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松属部分种的ISSR-PCR扩增体系优化及鉴别 被引量：1
1
作者 赵虎 王玉 +1 位作者 王晓燊 洑香香 《林业科技开发》 2010年第5期64-67,共4页
对松属部分种的ISSR-PCR的反应体系及扩增程序进行优化,并进行种质鉴别。优化的10μL扩增体系为:Taq酶0.5 U,10×Buffer(Mg2+free),dNTP 0.35 mmol/L,Mg2+2.25 mmol/L,20ng DNA,0.8μL引物。扩增程序为:94℃预变性7 min,然后进行40... 对松属部分种的ISSR-PCR的反应体系及扩增程序进行优化,并进行种质鉴别。优化的10μL扩增体系为:Taq酶0.5 U,10×Buffer(Mg2+free),dNTP 0.35 mmol/L,Mg2+2.25 mmol/L,20ng DNA,0.8μL引物。扩增程序为:94℃预变性7 min,然后进行40个循环:94℃变性30 s,56℃退火45 s,72℃延伸2 min;最后72℃延伸7 min,4℃保温。从100条UBC系列引物中筛选出5条特异性强、稳定性好的引物UBC823、UBC840、UBC841、UBC855、UBC873,扩增的特异性条带可对松属的7个种进行鉴别。 展开更多
关键词 松属 ISSR-PCR 扩增体系优化 鉴别
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石蒜SRAP-PCR扩增体系的建立与优化 被引量：34
2
作者 袁菊红 权俊萍 +3 位作者 胡绵好 孙视 彭峰 夏冰 《植物资源与环境学报》 CAS CSCD 2007年第4期1-6,共6页
以陕西产野生石蒜〔Lycorisradiata (L’Hr.)Herb.〕为材料,通过单因子实验分别研究了模板DNA、Mg2+、dNTPs、引物浓度及Taq DNA聚合酶用量对石蒜SRAP分子标记扩增体系的影响,并对扩增体系进行了优化。优化后的反应体系总体积为10μL,... 以陕西产野生石蒜〔Lycorisradiata (L’Hr.)Herb.〕为材料,通过单因子实验分别研究了模板DNA、Mg2+、dNTPs、引物浓度及Taq DNA聚合酶用量对石蒜SRAP分子标记扩增体系的影响,并对扩增体系进行了优化。优化后的反应体系总体积为10μL,含20ng模板DNA、3.0mmol·L-1Mg2+、0.20mmol·L-1dNTPs、0.4μmol·L-1引物和0.50UTaq DNA聚合酶。运用优化体系对9个石蒜居群的基因组DNA进行扩增,获得的DNA条带清晰,多态性比较丰富。说明SRAP-PCR可用于石蒜属植物的亲缘关系、系统演化、物种鉴别和遗传多样性等领域的研究。 展开更多
关键词 石蒜 SRAP—PCR 扩增体系优化 遗传多样性
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香菇SRAP扩增体系的建立与优化 被引量：17
3
作者 付立忠 魏海龙 +3 位作者 李海波 吴庆其 吴大丰 吴学谦 《食用菌学报》 2006年第4期10-20,共11页
为了建立稳定的香菇(Lentinula edodes)SRAP(sequence-related amplified polymorphis m,相关序列扩增多态性)分子标记技术体系,以香菇(Lentinula edodes)为材料,采用SDS-CTAB(sodium dodecyl sulfate-cetylri methylammoniumbromide)... 为了建立稳定的香菇(Lentinula edodes)SRAP(sequence-related amplified polymorphis m,相关序列扩增多态性)分子标记技术体系,以香菇(Lentinula edodes)为材料,采用SDS-CTAB(sodium dodecyl sulfate-cetylri methylammoniumbromide)法提取菌丝体基因组DNA,用琼脂糖检测扩增产物,筛选优化了SRAP扩增条件。可用于香菇SRAP分析的最佳PCR条件为20μL PCR反应体系中,模板DNA25ng,Buffer l×,Mg2+2.5mmol/L,dNTP Mixture0.2mmol/L,引物0.4μmol/L,Taq DNA聚合酶1.5U。优化后的SRAP体系目标条带增多,重现性好。 展开更多
关键词 香菇 分子标记 扩增体系优化 SRAP
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怀地黄SRAP扩增体系的建立与引物的筛选 被引量：6
4
作者 周春娥 谷凤平 +2 位作者 路淑霞 段红英 周延清 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期256-260,273,共6页
为建立适合怀地黄SRAP-PCR分子标记技术体系,通过单因子实验分别研究了DNA模板浓度、TaqDNA聚合酶浓度、Mg2+浓度、引物浓度以及dNTP浓度对怀地黄SRAP扩增反应的影响,确立了适合怀地黄SRAP最佳反应体系为:在25μL的反应体系中,模板DNA量... 为建立适合怀地黄SRAP-PCR分子标记技术体系,通过单因子实验分别研究了DNA模板浓度、TaqDNA聚合酶浓度、Mg2+浓度、引物浓度以及dNTP浓度对怀地黄SRAP扩增反应的影响,确立了适合怀地黄SRAP最佳反应体系为:在25μL的反应体系中,模板DNA量20ng/25μL、2.5mmol/LMg2+、0.32μmol/L的上下游引物、0.30μmol/L的dNTP以及2.5UTaq酶,并利用确定的体系从88个引物组合中筛选出12对适合怀地黄SRAP-PCR反应的引物。 展开更多
关键词 怀地黄 分子标记 扩增体系优化 SRAP 引物的筛选
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分蘖洋葱ISSR-PCR扩增体系的建立 被引量：1
5
作者 刘淑芹 吴凤芝 +1 位作者 刘守伟 潘凯 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期130-135,共6页
以分蘖洋葱幼嫩叶片DNA为试材,采用单因素试验,对ISSR-PCR扩增体系中的退火温度、模板DNA量、Mg2+浓度、dNTP浓度、Taq酶含量以及引物浓度等各因素进行优化。结果表明,在反应体系为25μL反应液中,包含DNA模板40 ng(2μL),10×PCR Bu... 以分蘖洋葱幼嫩叶片DNA为试材,采用单因素试验,对ISSR-PCR扩增体系中的退火温度、模板DNA量、Mg2+浓度、dNTP浓度、Taq酶含量以及引物浓度等各因素进行优化。结果表明,在反应体系为25μL反应液中,包含DNA模板40 ng(2μL),10×PCR Buffer 3μL,Mg2(+2.5 mmol.L-1)2μL,dNTPs(2.5 mmol.L-1)3μL,引物(5 mmol.L-1)3μL,Taq酶(5 U.μL-1)0.4μL,退火温度为56℃时,分蘖洋葱ISSR-PCR扩增获得最佳效果,初步建立分蘖洋葱叶片最佳ISSR-PCR扩增体系,为ISSR分子标记技术应用于分蘖洋葱种群遗传多样性分析、遗传图谱构建、核心种质资源保存利用等奠定分子生物学的理论基础和技术支撑。 展开更多
关键词 分蘖洋葱 ISSR-PCR 扩增体系优化
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均匀设计优化杨属的SRAP-PCR反应体系 被引量：7
6
作者 郭丽琴 卫尊征 +3 位作者 张金凤 王欢 李贤 郭军 《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期34-38,共5页
采用均匀设计方法,对影响杨属SRAP-PCR体系的MgCl2、dNTPs、引物、TaqDNA聚合酶和模板浓度等因素分别进行了U16(45)和U12(35)两轮优化,建立了适用于杨属的SRAP-PCR反应体系。在25μL反应体系中,MgCl23.5mmol/L、dNTPs0.20mmol/L、引物0... 采用均匀设计方法,对影响杨属SRAP-PCR体系的MgCl2、dNTPs、引物、TaqDNA聚合酶和模板浓度等因素分别进行了U16(45)和U12(35)两轮优化,建立了适用于杨属的SRAP-PCR反应体系。在25μL反应体系中,MgCl23.5mmol/L、dNTPs0.20mmol/L、引物0.44μmol/L、TaqDNA聚合酶1.50U、模板浓度28ng/L为最适条件。在此基础上又对退火温度进行了摸索,结果发现,扩增结果对退火温度变化不敏感。最后运用优化体系对杨属3派10个种共16个单株的DNA进行扩增验证,结果获得的DNA条带清晰,多态性比较丰富。说明这一优化的SRAP-PCR反应体系可用于杨属不同种间亲缘关系、系统进化和遗传多样性等方面的研究。 展开更多
关键词 杨属 均匀设计 SRAP--PCR 扩增体系优化
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怀地黄SRAP分子标记优化体系的建立 被引量：3
7
作者 周春娥 谷凤平 +2 位作者 路淑霞 段红英 周延清 《湖北农业科学》 北大核心 2009年第3期536-540,共5页
为了建立适宜怀地黄的SRAP反应体系,以22个不同类型的怀地黄品种为材料,研究了PCR反应体系的主要成分对SRAP扩增结果的影响。对SRAP反应体系中的DNA模板浓度、TaqDNA聚合酶浓度、Mg2+浓度、引物浓度以及dNTP浓度进行了探索,确立的适合... 为了建立适宜怀地黄的SRAP反应体系,以22个不同类型的怀地黄品种为材料,研究了PCR反应体系的主要成分对SRAP扩增结果的影响。对SRAP反应体系中的DNA模板浓度、TaqDNA聚合酶浓度、Mg2+浓度、引物浓度以及dNTP浓度进行了探索,确立的适合怀地黄SRAP反应的体系为:在25μL的反应体系中,模板DNA20ng、2.5mmol·L-1Mg2+、0.32μmol·L-1的上下游引物、0.30mmol·L-1的dNTPs以及2.5UTaq酶。并利用该反应体系对怀地黄22个不同品种进行了SRAP反应,发现不同品种间的DNA谱带多态性丰富,证实该体系稳定可靠,可以用于怀地黄的分子标记研究。 展开更多
关键词 怀地黄 相关序列扩增多态性分子标记 扩增体系优化
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八仙花SRAP反应体系的建立与优化 被引量：8
8
作者 李艳香 李达 +2 位作者 李炎林 彭尽晖 朱霁琪 《湖南农业科学》 2008年第6期14-16,45,共4页
为建立适合八仙花SRAP-PCR分子标记技术体系,以八仙花栽培品种H.macrophylla‘Lavbla’为材料,通过单因子实验分别研究了模板DNA、dNTPs、Mg2+、Taq酶浓度和引物用量对八仙花SRAP扩增反应的影响,确立了八仙花SRAP分析的最佳反应体系为25... 为建立适合八仙花SRAP-PCR分子标记技术体系,以八仙花栽培品种H.macrophylla‘Lavbla’为材料,通过单因子实验分别研究了模板DNA、dNTPs、Mg2+、Taq酶浓度和引物用量对八仙花SRAP扩增反应的影响,确立了八仙花SRAP分析的最佳反应体系为25μl:模板DNA60ng、Mg2+2.0mmol/L、dNTPs0.7mmol/L、Taq酶0.5U、引物0.7μmol/L×2、10×PCRBuffer2.5μl,该反应条件下八仙花SRAP扩增条带清晰,多态性丰富。 展开更多
关键词 八仙花 SRAP 扩增体系优化
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油莎豆SRAP-PCR体系优化及遗传多样性分析 被引量：3
9
作者 赵琦琦 郭玉静 +3 位作者 于梦斐 王颖 高文伟 张斌 《山东农业科学》 北大核心 2022年第8期31-38,共8页
以16份油莎豆种质资源为材料,用改良的CTAB法提取基因组DNA,利用单因素试验和正交试验研究引物浓度、混合酶体积和DNA模板含量3个因素对油莎豆SRAP-PCR扩增结果的影响,以优化其SRAP-PCR体系,并对供试油莎豆种质材料的遗传多样性进行分... 以16份油莎豆种质资源为材料,用改良的CTAB法提取基因组DNA,利用单因素试验和正交试验研究引物浓度、混合酶体积和DNA模板含量3个因素对油莎豆SRAP-PCR扩增结果的影响,以优化其SRAP-PCR体系,并对供试油莎豆种质材料的遗传多样性进行分析。结果表明,混合酶体积对SRAP-PCR反应体系影响最大,引物浓度影响最小;油莎豆SRAP-PCR总体系为15μL时,引物浓度为0.5μmol/L、混合酶体积为10.5μmol/L、DNA模板含量为80 ng的扩增效果最佳。利用最佳扩增体系,从102对引物组合中筛选出30对多态性引物,共扩增出289个多态性位点,平均多态性比率为92.82%。进一步对16份油莎豆种质的遗传多样性进行分析,结果显示其遗传一致度范围为0.60~0.93,遗传距离范围为0.07~0.40,表明供试油莎豆种质资源的遗传背景差异较小;UPGMA聚类结果表明,油莎豆种质资源亲缘关系受油莎豆品种特性和地域的影响。本研究结果可为油莎豆种质资源的多样性评价及鉴定提供方法和技术,并为其遗传育种提供依据。 展开更多
关键词 油莎豆 SRAP-PCR 扩增体系优化 遗传多样性
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怀地黄SRAP分子标记体系的建立与DNA指纹图谱的构建 被引量：14
10
作者 谷凤平 周春娥 +4 位作者 路淑霞 姚换灵 王芳 段红英 周延清 《河南师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期175-178,共4页
以怀地黄DNA为模板,进行SRAP反应条件的优化及DNA指纹图谱构建,优化的反应体系为:25μL的体积中,模板DNA 20 ng,Mg2+浓度2.5 mmol.L-1,上下游引物各0.36μmol.L-1,dNTPs 0.30 mmol.L-1,Taq DNA酶2.0 U.构建了怀地黄23个品种的DNA指纹图... 以怀地黄DNA为模板,进行SRAP反应条件的优化及DNA指纹图谱构建,优化的反应体系为:25μL的体积中,模板DNA 20 ng,Mg2+浓度2.5 mmol.L-1,上下游引物各0.36μmol.L-1,dNTPs 0.30 mmol.L-1,Taq DNA酶2.0 U.构建了怀地黄23个品种的DNA指纹图谱,为怀地黄品种鉴定、遗传多样性分析、分子标记辅助育种和质量综合评价等研究奠定了基础. 展开更多
关键词 怀地黄 SRAP扩增体系优化 SRAP DNA指纹图谱
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