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茶树RAPD反应系统和扩增程序优化 被引量:28
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作者 陈亮 高其康 +2 位作者 杨亚军 虞富莲 陈大明 《茶叶科学》 CAS CSCD 1998年第1期16-20,共5页
以龙井43为材料,使用国产PCR仪,对茶树RAPD分析中影响PCR扩增结果的因素进行了研究,确定了茶树RAPD的最适反应系统和扩增程序,即在25μl反应体系中,含25~50ng模板DNA、2mmol/LMgCl2、各0.2mmo/LdNTPs、0.2μmol/L引物和0.5... 以龙井43为材料,使用国产PCR仪,对茶树RAPD分析中影响PCR扩增结果的因素进行了研究,确定了茶树RAPD的最适反应系统和扩增程序,即在25μl反应体系中,含25~50ng模板DNA、2mmol/LMgCl2、各0.2mmo/LdNTPs、0.2μmol/L引物和0.5~1.0UTanDNA聚合酶;扩增程序为:94℃预变性180s,94℃变性60s,38℃退火90s,72℃延伸120s,共进行40~45个循环,最后72℃延伸300~600s,这样可以取得较好的扩增结果。 展开更多
关键词 茶树 RAPD 反应系统 扩增程序
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洋葱(Alliumcepa L.)RAPD-PCR反应体系及扩增程序的优化 被引量:7
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作者 陈沁滨 侯喜林 +3 位作者 王建军 冷月强 蒋芳玲 薛萍 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2006年第4期434-438,共5页
为建立多态性高、稳定性好的洋葱RAPD-PCR反应体系,采用正交设计,研究了Taq酶、Mg2+、引物和dNTP 4种RAPD-PCR反应组分浓度变化对扩增结果的影响,在此基础上对模板DNA用量、扩增程序中退火温度和反应循环次数进行了筛选。试验结果表明,... 为建立多态性高、稳定性好的洋葱RAPD-PCR反应体系,采用正交设计,研究了Taq酶、Mg2+、引物和dNTP 4种RAPD-PCR反应组分浓度变化对扩增结果的影响,在此基础上对模板DNA用量、扩增程序中退火温度和反应循环次数进行了筛选。试验结果表明,洋葱20μl RAPD-PCR优化反应体系为1×Buffer、2.0 mmo1/L Mg2+、1.0 UTaqDNA聚合酶、200μmo1/L dNTP、0.6μmo1/L引物、2%甘油和15 ng DNA模板;PCR扩增程序为94℃预变性4 m in;94℃变性30 s,35℃退火40 s,72℃延长1.5 m in,45个循环;72℃保温延伸7 m in。 展开更多
关键词 洋葱 RAPD-PCR反应体系 扩增程序 正交设计
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小鼠RAPD-PCR反应体系及扩增程序的筛选 被引量:7
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作者 吴丰春 魏泓 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期19-21,共3页
目的:筛选优化小鼠RAPD-PCR反应体系及扩增程序。方法:以40条引物对9个品系的小鼠基因组DNA在各种不同条件下进行RAPD-PCR,分析比较扩增结果。结果:在下列反应体系及扩增程序下结果较好:在25μl的反应体... 目的:筛选优化小鼠RAPD-PCR反应体系及扩增程序。方法:以40条引物对9个品系的小鼠基因组DNA在各种不同条件下进行RAPD-PCR,分析比较扩增结果。结果:在下列反应体系及扩增程序下结果较好:在25μl的反应体系中含有10×bufer2.5μl,dNTP200μmol/L,Mg2+2.5mmol/L,引物0.2μmol/L,Taq酶1.5U,模板DNA20ng,扩增程序为94℃变性1min,38℃退火1min,72℃延伸2min,40个循环后接10min延伸。结论:以上述反应体系及扩增程序进行小鼠RAPD-PCR,扩增结果稳定。 展开更多
关键词 DNA 筛选 RAPD-PCR 小鼠 扩增程序
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正交设计优化绿竹ISSR-PCR体系和引物筛选 被引量:8
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作者 徐雯 瞿印权 +3 位作者 韩笑 何天友 荣俊冬 郑郁善 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期103-110,共8页
旨在建立绿竹ISSR-PCR最佳反应体系和扩增程序,并筛选适于绿竹ISSR-PCR分析的高多态性引物。以绿竹基因组DNA为ISSR-PCR扩增模板,采用正交试验方法,对d NTPs浓度、Mg2+浓度、Taq DNA聚合酶浓度、引物浓度、模板DNA用量设计5因素4水平试... 旨在建立绿竹ISSR-PCR最佳反应体系和扩增程序,并筛选适于绿竹ISSR-PCR分析的高多态性引物。以绿竹基因组DNA为ISSR-PCR扩增模板,采用正交试验方法,对d NTPs浓度、Mg2+浓度、Taq DNA聚合酶浓度、引物浓度、模板DNA用量设计5因素4水平试验,采用极差分析法和方差分析法对试验结果进行分析。并对退火温度和循环次数进行筛选,建立绿竹ISSR-PCR最佳反应体系和扩增程序。并利用优化后的体系对100条ISSR引物进行筛选。最终确定的最佳反应体系为:20μL的扩增体系中,d NTPs浓度为0.2 mmol/L,Mg^(2+)浓度为2.0 mmol/L,Taq DNA聚合酶浓度为1.5 U,引物浓度为0.4μmol/L,DNA浓度为60 ng,10×PCR Buffer体积为2μL、剩下用灭菌ddH_2O补全。各因素影响大小依次是:Mg^(2+)>d NTPs>模板DNA>Taq DNA聚合酶>引物。扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃变性45 s,(根据引物的退火温度)复性30 s,72℃延伸90 s,循环38次,72℃延伸10 min,4℃保存。以此体系为基础进行引物筛选,在100条ISSR引物中筛选出14条扩增条带清晰、多态性较高、重复性好的引物。 展开更多
关键词 绿竹 ISSR 正交试验设计 反应体系 扩增程序 引物筛选
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苹果黑星病菌SSR反应体系的优化 被引量:6
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作者 董艳玲 胡小平 +1 位作者 杨家荣 苟建军 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期1148-1152,共5页
通过对苹果黑星病菌基因组DNA的SSR反应中一些重要参数进行优化,结果表明,最适反应体系为:2 5μL体系中,10×Buffer Mg Cl2 2 0 mm ol/ L 2 .5μL ,d NTP 10 0μmol·L- 1 、引物0 .5μmol·L- 1 、Taq DNA聚合酶1.5 U ,DN... 通过对苹果黑星病菌基因组DNA的SSR反应中一些重要参数进行优化,结果表明,最适反应体系为:2 5μL体系中,10×Buffer Mg Cl2 2 0 mm ol/ L 2 .5μL ,d NTP 10 0μmol·L- 1 、引物0 .5μmol·L- 1 、Taq DNA聚合酶1.5 U ,DNA模板2 m g·L- 1 ,dd H2 O 19.5μL .PCR扩增程序为93℃,2 min,5 7℃,30 s,1个循环;72℃,1m in,93℃,30 s,5 7℃,30 s,4 0个循环;72℃,10 min. 展开更多
关键词 反应体系 黑星病菌 SSR 优化 苹果 基因组DNA DNA聚合酶 DNA模板 扩增程序 mol TAQ PCR 循环 引物
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八角ISSR-PCR反应体系的建立及引物筛选研究 被引量:5
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作者 吴涛 陈海云 +4 位作者 陈少瑜 宁德鲁 冯丹 李勇杰 张艳丽 《西部林业科学》 CAS 北大核心 2013年第2期8-13,共6页
以文山、广西2个居群6个单株的八角嫩叶为研究材料,以八角叶片基因组DNA为模板,在分析归纳相关树种ISSR-PCR体系的基础上,确定一个反应体系并对ISSR引物库进行筛选,同时结合正交设计针对具体引物进行体系优化。结果表明,八角的ISSR-PCR... 以文山、广西2个居群6个单株的八角嫩叶为研究材料,以八角叶片基因组DNA为模板,在分析归纳相关树种ISSR-PCR体系的基础上,确定一个反应体系并对ISSR引物库进行筛选,同时结合正交设计针对具体引物进行体系优化。结果表明,八角的ISSR-PCR反应体系(25μL)为DNA模板0.003~0.016 ng,Taq DNA聚合酶0.5~1.0 U,dNTPs 0.2 mmol.L-1,Mg2+浓度2.5~3.0 mmol.L-1,引物浓度0.6~0.8μmol.L-1。扩增程序为,94℃预变性5 min;94℃变性30 s,引物特异温度退火45 s,72℃延伸1 min,40个循环;72℃最后延伸7min;4℃保存。获得效果稳定并具有多态性的ISSR引物13条。研究结果可为八角遗传多样性分析和种质资源鉴定等研究奠定基础。 展开更多
关键词 八角 ISSR—PCR 反应体系 DNA模板 扩增程序 引物筛选
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绿竹ISSR-PCR反应体系的建立与优化 被引量:4
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作者 徐雯 瞿印权 +4 位作者 陈剑成 何天友 荣俊冬 陈礼光 郑郁善 《江苏农业科学》 北大核心 2017年第15期34-38,共5页
以绿竹基因组DNA为ISSR-PCR扩增模板,采用单因素试验方法,对dNTPs、Mg^(2+)、Taq DNA聚合酶、引物、模板DNA设置7个不同浓度梯度进行研究,并对退火温度和循环次数进行筛选,建立绿竹ISSR-PCR最佳反应体系和扩增程序,并利用优化后的体系对... 以绿竹基因组DNA为ISSR-PCR扩增模板,采用单因素试验方法,对dNTPs、Mg^(2+)、Taq DNA聚合酶、引物、模板DNA设置7个不同浓度梯度进行研究,并对退火温度和循环次数进行筛选,建立绿竹ISSR-PCR最佳反应体系和扩增程序,并利用优化后的体系对100条ISSR引物进行筛选。最终确定的最佳反应体系为:20μL的扩增体系中,dNTPs浓度为0.2 mol/L,Mg2+浓度为2.0 mmol/L,Taq DNA聚合酶用量为1.0 U,引物浓度为0.4μmol/L,DNA用量为50 ng,10×PCR buffer体积为2μL、剩余体积用灭菌dd H2O补全。扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃变性45 s,(根据引物的退火温度)复性30 s,72℃延伸90 s,循环38次;72℃延伸10 min,4℃保存。以此体系为基础进行引物筛选,在100条ISSR引物中筛选出14条扩增条带清晰、多态性较高、重复性好的引物。本研究建立了绿竹ISSR-PCR最佳反应体系并筛选出高多态性引物,为绿竹的指纹图谱、遗传多样性分析、分子育种和品种鉴定等研究提供了基础。 展开更多
关键词 绿竹 ISSR 反应体系 扩增程序 引物筛选
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漾濞核桃RAPD反应优化体系的建立 被引量:3
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作者 杨恩 陈少瑜 +2 位作者 张雨 范志远 习学良 《福建林业科技》 北大核心 2005年第4期25-28,48,共5页
以漾濞核桃中的大姚三台核桃为实验材料,通过对影响RAPD扩增结果的主要因子Tag酶、Mg+2、引物、模板DNA、dNTPs等不同的浓度和组合的试验研究,确定了漾濞核桃的最适反应体系和扩增程序,即在25μL反应体系中,0.75 u.L-1Taq DNA聚合酶,3.0... 以漾濞核桃中的大姚三台核桃为实验材料,通过对影响RAPD扩增结果的主要因子Tag酶、Mg+2、引物、模板DNA、dNTPs等不同的浓度和组合的试验研究,确定了漾濞核桃的最适反应体系和扩增程序,即在25μL反应体系中,0.75 u.L-1Taq DNA聚合酶,3.0 mmol.L-1Mg+2,0.3 mmol.L-1引物,含1.6 mg.L-1模板,2.5 ul 10×Buffer,dNTPs各0.2 mmol.L-1。扩增程序为:94℃预变性300 s,94℃变性40 s,36℃退火60 s,72℃链延伸120 s,45次循环后,72℃延伸600 s。 展开更多
关键词 漾濞核桃 RAPD(随机多态性DNA) 反应体系 扩增程序 品种鉴定
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RAPD法研究穗花杉遗传多样性的反应条件优化
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作者 朱柏芳 朱笃 +2 位作者 李思光 刘如龙 邓荣根 《江西师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2005年第2期142-145,共4页
以改进CTAB法抽提的中国特有濒危植物穗花杉嫩叶总DNA为模板,进行随机扩增多态性DNA(RAPD)最佳条件优化,结果表明:RAPD分析最佳反应体系为10×Buffer缓冲液2μL,模板70ng,Mg2+2.0mmol/L,dNTPs0.2mmol/L,引物0.60μmol/L,Taq酶1.5U,... 以改进CTAB法抽提的中国特有濒危植物穗花杉嫩叶总DNA为模板,进行随机扩增多态性DNA(RAPD)最佳条件优化,结果表明:RAPD分析最佳反应体系为10×Buffer缓冲液2μL,模板70ng,Mg2+2.0mmol/L,dNTPs0.2mmol/L,引物0.60μmol/L,Taq酶1.5U,PCR反应体积为20μL.最佳扩增程序为94℃5min,1个循环;94℃1min、37℃1min、72℃2min,40个循环;72℃10min,1个循环. 展开更多
关键词 反应条件优化 穗花杉 遗传多样性 RAPD法 改进CTAB法 随机多态性 Buffer 最佳反应体系 RAPD分析 MG^2+ 总DNA 濒危植物 Taq酶 扩增程序 反应体积 缓冲液 mol PCR 循环 模板
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