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小鼠骨髓间充质干细胞通过JAK2/STAT3信号通路对成纤维细胞增殖和胶原表达水平的影响
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作者 黎涵玥 阳莲 +2 位作者 刘剑锋 张舒飞 洪莉 《吉林大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第2期325-332,共8页
目的:探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对L929细胞增殖和其胶原表达水平的影响,阐明其相关作用机制。方法:提取4周龄C57BL/6小鼠的BMSCs。采用免疫荧光染色鉴定BMSCs的表型。将L929细胞分为对照组(L929细胞)、共培养组(L929细胞与BMSCs)、Ja... 目的:探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对L929细胞增殖和其胶原表达水平的影响,阐明其相关作用机制。方法:提取4周龄C57BL/6小鼠的BMSCs。采用免疫荧光染色鉴定BMSCs的表型。将L929细胞分为对照组(L929细胞)、共培养组(L929细胞与BMSCs)、Janus激酶(JAK)抑制剂WP1066组(WP1066处理L929细胞与BMSCs)和二甲基亚砜(DMSO)组(DMSO处理L929细胞与BMSCs)。细胞计数试剂盒8 (CCK-8)法检测不同时间点各组L929细胞增殖活性,Western blotting法检测各组L929细胞中Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)和Ⅲ型胶原蛋白(ColⅢ)表达水平,免疫荧光染色法检测各组L929细胞中ColⅠ和ColⅢ蛋白表达。结果:BMSCs表面抗原(SA)荧光检测,BMSCs表达表面标志物CD29+、CD45-、CD90+和CD105+。CCK-8法检测,与对照组比较,共培养组L929细胞增殖活性明显升高(P<0.01),DMSO组L929细胞增殖活性明显升高(P<0.01);与共培养组比较,WP1066组L929细胞增殖活性明显降低(P<0.01)。Western blotting法检测,与对照组比较,共培养组和DMSO组L929细胞中ColⅠ及ColⅢ蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与共培养组比较,WP1066组L929细胞中ColⅠ和ColⅢ蛋白表达水平明显降低(P<0.01);与DMSO组比较,WP1066组L929细胞中ColⅠ和ColⅢ蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。免疫荧光染色法检测,与对照组比较,共培养组和DMSO组L929细胞中ColⅠ及ColⅢ荧光强度明显升高(P<0.01);与共培养组比较,WP1066组L929细胞中ColⅠ和ColⅢ荧光强度明显降低(P<0.01);与DMSO组比较,WP1066组L929细胞中ColⅠ和ColⅢ荧光强度明显降低(P<0.01)。结论:间充质干细胞可通过JAK2/信号转导和转录激活子3 (STAT3)信号通路促进小鼠L929细胞增殖及胶原生成。 展开更多
关键词 盆底功能障碍性疾病 骨髓间充质干细胞 纤维细胞 蛋白 蛋白 JANUS激酶2 信号转导和转录激活子3
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西罗莫司对肌成纤维细胞表达Ⅰ型胶原和纤维连接蛋白的抑制作用 被引量:2
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作者 张兰 黄海长 +1 位作者 李惊子 刘颖 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期509-513,共5页
目的:在细胞水平探讨西罗莫司[sirolimus,又名雷帕霉素(rapamycin)]的抗肾纤维化作用。方法:采用原代培养的大鼠肾皮质肌成纤维细胞(myofibroblast,MyoF)。实验各时间点分别设对照组和用西罗莫司40mg/L处理组。将细胞培养12h,24h,48h后... 目的:在细胞水平探讨西罗莫司[sirolimus,又名雷帕霉素(rapamycin)]的抗肾纤维化作用。方法:采用原代培养的大鼠肾皮质肌成纤维细胞(myofibroblast,MyoF)。实验各时间点分别设对照组和用西罗莫司40mg/L处理组。将细胞培养12h,24h,48h后分别收集细胞和细胞培养上清液,用Western blot方法检测细胞内α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、Ⅰ型胶原(typeⅠcollagen,ColⅠ-)和上清液中FN,ColⅠ-蛋白水平的表达;用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)法检测细胞培养1h,2h,4h,6h各时间点前胶原Ⅰ(procollagenⅠ-)mRNA表达的变化;用明胶酶谱法检测细胞培养上清液中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的活性。实验结果分别以各时间点对照组作为基线1,计算与对照组的比值。结果:(1)西罗莫司于各个时间点对细胞内α-SMA的表达均无影响。(2)用西罗莫司处理后,于24h对细胞内ColⅠ-蛋白表达量明显少于对照组,并持续至48h,分别为各时间点对照组的(0.58±0.05)倍和(0.63±0.18)倍,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)与各时间点对照组相比,细胞内procollagen-ⅠmRNA在1h,2h时表达均减少,分别为(0.38±0.05)倍和(0.55±0.16)倍,差异有统计学意义(P<0.05),于4h恢复到基础水平。(4)培养细胞上清液中12h即有ColⅠ-基础表达,经西罗莫司处理24h其表达量较对照组明显减少,为对照组的(0.59±0.25)倍,差异有统计学意义(P<0.05),持续至48h仍呈减少趋势,为对照组的(0.52±0.21)倍,P<0.05。(5)细胞内FN蛋白表达趋势与上清液中一致,24h其表达量较对照组明显减少,分别为对照组的(0.44±0.09)倍和(0.40±0.15)倍,差异均具有统计学意义(P<0.05),48h西罗莫司对FN的抑制作用消失。(6)经西罗莫司处理12h,24h和48h,上清液中MMP-2和MMP-9的活性均无明显变化。结论:西罗莫司可以通过抑制MyoF的ColⅠ-和/或FN的表达而发挥其抗肾纤维化的作用。 展开更多
关键词 西罗莫司 纤维细胞 纤连蛋白
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激活蛋白-1调控转化生长因子β_1诱导的人肺成纤维细胞Ⅰ型胶原分泌 被引量:4
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作者 胡永斌 曾庆富 +2 位作者 冯德云 李翔 彭劲武 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期776-781,共6页
目的:探讨核转录因子激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)在转化生长因子β1(transfor-ming growth factor-β1,TGF-β1)诱导人肺成纤维细胞Ⅰ型胶原分泌中的作用。方法:以人肺成纤维细胞HLF-02细胞系为研究对象,给予10μg/L的TGF-β... 目的:探讨核转录因子激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)在转化生长因子β1(transfor-ming growth factor-β1,TGF-β1)诱导人肺成纤维细胞Ⅰ型胶原分泌中的作用。方法:以人肺成纤维细胞HLF-02细胞系为研究对象,给予10μg/L的TGF-β1刺激,于不同时间点收集细胞,采用RT-PCR和Wester blot检测细胞Ⅰ型胶原转录和分泌;阻断实验中选用AP-1抑制剂姜黄素为阻断剂,凝胶阻滞实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测细胞内AP-1的DNA结合活性变化,同时Western印迹检测Ⅰ型胶原分泌变化。结果:TGF-β1能诱导HLF-02细胞Ⅰ型胶原mRNA的转录和分泌(P<0.05);TGF-β1能提高HLF-02细胞AP-1的DNA结合活力(P<0.05);姜黄素能明显抑制TGF-β1诱导的HLF-02细胞AP-1的DNA结合活力,抑制率分别为17.1%,17.6%,24.2%,31.3%(P<0.05);同时,姜黄素能明显抑制TGF-β1诱导的HLF-02细胞Ⅰ型胶原的分泌,抑制率分别为62.1%,58.8%,62.1%,59.6%(P<0.05)。结论:核转录因子AP-1参与TGF-β1刺激的HLF-02细胞Ⅰ型胶原的分泌调控。 展开更多
关键词 转化生长因子β1 纤维细胞 I 激活蛋白
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硬皮病皮损中热休克蛋白47、碱性成纤维细胞生长因子及Ⅰ型胶原蛋白的检测及意义 被引量:6
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作者 花卉 曹双林 施健 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期168-172,共5页
目的:探讨热休克蛋白(HSP)47、碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)及Ⅰ型胶原(COL-1)在硬皮病皮损中的表达及意义,分析三者在硬皮病发病机制中的作用及相互之间的关系。方法:采用免疫组化法检测早期硬皮病组(21例)、晚期硬皮病组(21例)及正... 目的:探讨热休克蛋白(HSP)47、碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)及Ⅰ型胶原(COL-1)在硬皮病皮损中的表达及意义,分析三者在硬皮病发病机制中的作用及相互之间的关系。方法:采用免疫组化法检测早期硬皮病组(21例)、晚期硬皮病组(21例)及正常对照组(10例)皮肤石蜡包埋组织中HSP47、b FGF及COL-1的原位表达情况。结果:HSP47、b FGF及COL-1均弥漫表达于正常皮肤和硬皮病皮损的细胞质中。HSP47在早期硬皮病组和晚期硬皮病组中的表达均高于正常对照组(P<0.01),但三者分别在早、晚期硬皮病组中的表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。硬皮病皮损中HSP47与COL-1的表达呈正相关(r=0.579,P=0.000);b FGF与COL-1的表达呈正相关(r=0.379,P=0.000);HSP47与b FGF的表达也呈正相关(r=0.493,P=0.000)。结论:HSP47、b FGF及COL-1在早、晚期硬皮病皮损中表达均明显上调,HSP47、b FGF及COL-1可能参与硬皮病的病理纤维化进程。 展开更多
关键词 硬皮病 热休克蛋白47 碱性纤维细胞生长因子
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硒和维生素E对心肌成纤维细胞 Ⅰ型胶原合成代谢的影响 被引量:1
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作者 苗春生 张丹 李相军 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期419-421,共3页
目的:研究硒(Se)及维生素E(VE)对去甲肾上腺素(NE)处理的心肌成纤维细胞(CFbs)Ⅰ型胶原合成的影响。方法:酶消化法获得Wistar大鼠乳鼠CFbs,与NE、Se和VE作用一定时间后,测定上清中羟脯氨酸(HYP)和Ⅰ型胶原含量。结果:Se、VE及Se+VE组培... 目的:研究硒(Se)及维生素E(VE)对去甲肾上腺素(NE)处理的心肌成纤维细胞(CFbs)Ⅰ型胶原合成的影响。方法:酶消化法获得Wistar大鼠乳鼠CFbs,与NE、Se和VE作用一定时间后,测定上清中羟脯氨酸(HYP)和Ⅰ型胶原含量。结果:Se、VE及Se+VE组培养液中HYP含量分别为(64.88±1.25)、(47.60±1.59)和(41.34±1.73)mg.L-1prot,明显低于NE组[(68.27±1.89)mg.L-1prot](P<0.05),Ⅰ型胶原含量分别为(0.67±0.05)、(0.40±0.03)和0.39±0.04,与NE组(0.90±0.15)比较,差异有显著性(P<0.05)。结论:Se和VE单独应用可抑制CFbsⅠ型胶原的合成,二者联合应用具有协同作用。 展开更多
关键词 维生素E 纤维细胞
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HMGB1对心肌成纤维细胞增殖和Ⅰ、Ⅲ胶原蛋白分泌的影响及意义 被引量:3
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作者 石苗茜 苏菲菲 +1 位作者 李文举 郑强荪 《科学技术与工程》 2010年第30期7402-7407,共6页
通过观察HMGB1(High mobility group protein-B1)对新生SD(Sprague-Dawley)大鼠心肌成纤维细胞(CFs)增殖和胶原合成的影响,探讨HMGB1在心梗后心脏重构过程中的作用。以培养的新生SD(Sprague-Dawley)大鼠CFs为实验对象,分别给予0(对照组)... 通过观察HMGB1(High mobility group protein-B1)对新生SD(Sprague-Dawley)大鼠心肌成纤维细胞(CFs)增殖和胶原合成的影响,探讨HMGB1在心梗后心脏重构过程中的作用。以培养的新生SD(Sprague-Dawley)大鼠CFs为实验对象,分别给予0(对照组)、0.01、0.1、和1mg/L浓度的HMGB1进行干预,6、12、18、24和48h后进行四氮唑盐(MTT)比色法检测CFs增殖水平,采用荧光实时定量PCR法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA表达。结果:(1)与对照组相比,48h后,不同浓度的HMGB1组新生SD大鼠CFs增殖水平和Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达水平均较对照组有所增高(p<0.05)。(2)HMGB1浓度为0.1mg/L时CFs增殖水平和I、Ⅲ型胶原mRNA表达水平较其他处理组均升高(p<0.05)。说明HMGB1能促进SD大鼠CFs增殖及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达,其作用显示在低水平时可能呈浓度依赖性,并且浓度为0.1mg/L时效应最明显,显示HMGB1参与了心梗后的心脏重构过程并发挥了重要作用。 展开更多
关键词 心梗 心脏重构 纤维细胞 Ⅰ、Ⅲ蛋白 高迁移率族蛋白Bl
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低氧诱导肌成纤维细胞生成并通过ERK1/2途径促进Ⅰ型胶原的表达 被引量:1
7
作者 郭丽萍 黄海长 李惊子 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期2428-2432,共5页
目的:探讨低氧能否激活成纤维细胞转化为肌成纤维细胞,以及低氧环境对肾皮质肌成纤维细胞表达Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)的影响及其可能的信号通路。方法:(1)采用正常大鼠肾成纤维细胞系(NRK-49F),应用Western blotting方法检测低氧诱导因子-1α(... 目的:探讨低氧能否激活成纤维细胞转化为肌成纤维细胞,以及低氧环境对肾皮质肌成纤维细胞表达Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)的影响及其可能的信号通路。方法:(1)采用正常大鼠肾成纤维细胞系(NRK-49F),应用Western blotting方法检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达;比较低氧和正常氧条件下α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白水平。(2)原代培养正常大鼠肾皮质肌成纤维细胞,Western blotting方法检测低氧和正常氧条件下,HIF-1α和Ⅰ型胶原蛋白水平以及ERK1/2的活化及其特异阻断剂PD98059的阻断效应;RT-PCR方法检测Ⅰ型胶原mRNA表达水平;细胞免疫化学法检测HIF-1α胞内表达部位的变化;明胶酶谱法检测细胞上清中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的活性。结果:(1)低氧刺激6 h,NRK-49F细胞和肌成纤维细胞胞内和核内均有HIF-1α蛋白表达,核内更明显。(2)低氧培养12 h,NRK-49F细胞表达α-SMA蛋白明显增高,是正常氧组的187%±32%(P<0.05),验证了低氧可引起成纤维细胞表型转化。(3)低氧刺激原代培养的正常大鼠肾皮质肌成纤维细胞6 h、12 h上清中Ⅰ型胶原蛋白水平增加,分别为正常氧组的171%±27%(P<0.05)和256%±61%(P<0.05);低氧刺激4 h、6 h,Ⅰ型胶原mRNA表达增加,为正常氧组的189%±28%(P<0.05)和221%±44%(P<0.05)。(4)低氧刺激肌成纤维细胞6 h、12 h、24 h,培养上清液中MMP-9、MMP-2活性无明显变化。(5)低氧刺激肌成纤维细胞15 min即可使ERK1/2活化,阻断实验显示,PD98059可以使低氧12h引起Ⅰ型胶原增加(低氧刺激组为正常氧对照组的273%±51%,P<0.05)显著减少(PD98059+低氧组为正常氧组的108%±19%,P>0.05)。结论:低氧促肾纤维化可能与其诱导肾成纤维细胞转化为肌成纤维细胞并经ERK1/2途径增加Ⅰ型胶原蛋白的表达有关。 展开更多
关键词 低氧 纤维细胞 ERK1/2通路
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机械拉伸对人牙周膜成纤维细胞Ⅰ型胶原及蛋白合成的影响 被引量:1
8
作者 陈新民 韩文利 赵云凤 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期155-157,共3页
目的 :研究拉伸应变对人牙周膜成纤维细胞Ⅰ型胶原及蛋白合成的影响。方法 :应用酶联免疫吸附实验及考马斯亮蓝微板法对拉伸应变下的细胞合成代谢变化进行观察 ,应变范围为 1%~ 8%。结果 :在 0 .5 %~ 8%拉伸应变范围内 ,人牙周膜成纤... 目的 :研究拉伸应变对人牙周膜成纤维细胞Ⅰ型胶原及蛋白合成的影响。方法 :应用酶联免疫吸附实验及考马斯亮蓝微板法对拉伸应变下的细胞合成代谢变化进行观察 ,应变范围为 1%~ 8%。结果 :在 0 .5 %~ 8%拉伸应变范围内 ,人牙周膜成纤维细胞Ⅰ型胶原合成无明显变化 ,但 1%~ 8%拉伸应变作用下细胞蛋白合成减少 ,其中2 %拉伸应变影响最明显。结论 展开更多
关键词 拉伸应奕 人牙周膜 纤维细胞 蛋白
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胰蛋白酶原16对哮喘气道肌成纤维细胞分化的影响
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作者 陈新 涂海燕 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期1425-1427,共3页
目的研究慢性哮喘发展过程中气管壁中肌成纤维细胞的异常分化与胰蛋白酶原16(trypsinogen16,TG16)表达量之间的关系,进一步探索气道基底膜增厚的具体机制。方法利用SDS-PAGE蛋白电泳分析比较OVA诱导的慢性哮喘小鼠与对照鼠肺总蛋白谱的... 目的研究慢性哮喘发展过程中气管壁中肌成纤维细胞的异常分化与胰蛋白酶原16(trypsinogen16,TG16)表达量之间的关系,进一步探索气道基底膜增厚的具体机制。方法利用SDS-PAGE蛋白电泳分析比较OVA诱导的慢性哮喘小鼠与对照鼠肺总蛋白谱的差异,筛选出差异条带进行质谱分析。对差异条带中的TG16基因从小鼠肺组织中进行克隆和表达,转染体外培养的小鼠胚胎成纤维细胞同时给予转化生长因子-1(TGF-β1)刺激,RT-PCR分析过表达TG16对细胞机动蛋白α亚型(α-actin)的mRNA水平影响。给予TG16的RNA干扰,利用Western blotting检测TG16的下降对α-actin的表达水平的影响。结果OVA慢性致敏小鼠的肺组织蛋白TG16含量明显增高;在TGF-β1刺激下,与对照组(α-actin/GAPDH=3.20±1.36)相比,3T3细胞外源表达TG16会明显抑制α-actin的表达(1.78±0.50);同样在TGF-β1刺激下,与转染对照寡核苷酸的3T3细胞(2.78±0.50)相比,应用RNAi干扰抑制TG16表达的同时α-actin的表达显著上调(3.60±0.44)。结论首次发现和证实TG16可以抑制α-actin在成纤维细胞中的表达,这可能是哮喘发展过程中机体本身的一种保护性反应。 展开更多
关键词 哮喘 Α-平滑蛋白 蛋白16 纤维细胞
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硒和维生素E对心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原合成代谢的影响 被引量:4
10
作者 申华峰 任立群 +1 位作者 张秀云 张丹 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期738-740,共3页
目的:探讨硒(Se)和维生素E(VE)对心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原合成代谢的影响。方法:用不同浓度的Se和(或)VE作用于体外培养的Wistar大乳鼠心肌成纤维细胞,测定培养上清液中羟脯氨酸及Ⅰ型胶原的含量。结果:①低、中和高浓度Se(0.05、0.1和0.... 目的:探讨硒(Se)和维生素E(VE)对心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原合成代谢的影响。方法:用不同浓度的Se和(或)VE作用于体外培养的Wistar大乳鼠心肌成纤维细胞,测定培养上清液中羟脯氨酸及Ⅰ型胶原的含量。结果:①低、中和高浓度Se(0.05、0.1和0.2 mg.L-1)均可抑制NE(0.2 mg.L-1)的促成纤维细胞(CFbs)胶原合成的作用(P<0.05),以高浓度Se最为明显(56.13±1.31,P<0.05);②不同浓度VE(1、10和100 mg.L-1)均降低NE对CFbs胶原合成的促进作用,以1和100 mg.L-1的VE对羟脯氨酸含量的影响最显著(P<0.05);③Se和VE的联合应用(0.05 mg.L-1Se+10 mg.L-1VE),对CFbs的胶原合成的抑制作用更明显(41.34±1.73,0.39±0.04,P<0.05)。结论:Se和VE对心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原合成代谢有抑制作用。 展开更多
关键词 硒元素 维生素E 纤维细胞 代谢 抑制作用 亚硒酸钠 纤维
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强脉冲光对皮肤成纤维细胞Ⅰ型和Ⅲ型前胶原mRNA表达水平的影响 被引量:10
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作者 吴迪 骆丹 +2 位作者 张镇静 闵玮 朱洁 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期357-359,共3页
目的:研究强脉冲光(IPL)照射对体外培养的汉族人皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达水平的影响。方法:分离培养人原代成纤维细胞,采用波长为570~950nm、能量密度为15J/cm2的IPL照射培养细胞。在照射结束后1、12、24及48h收集细胞总R... 目的:研究强脉冲光(IPL)照射对体外培养的汉族人皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达水平的影响。方法:分离培养人原代成纤维细胞,采用波长为570~950nm、能量密度为15J/cm2的IPL照射培养细胞。在照射结束后1、12、24及48h收集细胞总RNA,应用反转录(RT)-PCR法测定各时间点成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达水平。结果:在IPL照射后12、24及48h,成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达水平均明显上调(P<0.05),且表达水平随孵育时间的延长呈增加的趋势。结论:IPL可直接促进成纤维细胞中Ⅰ型和Ⅲ型前胶原mRNA的转录,该研究部分阐明了IPL除皱的机制。 展开更多
关键词 强脉冲光 纤维细胞 MRNA表达 前胶 前胶
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红外线影响人皮肤成纤维细胞中c-Jun、Ⅰ型和Ⅲ型胶原的表达 被引量:7
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作者 刘平 杨荣丽 +4 位作者 苏慧 李林丽 宋健文 卢宁 刘钰泽 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期163-169,共7页
目的研究红外线对体外培养成纤维细胞(HSF)中c-Jun和Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响,为红外线引起光老化损伤的分子机制提供理论依据。方法提取原代皮肤成纤维细胞培养,成纤维细胞被分为对照组(无红外线照射)和实验组(红外线照射);用MTT检测各... 目的研究红外线对体外培养成纤维细胞(HSF)中c-Jun和Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响,为红外线引起光老化损伤的分子机制提供理论依据。方法提取原代皮肤成纤维细胞培养,成纤维细胞被分为对照组(无红外线照射)和实验组(红外线照射);用MTT检测各组细胞活性;用实时定量PCR和免疫细胞化学(ICC)方法检测各组c-Jun和Ⅰ、Ⅲ型胶原m RNA和蛋白的表达。结果MTT检测显示与对照组比较,实验组各组中红外线照射对HSF的增殖有不同程度的抑制作用;红外线照射下调Ⅰ型胶原m RNA和蛋白的表达,随着照射剂量的增加,Ⅰ型胶原的m RNA和蛋白表达下降越明显(P<0.01);红外线照射成纤维细胞12 h后Ⅲ型胶原m RNA和蛋白的表达都呈照射剂量依赖性下调(P<0.05,P<0.01),24 h后Ⅲ型胶原m RNA和蛋白的表达都呈照射剂量依赖性上调(P<0.05,P<0.01);红外线照射上调了c-Jun m RNA和蛋白的表达水平,随着照射剂量的增加,呈照射剂量依赖性(P<0.05,P<0.01)。结论红外线照射人皮肤成纤维细胞后上调c-Jun表达,抑制Ⅰ型胶原表达,干扰Ⅲ型胶原表达,这可能是其引发和促进皮肤光老化的发生机制之一。 展开更多
关键词 红外线 C-JUN 人皮肤纤维细胞
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雷公藤甲素抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的研究 被引量:12
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作者 徐朝军 宋岚 +2 位作者 尹晓清 郭正宇 杨进 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2008年第5期499-503,共5页
目的:探讨雷公藤甲素对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞(cardi-acfibroblasts,CFb)增殖及α1(Ⅰ)型前胶原合成的影响。方法:建立AngⅡ诱导新生大鼠心肌纤维化细胞模型。采用四氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖;分别采用... 目的:探讨雷公藤甲素对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞(cardi-acfibroblasts,CFb)增殖及α1(Ⅰ)型前胶原合成的影响。方法:建立AngⅡ诱导新生大鼠心肌纤维化细胞模型。采用四氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖;分别采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot印迹法检测大鼠心肌成纤维细胞α1(Ⅰ)型前胶原mRNA及蛋白表达。结果:雷公藤甲素以剂量依赖性方式抑制心肌成纤维细胞增殖和α1(Ⅰ)型前胶原合成。结论:雷公藤甲素可以通过抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖和α1(Ⅰ)型前胶原合成从而抑制心肌纤维化。 展开更多
关键词 雷公藤甲素 纤维细胞 血管紧张素Ⅱ α1(Ⅰ)前胶
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高糖对大鼠皮肤成纤维细胞生长及胶原蛋白合成的影响 被引量:6
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作者 张再超 叶希韵 +1 位作者 刘霞 翁宇静 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期323-326,共4页
目的研究不同浓度的葡萄糖对体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞生长及胶原蛋白合成的影响。方法体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞中加入含不同浓度葡萄糖培养液(30、35、40mmol/L)培养48h(高糖1~3组),用MTT法测定细胞生长情况;试剂盒法测定细... 目的研究不同浓度的葡萄糖对体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞生长及胶原蛋白合成的影响。方法体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞中加入含不同浓度葡萄糖培养液(30、35、40mmol/L)培养48h(高糖1~3组),用MTT法测定细胞生长情况;试剂盒法测定细胞培养液中羟脯氨酸质量-体积浓度;RT-PCR技术检测Ⅰ、Ⅲ型前胶原蛋白以及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶抑制酶(TIMP-2)mRNA的表达。以加入含25mmol/L葡萄糖培养液的细胞作为正常对照组。结果随着培养液中葡萄糖浓度的升高,皮肤成纤维细胞的生长明显受抑;培养液中羟脯氨酸的质量-体积浓度明显降低(P<0.01)。RT-PCR结果显示,高糖组细胞内Ⅰ、Ⅲ型前胶原蛋白及TIMP-2 mRNA表达明显下调,MMP-2 mRNA表达明显上调,与正常对照组比较差异显著(均P<0.05)。结论高浓度葡萄糖对体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞的生长有一定的抑制作用,并可能通过抑制Ⅰ、Ⅲ型前胶原蛋白、TIMP-2和上调MMP-2的mRNA表达导致皮肤成纤维细胞胶原蛋白的合成减少。 展开更多
关键词 皮肤纤维细胞 高糖 RT-PCR 蛋白 蛋白 基质金属蛋白 基质金属蛋白酶抑制酶
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TGF-β1对肾间质成纤维细胞Ⅲ型胶原表达的影响 被引量:5
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作者 王伟铭 姚建 +1 位作者 石蓉 董德长 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第1期29-31,共3页
目的通过观察TGF β1对肾间质成纤维细胞的增殖及Ⅲ型胶原mRNA表达的影响 ,探讨肾间质成纤维细胞在肾纤维化过程中的作用。方法应用大鼠肾间质成纤维细胞体外培养 ,以MTT比色法和RT PCR法 ,观察TGF β1对肾间质成纤维细胞的增殖作用和... 目的通过观察TGF β1对肾间质成纤维细胞的增殖及Ⅲ型胶原mRNA表达的影响 ,探讨肾间质成纤维细胞在肾纤维化过程中的作用。方法应用大鼠肾间质成纤维细胞体外培养 ,以MTT比色法和RT PCR法 ,观察TGF β1对肾间质成纤维细胞的增殖作用和对Ⅲ型胶原mRNA表达的影响。结果TGF β1可促进肾间质成纤维细胞的增殖 ,且与TGF β1的质量浓度呈正相关 ;TGF β1可刺激肾间质成纤细胞Ⅲ型胶原mRNA的表达 ,并呈剂量和时间依赖效应。结论TGF β1与肾间质成纤维细胞的相互作用 ,在肾间质纤维化中可能起重要的作用。 展开更多
关键词 TGF-Β1 肾间质 纤维细胞 细胞增殖
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玉米幼芽提取物对小鼠皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达的影响 被引量:2
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作者 余欣 欧阳五庆 +1 位作者 张黎 王莉 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2007年第7期15-18,共4页
分离培养小鼠皮肤成纤维细胞,用2种富含腺嘌呤类衍生物的玉米幼芽提取物(20 mg/L)提前保护细胞后,体外构建H2O2急性氧化损伤细胞模型,应用RT-PCR对小鼠皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达进行半定量检测。结果表明,损伤对照组(Ⅱ组... 分离培养小鼠皮肤成纤维细胞,用2种富含腺嘌呤类衍生物的玉米幼芽提取物(20 mg/L)提前保护细胞后,体外构建H2O2急性氧化损伤细胞模型,应用RT-PCR对小鼠皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达进行半定量检测。结果表明,损伤对照组(Ⅱ组)小鼠皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达量分别为空白对照组(I组)的24%(P<0.01)和20%(P<0.01),而药物保护组(Ⅲ组、Ⅳ组)小鼠皮肤成纤维细胞Ⅰ型前胶原mRNA的表达量均高于损伤对照组,分别是损伤对照组的3.5倍(P<0.01)和1.8倍,Ⅲ型前胶原mRNA的表达量也均高于损伤对照组,分别是损伤对照组的4.6倍(P<0.01)和3倍(P<0.01)。说明在H2O2致小鼠皮肤成纤维细胞急性氧化损伤过程中,这2种玉米幼芽提取物能够保护Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达,且0501提取物对小鼠皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原表达的保护作用优于0502提取物。 展开更多
关键词 玉米幼芽提取物 氧化损伤 小鼠皮肤 纤维细胞 前胶 前胶
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不同血清浓度对小鼠成纤维细胞L929生长增殖和胶原蛋白分泌的影响 被引量:2
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作者 刘敏 胡平安 丁克祥 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期736-739,共4页
目的:观察不同血清浓度对小鼠L929成纤维细胞生长增殖和分泌Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和羟脯氨酸的影响,以了解适宜成纤维细胞生长和分泌的最佳血清浓度。方法:L929细胞分成6组:分别以血清浓度为0 mL/L、200 mL/L、400 mL/L、600 mL/L、800... 目的:观察不同血清浓度对小鼠L929成纤维细胞生长增殖和分泌Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和羟脯氨酸的影响,以了解适宜成纤维细胞生长和分泌的最佳血清浓度。方法:L929细胞分成6组:分别以血清浓度为0 mL/L、200 mL/L、400 mL/L、600 mL/L、800 mL/L和1 000 mL/L的培养液培养,培养2 d、4 d、6 d和8 d分别取各组细胞进行HE和吖啶橙荧光染色,了解细胞形态和生长状况变化。在2 d、4 d、6 d和8 d分别取各组上清,酶联免疫法检测Ⅰ型胶原,Ⅲ型胶原,羟脯氨酸水平。磺基罗丹明B(SRB)法检测培养2 d、4 d、6 d和8 d后各组细胞增殖情况。结果:(1)L929在血清浓度很高和很低(0%和100%)时细胞增殖率都明显下降,20%组血清浓度的增殖率最高;40%~100%组,随着血清浓度增高,细胞增殖率反而下降;(2)HE和AO染色发现0%血清浓度组细胞出现凋亡情况,80%组细胞开始出现空泡化,100%血清浓度时细胞空泡化严重。20%~60%血清浓度细胞形态基本正常。(3)0%、80%和100%血清浓度在培养的8 d内I型胶原浓度一直比较低,40%血清浓度I型胶原浓度最高。培养的第2天,各浓度组的Ⅲ胶原均有增加,后有所下降,6~8 d时又再次上升。各组血清浓度组的L929细胞在不同培养时间羟脯氨酸浓度变化不大。结论:20%~40%血清浓度最适合成纤维细胞的生长,增殖和胶原分泌,血清浓度过高或过低都会引起细胞增殖率下降、细胞凋亡、空泡化和胶原的分泌减少,自体血清注射时采用合适的血清浓度可能会取得更好的效果。 展开更多
关键词 小鼠L929纤维细胞 细胞增殖 羟脯氨酸
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p38MAPK信号通路在人胚肺成纤维细胞表达Ⅰ型胶原中的调控作用 被引量:3
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作者 彭海兵 王献华 冯莉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期820-822,共3页
目的:探讨p38MAPK信号通路在调控人胚肺成纤维细胞(HELF)增殖和Ⅰ型胶原表达中的作用。方法:收集矽肺患者肺泡巨噬细胞(AM),在体外用含有SiO2的DMEM培养液和不含SiO2的DMEM培养液培养18h,然后收集培养的AM上清液。用该上清培养H... 目的:探讨p38MAPK信号通路在调控人胚肺成纤维细胞(HELF)增殖和Ⅰ型胶原表达中的作用。方法:收集矽肺患者肺泡巨噬细胞(AM),在体外用含有SiO2的DMEM培养液和不含SiO2的DMEM培养液培养18h,然后收集培养的AM上清液。用该上清培养HELF,WST-1法检测HELF增殖情况,用免疫细胞化学法检测HELF中Ⅰ型胶原的表达。结果:经SiO2刺激的矽肺患者AM培养上清可促进HELF增殖和Ⅰ型胶原的表达(平均A值为0.304±0.032),与空白对照组(平均4值为0.153±0.021)、对照组(平均吸光度值为0.213±0.021)比较增加,差异有统计学意义(P〈0.01);预处理组加入了10μmol/L p38 MAPK特异性抑制剂SB203580后,HELF增殖能力和Ⅰ型胶原的表达下降(平均A值为0.176±0.020),与处理组相比差异明显(P〈0.01)。结论:经SiO2刺激的矽肺患者AM培养上清可促进HELF增殖和Ⅰ型胶原的表达,p38MAPK信号通路在此过程中起重要的调控作用。 展开更多
关键词 SIO2 P38MAPK 纤维 肺泡巨噬细胞 人胚肺纤维细胞
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血管紧张素Ⅱ和醛固酮对心脏成纤维细胞Ⅲ型胶原mRNA表达的影响 被引量:6
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作者 杜昕 易宗春 戴闺柱 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 2000年第1期45-47,共3页
目的 研究肾素 血管紧张素 醛固酮系统 (RAAS)的效应激素血管紧张素Ⅱ (ANGⅡ )和醛固酮 (ALD)对培养的心脏成纤维细胞Ⅲ型胶原mRNA表达的影响。方法 用RT PCR的方法检测原代培养心脏成纤维细胞Ⅲ型胶原mR NA表达。结果 ANGⅡ (10 ... 目的 研究肾素 血管紧张素 醛固酮系统 (RAAS)的效应激素血管紧张素Ⅱ (ANGⅡ )和醛固酮 (ALD)对培养的心脏成纤维细胞Ⅲ型胶原mRNA表达的影响。方法 用RT PCR的方法检测原代培养心脏成纤维细胞Ⅲ型胶原mR NA表达。结果 ANGⅡ (10 - 8mol L)和ALD(10 - 8mol L)分别能促进心脏成纤维细胞Ⅲ型胶原mRNA表达 ,其各自的受体拮抗剂可分别拮抗它们的作用。结论 ANGⅡ和ALD可直接促进Ⅲ型胶原在心肌间质沉积 ,在心室重塑的病理生理过程中扮演重要角色。应用ANGⅡ和ALD的受体拮抗剂可抑制心肌纤维化 ,预防心室重塑的发生。 展开更多
关键词 血管紧张素Ⅱ 醛固酮 心脏纤维细胞 RT-PCR
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低氧对人胚肺成纤维细胞增殖及I型前胶原基因表达的影响 被引量:1
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作者 赵磊 杨红 +2 位作者 郭晓明 陈祥银 严仪昭 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期108-113,共6页
目的阐明低氧在血管壁构形重组中的作用及川芎嗪的疗效机理。方法用细咆计数法及非放射性细胞增殖检测法观察2%低氧对人胚肺成纤维细胞增殖的影响;用Northern印迹杂交法检测2%低氧对人胚肺成纤维细胞Ⅰ型前胶原基因表达的作用及川芎嗪... 目的阐明低氧在血管壁构形重组中的作用及川芎嗪的疗效机理。方法用细咆计数法及非放射性细胞增殖检测法观察2%低氧对人胚肺成纤维细胞增殖的影响;用Northern印迹杂交法检测2%低氧对人胚肺成纤维细胞Ⅰ型前胶原基因表达的作用及川芎嗪对基因表达的影响。结果低氧24.48及72h能明显促进人胚肺成纤维细胞增殖;低氧24h Ⅰ型前胶原基因表达明显升高;川芎嗪(30μg/ml及10μg/ml)可抑制上述基因表达的升高。结论低氧对人胚肺成纤维细胞有直接利激作用,通过促进其增殖及前胶原基因表达而影响肺血管构形重组和损伤组织的修复。 展开更多
关键词 低氧 纤维细胞 增殖 前胶基因
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