血清学和r干扰素释放试验辅助诊断结核病的潜在价值。方法选取40只无特定病原体（specific pathogen free，SPF）级BALB／c小鼠和18只SPF级豚鼠，均分别注射卡介苗（BCG）或热灭活结核分枝杆菌。... 目的分析重组融合蛋白PstS1-ESAT-6抗原血清学和r干扰素释放试验辅助诊断结核病的潜在价值。方法选取40只无特定病原体（specific pathogen free，SPF）级BALB／c小鼠和18只SPF级豚鼠，均分别注射卡介苗（BCG）或热灭活结核分枝杆菌。选取解放军第三0九医院全军结核病研究所于2012年3—8月收治入院的129例结核病患者（结核病组）、54例非结核性肺部相关疾病患者（非结核病组）和194名健康者（健康对照组）作为研究对象。研究对象均采集外周静脉血。外周血单个核细胞（PBMC）和免疫的小鼠脾淋巴细胞经重组融合蛋白PstS1-ESAT-6体外刺激，应用酶联免疫斑点法（ELISPOT）检测经抗原刺激后释放r干扰素（IFN-γ）的效应T淋巴细胞即斑点形成细胞（SFC）；应用酶联免疫吸附法（ELISA）检测外周血血浆和免疫小鼠血清抗重组融合蛋白PstS1-ESAT-6的IgG；应用孟都法（Mantoux）检测健康者BCG-PPD皮试、免疫豚鼠BCG-PPD皮试及重组融合蛋白PstS1-ESAT-6皮试。结果结核病组PBMC体外经重组融合蛋白PstS1-ESAT-6刺激，分泌IFN-γ的SFC数为（45．02±68．03）／z．5x10。个PBMC，高于非结核病组的（11．87±38．63）／2．5×10。个PBMC和健康对照组的（5．24±15．46）／2．5×10。个PBMC（F=32．96，P=0．000）。ELISPOT诊断结核病患者的敏感度为82．2％（106／lZ9），诊断非结核病组患者和健康者的特异度分别为87．0％（47／54）和90．2％（175／194），两者特异度比较差异无统计学意义（χ^2=0.45，P=0．500）。结核病组血浆中抗重组融合蛋白PstS1-ESAT-6的IgG水平（平均A492值为0.82±0.66）高于非结核病组[平均A492值为（0.60±0.30）]和健康对照组[平均A492为（0．36±0．20）1（F=43．60，P=0.000）；ROC分析确定检测临界值为0.49，其用于诊断结核病的敏感度为62．2％（69／111）、诊断非结核病组的特异度为40．4％（19／47）、诊断健康者的特异度为84．5％（164／192），诊断非结核病组与健康组的特异度比较，差异有统计学意义（χ^2=42．60，P〈0．01）。热灭活结核分枝杆菌免疫豚鼠均产生BCG-PPD和重组融合蛋白PstS1-ESAT-6皮试反应，所有豚鼠皮肤出现红肿或硬结平均直径〉5mm；热灭活结核分枝杆菌免疫小鼠，重组融合蛋白PstS1-ESAT-6的ELISPOT和ELISA检测均为阴性。BCG免疫豚鼠只产生BCG-PPD皮试反应，硬结平均直径为（10．08±0．36）mm，不产生重组融合蛋白PstS1-ESAT-6皮试反应；BCG免疫小鼠，重组融合蛋白PstS1-ESAT-6的ELISPOT检测阴性，而ELISA检测为阳性。结论ELISPOT用于结核病诊断优于血清学诊断，但其诊断活动I生结核病价值还需进一步论证。 展开更多

关键词 结核 早期分泌抗原靶6 结核菌素试验 酶联免疫斑点检测 酶联免疫吸附测定 对比研究

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Dot-ELISA法检测致病性嗜水气单胞菌 被引量：5

11

作者 任燕 潘子豪 +2 位作者 陆承平 姚火春 吴淑勤 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1409-1415,共7页

在鱼类致病性气单胞菌诊断试剂盒的基础上,用斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)检测致病性嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)胞外蛋白酶ECPase54,同时用脱脂奶平板、PCR特异性扩增气溶素基因aer和16SrRNA基因检测72株气单胞菌分离... 在鱼类致病性气单胞菌诊断试剂盒的基础上,用斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)检测致病性嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)胞外蛋白酶ECPase54,同时用脱脂奶平板、PCR特异性扩增气溶素基因aer和16SrRNA基因检测72株气单胞菌分离株。结果显示致病性嗜水气单胞菌检测阳性率分别如下:Dot-ELISA法90.3%(65/72)、脱脂奶平板法75%(54/72)、aer基因PCR法94.4%(68/72)、16SrRNA PCR法81.9%(59/72),Dot-ELISA与其他3种方法的符合率分别为79.2%(57/72)、91.6%(66/72)、81.9%(59/72)。在ECPase54兔抗血清制备后的2、4、6、12、18个月,用Dot-ELISA检测72株分离株,检测结果重复性好。结果表明Dot-ELISA法敏感、特异、实用,可用于鱼类致病性Ah的临床诊断。 展开更多

关键词 嗜水气单胞菌 胞外蛋白酶 斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA) 检测

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核酸杂交技术在禽白血病病毒TCID_(50)测定中的应用 被引量：7

12

作者 孟凡峰 范建华 +4 位作者 徐步 时建蓬 董宣 崔治中 赵鹏 《中国家禽》 北大核心 2015年第1期13-16,共4页

为探索核酸杂交技术在测定J亚群禽白血病病毒(ALV-J)细胞半数感染量(TCID50)中的可行性,将ALV-J传染性克隆r NX0101株以10倍梯度稀释后按常规方法接种已长满单层鸡胚成纤维细胞(CEF)的96孔板,在维持7 d后收集细胞培养上清。上清液部分... 为探索核酸杂交技术在测定J亚群禽白血病病毒(ALV-J)细胞半数感染量(TCID50)中的可行性,将ALV-J传染性克隆r NX0101株以10倍梯度稀释后按常规方法接种已长满单层鸡胚成纤维细胞(CEF)的96孔板,在维持7 d后收集细胞培养上清。上清液部分按照试剂盒说明书进行p27抗原的ELISA检测,另一部分提取RNA后以鸡致病性外源性禽白血病病毒特异性核酸探针交叉斑点杂交检测试剂盒进行Dot-blot检测,每孔中细胞固定后以ALV-J特异性单克隆抗体进行IFA检测,确定病毒感染孔后按照Reed-Muench法分别计算三种方法测定的TCID50。结果显示ELISA法、IFA法和Dot-blot法在确定病毒感染中能够相互验证和补充,该病毒在CEF的TCID50分别为10-4.7TCID50/0.1 m L、10-5.2TCID50/0.1 m L和10-5.3TCID50/0.1 m L。表明采用Dot-blot法测定ALV-J的TCID50是可行的,不仅能够排除内源性的干扰,并且比ELISA和IFA具有更高的灵敏度。 展开更多

关键词 J亚群禽白血病病毒 斑点杂交 间接免疫荧光试验 酶联免疫吸附试验 TCID50

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应用Dot-ELISA快速检测牙鲆腹水病病原的研究 被引量：3

13

作者 朱壮春 陈阳 +6 位作者 郝东升 姜广建 邢朝斌 吴鹏 白崇洲 李金龙 史相国 《水产科学》 CAS 北大核心 2010年第3期162-165,共4页

选用硝酸纤维素膜作固相载体,建立检测迟钝爱德华氏菌的斑点酶联免疫吸附试验诊断方法。根据棋盘试验,确定迟钝爱德华氏菌免疫血清最佳工作浓度为1∶800,酶标抗体最佳工作浓度为1∶200,以出现明显清晰斑点者判定为阳性。用该方法检测时... 选用硝酸纤维素膜作固相载体,建立检测迟钝爱德华氏菌的斑点酶联免疫吸附试验诊断方法。根据棋盘试验,确定迟钝爱德华氏菌免疫血清最佳工作浓度为1∶800,酶标抗体最佳工作浓度为1∶200,以出现明显清晰斑点者判定为阳性。用该方法检测时,迟钝爱德华氏菌呈阳性,温和气单胞菌、嗜水气单胞菌、河流弧菌、溶藻弧菌、鳗弧菌、腐败希瓦氏菌、产碱普罗威斯登菌、阪崎肠杆菌和大肠杆菌均呈阴性。试验结果表明,Dot-ELISA方法简便、特异、快速、结果直观,便于在基层推广使用。 展开更多

关键词 斑点酶联免疫吸附试验 牙鲆 迟钝爱德华氏菌 快速检测

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兔出血症三种快速诊断法比较研究 被引量：6

14

作者 刘永德 汪毅 +2 位作者 徐俊 施蔡培 陈智龙 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1992年第4期361-365,共5页

本试验对快速诊断兔出血症(RHD)的免疫酶染色法(IES),斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)与间接荧光染色法(IFS)进行了比较。试验表明,三种快速诊断法对17份实验感染兔肝材料的检测结果与血凝试验(HA)的阳性符合率分别为88.2％、88.2％及9... 本试验对快速诊断兔出血症(RHD)的免疫酶染色法(IES),斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)与间接荧光染色法(IFS)进行了比较。试验表明,三种快速诊断法对17份实验感染兔肝材料的检测结果与血凝试验(HA)的阳性符合率分别为88.2％、88.2％及93.3％,阴性符合率均为100％;对4份脏器材料检测结果证明,兔出血症病毒(RHDV)含量依次为;肝>脾>肾>肺>心肌。肝触片及快诊膜分别在4℃和室温放置1个月后,其检测结果不受影响。三种快速诊断对RHDV的检测具有很高的特异性、敏感性和稳定性。Dot-ELISA具有经济、简便、快速、敏感、准确的优点。 展开更多

关键词 兔出血症 免疫酶染色法 斑点酶联免疫吸附试验 间接荧光染色法

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NS1基因主要抗原区的可溶性表达及其DotELISA检测方法的建立 被引量：2

15

作者 赵朴 苏红辽 +5 位作者 刘兴友 赵坤 胡建和 王三虎 姚四新 郑玉姝 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2015年第6期35-40,共6页

【目的】可溶性表达猪流感病毒(SIV)NS1基因主要抗原区(NS1′)蛋白,获得具有良好抗原性的NS1′蛋白,并初步建立检测NS1抗体的斑点酶联吸附试验(Dot-ELISA)方法,为鉴别诊断猪流感病毒感染猪与疫苗免疫猪奠定基础。【方法】以质粒pET28a-... 【目的】可溶性表达猪流感病毒(SIV)NS1基因主要抗原区(NS1′)蛋白,获得具有良好抗原性的NS1′蛋白,并初步建立检测NS1抗体的斑点酶联吸附试验(Dot-ELISA)方法,为鉴别诊断猪流感病毒感染猪与疫苗免疫猪奠定基础。【方法】以质粒pET28a-NS1为模板,PCR扩增NS1基因抗原性较好的区段NS1′,用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后插入pET-32a(+),构建pET32a-NS1′,经PCR、EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切及DNA测序鉴定后,转化大肠杆菌Rosetta,用IPTG诱导表达,纯化NS1′并免疫家兔制备多克隆血清,对其进行SDS-PAGE、Western blotting检测和免疫荧光分析,并以纯化的NS1′作为包被抗原初步建立Dot-ELISA检测方法。【结果】PCR扩增获得了长约250bp的H3N2SIV NS1′片段;成功构建了重组载体pET32a-NS1′;SDS-PAGE和Western blotting检测结果显示,融合蛋白NS1′大小约34ku,该蛋白可溶,能与感染SIV的猪血清特异性反应,并且用纯化蛋白NS1′制备的多克隆血清能识别293T细胞中表达的NS1,建立的Dot-ELISA检测方法可鉴别猪流感病毒感染猪与疫苗免疫猪。【结论】实现了H3N2SIV NS1′蛋白的可溶性表达,表达产物具有良好的抗原性,以NS1′作为包被抗原,建立了检测NS1抗体的Dot-ELISA方法。 展开更多

关键词 猪流感病毒 非结构蛋白1 主要抗原区域 可溶性表达 斑点酶联免疫吸附试验

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诊断用过敏原膜芯片的制备及其应用研究 被引量：2

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作者 毛露甜 陈丽婉 +1 位作者 范红英 刘新华 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期654-655,659,共3页

目的:制备过敏原诊断用膜芯片并优化其实验条件,探讨其在过敏性疾病诊断中的应用价值。方法:以虾、蟹、鳖、大豆等过敏原按一定点阵排列吸附在不同膜载体(NC膜、PVDF膜)上,制作含有阳性对照和阴性对照的膜芯片,用斑点酶联免疫吸附法(Dot... 目的:制备过敏原诊断用膜芯片并优化其实验条件,探讨其在过敏性疾病诊断中的应用价值。方法:以虾、蟹、鳖、大豆等过敏原按一定点阵排列吸附在不同膜载体(NC膜、PVDF膜)上,制作含有阳性对照和阴性对照的膜芯片,用斑点酶联免疫吸附法(Dot-ELISA)从包被液、过敏原包被浓度、二抗浓度等方面优化工作条件,并与德国Allergop-harma的过敏原检测试剂盒比较结果符合度。将包被好的PVDF膜保存在4℃冰箱中在3个月内检测其稳定性。结果:PVDF膜的效果优于NC膜,肉眼观察膜上斑点的显色即可确定相应过敏原,以试剂盒检出的阳性血清28份作比较,结果总符合率达82.1%(23/28),差异无统计学意义(P>0.05)。不同时间同批试剂重复检测结果完全一致,制备的过敏原膜芯片在4℃密封避光可稳定保存3个月。结论:建立的Dot-ELISA法膜芯片能同时检测多种过敏原,具有用血量少,成本低,操作简便,安全特异等优点,值得临床推广应用。 展开更多

关键词 过敏原 斑点酶联免疫吸附试验 膜芯片

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Dot-ELISA检测兔疥螨抗体方法的建立和应用 被引量：2

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作者 郝桂英 杨光友 古小彬 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第4期8-13,共6页

将从病兔痂皮内收集的疥螨经研磨、冻融、离心后,制成可溶性抗原,作为诊断抗原,建立Dot-ELISA方法检测兔疥螨血清抗体。研究确定了该方法的最佳工作条件。制备的诊断膜片特异性强,不与兔瘟病毒、兔大肠埃希菌、兔附红细胞体等阳性血清... 将从病兔痂皮内收集的疥螨经研磨、冻融、离心后,制成可溶性抗原,作为诊断抗原,建立Dot-ELISA方法检测兔疥螨血清抗体。研究确定了该方法的最佳工作条件。制备的诊断膜片特异性强,不与兔瘟病毒、兔大肠埃希菌、兔附红细胞体等阳性血清反应。膜片具有良好的灵敏性,高免血清作1∶210稀释亦能检出;重复性试验表明该法重复性良好。诊断膜片在4℃保存5个月其检测活性不变。结果表明,建立的Dot-ELISA可用于免疥螨抗体的检测。 展开更多

关键词 斑点酶联免疫吸附试验 兔疥螨 抗体检测

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用于检测小鹅瘟抗体的Dot-ELISA建立 被引量：2

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作者 布日额 王君伟 吴金花 《中国家禽》 北大核心 2009年第11期24-26,共3页

以小鹅瘟病毒(GPV)VP1-VP3非重叠序列重组原核表达多肽为检测抗原,建立了鉴别GPV全病毒抗体与VP3亚单位抗体的Dot-ELISA。该方法中检测抗原包被浓度为70ng/斑点,兔抗鹅IgG-HRP标记抗体的最适稀释度为1∶200,被检血清最佳稀释度为1∶400... 以小鹅瘟病毒(GPV)VP1-VP3非重叠序列重组原核表达多肽为检测抗原,建立了鉴别GPV全病毒抗体与VP3亚单位抗体的Dot-ELISA。该方法中检测抗原包被浓度为70ng/斑点,兔抗鹅IgG-HRP标记抗体的最适稀释度为1∶200,被检血清最佳稀释度为1∶400。特异性试验的结果中,检测抗GPV抗体的阳性率为100%,而抗GPV-VP3禽痘重组病毒抗体的阳性率为0,表明其有很好的特异性与灵敏度。 展开更多

关键词 鹅细小病毒 GPV-(VP1-VP3)非重叠序列 斑点-酶联免疫吸附试验

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三种猪瘟抗体检测技术的应用比较 被引量：4

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作者 林琳 江斌 +3 位作者 吴胜会 吴南洋 张世忠 吴宗福 《福建畜牧兽医》 2004年第3期23-24,共2页

应用猪瘟正向间接血凝法 (IHA)、斑点酶联免疫吸附试验 (Dot ELISA)以及猪瘟抗体免疫金标试纸条对规模化养猪场 1 38份不同阶段猪血清进行猪瘟免疫抗体水平的同步监测 ,检测结果 :IHA ,Dot ELISA ,金标试纸条测出经产母猪的猪瘟抗体阳... 应用猪瘟正向间接血凝法 (IHA)、斑点酶联免疫吸附试验 (Dot ELISA)以及猪瘟抗体免疫金标试纸条对规模化养猪场 1 38份不同阶段猪血清进行猪瘟免疫抗体水平的同步监测 ,检测结果 :IHA ,Dot ELISA ,金标试纸条测出经产母猪的猪瘟抗体阳性率分别为 83 3 %、80 0 %、80 0 % ,其平均值为 81 1 % ;三种方法测出后备母猪的猪瘟抗体阳性率分别为 53 3 %、53 3 %、50 0 % ,其平均值为 52 2 % ;三种方法测出 2 0日龄仔猪的猪瘟抗体阳性率分别为 69 2 %、76 9%、76 9% ,其平均值为 74 3 % ;测出 40日龄猪的猪瘟抗体阳性率分别为 76 9%、80 8%、80 8% ,其平均值为 79 5 % ;测出育肥猪的猪瘟抗体阳性率分别为 30 8%、30 8%、34 6 % ,其平均值为 32 1 %。经过统计学x2 检验 ,对于不同阶段猪三种方法两两之间检测结果均差异不显著 (P >0 0 5) ,表明上述三种方法均可用于猪瘟抗体的检测。 展开更多

关键词 猪瘟抗体 检测技术 猪瘟正向间接血凝法 斑点酶联免疫吸附试验

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小鼠肝炎病毒抗体Dot—ELISA诊断试剂盒的研制 被引量：2

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作者 杨邦玲 胡柏林 +2 位作者 史晋 杨丽风 陈均华 《中国实验动物学杂志》 1997年第2期65-68,共4页

本文报道以硝酸纤维素膜为固相载体制备的小鼠肝炎病毒（MHV）抗原诊断膜片，用以检测MHV抗体的斑点酶联免疫吸附试验（Dot－ELISA）诊断试剂盒的研制。研究结果表明：试剂盒不仅具有特异性强、灵敏性高、重复性和稳定性好等特点，而且... 本文报道以硝酸纤维素膜为固相载体制备的小鼠肝炎病毒（MHV）抗原诊断膜片，用以检测MHV抗体的斑点酶联免疫吸附试验（Dot－ELISA）诊断试剂盒的研制。研究结果表明：试剂盒不仅具有特异性强、灵敏性高、重复性和稳定性好等特点，而且还具有成本低、操作简便快速（2～3h即可作出诊断），结果客观，便于长期保存，不需特殊仪器，肉眼易判定等优点，具有推广和应用价值。本研究在国内尚未见报道。 展开更多

关键词 诊断试剂盒 鼠肝 肝炎病毒 小鼠 抗体 DOT-ELISA 出诊 斑点酶联免疫吸附试验 肉眼 推广

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