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MOI对HEK293细胞感染病毒后的生长代谢和腺病毒扩增效率的影响 被引量:7
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作者 刘旭平 范里 +2 位作者 朱明龙 张旭 谭文松 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第4期638-644,共7页
分别在方瓶贴壁和转瓶悬浮二种培养模式下,考察了感染复数(Multiplicity of Infection,MOI)对HEK293细胞感染病毒后的生长代谢和腺病毒扩增效率的影响。通过实验发现,感染病毒后的细胞跟未感染病毒相比较,其细胞生长受到严重限制,但仍... 分别在方瓶贴壁和转瓶悬浮二种培养模式下,考察了感染复数(Multiplicity of Infection,MOI)对HEK293细胞感染病毒后的生长代谢和腺病毒扩增效率的影响。通过实验发现,感染病毒后的细胞跟未感染病毒相比较,其细胞生长受到严重限制,但仍然保持着旺盛的代谢活动。结果表明:MOI对细胞感染病毒后的生长代谢和腺病毒扩增效率有显著影响。随着MOI增加,细胞死亡速率增加,其代谢速率也普遍上升。同时,MOI增加能有效地提高病毒感染率和单位细胞病毒颗粒数扩增效率,但过高的MOI亦会降低病毒滴度扩增效率,从而影响病毒包装质量。 展开更多
关键词 HEK293细胞 腺病毒 病毒扩增效率 MOI
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不同引物对和退火温度对盐生植物盐穗木内参基因β-actin扩增效率的影响 被引量:3
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作者 白雪芹 杨瑞瑞 曾幼玲 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期352-360,共9页
【目的】以盐生植物盐穗木为材料,研究不同引物对和不同退火温度对盐穗木内参基因β-actin扩增效率的影响。【方法】设计扩增β-actin基因的两对引物,标记为β-actin1和β-actin2,分别建立这两对引物扩增盐穗木β-actin基因和特异性引... 【目的】以盐生植物盐穗木为材料,研究不同引物对和不同退火温度对盐穗木内参基因β-actin扩增效率的影响。【方法】设计扩增β-actin基因的两对引物,标记为β-actin1和β-actin2,分别建立这两对引物扩增盐穗木β-actin基因和特异性引物扩增该物种的过氧化物酶基因POD(盐响应的代表性基因),在不同退火温度下的标准曲线和扩增曲线。【结果】不论55还是58℃退火温度,引物对β-actin1比引物对β-actin2有更好的扩增效率;在55℃退火温度下,引物对β-actin1有更高的扩增效率。在这两个退火温度下,分别以β-actin1和β-actin2引物对扩增β-actin基因作为内参,盐穗木POD基因的相对表达水平具有一定的差异性。【结论】引物和退火温度会影响荧光定量PCR的扩增效率,进而会影响靶基因的相对表达水平。 展开更多
关键词 盐穗木 不同引物对 退火温度 Β-ACTIN 扩增效率
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鉴定定量PCR不同引物对的扩增效率 被引量:3
3
作者 张静静 马长艳 孙玉洁 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期645-648,共4页
目的:采用载体构建及荧光定量PCR的方法比较BCL2等位基因不同部位PCR引物在定量分析中的扩增效率,判断其用于不同等位基因转录活性分析的可靠性。方法:用PCR扩增包含定量PCR目的片段的序列,然后将扩增产物分别插入pGEM-TEasy载体中,构建... 目的:采用载体构建及荧光定量PCR的方法比较BCL2等位基因不同部位PCR引物在定量分析中的扩增效率,判断其用于不同等位基因转录活性分析的可靠性。方法:用PCR扩增包含定量PCR目的片段的序列,然后将扩增产物分别插入pGEM-TEasy载体中,构建TA3重组载体,再以TA3载体为模板,采用荧光定量PCR方法比较引物对之间扩增效率。结果:定量PCR结果显示引物对之间扩增效率无明显差异。结论:所检测的PCR引物对之间的扩增效率一致,可用于比较分析mbr+/mbr-Nalm-6杂合子细胞系中两个等位基因表达活性。 展开更多
关键词 PCR 引物 扩增效率
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提高富含GC碱基DNA模板PCR扩增效率的方法 被引量:3
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作者 邢小黑 姜卫红 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期112-114,共3页
关键词 PCR 扩增效率 GC碱基 DNA模板
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细胞裂解法对植入前诊断中聚合酶链反应扩增效率的影响 被引量:1
5
作者 李崎 马燕琳 +3 位作者 潘乾 夏家辉 戴和平 夏昆 《湖南医科大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第3期201-203,共3页
目的 :探讨优化细胞裂解条件 ,提高植入前诊断中聚合酶链反应的扩增效率。方法 :吸取单个淋巴细胞或人胚胎单卵裂球 ,用碱裂解液、蛋白酶K裂解液和改良的蛋白酶K裂解液进行处理 ,随后以巢式 -聚合酶链反应扩增人肾上腺脑白质营养不良基... 目的 :探讨优化细胞裂解条件 ,提高植入前诊断中聚合酶链反应的扩增效率。方法 :吸取单个淋巴细胞或人胚胎单卵裂球 ,用碱裂解液、蛋白酶K裂解液和改良的蛋白酶K裂解液进行处理 ,随后以巢式 -聚合酶链反应扩增人肾上腺脑白质营养不良基因 (ALD基因 )的 3号外显子 ,比较其扩增效率。结果 :三种裂解液组对人淋巴细胞的扩增效率分别为 90 % ,74 % ,87% ,对人单卵裂球的扩增效率分别为 98% ,77% ,96 %。结论 :在植入前诊断中 。 展开更多
关键词 细胞裂解法 植入前诊断 聚合酶链反应 扩增效率 影响
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氧化石墨烯对聚合酶链式反应扩增效率、灵敏度和特异性的影响
6
作者 蒋城 杨中柱 +1 位作者 赵美莲 宋瑱 《环境化学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期724-729,共6页
以人类基因组DNA和志贺氏菌粗制裂解菌液为模板,扩增115 bp的Alu基因片段和402 bp的ipaH基因片段.通过设置氧化石墨烯(Graphene Oxide,GO)和模板的浓度为变量,分别研究了氧化石墨烯对聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)扩... 以人类基因组DNA和志贺氏菌粗制裂解菌液为模板,扩增115 bp的Alu基因片段和402 bp的ipaH基因片段.通过设置氧化石墨烯(Graphene Oxide,GO)和模板的浓度为变量,分别研究了氧化石墨烯对聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)扩增效率和灵敏度的影响;运用多轮PCR扩增方法研究了氧化石墨烯对聚合酶链式反应扩增特异性的影响.结果显示,氧化石墨烯有效提高PCR扩增效率的范围为9—14倍,提高PCR灵敏度一个数量级以及增加多轮PCR扩增中的两轮扩增反应.从原子力显微镜(Atomic force microscope,AFM)的结果可以看出,本文制备的氧化石墨烯片层厚度主要集中在0.5—0.8 nm,少数大于1 nm,总体具有较大的比表面积.除此之外,本文还发现当氧化石墨烯浓度到达μg·μL^(-1)后,引物二聚体与氧化石墨烯的浓度呈正比,说明氧化石墨烯优化PCR的主要影响因素是其与引物的相互作用. 展开更多
关键词 氧化石墨烯 聚合酶链式反应 扩增效率 灵敏度 特异性
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LAMP(环介导等温扩增)的原理及在寄生虫检测上的应用 被引量:7
7
作者 史亚东 赵子方 +3 位作者 朱丹 张龙现 宁长申 菅复春 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期935-939,共5页
2000年,Notomi等[1]建立了一种快速、简单、灵敏、特异并且低成本的核酸扩增方法——环介导等温扩增法(LAMP),这种新颖的核酸扩增方法具有许多优势[2-4]:(1)扩增效率极高,60min内扩增产物可达到靶基因的109~1010倍;(2)操作简单,
关键词 环介导等温 LAMP 寄生虫 应用 检测 方法 扩增效率 产物
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反向嵌套PCR法高效扩增辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA5′末端序列 被引量:8
8
作者 李秋莉 高晓蓉 +3 位作者 范琦 袁晓东 刘大伟 安利佳 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2001年第11期17-19,共3页
采用反向嵌套PCR法 ,根据已获得的辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA的部分序列 ,设计一条 5′末端磷酸化的特异性反转录引物和两对特异性反向嵌套PCR引物 ,成功地克隆了辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA 5′末端。与锚定PCR法相比 ,反向嵌套PCR法... 采用反向嵌套PCR法 ,根据已获得的辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA的部分序列 ,设计一条 5′末端磷酸化的特异性反转录引物和两对特异性反向嵌套PCR引物 ,成功地克隆了辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA 5′末端。与锚定PCR法相比 ,反向嵌套PCR法具有特异性强、扩增效率高等优点 ,是一种非常有效的扩增cDNA 5′末端序列的方法。 展开更多
关键词 反向嵌套PCR 辽宁碱蓬 甜菜碱醛脱氢酶 5′cDNA 末端序列 基因工程 RACE 反转录 克隆 扩增效率
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6种非洲猪瘟病毒荧光定量PCR检测试剂盒的比对
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作者 张倩 李梦莹 +2 位作者 尹清清 王廉 苏志鹏 《中国动物检疫》 2025年第9期96-103,117,共9页
为评估不同荧光定量PCR试剂盒对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的检测性能,以ASFV P72基因假病毒核酸质控品为标准物质,系统比较了6种试剂盒(A—F)的线性相关系数(R2)、扩增效率(E)、检出限(LOD)、分析特异性及反应条件... 为评估不同荧光定量PCR试剂盒对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的检测性能,以ASFV P72基因假病毒核酸质控品为标准物质,系统比较了6种试剂盒(A—F)的线性相关系数(R2)、扩增效率(E)、检出限(LOD)、分析特异性及反应条件等指标。结果显示:6种试剂盒的R2均大于0.980,LOD为3.8~60.8 copies/μL,与猪场常见病毒核酸均无交叉反应;E分别为88.74%、90.23%、75.41%、82.72%、88.16%、91.76%,仅B与F试剂盒为90%~110%;在LOD重复性试验(n=20)中,A、B、D、E试剂盒检出率均大于95%,而C、F试剂盒分别仅为50%和65%。此外,各试剂盒在检测时长(56~84 min)和模板添加量(5或10μL)方面存在差异。结果表明,6种试剂盒均具有良好的线性关系、分析特异性,但在E、LOD及LOD重复性方面存在一定差异。建议兽医实验室在使用试剂盒前对其性能进行科学评估。本研究为养殖场和兽医实验室选择ASFV荧光定量PCR检测试剂盒提供了参考。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 荧光定量PCR 性能比对 检出限 扩增效率
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不同引物及数据分析方法对定量PCR结果的影响 被引量:18
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作者 刘正霞 徐阳 +3 位作者 徐进梅 杨明夏 马磊 朱昌亮 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1112-1117,共6页
目的:研究不同引物及数据分析方法对实时荧光定量PCR SYBR Green染料法检测基因表达差异结果分析的影响。方法:通过Primer Express 2.0软件对目的基因CCND1、C-JUN分别设计4对不同引物进行SYBR Green染料法定量PCR扩增,并分别使用2-△... 目的:研究不同引物及数据分析方法对实时荧光定量PCR SYBR Green染料法检测基因表达差异结果分析的影响。方法:通过Primer Express 2.0软件对目的基因CCND1、C-JUN分别设计4对不同引物进行SYBR Green染料法定量PCR扩增,并分别使用2-△△CT法、Pfaffl法及相对标准曲线法计算肺癌紫杉醇敏感细胞株及耐药细胞株间目的基因的表达差异,分析不同引物和数据计算方法对实验结果的影响。结果:统计学分析表明,引物的扩增效率对定量PCR结果分析有显著影响,不同引物特异性扩增得到的样本间表达倍数有显著差异(P<0.05)。3种计算方法中,Pfaffl法与相对标准曲线法无统计学差异(P>0.05),而2-△△CT法与其他2种方法均有显著差异(P<0.05)。结论:引物的选择对于定量PCR结果有显著影响;Pfaffl法是更准确,更合理的相对定量计算方法。 展开更多
关键词 实时荧光定量PCR 2^-△△CT法 Pfaffl法 相对标准曲线法 扩增效率
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标准品制备方法对FQ-PCR定量基因表达水平的影响 被引量:2
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作者 陈军 李慧玲 +3 位作者 董建一 王福金 王爱国 王靖宇 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1064-1068,共5页
实时荧光定量PCR(FQ-PCR)标准曲线法准确定量基因表达的关键在于标准品与待检样本的扩增效率是否一致.为检测DNA标准品与样本cDNA扩增效率的一致性,探讨定量用标准品的最佳制备方法,本研究以脂肪酸结合蛋白5(Fabp5)、过氧化物酶体增殖... 实时荧光定量PCR(FQ-PCR)标准曲线法准确定量基因表达的关键在于标准品与待检样本的扩增效率是否一致.为检测DNA标准品与样本cDNA扩增效率的一致性,探讨定量用标准品的最佳制备方法,本研究以脂肪酸结合蛋白5(Fabp5)、过氧化物酶体增殖活化受体α(Ppar-α)及β肌动蛋白(β-Actin)的3个基因为对象,分别采用质粒纯化法、PCR产物直接纯化法、PCR产物凝胶回收法制备DNA标准品,10倍梯度稀释后用FQ-PCR制作标准曲线.并以10倍梯度稀释的样本cDNA标准曲线的参数为对照,进行比较分析.结果表明,不同方法制备的DNA标准品的扩增效率差异较大,并且与cDNA的扩增效率不一致,不能对cDNA样本进行准确定量.另外,虽然目的基因在cDNA样本中的拷贝未知,不能对基因表达水平进行绝对定量,但因不同cDNA样本的同一基因的扩增效率一致,可对基因的表达进行准确的相对定量. 展开更多
关键词 实时荧光定量PCR DNA标准品 CDNA 扩增效率
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荧光定量PCR技术优化及在草莓上的应用 被引量:1
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作者 张卿 邢宇 +1 位作者 曹庆芹 秦岭 《北京农学院学报》 2016年第4期21-25,共5页
【目的】为优化荧光定量PCR技术体系并在草莓研究中应用。【方法】以二倍体草莓(Fragaria vesca‘Ruegen’)为试材,草莓当中两个β-肌动蛋白基因家族成员Actin1和Actin2为内参基因,对比分析10μL和20μL反应体系条件下荧光定量PCR扩增... 【目的】为优化荧光定量PCR技术体系并在草莓研究中应用。【方法】以二倍体草莓(Fragaria vesca‘Ruegen’)为试材,草莓当中两个β-肌动蛋白基因家族成员Actin1和Actin2为内参基因,对比分析10μL和20μL反应体系条件下荧光定量PCR扩增反应。【结果】内参基因引物组合Actin1的扩增效率等指标优于Actin2;10μL反应体系中的扩增效率等指标优于20μL反应体系;内参基因Actin1在10μL反应体系下是草莓最优的荧光定量PCR技术体系。【结论】优化了草莓荧光定量PCR体系并应用该技术体系检测了草莓CrRLK1Ls家族成员的时空表达情况。 展开更多
关键词 荧光定量PCR 内参基因 草莓 扩增效率 CrRLK1Ls
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乳及乳制品中DNA提取方法的比较研究 被引量:3
13
作者 郭梁 刘国强 +2 位作者 罗建兴 唐媛媛 郭元晟 《农业与技术》 2021年第20期46-50,共5页
高质量DNA的提取是乳及乳制品真实性分析的先决条件。本研究对3种提取方法进行比较研究,采用传统十六烷基三甲基溴化铵法(Cetyltrimethylammonium Bromide,CTAB)、TaKaRa试剂盒法和MagAttract试剂盒法分别提取牛奶和蒙古族传统发酵乳制... 高质量DNA的提取是乳及乳制品真实性分析的先决条件。本研究对3种提取方法进行比较研究,采用传统十六烷基三甲基溴化铵法(Cetyltrimethylammonium Bromide,CTAB)、TaKaRa试剂盒法和MagAttract试剂盒法分别提取牛奶和蒙古族传统发酵乳制品(嚼克)2种样品的脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic acid,DNA),使用核酸蛋白分析仪测定其浓度和纯度,并通过琼脂糖凝胶电泳评价DNA的完整性;利用牛源性特异的实时荧光聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)方法检测模板DNA的检出限(Limit of detection,LOD)和标准曲线的扩增效率,对所提取的DNA的质量进行评价。结果表明:MagAttract试剂盒法提取的DNA条带单一清晰、无明显拖尾及降解的现象;相同浓度模板DNA的循环(Cycle threshold,Ct)值最小且扩增效率最高,表明此方法提取的DNA质量最好、完整性最高。目前关于乳及乳制品高质量DNA提取的方法研究较少,MagAttract试剂盒法将为乳制品DNA的提取以及乳制品真实性分析提供方法依据。 展开更多
关键词 DNA提取 琼脂糖凝胶电泳 检出限 扩增效率
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LAMP研究中的常见问题分析及解决方法 被引量:2
14
作者 杨卓 《现代畜牧兽医》 2016年第7期53-57,共5页
本文通过《小反刍兽疫病毒RT-LAMP快速检测和鉴别方法的建立》研究中的相关扩增曲线和试验结论,对LAMP研究中出现的几种问题进行了初步探讨,并提出解决方案。文章从气溶胶污染、非特异性扩增、扩增效率不高和扩增曲线常见问题分析等方面... 本文通过《小反刍兽疫病毒RT-LAMP快速检测和鉴别方法的建立》研究中的相关扩增曲线和试验结论,对LAMP研究中出现的几种问题进行了初步探讨,并提出解决方案。文章从气溶胶污染、非特异性扩增、扩增效率不高和扩增曲线常见问题分析等方面,分析其产生原因并总结了相关解决办法,从而为今后的LAMP技术研究和推广做出贡献。 展开更多
关键词 LAMP技术 气溶胶污染 非特异性 扩增效率不高 曲线
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革胡子鲶MHC基因表达qPCR分析的引物设计与评估 被引量:1
15
作者 李转转 王妍 +4 位作者 高金伟 王晓梅 陈成勋 李涛 莫宝霖 《天津农学院学报》 CAS 2016年第4期33-37,42,共6页
为应用实时荧光定量PCR(qPCR)技术分析革胡子鲶主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)基因的表达谱,本研究利用Primer 5软件设计扩增革胡子鲶MHC基因片段的引物并进行qPCR评估。结果显示:引物MHCF1-MHCR3在qPCR... 为应用实时荧光定量PCR(qPCR)技术分析革胡子鲶主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)基因的表达谱,本研究利用Primer 5软件设计扩增革胡子鲶MHC基因片段的引物并进行qPCR评估。结果显示:引物MHCF1-MHCR3在qPCR扩增时,融解曲线为单一尖锐峰;标准曲线分析显示:引物的扩增效率为99.3%,R2值为0.998。上述结果说明该对引物具有良好的扩增特异性和扩增效率,满足了qPCR扩增的要求。本研究为革胡子鲶MHCⅠ基因表达的qPCR分析奠定了基础。 展开更多
关键词 革胡子鲶 主要组织相容性复合体 实时荧光定量PCR 融解曲线 扩增效率
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番茄褪绿病毒TaqMan荧光定量PCR快速检测方法的建立与应用 被引量:4
16
作者 王吉成 李洁 +1 位作者 丁天波 褚栋 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期159-165,共7页
【目的】本研究旨在建立TaqMan实时荧光定量PCR(TaqMan RT-qPCR)技术,快速检测单头烟粉虱Bemisia tabaci体内的番茄褪绿病毒(tomato chlorosis virus,ToCV)。【方法】根据ToCV外壳蛋白保守序列设计了1对特异性引物和1条TaqMan探针,建立... 【目的】本研究旨在建立TaqMan实时荧光定量PCR(TaqMan RT-qPCR)技术,快速检测单头烟粉虱Bemisia tabaci体内的番茄褪绿病毒(tomato chlorosis virus,ToCV)。【方法】根据ToCV外壳蛋白保守序列设计了1对特异性引物和1条TaqMan探针,建立了TaqMan RT-qPCR方法;与常规PCR检测进行比较,检测该方法的灵敏度与特异性;并应用该方法对单头烟粉虱成虫体内ToCV进行了快速检测。【结果】本研究构建的TaqMan RT-qPCR检测ToCV的标准曲线,其循环阈值(Ct值)与模板浓度具有良好的线性关系,扩增效率为98%。该方法对ToCV的最低检测浓度为8.3×10 copies/μL,灵敏度是常规RT-PCR的1000倍。该方法与田间番茄两种重要病毒番茄黄化曲叶病毒(tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)和番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus,TSWV)检测无交叉反应。单头烟粉虱成虫ToCV检测结果表明,温室内ToCV侵染植株上烟粉虱携毒率为100%,田间烟粉虱的携毒率为30%。【结论】本研究建立的TaqMan RT-qPCR检测方法,可快速有效检测单头烟粉虱体内ToCV携毒情况,为该病毒病的防控提供了技术支撑。 展开更多
关键词 番茄褪绿病毒 烟粉虱 外壳蛋白 携毒率 扩增效率 TAQMAN RT-QPCR
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人体脑组织福尔马林固定石蜡包埋样本中长链非编码RNA的提取及定量分析方法 被引量:2
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作者 吕叶辉 李志宏 +4 位作者 刘丽 黎世莹 李堃 杨智昉 陈忆九 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期400-406,共7页
目的·比较脑组织新鲜样本和福尔马林固定石蜡包埋(formalin-fixed paraffin-embedded,FFPE)样本中RNA的质量,并分析长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)的表达情况。方法·收集不同保存条件下的FFPE及成对新鲜脑组织,... 目的·比较脑组织新鲜样本和福尔马林固定石蜡包埋(formalin-fixed paraffin-embedded,FFPE)样本中RNA的质量,并分析长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)的表达情况。方法·收集不同保存条件下的FFPE及成对新鲜脑组织,提取并检测RNA质量,运用实时定量PCR(RT-q PCR)分析各RNA指标的扩增效率和表达稳定度,筛选内参指标并对比不同扩增长度候选指标的△Ct值改变情况,以明确FFPE样本中lnc RNA真实表达水平。结果·FFPE样本中RNA纯度相对较高,但完整性明显低于新鲜样本。所有指标均成功扩增,长链RNA的扩增效率与产物长度、样本处理方式、保存温度及保存时间有关,而5S、mi R-9及mi R-125b扩增效率均接近理想状态并在所有样本中稳定表达,适合作为内参指标。与新鲜样本相比,在4℃保存的FFPE样本中,只有HAR1F和MALAT1-L(>200 bp)的△Ct值升高;在室温保存的FFPE样本中,多数指标的△Ct值显著增加,但是短扩增(<60 bp)指标在所有样本中表达一致。结论·尽管处理方式和保存条件会影响组织RNA的完整性,但通过选择合适的扩增长度及内参指标,能够准确定量FFPE组织中lnc RNA的表达水平。 展开更多
关键词 脑组织 福尔马林固定石蜡包埋 RNA 质量 扩增效率 内参指标 长链非编码RNA
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山羊绒和绵羊毛混合物荧光PCR法测试研究 被引量:2
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作者 李典典 《针织工业》 北大核心 2023年第3期86-88,共3页
根据GB/T 36433—2018《纺织品山羊绒和绵羊毛的混合物DNA定量分析荧光PCR法》标准,通过试验计算得出羊绒和羊毛的扩增效率分别为95.26%和98.60%,并以此对方法中用到的引物、探针和扩增条件等进行进一步验证。此外,结合固相萃取技术,探... 根据GB/T 36433—2018《纺织品山羊绒和绵羊毛的混合物DNA定量分析荧光PCR法》标准,通过试验计算得出羊绒和羊毛的扩增效率分别为95.26%和98.60%,并以此对方法中用到的引物、探针和扩增条件等进行进一步验证。此外,结合固相萃取技术,探究常规不过柱法、常规过柱法和试剂盒法3种不同前处理方法对羊绒和羊毛混合物样品测试结果的影响。结果表明:常规不过柱法有局限性,仅适用于颜色较浅的样品;而常规过柱法和试剂盒法在测试颜色较深的样品方面有一定的优势,在定性和定量方面结果比较一致;这3种方法可以满足试验者的不同需求,进一步提高试验效率。 展开更多
关键词 羊绒 羊毛 纤维定量分析 荧光PCR法 固相萃取 扩增效率
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脐血乙型肝炎病毒核酸载量检测 被引量:1
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作者 余南 陈小坚 +1 位作者 毕晓云 张云娇 《实用医学杂志》 CAS 2007年第13期1948-1950,共3页
目的:评价脐血乙型肝炎病毒(hepatitis Bvirus,HBV)核酸载量检测结果。方法:通过建立扩增效率分析法,评价脐血进行HBV-DNA定量检测的有效性;通过比较脐血HBV血清学标志物的检测结果与脐血标本HBV-DNA定量检测结果,评价检测方法。结果:HB... 目的:评价脐血乙型肝炎病毒(hepatitis Bvirus,HBV)核酸载量检测结果。方法:通过建立扩增效率分析法,评价脐血进行HBV-DNA定量检测的有效性;通过比较脐血HBV血清学标志物的检测结果与脐血标本HBV-DNA定量检测结果,评价检测方法。结果:HBV血清学标志物检测结果为大三阳,即HBsAg(+)、HBeAg(+)和HBcAb(+)的乙型病毒性肝炎产妇,其新生儿脐血标本在HBV-DNA定量检测中,20例中有13例(65%)发生扩增,扩增效率分析与其他血清标本差异无显著性;该20例脐血标本的HBV血清学标志物检测结果HBcAb(+)12例(60%),HBeAg(+)11例(55%),而其中HBsAg(+)仅1例(5%)。结论:脐血标本可用于检测HBV核酸载量。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 脐血 荧光定量PCR 扩增效率
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