利用RT-PCR检测葡萄扇叶病毒的研究 被引量：13

1

作者 何水涛 周厚成 +1 位作者 张亚冰 郭卫东 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期186-187,共2页

以一年生品丽珠葡萄品种为试材，改进葡萄叶片总RNA的提取方法，获得了纯度较高、完整性较好的总RNA，在此基础上进行反转录和PCR扩增，检测到了葡萄扇叶病毒（GFLV), 建立了GFLV的RT－PCR检测程序，并得到应用。

关键词 葡萄扇叶病毒 RT-PCR 检测

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葡萄扇叶病毒RT-PCR检测技术研究 被引量：6

2

作者 牛建新 鲁晓燕 陈萍 《西北农业学报》 CAS CSCD 2003年第3期81-85,共5页

以扇叶病株为材料,根据病毒编码外壳蛋白的核苷酸序列,设计特异引物P_1(1,064—1,083),P_2(762—781),建立了以RNA为模板的GFLV的RT-PCR检测体系。PCR产物电泳谱带明显,与预期的引物应扩增321 bp片段完全吻合。并利用建立起来的技术体系... 以扇叶病株为材料,根据病毒编码外壳蛋白的核苷酸序列,设计特异引物P_1(1,064—1,083),P_2(762—781),建立了以RNA为模板的GFLV的RT-PCR检测体系。PCR产物电泳谱带明显,与预期的引物应扩增321 bp片段完全吻合。并利用建立起来的技术体系,对田间葡萄进行了随机取样检测,取得了很好效果。此方法操作简单,检测周期短,准确率高,具有广泛和更进一步的应用价值。 展开更多

关键词 葡萄扇叶病毒 RT-PCR 检测 RNA 引物

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间接酶联免疫吸附试验检测葡萄扇叶病毒的研究和应用 被引量：6

3

作者 郭德银 李知行 蔡文启 《果树科学》 CSCD 北大核心 1991年第4期215-218,共4页

采用蛋白A抗体夹心和异种动物抗体夹心两种间接酶联免疫吸附试验(ELISA)直接检测葡萄叶片和试管苗中的葡萄扇叶病毒,使试验程序简化,灵敏度与双抗体夹心ELISA直接法相当或较高。检测结果表明,经检测的103样品,其中田间品种扇叶病毒带毒... 采用蛋白A抗体夹心和异种动物抗体夹心两种间接酶联免疫吸附试验(ELISA)直接检测葡萄叶片和试管苗中的葡萄扇叶病毒,使试验程序简化,灵敏度与双抗体夹心ELISA直接法相当或较高。检测结果表明,经检测的103样品,其中田间品种扇叶病毒带毒率高达74.3%,热处理试管苗为5.6%,国外引进的脱毒品种(系)也有17.7%带毒。 展开更多

关键词 葡萄 病毒 检测 扇叶病毒 ELISA

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葡萄扇叶病毒的ELISA检测技术 被引量：11

4

作者 谷洪仓 严敦余 +2 位作者 刘焕庭 朱汉城 郭兴启 《山东农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 1994年第1期82-86,共5页

本文是关于葡萄扇叶病毒ＥＬＩＳＡ检测技术的报告。采用Ｌ．ｐｉｎｋ的方法提纯病毒，制备了兔抗血清和小鼠腹水抗体，效价分别达１：５１２００和１：５×１０￣６，特异性较强。经间接双抗体夹心ＥＬＩＳＡ检测ＧＦＶ提纯病毒最... 本文是关于葡萄扇叶病毒ＥＬＩＳＡ检测技术的报告。采用Ｌ．ｐｉｎｋ的方法提纯病毒，制备了兔抗血清和小鼠腹水抗体，效价分别达１：５１２００和１：５×１０￣６，特异性较强。经间接双抗体夹心ＥＬＩＳＡ检测ＧＦＶ提纯病毒最低浓度为３ｎｇ／ｍｌ。对葡萄的根、幼叶和嫩茎抽提液检测结果一致，稀释倍数１：２０。 展开更多

关键词 葡萄 葡萄扇叶病毒 检测 ELISA

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甘肃葡萄扇叶病毒和卷叶病毒的检测 被引量：3

5

作者 谭雪莲 马静芳 曹孜义 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2005年第1期65-68,共4页

采用 DAS-ELISA 检测方法对甘肃地区的葡萄主要品种进行扇叶病毒和卷叶病毒的调查和测定。结果表明,这两种病毒病在甘肃地区的主要葡萄产区均有发生。兰州地区和一些老的葡萄产区葡萄带病毒病较严重。通过对比植株下部枝条的幼叶、幼茎... 采用 DAS-ELISA 检测方法对甘肃地区的葡萄主要品种进行扇叶病毒和卷叶病毒的调查和测定。结果表明,这两种病毒病在甘肃地区的主要葡萄产区均有发生。兰州地区和一些老的葡萄产区葡萄带病毒病较严重。通过对比植株下部枝条的幼叶、幼茎、老叶和老茎病原的检测结果,说明植株下部幼嫩组织是卷叶病毒最适的检测部位。 展开更多

关键词 葡萄 扇叶病毒 卷叶病毒 DAS—ELISA

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葡萄扇叶病毒外壳蛋白基因克隆和植物表达载体的构建 被引量：1

6

作者 李红叶 陈力耕 周雪平 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期646-648,共3页

用RT-PCR法从葡萄扇叶病毒杭州分离物(GFLV-H)基因组RNA中扩增了该病毒分离物的外壳蛋白基因cDNA片段,并克隆到质粒pGEM-T-easyVector.序列分析结果表明,该基因含有1515个核苷酸,编码504个氨基酸,其核苷酸和推导的氨基酸与GFLV法国分离... 用RT-PCR法从葡萄扇叶病毒杭州分离物(GFLV-H)基因组RNA中扩增了该病毒分离物的外壳蛋白基因cDNA片段,并克隆到质粒pGEM-T-easyVector.序列分析结果表明,该基因含有1515个核苷酸,编码504个氨基酸,其核苷酸和推导的氨基酸与GFLV法国分离物F13的同源性分别为88%和95%.目前该基因已成功地克隆到植物表达载体pBI121,经三亲交配导入到根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)LBA4404中. 展开更多

关键词 葡萄 扇叶病毒 外壳蛋白 基因克隆 植物 表达载体

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葡萄扇叶病毒杭州分离物(GFLV-H)P_(38)蛋白基因克隆及序列分析 被引量：1

7

作者 李红叶 陈力耕 周雪平 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期34-38,共5页

为了证实GFLV-HP38蛋白的性质及其在寄主扩散中的作用,根据葡萄扇叶病毒(Grapevinefanleafvirus,GFLV)法国分离物F13RNA2序列合成特异性引物,利用RT-PCR从GFLV-H基因组中扩增出P38蛋白基因的cDNA片段,并克隆到pGEM-T-easyvector上。序... 为了证实GFLV-HP38蛋白的性质及其在寄主扩散中的作用,根据葡萄扇叶病毒(Grapevinefanleafvirus,GFLV)法国分离物F13RNA2序列合成特异性引物,利用RT-PCR从GFLV-H基因组中扩增出P38蛋白基因的cDNA片段,并克隆到pGEM-T-easyvector上。序列分析表明该基因包含1044个核苷酸,编码347个氨基酸。序列比较发现GFLV-HP38蛋白基因与GFLV-F13对应基因核苷酸和氨基酸的同源性分别为90%和96%;与线虫传多面体病毒属中的南芥菜花叶病毒(Arabismosaicvirus,ArMV)和番茄环斑病毒(Tomatoringspotvirus,TomRSV)对应基因氨基酸同源性分别为85%和38.6%,与烟草黑环病毒(Tabaccoblackringvirus,TBLV)、葡萄铬色花叶病毒(Grapevinechromemosaicvirus,GCMV)和树莓环斑病毒(Raspberryringspotvirus,RRSV)的同源性均低于30%。 展开更多

关键词 葡萄扇叶病毒 杭州分离物 P38蛋白 基因克隆 同源性 序列分析

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应用RT-PCR技术检测葡萄扇叶病毒的研究 被引量：3

8

作者 鲁晓燕 牛建新 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2002年第3期211-213,共3页

以扇叶病株为材料 ,根据病毒外壳蛋白核苷酸序列 ,设计特异引物P1(10 6 4 10 83) ,P2 (76 2 781) ,建立了以RNA为模板的GFLV的RT

关键词 RT-PCR技术 葡萄扇叶病毒 核苷酸序列 特异引物 病毒检测 RNA提取

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北京地区葡萄扇叶病毒检测 被引量：2

9

作者 晁无疾 乜爱华 +1 位作者 周敏 章德明 《葡萄栽培与酿酒》 1997年第1期1-3,共3页

采用酶联免疫吸附技术（ＥＬＩＳＡ）（Ａ－蛋白夹心法）对北京地区的葡萄品种进行扇叶病毒（ｆａｎｌｅａｆｖｉｒｕｓ）的测定。结果表明，北京地区葡萄品种普遍感染扇叶病毒且带毒情况较为严重。

关键词 北京 葡萄 扇叶病毒 检测 病害

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三种ELISA方法检测葡萄卷叶病毒(GLRaV)和扇叶病毒(GFLV)的比较 被引量：4

10

作者 顾沛雯 龚玉梅 《中外葡萄与葡萄酒》 2002年第3期14-16,19,共4页

检测是认识一种病害最基本的前提,通过对三种ELISA检测GLRaV和GFLV的比较认为,双抗夹心-ELISA(DAS-ELISA)、间接-ELISA(PTA-ELISA)和A蛋白夹心-ELISA(PAS-ELISA) 都能检测GLRaV和GFLV。DAS-ELISA能缩短检测的时间,然而这项技术具有较高... 检测是认识一种病害最基本的前提,通过对三种ELISA检测GLRaV和GFLV的比较认为,双抗夹心-ELISA(DAS-ELISA)、间接-ELISA(PTA-ELISA)和A蛋白夹心-ELISA(PAS-ELISA) 都能检测GLRaV和GFLV。DAS-ELISA能缩短检测的时间,然而这项技术具有较高的株系特异性,在检测中可能产生假阴性反应,因此,必要时可用PTA-ELISA和PAS-ELISA对一些关键样品进行复检。 展开更多

关键词 ELISA 方法 检测 葡萄卷叶病毒 扇叶病毒

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葡萄扇叶病毒和卷叶病毒的田间病状鉴别与防治 被引量：4

11

作者 张福庆 李巍 田卫东 《中外葡萄与葡萄酒》 2002年第3期20-21,共2页

扇叶病毒和卷叶病毒是我国葡萄生产中的主要病毒种类,一些新发展地区由于对病毒的危害认识不够,盲目引种,已造成了酿酒企业和果农的严重经济损失。本文介绍了两种病毒的田间病状、与其易混淆的病害现象和传播途径,并提出了防治方法。

关键词 葡萄 扇叶病毒 卷叶病毒 田间病状 鉴别 防治

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葡萄扇叶病毒病的田间观察

12

作者 刘震 孙祎龙 《葡萄栽培与酿酒》 1991年第4期21-23,共3页

随着葡萄栽培业的发展和植保专业科学技术的提高,葡萄病毒病已引起专业人员的高度重视。但目前国内尚未研究出其病原物,更没有大面积防治的先例。扇叶病毒病发生初期往往被误认为是生理病或缺素症。它是由苗木本身(或地块以前有病原物)... 随着葡萄栽培业的发展和植保专业科学技术的提高,葡萄病毒病已引起专业人员的高度重视。但目前国内尚未研究出其病原物,更没有大面积防治的先例。扇叶病毒病发生初期往往被误认为是生理病或缺素症。它是由苗木本身(或地块以前有病原物)带有病毒,定植在葡萄园中,再由线虫和花粉传播造成大面积感染。为了今后对其更好的识别和研究,我们在1988—1990年,对同等栽培条件下的扇叶病毒病植株和正常植株的生长表现,结果习性等进行了比较观察,初步得出一些形态特征,在此供献给生产者和研究者参考。 展开更多

关键词 葡萄 扇叶病毒病 田间观察

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我国葡萄扇叶衰退病相关病毒研究进展 被引量：2

13

作者 范旭东 胡国君 +5 位作者 陈绍莉 任芳 杜乃凡 战良 张尊平 董雅凤 《中国果树》 北大核心 2023年第9期1-5,共5页

葡萄扇叶衰退病(grapevine fanleaf degeneration disease,GFDD)是葡萄栽培中常见的病毒病害,在我国葡萄产区发生普遍,危害严重。引起该病的病毒种类有10余种,症状表现受葡萄品种、病毒种类、栽培条件等多种因素影响。由于高通量测序技... 葡萄扇叶衰退病(grapevine fanleaf degeneration disease,GFDD)是葡萄栽培中常见的病毒病害,在我国葡萄产区发生普遍,危害严重。引起该病的病毒种类有10余种,症状表现受葡萄品种、病毒种类、栽培条件等多种因素影响。由于高通量测序技术的发展与应用,我国鉴定发现了除葡萄扇叶病毒(grapevine fanleaf virus,GFLV)之外的3种GFDD相关病毒,即葡萄浆果内坏死病毒(grapevine berry inner necrosis virus,GINV)、灰比诺葡萄病毒(grapevine Pinot gris virus,GPGV)和葡萄蚕豆萎蔫病毒(grapevine fabavirus,GFabV)。系统综述了我国GFDD的主要病原及其侵染状况,可为该病害的精准防控提供参考。 展开更多

关键词 葡萄扇叶衰退病 葡萄扇叶病毒 葡萄浆果内坏死病毒 灰比诺葡萄病毒 葡萄蚕豆萎蔫病毒

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ODA_H_2O_2-HRP偶合反应伏安酶联免疫分析检测植物病毒GFV、TAV和PVY 被引量：9

14

作者 焦奎 韦璐 +5 位作者 张书圣 刘澄凡 张成良 张作芳 刘靖宇 魏澎 《分析测试学报》 CAS CSCD 1998年第2期1-4,共4页

将邻联茴香胺（ＯＤＡ）＿Ｈ２Ｏ２＿辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）偶合反应伏安酶联免疫分析新体系，应用于植物病毒葡萄扇叶病毒（ｇｒａｐｅｖｉｎｅｆａｎｌｅａｆｖｉｒｕｓ，ＧＦＶ）、番茄不孕病毒（ｔｏｍａｔｏａｓｐｅｒｍｙｖｉ... 将邻联茴香胺（ＯＤＡ）＿Ｈ２Ｏ２＿辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）偶合反应伏安酶联免疫分析新体系，应用于植物病毒葡萄扇叶病毒（ｇｒａｐｅｖｉｎｅｆａｎｌｅａｆｖｉｒｕｓ，ＧＦＶ）、番茄不孕病毒（ｔｏｍａｔｏａｓｐｅｒｍｙｖｉｒｕｓ，ＴＡＶ）和马铃薯Ｙ病毒（ｐｏｔａｔｏｖｉｒｕｓＹ，ＰＶＹ）的测定。该法对以上各种植物病毒叶澄清液的测定的稀释比均高于酶联免疫吸附分析（ＥＬＩＳＡ）法，检测范围均宽于ＥＬＩＳＡ法。 展开更多

关键词 葡萄扇叶病毒 番茄不孕病毒 马铃薯Y病毒 ODA

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葡萄病毒病多重RT-PCR检测技术体系优化分析 被引量：16

15

作者 牛建新 陈萍 马兵钢 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期120-123,共4页

在确立葡萄卷叶病毒Ⅲ和扇叶病毒RT-PCR优化体系基础上,研究了多重PCR的主要成分:dNTPS、TaqDNA聚合酶、MgCl2对PCR反应的影响,从而确立了GLRaVⅢ、GFLV的多重RT-PCR检测体系。研究结果表明,多重PCR反应体系中TaqDNA聚合酶的用量较单重... 在确立葡萄卷叶病毒Ⅲ和扇叶病毒RT-PCR优化体系基础上,研究了多重PCR的主要成分:dNTPS、TaqDNA聚合酶、MgCl2对PCR反应的影响,从而确立了GLRaVⅢ、GFLV的多重RT-PCR检测体系。研究结果表明,多重PCR反应体系中TaqDNA聚合酶的用量较单重PCR反应体系要低,而且可降低成本和缩短检测时间。 展开更多

关键词 葡萄卷叶病毒Ⅲ(GLRaV Ⅲ) 葡萄扇叶病毒(GFLV) 多重RT-PCR检测体系

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无病毒葡萄‘纽约玫瑰’在盘锦地区的栽培表现 被引量：2

16

作者 杨立柱 《北方果树》 2008年第3期66-,共1页

　　'纽约玫瑰'由中国农科院郑州果树所于1986年自美国引入,我所又从郑州果树所北京基点引进.当时共引进20个品种,148株,旨在筛选出适合于盘锦滨海盐碱地栽培的无病毒优良品种.从中选出'纽约玫瑰'这个品种,适合盐碱地栽... 　　'纽约玫瑰'由中国农科院郑州果树所于1986年自美国引入,我所又从郑州果树所北京基点引进.当时共引进20个品种,148株,旨在筛选出适合于盘锦滨海盐碱地栽培的无病毒优良品种.从中选出'纽约玫瑰'这个品种,适合盐碱地栽培.…… 展开更多

关键词 无病毒 玫瑰 蔷薇属 盘锦地区 葡萄扇叶病毒 纽约 美国 贝达

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盘锦地区无病毒葡萄品种引种试验 被引量：1

17

作者 杨立柱 《北方果树》 2007年第2期63-65,共3页

2000年盘锦地区发现了葡萄扇叶病毒，且日趋严重，造成了坐果率低，果穗松散，品质差，产量下降，生长势弱，迅速衰老。为更新品种和实现葡萄无毒化栽培，我所于2001年从中国农科院郑州果树所北京基点，引进了一批美国无病毒优良品种。... 2000年盘锦地区发现了葡萄扇叶病毒，且日趋严重，造成了坐果率低，果穗松散，品质差，产量下降，生长势弱，迅速衰老。为更新品种和实现葡萄无毒化栽培，我所于2001年从中国农科院郑州果树所北京基点，引进了一批美国无病毒优良品种。经多年试验，其生长结果表现良好。 展开更多

关键词 引种试验 葡萄品种 盘锦地区 葡萄扇叶病毒 生长结果表现 无毒化栽培 中国农科院

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吐鲁番地区葡萄病毒病调查 被引量：2

18

作者 王作镒 高锐 +2 位作者 李志超 卢元贞 傅焱 《葡萄栽培与酿酒》 1995年第1期41-42,共2页

1991和1992年春秋两季在吐鲁番地区葡萄产区进行葡萄病毒病普查并采样电镜观察及酶联免疫吸附法(ELISA)检测证实,葡萄扇叶病毒病和卷叶病毒病在吐鲁番地区的主要葡萄产区均有发生。调查中还发现一些类似病毒病的症状如葡萄脉坏死病、叶... 1991和1992年春秋两季在吐鲁番地区葡萄产区进行葡萄病毒病普查并采样电镜观察及酶联免疫吸附法(ELISA)检测证实,葡萄扇叶病毒病和卷叶病毒病在吐鲁番地区的主要葡萄产区均有发生。调查中还发现一些类似病毒病的症状如葡萄脉坏死病、叶耳突病、斑点病、星状花叶病、缩叶病等。葡萄病毒病是影响葡萄生产的最主要因素之一,须加强检疫和防治。 展开更多

关键词 葡萄 扇叶病毒病 卷叶病毒病 类似病毒病 病毒病

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吐鲁番地区葡萄病毒病调查

19

作者 王作镒 高锐 +2 位作者 李志超 卢元贞 傅焱 《新疆农业科学》 CAS CSCD 1993年第2期67-69,共3页

1991和1992年春秋两季在吐鲁番地区葡萄产区进行葡萄病毒病普查并采样电镜观察及酶联免疫吸附法(ELISA)检测证实,葡萄扇叶病毒病和卷叶病毒病在吐鲁番地区的主要葡萄产区均有发生。调查中还发现一些类似病毒病的症状如葡萄脉坏死病、叶... 1991和1992年春秋两季在吐鲁番地区葡萄产区进行葡萄病毒病普查并采样电镜观察及酶联免疫吸附法(ELISA)检测证实,葡萄扇叶病毒病和卷叶病毒病在吐鲁番地区的主要葡萄产区均有发生。调查中还发现一些类似病毒病的症状如葡萄脉坏死病、叶耳突病、斑点病、星状花叶病、缩叶病等。葡萄病毒病是影响葡萄生产的最主要因素之一,须加强检疫和防治。 展开更多

关键词 吐鲁番地区 葡萄 症状 检疫 防治 扇叶病毒病 卷叶病毒病 类似病毒病

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GFLV CP基因RNAi载体构建及其在转基因烟草中的干涉效果 被引量：2

20

作者 田莉莉 牛良 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2014年第B12期1-5,共5页

为探讨RNAi策略在抗GFLV基因工程中的效果,通过RT-PCR克隆获得了310 bp的GFLV外壳蛋白基因保守片段,采用Gateway技术将该基因片段连入目标载体p HELLSGATE12构建了RNAi植物表达载体,并通过农杆菌介导法转入烟草中,RT-PCR检测表明目的基... 为探讨RNAi策略在抗GFLV基因工程中的效果,通过RT-PCR克隆获得了310 bp的GFLV外壳蛋白基因保守片段,采用Gateway技术将该基因片段连入目标载体p HELLSGATE12构建了RNAi植物表达载体,并通过农杆菌介导法转入烟草中,RT-PCR检测表明目的基因片段已整合到烟草基因组中并在RNA水平上得到表达,病毒接种结果显示阳性植株的发病率明显低于对照,说明在转基因植株中dsRNA表达可干涉GFLV侵染过程。 展开更多

关键词 葡萄扇叶病毒 RNAI 载体构建 转基因 烟草

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