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编码绿色荧光蛋白和βARKct的重组腺病毒的制备
被引量：
1
1
作者
单志新
郑猛
+4 位作者
余细勇
林秋雄
符永恒
谭虹虹
林曙光
《中山大学学报（医学科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第4期392-395,408,共5页
【目的】制备编码绿色荧光蛋白(GFP)和G茁γ活性抑制剂茁ARKct的重组腺病毒载体。【方法】构建腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV-茁ARKct,经PmeI线性化后转化入含腺病毒骨架质粒pAdEasy-I的BJ5183菌,筛选获得重组腺病毒质粒pAdEasy-gfp-茁AR...
【目的】制备编码绿色荧光蛋白(GFP)和G茁γ活性抑制剂茁ARKct的重组腺病毒载体。【方法】构建腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV-茁ARKct,经PmeI线性化后转化入含腺病毒骨架质粒pAdEasy-I的BJ5183菌,筛选获得重组腺病毒质粒pAdEasy-gfp-茁ARKct。用LipoFectamine2000将经PacI线性化的pAdEasy-gfp-茁ARKct转染入人胚肾293细胞,包装并扩增出重组腺病毒颗粒rAd-gfp-茁ARKct。用氯化铯高速梯度离心、纯化rAd-gfp-茁ARKct。用rAd-GFP-茁ARKct干预去甲肾上腺素诱导的乳鼠心肌细胞肥大过程,观察对茁肌球蛋白重链(茁MHC)基因表达的影响。【结果】将pAdTrack-CMV-茁ARKct转入含pAdEasy-I的BJ5183菌后获得20%的阳性重组体克隆。重组腺病毒质粒在293细胞中包装并扩增出大量的腺病毒,经PCR鉴定含有茁ARKct编码基因。透析纯化得到重组腺病毒滴度为6.0×106pfu/mL。rAd-GFP-茁ARKct表达的茁ARKct可抑制乳鼠心肌细胞茁MHC的高表达。【结论】成功构建重组腺病毒载体,并在293细胞中包装、制备出可表达茁ARKct的重组腺病毒rAd-gfp-茁ARKct。
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关键词
绿色荧光蛋白
制备
重
组腺病毒载体
人胚肾293细胞
心肌细胞肥大
去甲
肾上腺素
肌球蛋白
重
链
PCR鉴定
穿梭质粒
骨架质粒
病毒颗粒
梯度离心
基因表达
编码基因
病毒滴度
线性化
MHC
抑制
剂
PME
Pac
包装
氯化铯
重
组体
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职称材料
参味宁郁片对三种药物诱发动物模型的抗抑郁作用研究
被引量：
1
2
作者
王雅欣
郭姗姗
+2 位作者
高英杰
图娅
崔晓兰
《中国比较医学杂志》
CAS
北大核心
2022年第1期57-61,共5页
目的探索参味宁郁片对三种药物诱发动物模型的抗抑郁机制。方法建立了三种药物诱发的动物模型,均在给药1周后进行造模,在加强单胺作用试验中,各组动物进行腹腔注射盐酸帕吉林(pargyline hydrochloride),再尾静脉注射5-羟色胺酸(5-hydrox...
目的探索参味宁郁片对三种药物诱发动物模型的抗抑郁机制。方法建立了三种药物诱发的动物模型,均在给药1周后进行造模,在加强单胺作用试验中,各组动物进行腹腔注射盐酸帕吉林(pargyline hydrochloride),再尾静脉注射5-羟色胺酸(5-hydroxytryptophan,5-HTP),观察25 min内的甩头次数。在抑制去甲肾上腺素(noradrenaline,NE)重吸收实验中,各给药组皮下注射NE后统计死亡率。在单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)抑制实验中,各给药组尾静脉注射盐酸色胺并逐只观察大鼠"蹬踩"运动。结果加强单胺作用实验:各给药组的甩头次数较模型组明显增多,并具有显著性差异。抑制NE重吸收实验:与模型组比较,各给药组小鼠的死亡率均明显增加,其中低剂量组与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。MAO抑制实验:模型组可出现明显的"蹬踩"运动,各给药组动物造模后的"蹬踩"运动次数较模型组虽有明显增多,但无显著性差异。结论参味宁郁片的抗抑郁作用可能与增强NE神经功能及五羟色胺(5-HT)两个方面有关。
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关键词
抑郁症
参味宁郁片
加强单胺作用
抑制去甲肾上腺素重吸收
单胺氧化酶
抑制
作用
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职称材料
题名
编码绿色荧光蛋白和βARKct的重组腺病毒的制备
被引量：
1
1
作者
单志新
郑猛
余细勇
林秋雄
符永恒
谭虹虹
林曙光
机构
广东省心血管病研究所冠心病研究重点实验室
出处
《中山大学学报（医学科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第4期392-395,408,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(30271287
30300421)
+1 种基金
广东省自然科学基金团队项目(015015)
广东省医学科学技术研究基金项目(A2002935)
文摘
【目的】制备编码绿色荧光蛋白(GFP)和G茁γ活性抑制剂茁ARKct的重组腺病毒载体。【方法】构建腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV-茁ARKct,经PmeI线性化后转化入含腺病毒骨架质粒pAdEasy-I的BJ5183菌,筛选获得重组腺病毒质粒pAdEasy-gfp-茁ARKct。用LipoFectamine2000将经PacI线性化的pAdEasy-gfp-茁ARKct转染入人胚肾293细胞,包装并扩增出重组腺病毒颗粒rAd-gfp-茁ARKct。用氯化铯高速梯度离心、纯化rAd-gfp-茁ARKct。用rAd-GFP-茁ARKct干预去甲肾上腺素诱导的乳鼠心肌细胞肥大过程,观察对茁肌球蛋白重链(茁MHC)基因表达的影响。【结果】将pAdTrack-CMV-茁ARKct转入含pAdEasy-I的BJ5183菌后获得20%的阳性重组体克隆。重组腺病毒质粒在293细胞中包装并扩增出大量的腺病毒,经PCR鉴定含有茁ARKct编码基因。透析纯化得到重组腺病毒滴度为6.0×106pfu/mL。rAd-GFP-茁ARKct表达的茁ARKct可抑制乳鼠心肌细胞茁MHC的高表达。【结论】成功构建重组腺病毒载体,并在293细胞中包装、制备出可表达茁ARKct的重组腺病毒rAd-gfp-茁ARKct。
关键词
绿色荧光蛋白
制备
重
组腺病毒载体
人胚肾293细胞
心肌细胞肥大
去甲
肾上腺素
肌球蛋白
重
链
PCR鉴定
穿梭质粒
骨架质粒
病毒颗粒
梯度离心
基因表达
编码基因
病毒滴度
线性化
MHC
抑制
剂
PME
Pac
包装
氯化铯
重
组体
Keywords
homologous recombination
adenoviruses
G protein
分类号
R394 [医药卫生—医学遗传学]
R979.5 [医药卫生—药品]
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职称材料
题名
参味宁郁片对三种药物诱发动物模型的抗抑郁作用研究
被引量：
1
2
作者
王雅欣
郭姗姗
高英杰
图娅
崔晓兰
机构
中国中医科学院中药研究所
北京中医药大学针灸推拿学院
出处
《中国比较医学杂志》
CAS
北大核心
2022年第1期57-61,共5页
基金
国家科技重大专项课题(重大新药创制)(2019ZX09301-005)。
文摘
目的探索参味宁郁片对三种药物诱发动物模型的抗抑郁机制。方法建立了三种药物诱发的动物模型,均在给药1周后进行造模,在加强单胺作用试验中,各组动物进行腹腔注射盐酸帕吉林(pargyline hydrochloride),再尾静脉注射5-羟色胺酸(5-hydroxytryptophan,5-HTP),观察25 min内的甩头次数。在抑制去甲肾上腺素(noradrenaline,NE)重吸收实验中,各给药组皮下注射NE后统计死亡率。在单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)抑制实验中,各给药组尾静脉注射盐酸色胺并逐只观察大鼠"蹬踩"运动。结果加强单胺作用实验:各给药组的甩头次数较模型组明显增多,并具有显著性差异。抑制NE重吸收实验:与模型组比较,各给药组小鼠的死亡率均明显增加,其中低剂量组与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。MAO抑制实验:模型组可出现明显的"蹬踩"运动,各给药组动物造模后的"蹬踩"运动次数较模型组虽有明显增多,但无显著性差异。结论参味宁郁片的抗抑郁作用可能与增强NE神经功能及五羟色胺(5-HT)两个方面有关。
关键词
抑郁症
参味宁郁片
加强单胺作用
抑制去甲肾上腺素重吸收
单胺氧化酶
抑制
作用
Keywords
depression
Shenwei Ningyu tablets
strengthening monoamine action
inhibition of norepinephrine reabsorption
monoamine oxidase inhibition
分类号
R-33 [医药卫生]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
编码绿色荧光蛋白和βARKct的重组腺病毒的制备
单志新
郑猛
余细勇
林秋雄
符永恒
谭虹虹
林曙光
《中山大学学报（医学科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2005
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
参味宁郁片对三种药物诱发动物模型的抗抑郁作用研究
王雅欣
郭姗姗
高英杰
图娅
崔晓兰
《中国比较医学杂志》
CAS
北大核心
2022
1
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